JIS_Z_2801-2010中⽂
JIS_Z_2801：2010 抗菌加⼯产品-抗菌试验⽅法，抗菌效果 概要
本标准是在2007年第⼀次发⾏的ISO22196的基础上，为符合科技发展及实际情况等⽽做的技术内容变更所制定的⽇本⼯业标准。 另外，在本标准中的斜体字或虚线下划线所标注的有关国际标准变更事项的说明。变更表格涵盖在此说明中，具体请详见附属表格JA。
1、试⽤范围
本标准除纤维制品及光触媒抗菌加⼯制品以外，对树脂制品，⾦属制品，陶瓷制品等抗菌加⼯产品(含中间产品)表⾯细菌的抗菌性试验⽅法及抗菌效果的规定。
另外，防霉、防臭、⽣物腐蚀等仅次于抗菌效果的功能，不包含在本标准中。
注：1.有些制品要从其使⽤⽤途、形状等来判断纤维制品的试验操作⽅法是否妥当，可参见JISL1902规定10（定量试验）。
2.本标准就有关国际标准以及其相关程度所表⽰的符号含义，详见如下。
ISO 22196:2007，Plastics-Measurement of antibacterial activity on plastics
surfaces（MOD），对其相关程度所表⽰的“MOD”是指以ISO/IEC
Guide21-1为基础，即表⽰“正在修订中”。
2、参考⽂件
下列标准和条款通过本标准的引⽤成为本标准，版本更新的标准适⽤本标准。
JIS K 0050 化学分析⽅法总则
JIS K0950 塑料杀菌碟
JIS K0970 按钮式液体⽤微量体积计
JIS K3800 ⼆级的⽣物安全装置
JIS K8101 ⼄醇（99.5）（试剂）
JIS K8150 盐酸
JIS K8180 盐酸（试剂）
JIS K8263 琼脂（试剂）
JIS K8576 氢氧化钠（试剂）
JIS K9007 磷酸⼆氢钾
JIS K9017 磷酸⼆钾
JIS K9012纺织产品的抗菌性实验⽅法
JIS R3505 玻璃材质的体积计
JIS Z 8802 pH值测定⽅法
3、定义
本标准使⽤了如下定义和术语
3.1抗菌抑制产品表⾯细菌繁殖的状态
3.2抗菌剂直接使⽤或混合在制品表⾯以抑制细菌⽣长的试剂。
3.3抗菌加⼯以抗菌为⽬的的加⼯。
3.4抗菌加⼯制品被实施抗菌加⼯技术的制品。
3.5抗菌活性值（antibacterial activity）
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加⼯产品和未加⼯产品进⾏细菌接种培养后的细菌数进⾏对数后的差值。3.6抗菌效果 (antibacterial effectivvness) 从抗菌活性值判断抗菌加⼯产品的效果。
4、抗菌加⼯产品的抗菌效果，根据本标准的试验⽅法得出，抗菌活性值为2.0以上可判定具有抗菌效果。另外，根据当事⼈之间的协定，2.0上下的数值均可以。
5、试验⽅法
5.1 试验中的细菌
试验中所使⽤到的细菌种类，可根据以下列表，对其细菌逐⼀进⾏试验检测。
a)⾦黄⾊葡萄球菌
铁路运输安全保护条例b)⼤肠埃希⽒菌
本标准所试⽤的药品，材料，器具及装置，没有特别的规定，如下所⽰均可
⼄醇（C2H5OH） JIS K8101规定的1级以上的物品
⽜⾁浸膏微⽣物试验⽤的物品
蛋⽩胨微⽣物试验⽤的物品
氯化钠（NaCl） JIS K8150规定的特级物品
纯⽔适合第15修正⽇本药局⽅的基准的物品
琼脂 JIS K8263规定的特级以上的物品
明基笔记本电脑酵母膏微⽣物试验⽤的物品
