欧阳文;熊广华;李顺祥;罗懿钒;程思佳;张云坤;唐敏;唐纯玉;唐代凤;肖珊;贺玉婷
景德镇陶瓷名人录【摘 要】宏大叙事
目的 研究湘产特药材土牛膝化学成分.方法 采用乙醇提取、溶剂萃取法初步分离,硅胶、反相硅胶柱层析与溶剂重结晶进行化合物分离纯化,通过波谱数据、理化性质及文献对照对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果 从土牛膝乙醇提取物中获得7个蜕皮甾酮类化合物,分别为:β-蜕皮甾酮(1)、牛膝甾酮(2)、水龙骨甾酮B(3)、pterosterone(4)、24(28)-ecdysterone(5)、achyranthesterone A(6)、rubrosterone(7).结论 化合物4-7均为首次从该种植物中分离得到. 小时候绿原
【年(卷),期】2018(038)010
【总页数】唐山警示录4页(P1129-1132)
【关键词】土牛膝;化学成分;结构鉴定;蜕皮甾酮
【作 者】欧阳文;熊广华;李顺祥;罗懿钒;程思佳;张云坤;唐敏;唐纯玉;唐代凤;肖珊;贺玉婷
【作者单位】湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南食品药品职业学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;湖南时代阳光药业股份有限公司,湖南 永州 410116;湖南省抗感染中药工程技术研究中心,湖南 永州 410116;湖南时代阳光药业股份有限公司,湖南 永州 410116;湖南省抗感染中药工程技术研究中心,湖南 永州 410116;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208
【正文语种】中 文
【中图分类】R284.2
土牛膝为民间药，别名倒钩草、倒梗草，来源较为复杂，包括苋科植物粗毛牛膝、柳叶牛膝及牛膝野生种的干燥根及根茎[1]。2009版《湖南省中药材标准》收录土牛膝为为苋科植物土牛膝Achyranthes aspera Linnacus的干燥根及根茎，秋冬季地上部分枯萎或早春发苗时采挖[2]。土牛膝主要产于湖南、安徽、浙江等地,在民间主要用于白喉，且疗效显著。土牛膝具有显著的抗炎药用功能，研究表明土牛膝提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、鸡蛋清引起的大鼠足跖肿胀以及急性炎症导致的腹腔毛细血管通透性均有不同程度的抑制作用[3]。饶芳等建立家兔声带炎症模型，观察研究了土牛膝提取物对大白兔急性咽喉炎的作用，结果表明土牛膝提取物可以显著抑制家兔急性咽喉炎的症状[4]。
目前关于土牛膝的物质基础研究国内外报道较少，为充分利用土牛膝植物资源，进一步开发土牛膝的药用价值，本文拟对土牛膝的根及根茎主要化学成分进行研究。
1 仪器与材料
INOVA-600MHz,INOVA-500MHz高分辨超导核磁共振谱仪 (瑞士Bruker公司)；Waters Xev
o G2-XS Q-Tof质谱仪（美国Waters公司）。柱层析正相硅胶(80-100目、200-300目)（青岛谱科分离材料有限公司）；反相硅胶 RP-18 ODS-A(50 μm)（日本YMC Co.Ltd.），正相硅胶薄层层析板（青岛海洋化工分厂）；反相硅胶薄层层析板（德国默克公司）；其他试剂均为分析纯试剂。
土牛膝根采自湖南永州市零陵地区，经湖南中医药大学王智老师鉴定为苋科植物土牛膝Achyranthes aspera Linnacus.的干燥根及根茎，标本保存在湖南中医药大学中药活性物质筛选工程技术研究中心。
2 提取与分离
取土牛膝粗粉4.45 kg，乙醇回流提取3次，65℃减压回收溶剂，加适当水分散，水分散液分别用石油醚、乙酸乙酯充分萃取，减压回收各萃取层溶剂，其中得乙酸乙酯浸膏45.9 g。乙酸乙酯层浸膏经硅胶常压柱层析，石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，共获得12个组分（Fr.A-L）。
其中Fr.K部分过硅胶柱层析，经乙酸乙酯-氯仿-甲醇-水梯度洗脱，共得到7个组分 （Fr.K1-
车辆排队长度K7），其中Fr.K3继续过硅胶柱层析，经二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，再经过ODS柱层析（40％甲醇为流动相），获得化合物 7（4.8 mg）。
