(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
全能住宅改造王2011(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910158850.7
(22)申请日 2019.03.04
(71)申请人 华中农业大学
地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山
街1号
(72)发明人 王小红 黄晨曦 王佳 吴仁蔚
fmc公司李晚宁 聂若男 杨其乐 丁一峰
(74)专利代理机构 武汉开元知识产权代理有限
公司 42104
代理人 王和平 冯超
(51)Int.Cl.
C12N 7/00(2006.01)
电脑诊所C12N 1/20(2006.01)
C12N 1/02(2006.01)
ANALYSISES
C12Q 1/24(2006.01)
C12R 1/92(2006.01)C12R 1/42(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要再生制动
本发明公开了一种沙门氏菌噬菌体纳米磁
珠偶联物及其富集分离试剂盒，所述偶联物为沙
门氏菌噬菌体与羧基磁珠偶联得到复合物，其
中，所述沙门氏菌噬菌体为鼠伤寒沙门氏菌噬菌
体(Salmonella Typhimurium bacteriophage)
LPST10，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2016473。本
发明沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物中噬菌体
能特异性识别并侵染细菌；具有特异性好，分子
量小的特点。该试剂盒能快速、灵敏的分离富集
沙门氏菌。权利要求书2页 说明书7页 附图4页CN 109929813 A 2019.06.25
C N 109929813
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109929813 A
1.一种沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物，其特征在于：所述偶联物为沙门氏菌噬菌体与羧基磁珠偶联得到复合物，其中，所述沙门氏菌噬菌体为鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(Salmonella Typhimurium bacteriophage)LPST10，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2016473。
2.根据权利要求1所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物，其特征在于：所述羧基磁珠的直径为300～500nm。
3.根据权利要求1或2所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物，其特征在于：所述羧基磁珠的直径为400nm。
4.权利要求1所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将噬菌体LPST10活化；
2)将磁珠进行羧基活化；得到活化羧基磁珠；
3)将活化的噬菌体LPST10与羧基磁珠进行偶联，得到沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物。
5.根据权利要求4所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，噬菌体LPST10活化具体方法如下：
从-80℃取噬菌体贮存液于TSA平板上划线，按从稀释倍数高到低的方向倒入4mL含有200μL宿主菌的0.7％琼脂TSB培养基，挑取单个噬菌斑于1mL TSB培养基37℃培养6-8小时，加入20μL氯仿，继续培养10min以释放子代噬菌体；经8000r/min离心10min，取上清液划线，按上述方法采用双层平板于37℃培养，倾注4mL PBS缓冲液至含有噬菌斑的平板上于4℃过夜，吸取出缓冲液到10mL离心管，8,000rpm离心15min，并用0.22μm微孔滤膜过滤备用。
6.根据权利要求4所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，磁珠羧基活化的制备方法如下：
取1mL保存磁珠，经超声分散充分混匀后，取100μL PuriMag Si-COOH磁珠到1.5mL离心管中，置于磁性分离架上，待固液分离后去除上清液，保留MBs；加入200μL MES溶液到上述离心管中，混匀置于磁性分离架上，待固液分离后去除上清液，重复该步骤1次；迅速加入新配置的100μL NHS溶液，200μL EDC溶液到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，室温下垂直混合30min，用磁力架弃上清，并用冰PBS缓冲液洗三次，于100μLPBS缓冲液中重悬。
7.根据权利要求4所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，偶联
硫铁矿制硫酸的具体方法：
取100μL PBS缓冲液重悬保存活化的磁珠，加入100μL噬菌体液轻柔地混匀，在4℃条件下垂直混合过夜，用1mL PBS缓冲液至少洗三次以去除未偶联的噬菌体，噬菌体-磁珠用1mL 含0.1％BSA的PBS缓冲液封闭剩余结合位点，涡旋30s，将离心管置于混合仪4℃反应2h，反应结束后，将离心管置于磁力架上，待固液分离后移除上清液，然后加入1mL PBS缓冲液，磁吸分离，重复该步骤1次；噬菌体磁珠偶联物保存于含有质量体积浓度为0.1％的BSA的PBS 缓冲液中。
8.一种富集分离沙门氏菌的试剂盒，其特征在于：它包括权利要求1所述沙门氏菌噬菌体纳米磁珠偶联物。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阴性对照品、阳性对
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