胰化蛋⽩胨微⽣物试验⽤的物品
葡萄糖微⽣物试验⽤的物品
酪蛋⽩胨微⽣物试验⽤的物品
⼤⾖胨微⽣物试验⽤的物品
卵磷脂微⽣物试验⽤的物品
⾮离⼦表⾯活性剂吐温80
磷酸⼆氢钾KH2PO4 JIS K 9007规定的特级物品
磷酸氢⼆钾K2HPO4 JIS K 9017规定的特级物品
氢氧化钠NaOH JIS K8576规定的特级物品
盐酸HCL JIS K 8180规定的特级物品
棉花塞
接种环尖端⼤约⼀个4mm的环点
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⼲热消毒器使保持温度在160⾄180℃
⾼压灭菌器能保持121℃和103KPa 的压⼒
⽣物安全柜性能按照或等价于JIS K 3800
pH计 JIS Z 8802规定中所使⽤的pH计
天平性能按照或等价于JIS K 0050
净化操作台微⽣物实验⽤
吸管精确度能达到或等价于JIS K 0970或JIS R 3505A 级
培养箱保持温度±1℃
⽆菌培养⽫内径90mm的玻璃器⽫或是按JIS K 0950中规定规格
振荡器（拍打机）微⽣物测试
薄膜不能影响微⽣物⽣长和吸⽔、厚度不定，但可以吸附着使⽤。
5. 3 杀菌⽅法
试管、吸管等玻璃试验器具，呈碱性状态时⽤中性试剂冲洗即可，再⽤⽔充分洗净，待⼲燥之后再进⾏⼲热杀菌或者⾼压蒸汽杀菌处理。具体灭菌⽅法，详见下列a)⾄b).另外，接种环等需要⽕焰灭菌的情况下使⽤，详见c).
a）⼲热杀菌
将杀菌对象放⼊⼲热杀菌器，在170℃的情况下进⾏60分钟以上时间的杀菌，或在160℃的情况下进⾏120分钟以上时间的杀菌。但是⼲热杀菌完成后，杀菌的绵塞，包装物等被⽔浸湿时，器具不可再⽤。
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b）⾼压灭菌锅
将⽔倒⼊⾼压杀菌器，把杀菌物放在铁丝⽹篮上，盖上⾼压杀菌器的盖⼦，加热，温度达到121℃（压⼒相当103KPa）后保持15～20分钟。加热停⽌，⾃然冷却到100℃以下后，打开排⽓，排去蒸汽，打开盖⼦，取出杀菌后的物品，如有必要的情况下在净化操作台内冷却。⾼压灭菌锅要防⽌受到培养基和化学试剂的污染，为了保持⼲净，有必要的情况下可以放到中性洗剂中洗净，再⽤⽔充分清洗。
c）⽕焰杀菌
将需要灭菌的物体或部分物体放到⽓体或者酒精的⽕焰中。接种环应加热到⾜够的红，试管应解除⽕焰2-3秒。
5. 4 其它培养基
使⽤如下所⽰组合的培养基。另外，如果成分相同，可以使⽤市场上销售的产品。
a）细菌悬浊液⽤营养⾁汤[1/500细菌悬浊液⽤营养⾁汤(1/500NB)]
准备纯⽔或者离⼦交换⽔1000ml，称取⽜⾁浸膏3.0g，蛋⽩胨10.0g，氯化钠
5.0g，放⼊烧瓶⾥混合，充分溶解。⽤纯⽔稀释500倍。，⽤氢氧化钠或者盐酸溶液进⾏调整PH值，使PH值在
6.8—
7.2之间 (25℃)，然后进⾏⾼压蒸汽杀菌。配好的1/500NB如果不马上使⽤，可放到5-10℃的温度下保存。超过⼀周以上的
1/500NB不能使⽤。
b)营养琼脂培养基
准备纯⽔或者离⼦交换⽔1000ml，称取⽜⾁浸膏5.0g，蛋⽩胨10.0g，氯化钠
5.0g，放⼊烧瓶⾥混合，全部溶解后，⽤氢氧化钠或者盐酸溶液进⾏调整PH值，使PH值在7.0—7.2之
间(25℃)，加⼊琼脂粉