Fr.L部分经过ODS柱层析，甲醇-水梯度（10％～100％），共获得 6 个组分（Fr.L1-L6）。 其中Fr.L2组分经过硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱（1％～100％），共获得7个组分。主要组分Fr.L2-2经过硅胶柱层析，氯仿-甲醇（95∶5）反复洗脱分离，得到主要化合物 1（78.3 mg）和化合物 2（52.7 mg），Fr.L2-3过ODS柱层析，40％甲醇反复洗脱得化合物 4（6.3 mg）、50％甲醇洗脱部分获得化合物 5（5.1 mg）。Fr.L2-4过ODS柱层析，甲醇-水梯度（10％～100％），并经35％甲醇反复洗脱分离，依次获得化合物 3（7.3 mg）和化合物 6（4.7 mg）。
3 结构鉴定
化合物1：白晶体，紫外光下显暗紫荧光，香草醛-浓硫酸反应显蓝绿。1H-NMR(500 MHz,CD3OD),δ:5.87(1H,d,J=2.4 Hz,H-7),4.01(1H,m,H-3),3.90(1H,dt,J=13.8,4.2 Hz,H-2),3.37 (1H,m,H-22),3.21 (1H,m,H-9),1.26(3H,s,H-27),1.26(3H,s,H-21),1.25(3H,s,H-26),1.02(3H,s,H-19),0.95(3H,s,H-18)。13C-NMR(125 M
Hz,CD3OD),δ:206.5(C-6),167.9(C-8),122.1(C-7),85.2(C-14),78.3(C-22),77.9(C-20),71.2(C-25),68.7(C-2),68.5(C-3),51.7(C-5),50.5(C-17),48.5(C-13),42.3(C-24),39.2(C-10),37.3(C-1),35.0(C-9),32.8(C-4),32.4(C-12),31.8(C-15),29.6(C-26),29.0(C-27),27.3(C-23),24.4(C-19),21.5(C-16),21.4(C-11),21.0(C-21),18.0(C-18)。光谱数据与文献[5]报道的β-蜕皮甾酮一致，确定该化合物为β-蜕皮甾酮。
化合物2：无针状结晶，紫外光下可见暗紫荧光，该化合物的比移值与β-蜕皮甾酮相似，香草醛-浓硫酸反应显示红。1H-NMR(500 MHz,CD3OD),δ:5.83(1H,d,J=2.5 Hz,H-7),3.97(1H,m,H-3),3.86 (1H,dt,J=11.5,3.5Hz,H-2),3.48(1H,m,H-22),3.38(2H,m,H-26),3.17(1H,m,H-9),1.19(3H,s,H-21),0.96 (3H,s,H-27),0.98(3H,s,H-19),0.91 (3H,s,H-18)。 13C-NMR(125 MHz,CD3OD),δ:206.5(C-6),167.9(C-8),122.1(C-7),85.2(C-14),78.2(C-22),77.8(C-20),68.6(C-2),68.5(C-3),68.1(C-26),51.7(C-5),50.4(C-17),48.5(C-13),39.2(C-10),37.3(C-1),36.8(C-25),35.0(C-9),32.5(C-4),32.0(C-15),31.7(C-12),31.7(C-24),30.1(C-23),24.4(C-19),21.4(C-16),21.4(C-11),21.0(C-21),18.0(C-27),17.5(C-18)。与文献[6]数据比较基本一致，故确定该化合物为牛膝甾酮。
