展
攀誊
海洋天然产物Manoalide药理作用的研究进展
山东省海洋药物科学研究所(266003)李青选应对方式问卷
八十年代初期，抛自栖息于太平洋
西加罗林岛附近水域水深2O至35米处的
海绵I.~ffarwlla1xtTio~中提取出一种二倍半
李克农将军萜烯类物质称之为Manoalide(MLD)D].体外
链霉菌及金黄葡萄球菌的活性尤为明显.
此后,Johnr叫b[】.]自Palau岛附近水域之同
类海绵中亦分离出MLD并发现当MLD剂量
为50rag/幻时，在苯醌试验中对小鼠有明显
的镇痛作用.鉴于MLD结构新颖且与已知的
镇痛药物如，内啡肽，水杨酸盐及吲哚
美辛等在结构上无相关性，引起了国外学者
生产调度系统对其进行深入研究的兴趣.近十年的研究进
展表明,MLD对磷脂酶A2，磷脂酶，鸟氨
及脂氧酶具有双重抑制作用，是一种具有重
要开发研究价值的海洋天然产物.
药理作用
1.对磷脂酶的抑制作用
1.1对磷脂酶A2的抑制作用
Bennett研究了MLD对四种纯化的细胞
外磷脂酶A2(PLA2)的抑制作用[2].结果表
明,MLD对蜂毒PLA2活性最强,Ics0值为0.12 pmol/L，对猪胰PLAz活性最差,Ic50值为
30pmol/L.而对响尾蛇毒PLA2及眼镜蛇毒
PLA2的ICso值分别为0.7及1.9.umol/L. Glazer总结了MLD对蜂毒PLA2的抑制作用
的四个特点[.:(I)MLD对PLA2的抑制呈
浓度依赖关系.当MLD≥4.0pmol/L时对
'中国海洋药物垛志1991年夸I53期(总第39期) PLA2活性完全抑制，而其Ic50值则为0.
051Jmol/L，在双倒数图象中(double—recipro_ calplot)两者关系为非线型，表明MLD的作
用不遵循典型之Michaelis--Menten动力学原理;(ir)MLD在微摩尔(1imo1)浓度范围内,
PLAz活性丧失与时间的关系不呈直线型,
提示两者不循从伪一级动力学(pseudo--first
—
orderkinetics)原理;(Ⅲ)MLD的作用为
pH依赖性而非钙依赖性.MLD在pH6.0—
7.0之间迅速抑制PLAz,pH8时活性最强;
当ca.+在0—12nmol/L范围内对0.5~tmol/L
之MLD的作用无影响;(IV)对PLA2的抑制
为不可逆性.D—PLA,，复合物在稀释100
倍时，或在4℃透析24h,PLAz活性并不逆
转.在此基础上,Glazer进而研究了MLD抑
制蜂毒PLAz的动力学以及所必需之肽段和
氨基酸残基['..Glazer发现,MLD不仅能抑
制蜂毒PLA2活性，而且可与PLA2形成生
团(Chromophore,),max437nm).MLD的结构
可分为两部分：一部分是羟丁烯酸内酯(hy—droxybutenolide)，一部分是吡喃(pyraa).生
团的形成系羟丁烯酸内酯部分与嗜核基
团发生反应所致；而对PLAz的抑制作用则
是吡喃与另一个嗜核基团反应所致.据此, Glaser推测MLD与蜂毒PLA2的作用分两个阶段，最初是MLD中的羟丁烯酸内酯部分
与一个嗜核基团反应；而对PLAz的不可逆
抑制则是吡喃部分与另一个嗜核基团的反
应结果.利用生团为标志可阐明MLD与PLA的结合部位.业已证实,MLD与PLA2
一
级和三级结构中的两个Lys残基的e一氨
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基发生作用，所需最佳肽段为L?或Lys—x
—
x—Lys.