15.0g，加热溶解，塞上绵栓，进⾏⾼压蒸汽杀菌。配好的培养基如果不马上使⽤，可放到5-10℃的温度下保存。不能使⽤超过⼀个⽉以上的营养琼脂培养基。
c) 平板计数琼脂/标准琼脂培养基
准备纯⽔或者离⼦交换⽔1000ml，称取酵母膏2.5g，蛋⽩胨5.0g，葡萄糖1.0g，放⼊烧瓶⾥混合，全部溶解后，⽤氢氧化钠或者盐酸溶液进⾏调整PH值，使PH值在7.0—7.2之间(25℃)，加⼊琼脂粉15.0g，加热溶解，塞上绵栓，进⾏⾼压蒸汽杀菌。配好的培养基如果不马上使⽤，可放到5-10℃的温度下保存。不能使⽤超过⼀个⽉以上的标准琼脂培养基。
d)斜⾯培养基
准备6-10ml溶解后的营养琼脂培养基b)注⼊试管内，塞上绵栓⾼压蒸汽灭菌。灭菌完成后，把试管放在⼲净的室内保持15°倾斜，让试管内的物质凝固。如果没有冷凝⽔，则重新溶解，凝固后再⽤。配好的培养基如果不马上使⽤，可放到5-10℃的温度下保存。不能使⽤调⾄超过⼀个⽉以上的斜⾯培养基。
e) SCDLP ⾁汤
准备纯⽔或者离⼦交换⽔1000ml，酪蛋⽩胨17.0g，⼤⾖胨3.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢氧⼆化钠2.5g，葡萄糖2.5g，卵磷脂1.0g，放⼊烧瓶内混合，充分溶解后，添加⾮离⼦表⾯活性剂7.0g并溶解。⽤氢氧化钠或者盐酸溶液进⾏调整PH值，使PH值在6.8—7.2之间(25℃)，⾼压蒸汽灭菌。配好的培养基如果不马上使⽤，可放到5-10℃的温度下保存。不可使⽤超过⼀个⽉的SCDLP（液体培养基）。
f)磷酸缓冲液
准备磷酸⼆氢钾34.0g放到烧瓶内，添加纯⽔或者离⼦交换⽔500ml进⾏混合，充分溶解后，⽤氢氧化钠或者盐酸溶液进⾏调整PH 值，使PH值在6.8—7.2之间(25℃)。进⽽，添加纯⽔或者离⼦交换⽔使之达到1000ml。⾼压蒸汽灭菌备⽤。不可使⽤超过⼀个⽉的磷酸缓冲液培养基。
g) 磷酸盐缓冲⽣理盐⽔溶液
⽤⽣理盐⽔（0.85%氯化钠溶液）800倍的量稀释磷酸溶液，必要的情况下，注⼊试管或者三⾓锥瓶中，塞上绵栓进⾏⾼压蒸汽灭菌。调⾄后，不马上使⽤的放到
5-10℃的温度下保存。不可使⽤超过⼀个⽉的磷酸盐缓冲液。
5. 5 菌种准备
菌种的转接要⽆菌操作，有必要时使⽤⽣物安全柜。⼀⼿持带有菌种的斜⾯培养基，另⼀⼿持接种环，⽤这只⼿拔出棉塞，然后⽤⽕焰对试管⼝和接种环进⾏消毒，⽤接种环碰触斜⾯培养基上的冷凝⽔使冷却，⽤接种环从培养基表⾯刮取部分菌种并在新的斜⾯培养基上涂开，划线涂抹成条状。
物质的量此⽅法根据图1所⽰，⽤接种环的顶端置于冷凝⽔以分散菌种，从冷凝⽔底部到斜⾯上⽅⽅向，⽤蘸取冷凝⽔的接种环的顶端以Z 形划线涂抹。
图1 菌种转接
对试管⼝⽤⽕焰进⾏再次消毒，塞住棉塞保持原状。⽤过的接种环要进⾏再次消毒，转接的菌种在35±1℃下接种培养24-48⼩时，后储存在5-10℃温度下，⼀个⽉内进⾏转接，过程同上。菌种传代次数不能超过5次，从最初的菌种从管理部门获得计算。此外，当最后⼀次转接超过⼀个⽉或是更多，
则不能被使⽤。
另外，来⾃菌种管理部门的菌种，经过冷冻⼲燥、冻结等允许使⽤长期保存⽅法保存的情况下，为了保存菌种⽽进⾏菌种移植。在试验⽤时，不能使⽤超过转接5次的保存菌种。
5. 6测试
菌种应⽆菌操作，注意器械、⼈员、⼯作环境的污染，必要的情况下使⽤⽣物安全柜。
a）细菌预培养