化合物3：白结晶性粉末，紫外光下可见暗紫荧光。负离子模式ESI-MS给出准分子离子峰531（M+2H2O-H）和 1027（2M+2H2O-H），确定该化合物分子量为496。1H-NMR (500 MHz,CD3OD),δ:5.87(1H,d,J=2.5 Hz,H-7),4.00(1H,m,H-3),3.95(1H,m,H-2),3.21(1H,m,H-9),1.22(3H,s,H-21),1.21(3H,s,H-26),1.21(3H,s,H-27),0.94(3H,s,H-19),0.91(3H,s,H-18).13C-NMR(125 MHz,CD3OD),δ:202.4 (C-6),167.5 (C-8),120.6(C-7),85.0(C-14),80.3(C-5),78.4(C-22),77.9(C-20),71.3(C-25),70.2(C-2),68.4(C-3),50.4(C-17),48.6(C-13),45.4(C-10),42.4(C-24),39.0(C-9),36.2(C-1),34.2(C-4),32.6(C-12),31.7(C-15),29.7(C-26),28.9(C-27),27.3(C-23),22.5 (C-11),21.4 (C-16),21.0 (C-21),18.0(C-18),16.9(C-19)。与文献[7]比较，数据基本一致，故确定该化合物为水龙骨甾酮B。
化合物4：为无针晶(甲醇)，紫外光下可见暗紫荧光。负离子模式ESI-MS给出准分子离子峰515（M+2H2O-H）和 995（2M+2H2O-H），确定该化合物分子量为480。1H-NMR (500 MHz,CD3OD),δ:5.83(1H,d,J=2.5 Hz,H-7),3.97(1H,brs,H-3),3.85(1H,dt,J=11.5,3.5 Hz,H-2),3.60(1H,m,H-24),3.60 (1H,m,H-22),3.17 (1H,m,H-9),1.23 (3H,s,H-21),0.98 (3H,s,H-19),0.97(3H,d,J=6.5 Hz,H-27),0.92 (3H,d,J=6.5Hz,H-26),0.91(3H,s,H-18)。13C-NMR (125 MHz,CD3OD),δ:206.4(C-6),167.9(C-8),122.1(C-7),
85.2(C-14),77.7(C-22),77.6(C-20),77.5(C-24),68.8(C-2),68.5(C-3),51.8(C-5),50.5(C-17),48.7 (C-13),39.3 (C-10),37.4 (C-1),35.8(C-23),35.1(C-9),34.2(C-25),32.9(C-4),32.5(C-12),31.8 (C-15),24.4 (C-19),21.5 (C-16),21.5(C-11),20.9(C-21),19.3(C-27),18.0(C-18),17.0(C-26)。以上数据与文献[8]的pterosterone数据吻合。在该化合物HMBC图中，δH0.91(3H,s,H-18)与 δC48.7(C-13)相关，表明 δC48.7（C-13）信号被溶剂峰掩盖。
化合物5：白结晶性粉末，紫外光下可见暗紫荧光。负离子模式ESI-MS给出准分子离子峰527（M+2H2O-H）和 1019（2M+2H2O-H），确定该化合物分子量为492。1H-NMR (500 MHz,CD3OD),δ:5.83(1H,d,J=2.5 Hz,H-7),5.15(1H,brs,H-25),4.97 (1H,brs,H-25),3.97 (1H,m,H-3),3.86(1H,dt,J=11.5,3.5 Hz,H-2),3.61(1H,dd,J=10.5,2.0 Hz,H-22),3.15 (1H,m,H-9),1.39(3H,s,H-26),1.34 (3H,s,H-27),1.25 (3H,s,H-21),0.99(3H,s,H-19),0.90(3H,s,H-18)。13C-NMR (125 MHz,CD3OD),δ:206.5 (C-6),167.9(C-8),155.3(C-24),122.1(C-7),110.4(C-28),85.3(C-14),78.0(C-22),77.8(C-20),73.6(C-25),68.7(C-2),68.5(C-3),51.8(C-5),50.4(C-17),48.4(C-13),39.3(C-10),37.4(C-1),35.0(C-9),34.6(C-23),32.8(C-4),32.5(C-12),31.7(C-15),30.2 (C-26),29.7 (C-27),24.4 (C-19),21.5(C-11),21.5(C-16),21.0(C-21),18.0(C-18)。
与文献[9]比较，数据基本一致，故确定该化合物为24(28)-ecdysterone。
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