单独检验项目申请：25羟基维生素D测定(缩写VD-T)；组合检验项目申请：贫血组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请。
2.1 标本采集
2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5 下列标本为不合格标本
2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2 对于测定和吸样有干扰的标本。
2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2 标本保存
2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。
2.2.2 标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20℃。冰冻标本仅可冻融一次。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。
2.3 标本采集的注意事项
2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。
2.3.2 采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用分离胶促凝的血液标本。
3 方法原理
VD-T测定采用竞争化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：
第一步：将标本、预处理试剂1和预处理试剂2添加到反应管中，经过孵化，释放出与维生素D结合蛋白结合的25-羟基维生素D。 第二步：将预处理后的标本，抗25-羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物添加到反应管中，经过孵化，样本中的25-羟基维生素D和抗5-羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物形成复合物。
第三步：将生物素化25-羟基维生素D和链霉亲和素磁珠添加到反应管中，结合剩余的25-
羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物。经过孵化，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。
第四步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。所产生光子数与样本内的25-羟基维生素D浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。
4 试剂及其他用品
4.1 试剂：专用25羟基维生素D测定试剂盒，由深圳迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于2～8℃内，有效期365天。开启的试剂包载入系统中可使用28d。
4.2 试剂盒组分
4.2.1 试剂1磁珠包被物（Ra）：
工业自动化仪表技术
组分包被着链霉亲和素的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。
郑州轻工业学院图书馆
原料及含量：包被着链霉亲和素抗的超顺磁性微粒，0.2g/L;Tris缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。
装量:2×30人份/盒，2×2.7ml；2×50人份/盒,2×3.8ml；2×100人份/盒,2×6.6ml。
4.2.2 试剂2酶标记物（Rb）
组分：抗VD-T抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂。
原料及含量：抗VD-T抗体-碱性磷酸酶标记物，3mg/L;磷酸盐缓冲液，200mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。
4.2.3试剂3生物素结合素（Rc）：
生物素-25-羟基维生素D结合物稀释于缓冲液，含防腐剂。
原料及含量：生物素-25-羟基维生素D结合物，1ug/l；Tris缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。
装量:2×30人份/盒，2×2.4ml；2×50人份/盒,3.5ml；2×100人份/盒,6.3ml。
4.2.4 试剂4样本处理液（PT1）
组分：样本处理液1。
原料及含量：Tris缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。
装量:2×30人份/盒，2×2.1ml；2×50人份/盒,3.0ml；2×100人份/盒,5.3ml。
4.2.5 试剂5样本处理液（PT2）
组分：样本处理液2。
原料及含量：0.5M氢氧化钠溶液。
装量:2×30人份/盒，2×1.5ml；2×50人份/盒,2.0ml；2×100人份/盒,3.3ml。
4.2.6 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准备。
4.3 其他试剂与用品
4.3.1 化学发光底物：发光剂底物液。
4.3.2 清洗缓冲液、反应杯等。
5 校准品与校准模式
5.1 校准品: 深圳迈瑞公司提供的配套校准液，需贮2～8℃。
5.2 校准类型和校准点数目：非线性模式，5个校准点。
5.3 校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔28d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。
5.4 校准液重建方法：液体试剂，直接使用。
6 质控品与室内质控规则
无锡毛小平
6.1 质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。
河北卫视真情旋律
6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
6.3 质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。
6.4 质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。
6.5 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。
7 适用仪器
深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪。
8 标本检测步骤
装载试剂 → 进行校准 → 进行质控 → 输入标本检测项目 → 加载标本 →标本测定 → 结果复核 → 报告 9 主要分析参数
无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量40 µL。
萨伊德10 结果计算
仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以ng/mL表示。
奥林匹克大逆转11 检验结果的报告及范围
11.1 结果的报告
11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。
11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。
11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。
11.2 报告范围：30 ~ 300ng/mL，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。
12 操作性能
12.1 精密度：批内CV＜6.5％，批间CV＜7.5％。
12.2 分析范围：3~150 ng/mL。
12.3 灵敏度：4.0ng/mL。
12.4 方法的有限性及干扰因素：胆红素≤20mg/L、TG ≤1500 mg/L、Hb ≤5 0g/dL，TP≤10g/dL时，测试结果的干扰偏差在±10%范围内。
当样本中RF浓度≤400IU/ml时测试结果的干扰偏差在±15%范围内。当样本中含ANA干扰物时，测试结果的偏差在±10%范围内。
13 参考范围及医学决定水平
参考值（血清）： 30.00 ~ 300.00ng/mL
14 临床意义
14.1由于25-OH-VD是人体内维生素D的主要储存形式，因此，通过检测25-OH-VD可以确
定总体维生素D的情况。25-OH-VD检测的临床应用主要与佝偻病(儿童)，骨软化症、绝经后骨质疏松和肾性骨病的诊断、和监测有关。维生素D缺乏还和许多其他的疾病有关，包括癌症、心血管疾病、自身免疫性疾病、糖尿病和抑郁症。测定25-OH-VD可应用于:
1.监测骨相关疾病例如佝偻病(儿童)、骨软化症、绝经后骨质疏松症和肾性骨病或非骨相关疾病补充维生素D 的效果。
2.诊断维生素D毒性，例如有可疑毒性的患者(高钙血症)。
3.诊断维生素D不充足或缺乏，有助于确认那些可能通过补充维生素D达到最佳水平从而受益的个体。
15 结果审核以及与相关项目的联系
15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。
15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。
15.3 相关项目：审核与临床用药情况是否相符，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查原因
16 有关引用程序与文件
16.1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。
16.2 免疫检验室内质控标准操作程序。
16.3 检验结果审核程序。
16.4 标本送检和接收程序。
17 参考文献
17.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.
17.2 25羟基维生素D测定试剂盒说明书。
17.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2
006.
18 本SOP变动程序
任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。
19 本SOP涉及的记录与表单
19.1 剂装载记录表
19.2 质控记录
19.3 失控及失控处理记录
19.4 检验结果审校核记录
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议