使⽤接种环从保藏的斜⾯菌种5.5转接到斜⾯培养基5.4d上，在35±1℃培养16-24⼩时，然后从此斜⾯使⽤接种环接种到另⼀个斜⾯培养基，在35±1℃下培养16-20⼩时。
b）准备测试⽚
测试⽚准备，如下。
1.)把样品平的部分切成标准尺⼨50±2mm（厚度为10mm以内）的正⽅形，
如因产品形状问题不能准备，可以采⽤相同的加⼯⼯艺⽅法⽣成测试⽚。测试⽚尺⼨没有特别规定，
只要能被薄膜覆盖400－1600mm2即可。
2.)将⽆抗菌加⼯的测试⽚和经抗菌加⼯测试⽚切成相同⼤⼩，准备6⽚⽆抗
菌加⼯的测试⽚，使⽤3个测试⽚接种后马上测试活性细胞数值，另外3个计算接种24⼩时后的活细胞数。
3.)在没有⽆抗菌加⼯测试⽚的情况下，可使⽤5.2中的薄膜。测试⽚的准备过
程中可能会发⽣微⽣物污染，务必要注意制品间的相互污染以及制品被污染的情况。由于制品的形状导致测试⽚准备困难的情况下，可以使⽤原材料或者⽤同种加⼯⽅法制成平板形状的测试⽚。
4.)⽆抗菌加⼯测试⽚准备不⾜的情况下，准备半数（3个）测试⽚，在24⼩
时培养后的活细胞数测试中使⽤这3个⽆加⼯测试⽚，⽤薄膜替代⽆抗菌加⼯测试⽚，接种后马上测试活性细胞数。当半数（3个）测试⽚准备不⾜的情况下，可全部⽤薄膜替代。
c）测试⽚清洗
⽤纱布或脱脂棉粘上酒精全⾯的擦拭测试⽚b)2-3次，充分⼲燥。
如果经过处理后测试表⾯变软、表层分开，如果影响实验结果，样⽚清洗会导致软化、表⾯涂层溶解及溶出，应该避免清洗，或⽤没有清洗的测试⽚，也可⽤其它适合的⽅式清洁。
d）测试菌液准备
⽤接种环挑取培养好的测试细菌a)，均匀分散到少量的1/500NB（营养⾁汤）中，通过合适的⽅法使稀释液的细菌数量在
2.5x105~10x105个/ml，使⽤这种菌液当做
接种体。如果接种体没有马上使⽤，在0℃保存并在2⼩时内使⽤。
e）测试菌液的接种
1）在接种过程中，将各个试验⽚c)分别放⼊⽆菌平⽫中，实验测试⾯朝上。试
验测试⾯即为实施抗菌加⼯的制品表⾯。抗菌加⼯⼯艺在其内部的制品，剪裁制品的所得⾯并不为试验测试⾯。
2）⽤吸管准确吸取0.4ml测试菌液d)，并滴⼊各个平⽫中的测试⽚。⾮标准测
试⽚所需要使⽤的菌液量按其覆盖⾯⼤⼩进⾏⽐例分配。即使是⾮标准测试⽚，也要按规定中的菌液使⽤量接种，测试⽚很湿，像陶瓷，瓷砖, 瓷釉, 玻璃，也许少许倾斜, 这时菌液就会溢出薄膜。在这种情况下，菌液的量就可以减少到1/4的标准量。如果菌液量被减少，被接种在每个测试⽚上的细胞数量为6.2x103~2.5x104个/cm2，类似于标准的测试⽚。
3.)在滴下的接种菌液上⽅覆上薄膜，要注意不要让接种菌液从薄膜的⼀端溢出，
并且为了使测试菌液被薄膜全部覆盖，可⽤培养⽫的盖⼦上轻轻按压（参照图2）
薄膜的标准尺⼨为正⽅形40 mm ±2 mm。如果测试⽚不是标准的尺⼨，将薄膜调整到能覆盖到测试⽚内的2.5mm~5.00mm的⼤⼩，调整薄膜的尺⼨不⼩400mm2。再次，因测试产品的不平整形状等问题不能很好让薄膜吸附在上⾯，如因测试产品会亲⽔或吸⽔问题这个过程可以考虑不⽤薄膜。不使⽤薄膜的操作情况下，将5.6b)中的测试⽚⼤⼩调整为40±2mm（厚度为10mm以内)的标准尺⼨即可。
在接种过程中，如果很难阻⽌菌液从薄膜边缘溢出，可将接种量减少到0.1ml，但菌液浓度要增加，以保证和常规接种量的细菌数量⼀样。
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