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问：产品说明书中给出的胶乳粒径是平均粒径吗？
答：产品说明书中给出的胶乳粒径（Diameter）是平均粒径。
问：如何选择胶乳微球的粒径？
答：一般选择粒径小的胶乳微球，则需要的抗体量就多，精密度和线性相对较好，而选择粒径大的胶乳微球性，则所需抗体少，精密度和线性相对较差，相对于小球，大球的灵敏度较好。 行动研究法
问：一般情况下我们所使用的微球的浓度大概是多少？
答：整个测定体系中，微球的浓度大约在 0.01%左右，当然这与试剂本身规定的线性有关系。
问：在使用离心方法偶联乳胶微球，一般需要多大的（相对）离心力？
答：需要多大的离心力和所使用的乳胶微球有关，一般 70nm 左右的微球大概13000g/min 30min 以上，粒径越小所需时间越长，离心力越大。
8510w问：蛋白（抗体）与微球偶联前，是不是微球的活化时间越长，效率越好？答：羧基微球的活化所需时间很短，一般以 10-20 分钟为宜，长时间的活化反而会降低偶联效率。
问：由于抗体不只是 FC 的氨基酸上有 NH2，是不是表示它可以在任何方向与EDCA 活化微球偶联呢？如果是这样，是不是会影响抗体与抗原的特异性反应？答：事实的确如此，当然由于抗体的空间折叠方式和 FC 端疏水性强，因此偶联反应的绝大多数发生在 Fc 端，对抗体与抗原的结合的影响不大。 问：胶乳微球与抗体偶联后，当时没发现有凝集，但隔夜后发现有凝集，这是什么原因？如何控制和避免？
答：这种情况一般是偶联效率低的原因。当体系中蛋白不足或是其它原因，使微球表面在交联后还空出许多反应基团时，这些基团又可以与相连微球上的蛋白反应，结果是把球又拉在一起了，所以有聚集。可以加一些阻断剂解决，常见的是 BSA，另外，也可提高微球的交联率。但为什么是过一段时间后才出现凝集呢，这是因为微球偶联上蛋白后，相互之间由于携带同种电荷的关系，比较稳定（所以能以胶体样存在），只有当偶尔相互碰撞，遇上彼此的反应基团时才能结合。
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3、胶乳的自凝现象如何控制和避免？
答：胶乳自凝与许多因素有关，如高电解质浓度、表面价电荷被中和、或置于某些不利环境如冷冻时。如果电解质浓度升高到某一水平，使得表面的价负荷被掩蔽，胶乳微球之间发生接触，于是便产生凝集，故高离子强度的缓冲溶液不应使用，缓冲溶液的的浓度不要超过 50mM，但有些 CML 胶乳微球具有高电荷密度，则也能够耐受较高的离子强度。对负电荷胶乳微球，不能使用阳电荷的缓冲溶液如 Tris 缓冲溶液，因为能使电荷中和而凝集。在长期贮藏时，悬浮 介质的 pH 值应至少保持在比胶乳微球表面基团的 pKa 值高 1-2pH 单位。高浓度的胶乳微球容易促使胶体不稳定，故胶乳微球的浓度尽量以低浓度为宜，胶乳微球也不能受冷冻，否则会凝集。
问：抗体偶联至羧基微球后，即时检测效果很好，但置于 37 度 2 天后，抗体活性似乎下降很大，什么原因？
答：这种情况大概是以下情况所致：一、乳胶微球含有表面活性剂，导致胶乳自身出现自凝现象，可以通过显微镜进行观察，如果是胶乳含有活性剂，则在偶联之前进行清洗，保证偶联的胶乳微球没有聚集。二、如果共价结合反应是成功的而抗体活性失活如此迅速，最常见的原因是抗体质量差或试剂过期所致，而且还会出现一个自由流动白粉末、持续性团块等，这表表明试剂已被污染。
问：胶乳溶液用什么缓冲液多大离子强度保存稳定性最好？
答：一般常用的是低浓度的 Goods 缓冲液，如 MOPSO、MES、HEPES 等缓冲液，浓度在 25-50mmol/L。
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问：胶乳微球偶联抗体后与抗原进行反应，但是反应不明显，是什么原因所致？答：⑴抗原和抗体不匹配；⑵包被的抗体量下足；⑶抗体使用量虽多，但偶联效率低。
问：如何选择胶乳试剂的波长？
答：胶乳试剂随着检测波长的增加吸光度降低，为了保证试剂检测过程中不超过吸光度的检测限，一般胶乳试剂的波长选择在 546-600nm 左右。
共价结合胶乳微球的参考方法
A. 一步法
1. 配制 50 mM 的 MES 反应缓冲溶液，pH 值为 6.0；
2. 将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为 10mg/ml；
3. 用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为 1%（W/V）；
4. 将上述蛋白质溶液与胶乳微球混和，混和后在室温培育 20 分钟；
5. 用去离子水配制 EDAC 溶液，浓度为 10 mg/ml（52μ mol/ml）；
6. 取计算量的 EDAC 溶液加到蛋白质与胶乳微球混合液中；
7. 用 0.1 M 氢氧化钠（NaOH）溶液调整该反应混合液的 pH 值至 6.5±0.2，在摇床室温培育 2 小时；
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8. 将未结合的蛋白质除去，贮藏于缓冲溶液中。
B. 二步法简单二步法
清咽解热口服液消炎吗1. 用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为 1%（W/V）；
2.1ml 胶乳微球悬浮液，加入 20 mg EDAC，在室温培育 40 分钟，在 20 分钟后第二次加入 20 mg/ml；
3.用相等体积的该缓冲溶液来洗涤胶乳微球，离心，用 1 倍体积的缓冲溶液重复处理；
4.将蛋白质溶解于 50-100mM 的 MES 缓冲溶液中，蛋白质浓度为 1mg/ml；
5.再将胶乳微球悬浮于去离子水或结合的缓冲溶液中，迅速加入溶解的蛋白质， 37℃搅拌反应 3 小时；
6.按 1ml 反应混合液加入 2.5 μ l 乙醇胺混合，搅拌反应 10 分钟；
7.除去未结合的蛋白质，贮藏与贮存的缓冲溶液中。
生成 NHS-酯的中间体二步法
1.每 ml 反应混合物加入下列各物：
a.去离子水是最后容积为 1.0 ml；
b.0.1 ml 的 10x 的贮备缓冲溶液，其 pH 值为 6.0-6.5（一般可用 0.5 M MES 缓
冲溶液）；胶乳微球最终浓度为 1%（W/V）；
c.0.23 ml 的 50 mg/ml 的 NHS 在去离子水中的溶液；
d.19.2 mg/ml (100 mM)的
EDAC 在去离子水中的溶液（注 5、6）；
2.在室温将此混合物反应 15-30 分钟，不断搅拌；
3.用 MES 缓冲液或纯化水洗涤胶乳微球悬浮物，除去未反应的 NHS 和EDAC；
4.重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为 1%（w/v）；
5.将结合的蛋白质溶于50-100mM 的MES缓冲溶液中，浓度为1 mg/ml；
6.立即加入蛋白质溶液（胶乳微球、蛋白质和缓冲溶液的浓度分别为
0.5%(w/v)、0.5 mg/ml、25-50 mM）；
7.将混合物反应至少2小时，轻轻搅拌；
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