deFreitas采用大鼠膈神经标本及生化
测试方法研究了MLD对银环蛇毒液PLA2 的抑制作用[s-.研究结果表明,MLD与纯山东大学威海分校
PLA2培养lIl，可使PLA2对磷脂酰胆碱水解作用抑制75%.在双倒数图象中二者呈直线关系且MLD的KD值为4.8x10_.M，表明MLD为强力的PLA2抑制剂
鉴于MLD有抑制佛波酯(phorbol—
ester)致鼠耳炎症的活性，为探讨局部应用MLD的抗炎活性与对细胞内PLA2活性抑制
的关系,Bennett研究了MLD对细胞内PLA2
的抑制作用[引.Bennett采用胞浆分离术，分
离出豚鼠子宫，肺以及大鼠嗜碱细胞白血病
细胞(BRL～1)和平滑肌样细胞株(BC3H)内
的PLA2，并测得活性范围为1.2一
d7Opn1oles/n1g/Inin.结果表明,MLD对细胞
内PLA2的Ic5o值比MLD对蜂毒PLAzICs0值高200倍.MLD对小鼠耳匀浆中PLA2有抑
制作用，其IC5o为60/amol/L比MZ,D抑制佛
波酯致鼠耳炎症EDso值高2.5倍.可见,
MLD对细胞内PLAz的抑制作用低于对细胞
外PLA.的抑制作用.其原因可能是，胞浆中
含有一种蛋白质(可能是大分子的Lys残基)
对MLD的活性有抑制作用.
1.2对磷脂酶C的抑制作用
Bennett的工作证实了MLD对细胞内磷
脂酶C(PLC)具有抑制作用[6].MLD不仅对
豚鼠子宫细胞胞浆中的PLC有抑制作用而
且对纯制的PLC亦有抑制作用，此作用呈量
效依赖关系,Ic5.值为3—6pmol/L.MLD对
PLC的抑制特点与对PLA2的特点相似，只
是对PLC的抑制是钙依赖性的.在平滑肌样
细胞株,DDT以及MF一2细胞中,MLD对
去甲肾上腺素导之PLC对磷酸肌醇水解
和对钙的动员均有抑制作用.MLD能抑制去宁波px事件
老年人健康码实际使用现状甲肾上肾素诱导PLC水解肌醇形成l,4,5—
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三磷酸肌醇和l一磷酸肌醇，此作用呈浓度
依赖性.MLD抑制PLC形成l一磷酸肌醇的
Ic50值为1.5gmol/L；抑制Ca.+在DDT和MF 一
2细胞中的跨膜作用的Ic5o为2.0pmol/L. Bennett认为,MLD对细胞内PLC的抑
制作用与其抗炎作用有关[引.
2.对致炎二十碳酸的调节作用
致炎二十碳酸(pro/nflammatorye- icosanoids)包括花生四烯酸(AA)经环氧酶途径和脂氧酶途径生成的POs,LTs和TXs.近
年的研究工作表明,PLA.为其生物合成限
速酶[.?".Alejandro证实,MLD不仅对PLA2 有直接抑制作用，而且对致炎二十碳酸
PGE2和LTC.的合成亦有抑制作用[引.
2.1体外药理试验
(I)MLD抑制小鼠腹腔巨噬细胞(M)
释放
[.H]AA：以[.H]标记AA用1/amol/L乙
酰肉豆蔻酸佛波醇(PMA)刺激M,4h后测
定释放之[.H]AA.M未经MLD处理时,
[.H]AA的释放量为76348士352dpm，为
lo0.当MLD的浓度依次为0.01,0.025
及0.05pmol/L时,[.H]AA释放量分别为
62,826士531,52,ll8士405及47994士
339dpm，抑制率分别为82.3,68.3及
62.99/5.
(Ⅱ)MLD抑制M生物合成PGE2:
采用PMA，钙离子载体A23187及酵母
多糖(zymosan)为刺激剂，观察MLD对M
生物合成POE的抑制作用.结果表明，用
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