EDC
Cat. No. : C600433
C600433 package: 25 g/100 g
红脊长蝽描述
EDC洞察号登陆火星
1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物
园林快题设计分子量: 191.7
CAS # [25952-53-8]
储存
收到货后储存在干燥的-20°C 条件下，运输则在该温度下运输。
简介
1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物（EDC ）是一种零长度交联剂，用于羧基与氨基的偶联。EDC 首先与羧基反应形成可与胺反应的O-酰基异脲中间体，其与氨基快速反应以形成酰胺键并释放异脲副产物（图1）。中间体在水溶液中是不稳定的，因此两步共轭方法依靠N-羟基琥珀酰亚胺使其稳定。不与胺反应将导致中间体的水解、羧基的再生和N-取代的脲的释放。副反应形成N-酰基脲，通常仅限于位于蛋白质疏水区域的羧基。 Figure.1:. EDC reaction with carboxyl and amine-containing molecules 图1：EDC 与羧基和胺类分子的反应 使用EDC 将半连接蛋白偶联到载体蛋白的步骤 所需材料
1.
载体蛋白：2 mg 牛血清白蛋白（BSA ），卵清蛋白（OVA ）或匙孔血蓝蛋白（KLH ） 2.
共轭缓冲液：0.1M MES （2- [N-吗啉代]乙磺酸），pH 4.5~5 3.radius协议
EDC ：10 mg 4.
半抗原：1~2 mg 5.
旋转脱盐柱或其他具有5~6K 分子量截留的凝胶过滤柱 步骤
1.
将EDC 放置至室温； 2.
加入2 mg 冻干BSA 、OVA 或KLH 至200 μl 共轭缓冲液； 3.
在500 μl 的共轭缓冲液中溶解高达2 mg 的肽或半抗原，并将其加入到200 μl 载体蛋白溶液中； 4. 对于BSA 或OVA 缀合，将10 ml EDC 溶于1 ml 超纯水中，立即将100 μl 该溶液加入载体-肽溶液中。对于KLH 缀合，
将10 mg EDC 溶于1 ml 超纯水中后，立即将50 μl 该溶液加入载体-肽溶液中。如果出现沉淀，之后减少EDC 的量。ewt
S a n g o n B i o t e c h
粉泥网5.
室温下反应2小时； 6. 使用脱盐柱纯化缀合物。如果将免疫原储存数日，请将该结合物无菌过滤，并在4°C 或-20°C 温度下储存于无菌容器中。 使用EDC 和NHS 或磺基-NHS 两步耦合蛋白质的步骤
按照改编自Grabarek 和Gergely 描述方法的下面的说明，两种蛋白质可以顺序偶联，但不会因为将它们暴露于EDC 而影响第二种蛋白质的羧基。该方法需要用含巯基的化合物淬灭第一反应。
EDC 和Sulfo-NHS 的活化反应在pH 4.5~7.2时最为有效；但是，NHS 活化的或磺基-NHS 活化的分子与伯胺的反应在pH7~8下是最有效的。为获得最佳效果，在pH 5~6的MES 缓冲液（或其他非胺非羧酸盐缓冲液）中进行第一次反应，在与含胺分子反应之前，立即用磷酸盐缓冲液（或其他非胺缓冲液）将pH 升至7.2~7.5。为了淬灭第一反应，使用2-巯基乙醇，或者通过用脱盐柱塔进行缓冲液交换，可以简单地除去过量的试剂（以及反应pH 调节）。
所需材料
1.
活化缓冲液：0.1M MES ，0.5M NaCl ，pH 6.0 2.
偶联缓冲液：磷酸盐缓冲盐水（PBS ），100mM 磷酸钠，150mM NaCl ；pH 7.2 3.
蛋白＃1：在1 mg / ml 的激活缓冲液中制备 4.
蛋白＃2：在偶联缓冲液中制备 5.
NHS 或Sulfo-NHS 6.
2-巯基乙醇 7.
（可选）旋转脱盐柱或其他凝胶过滤柱 8.
羟胺盐酸 步骤
1.
打开瓶子之前，将EDC 和NHS 放置至室温。 2.
向1 ml 蛋白＃1溶液中加入0.4 mg EDC （~2 mM ）和0.6 mg NHS 或1.1 mg 磺基-NHS （~5 mM ），并在室温下反应15分钟。 3.
加入1.4 μl 2-巯基乙醇（终浓度为20 mM ）以淬灭EDC 。 4.
可选的步骤：使用已经用偶联缓冲液（PBS ）平衡的脱盐柱将蛋白质与过量的还原剂和灭活的交联剂分开。 5.
将蛋白质＃2以与蛋白质＃1相等的摩尔比添加到活化的蛋白质中。使蛋白质在室温下反应2小时。 6.
为了猝灭反应，加入羟胺至终浓度为10 mM 。该方法水解蛋白＃1上存在的未反应的NHS 并生成异羟肟酸盐。其他淬灭
方法包括加入20~50 mM Tris 、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；然而，这些含伯胺的化合物改变蛋白＃1上的羧基。 7.
使用脱盐塔柱除去过量的淬灭剂。 S a n g o n B i o t e c h
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