输血科试验操作规程
一、血型血清学检查的操作规程
（一） ABO+RH血型鉴定常规方法
1..试剂：
单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，RhD(IgM)血型单克隆抗体定型试剂，2-5%的反定红细胞悬液 2.．操作步骤：
（1）将病人标本离心
（2）反定型：取两只试管分别标明A、B，加入相应的反定细胞各1滴，加入病人的血浆1滴，离心 （3）将玻片用红蜡笔划分为3个区域，各加一滴待测标本红细胞，分别滴加抗A、抗B、RhD试剂，轻轻晃动观察结果
（4）结果：有凝集为阳性。无凝集无溶血为阴性。正反定型对照得出结果 （二）ABO+RH血型鉴定（卡氏法）操作
1.试剂：Ortho Biovue ABO-Rh正反定型血型试剂卡友6个微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白、大分子增强剂以及0.1%叠氮钠和0.01M的EDTA。
2.操作步骤：
（1）配置0.8%的反定细胞（一般配成约1.5%）
（2）将试剂卡编号，并打开试剂卡
（3）将病人血标本离心
（4）将50ul的反定细胞A、B加入到相应反应腔中（5号6号柱），加入50ul的病人血清。
（5）取50ul的病人压积红细胞加入1ml的盐水中配成5%的红细胞悬液，分别加入前四柱10ul的5%红细胞悬液。
（6）离心，读取结果. 按照下表并结正反定型对照。得出结果
报告 | 试验结果 |
阴性 | 无溶血及红细胞未凝集 |
1+ | 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞 |
2+ | 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞 |
3+ | 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分 |
4+ | 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带 |
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（二）改良凝聚胺技术交叉配血试验
一.主要组成成份：R1：低离子介质、R2：凝聚胺、R3：假凝集清除液。
二.步骤：
1.复检供血者、受血者血型
2.主侧管加入供血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入受血者血清1滴或2滴
3.次侧管加入受血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入供血者血清1滴或2滴
4.加低离子介质3滴，混匀，静置30秒，各管加凝聚胺1滴，混匀，3500r/min离心15秒，倒出上清液（残留约0.1ml）,扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集1min内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1min内不能被消除，即为阳性。
三.结论：阳性表示受（供）血者红细胞血型抗原相应的抗体（IgG或IgM）不相容，阴性表示供受血者相容。
（三）卡式交叉配血试验
国企再掀反腐风暴一、工作准备：
1.生理盐水
2.0.8%-1%样本红细胞配备：致幻剂10ul样本压积红细胞加入1ml的生理盐水中
二.操作步骤：
1.1号管中（主侧）加入50ul供血者1%红细胞悬液，25ul受血者血浆或血清。
2.2号管中（次侧）加入50ul受血者1%红细胞悬液，25ul供血者血浆或血清。
3.37℃孵育15min
4.离心5min，判断结果，记录
注：1+至4+为抗人球配血不成功，-（0）为配血成功
(四）抗体效价测定操作规程
操作步骤：
一．IgG类
1、IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200ul加等体积2－Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200µl病人血清＋600µl生理盐水备用
排列6支试管按顺序编号。第二管开始加样各加加生理盐水200，在第一管和第二管中各加入稀释血清俺妈说了200µl，第二管混匀后移出200µl转至第3管，以同样操作稀释至第6管，从第6管吸出200µl暂时保留在另一试管中（可作为第7管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第6管的血清稀释度依次是1∶8，1∶16，1：32，1：64，1在家里教学设计：128，1：256；
2、加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂） 每管各加2%相应红细胞悬液200µl，混匀。（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；
3.先直接离心观察结果，之后再每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30 S均匀后，再各加R2溶液1滴，并混合均匀，离心后再加R3液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。
二． IGM
1、 血清连续倍量稀释法 先稀释血清：100µl病人血清＋700µl生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样各加加生理盐水200ul，从第一管和第二管中各加入稀释血清200µl，第二管混匀后移出200µl转至第3管，以同样操作稀释至第6管，从第6管吸出200µl暂时保留在另一试管中（可作为第7管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第6管的血清稀释度依次是1∶8，1∶16，1：32，1：64，1：128，1：256；
2、 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂） 每管各加2%相应红细胞悬液200µl，混匀。（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；
此为IgM类盐水抗体可立即离心后观察。
恩度（五）新生儿溶血病检查
新生儿溶血病的检测主要有三项试验：直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试验，步骤：
1.将患儿标本离心
2.直接抗人球蛋白试验 取10ul的压积红细胞加入1ml生理盐水中配成1%的红细胞悬液，混匀后取50ul加入抗人球蛋白卡中，离心，观察结果。
3.游离抗体试验 取患儿血浆25ul加入与患儿同型2%的红细胞50ul，混匀后取50ul加入抗人球蛋白卡中，37℃孵育30min,离心，观察结果。
4.抗体释放试验 2012重庆高考作文将患儿压积红细胞洗涤3-5次，取0.5ml加入等量的生理盐水，56℃水浴震荡10min后立即3500r/min离心1min，取25ul上清液，加入与患儿同型的红细胞50ul，混匀后取50ul加入抗人球蛋白卡中，37℃孵育30min，离心，观察结果。
4 结果观察
报告 | 试验结果 |
阴性 | 无溶血及红细胞未凝集 |
1+ | 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞 |
2+ | 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞 |
3+ | 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分 |
4+ | 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带 |
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（六）不规则抗体检查
一．概述：
不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。所谓不规则抗体是抗 Ａ、抗 Ｂ以外的血型抗体，其多为ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ等),才能使致敏红细胞出现凝集反应。
虽然不规则抗体筛选阳性率较低，但是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞,抗原、抗体发生免疫性结合，补体的参与下,使输入的红细胞发生溶解,即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿,严重时甚至危及其生命。因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性。当不规则抗体筛选阳性时,必须进一步作抗体鉴定,确定其特异性后,再输入无相应抗原的红细胞,才能达到安全输血之目的。
不规则抗体是引起溶血性输血反应和新生儿溶血病的主要因素之一, 对输血发生溶血性反应所引起肾衰、死亡病例的诊断有临床意义。因此为了保证输血安全,提高输血疗效,减少或杜绝溶血性输血反应的发生,不规则抗体检查必须作为输血前检查的重要项目之一。
二．步骤：
1.将待测标本离心.
2.取50ulⅠ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞（2%-3%浓度）分别加入抗人球蛋白卡中，加入待测血清25ul,37℃孵育15min,离心，观察结果
三．结果观察
报告 | 试验结果 |
阴性 | 无溶血及红细胞未凝集 |
1+ | 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞 |
2+ | 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞 |
3+ | 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分 |
4+ | 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带 |
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