(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
新冠感染人数如何预估(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910389628.8
(22)申请日 2019.05.10
(71)申请人 上海大学
地址 200072 上海市宝山区上大路99号
(72)发明人 陈红霞
(74)专利代理机构 上海旭诚知识产权代理有限
公司 31220
代理人 郑立
(51)Int.Cl.
G01N 27/327(2006.01)
G01N 27/48(2006.01)
B01J 31/02(2006.01)
B01J 35/00(2006.01)
吡啶甲胺(54)发明名称
(57)摘要
由该方法制得的纳米酶探针作为信号输出手段，
提高了生物传感的灵敏度，同时也极大的提高了
生物传感的速度从而使得生物传感的信号顺利
输出；基于纳米酶探针构建了一种电化学传感检
测方法，该方法具有极低的检测限，能检测低至
fg级的微量BNP，体现了高度的特异性和灵敏性，
适合临床与科学研究；基于纳米酶探针构建了一
亨利种比化学传感的检测方法，具有极快的传感时
间和便捷操作，快速简单的检测BNP，适合家庭使
鸭子捉兔用。权利要求书2页 说明书7页 附图4页CN 110208347 A 2019.09.06
C N 110208347
A
郑超麟权 利 要 求 书1/2页CN 110208347 A
1.一种制备纳米酶探针的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将PADS溶液加入到HAuCl4水溶液中形成混合溶液，按照质量比，PADS溶液∶HAuCl4溶液为3.0～5.0∶1.0～2.0，HAuCl4水溶液中HAuCl4的质量分数为1％； (2)将所述混合溶液冷却回流5～20分钟后，冷却至室温，获得氨基表面修饰的AuNPs为N-AuNPs；
(3)将250～350μL pH＝10～13的Hemin溶液、50～150μL吐温溶液、10～25mg EDC和0.2～1mg SH-PEG加入到10～15mL N-AuNPs溶液中，闭光孵育1～5小时后，将反应溶液离心10～30分钟，然后将颗粒物Hemin-AuNPs重悬于超纯水中，得到Hemin-AuNPs溶液；
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(4)将所述Hemin-AuNPs溶液和靶标蛋白溶液按照体积比9∶1混合，置于30～45℃下孵育5～8小时，反应完成后离心10～30分钟，然后将获得物靶标蛋白-Hemin-AuNPs重悬于超纯水中，以获得靶标蛋白-Hemin-AuNPs的纳米酶探针的溶液。
2.如权利要求1所述的制备纳米酶探针的方法，其中，步骤(1)中按照质量比，PADS溶液∶HAuCl4溶
液为5.0∶1.0，所述PADS溶液的浓度为14mg·mL-1，步骤(3)中Hemin溶液浓度为1mM，pH＝11，步骤(4)中靶标蛋白为脑利钠肽。
3.一种基于纳米酶探针的脑利钠肽比传感的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)在待测溶液中，加入如权利要求1的所述的纳米酶探针的溶液和脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液形成混合物，将所述混合物在37℃反应20～40分钟，经过磁分离，取出所述混合物的上清液待测；
(b)向所述上清液中加入过氧化氢溶液和ABTS溶液，在30～42℃下充分反应，待反应完全后使用UV-vis检测。
4.如权利要求3所述的脑利钠肽比传感的检测方法，其中，制备脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs的方法为在超声波处理下将0.22M EDC溶液、0.22M NHS溶液与10mg/mL MNPs溶液混合15～30分钟，磁分离后，去除第一上清液，使用超纯水洗涤后重悬MNPs为MNPs溶液，将0.4mM脑利钠肽抗体溶液加入到所述MNPs溶液中，连续搅拌60～150分钟，磁分离后，去除第二上清液，使用超纯水洗涤沉淀后重悬MNPs为溶液，获得脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液。
5.如权利要求3所述的脑利钠肽比传感的检测方法，其中，步骤(a)中按照体积比，待测溶液∶纳米酶探针溶液∶脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液为10∶1∶1，步骤(b)中按照体积比，上清液∶过氧化氢溶液∶ABTS溶液为8∶1∶1。
6.一种基于纳米酶探针的脑利钠肽电化学传感的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(i)取待测溶液，加入脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液和如权利要求1所述的纳米酶探针的溶液形成混合物溶液，将裸磁性金电极浸没在所述混合物溶液中，在37℃反应15～40分钟； (ii)取出反应后的磁性电极，使用电化学工作站以三电极体系进行测试，工作电极为磁性金电极，对电极为铂电极，参比电极饱选用甘汞电极，采用循环伏安法和电化学阻抗谱表征电极表面修饰，采用差分脉冲伏安法进行电化学检测。
7.如权利要求6所述的脑利钠肽电化学传感的检测方法，其中，步骤(ii)中循环伏安法的扫描电位范围为-0.7V至0.7V，扫描速率为50mV·s-1；电化学阻抗谱的扫描频率为0.1Hz
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