七、问答题
(1)转录终止的两种主要的机制是什么?
(2)描述翻译怎样能调节转录终止。
(3)为什么在细菌转录终止中很少涉及到Pho因子?
(4)怎样能阻止转录的终止?
2．复制 DNA的聚合酶(DNA依赖的 DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有这种功能。
3．讨论原核生物基因表达的聚合作用反应定向的重要性。假如核糖体从3’端到5’端读它的模板 mRNA的话，那么将会发生什么情况?
4．概括细菌细胞内的转录过程。
5. 概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。
6．转录如何在基因或基因组末端终止?
7．(1)如何区分由启动子起始转录的RNA片段与5’端被加工过的RNA片段;
(2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成的。
8．比较E．coli rRNA和 tRNA的转录和加工。
勤奋学习全面发展
9．区别可诱导和可阻遏的基因调控。
10．衰减作用如何调控E. coli中氨酸操纵子的表达?
仇岗卫士
11．比较并指出细菌和真核生物RNA 翻译机理的异同。
12．什么是摇摆假说?
乡村社会学13．指出E.coli和真核生物翻译起始的不同。myie2
14．S．N Cohen于1973年构建了三个重组体， pSC102， pSC105， pSC109请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么?
15．基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的?
16．什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system) 17．细菌的限制—修饰系统有什么意义?三等残废
19．Ⅰ类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?
nvnu
20．Ⅲ类限制酶有哪些特点?
21．何谓限制性内切核酸酶的切割频率?
22．什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?
23．双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。
24．什么是 DNA多态性(DNA polymorphism)?
25．限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。26．计算下列三种酶各自在某染体 DNA序列上识别位点间的平均距离：
Alu Ⅰ：5’AGCT 3”Eco R Ⅰ: 5’GAATTC 3’
3 TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’
AcyⅠ:5’GPuCGPyC 3’
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3’CPyGCPu5’
(注： Py=任何一种嘧啶； Pu=任何一种嘌呤)
27．在细菌质粒 pBP1的四环素抗性基因 tet R的中间有一个HindⅡ的切点。用HindⅢ切割果蝇基因组 DNA，以 pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的
基因。用HindⅢ和Eco RV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1(用酶切的 pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。
(1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的 pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性
基因的位置—;
(2)如果用克隆在另一个与 pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进行
Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
(3)如果用克隆15的果蝇 DNA片段作为探针进行 Southem印迹杂交，放射自显影的
结果又是如何?
28．为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。
29．据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致 DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。
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30．为了绘制长为3.0kb Bam H Ⅰ限制性片段的限制性图谱，分别用Eco R Ⅰ、Hpa Ⅱ Eco R
Ⅰ十 Hpa Ⅱ消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离 DNA 片段，溴化乙锭染
后观察DNA 带型(图15.2)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明E.co R Ⅰ和H
pa Ⅱ识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。
31．1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA 连接酶，每个实验室的实验有什么特点?
32．简述 DNA 和RNA 连接酶的催化反应机制。 33. 影响 DNA 连接酶催化连接反应的因素有哪些?
34．什么是Klenow 酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用? 35. 如何利用 T4 DNA 聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? 36. 如何利用 T4 DNA 聚合酶进行双链 DNA 的3’末端标记? 37．如何利用 T4 DNA 聚合酶制备平末端?
38．反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY, aviam myeloblastosis virus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M —MLV ，Moloney murine leukemia virus)，它们之间有什么不同? 39．与E.coli RNA 聚合酶相比，细菌噬菌体的 SP6RNA 聚合酶、 T7 RNA 聚合酶和 T3 RNA 聚合酶具有哪些优越性?
40．什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应?
41．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途? 42．λ外切核酸酶(lambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?
43．Mn 2+、 Mg 2+
对 DNase Ⅰ(deoxyribonuclease Ⅰ)的活性有什么影响? DNase Ⅰ在基因
工程中有什么作用?
44．比较 S1-Mapping 和 Footprinting 在原理上、方法上、应用上有何不同
45．什么是复制子(replicon)?
46．什么是质粒的相容性?什么是不相容?机制是什么?
47．什么是质粒的带动转移?
48．说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
49． Co1El衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?
50． R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?
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