BDRhapsody单细胞多组学技术助力鉴定未知UnstableTreg亚 单细胞RNA测序技术（Single cell RNA sequencing，scRNA-seq）已被广泛应用于免疫学研究中，通过从单细胞水平解析免疫细胞亚异质性，极大地促进了我们对免疫相关亚的理解。调节性T细胞(Regulatory T cells, Treg)是控制免疫稳态不可或缺的细胞，具有自身免疫的临床潜力内幕
。通过研究得知体外实验时，一些条件会使部分Treg失去Foxp3转录因子的表达，而获得效应T细胞(Teff)的特性，这一过程被称为Treg可塑性。免疫应答过程中这种可塑性的程度和可逆性尚不清楚。今天向大家分享一篇近期发表在Science immunology（IF 17.727）上，利用scRNA-seq鉴定Unstable Treg亚相关研究的文章“Unstable regulatory T cells, enriched for naïve and Nrp1neg cells, are purged after fate challenge”。 技术亮点
1.BD Rhapsody单细胞多组学分析系统
中国农学通报
2.Rhapsody 靶向mRNA & AbSeq扩增试剂盒（TTA）
首都体育学院学报3.BD Abseq寡核苷酸偶联抗体
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4.BD Rhapsody小鼠多样本标记试剂盒（SMK） 5.BD Rhapsody Analysis Pipeline
研究结果
1.体内微生物生理刺激对ex-Foxp3细胞无诱导作用
文汇报姜维平研究者在本文中通过构建遗传诱导命运图谱小鼠技术(图1A)验证ex-Foxp3的产生（图1B），在微生物/抗原暴露下，无特定病原体的小鼠（SPF）与野生型小鼠（Co-house）体内都会产生数量相近、性能一致的ex-Foxp3细胞（图1C-J）。 2. 发现ex-Foxp3细胞是Treg中的一unstable Treg亚
通过遗传诱导命运图谱小鼠过继转移模型验证，发现ex-Foxp3细胞是Treg中的一unstable Treg亚（图2A，B，D），会在免疫缺陷的状态下转化生成(图2F)
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图2 Ex-Foxp3细胞的形成是非随机事件，体内unstable亚清除后Treg的稳定性升高
3. Ex-Foxp3细胞对Treg表达的谱系无命运记忆
进一步通过体外Treg极化条件下培养ex-Foxp3细胞（图3A，B）、以及通过改进的遗传诱导命运图谱小鼠过继转移模型进行体内验证（图3C-F），发现该ex-Foxp3细胞会持续保持炎症效应，而且对Treg表达的谱系再无命运记忆（图3）。
图3 在体外和体内，ex-Foxp3细胞表现出有限的命运记忆
4. 单细胞多组学技术鉴定潜在的Unstable Treg亚
BD Rhapsody单细胞多组学技术：TTA（214）+Abseq（5）+SMK
即使损伤改善后、炎症环境消除，ex-Foxp3细胞炎症状态也会持续存在，所以能表征出这个原始异质性的Treg亚很重要。
基于流式技术获取的动力学数据，研究者评估了Foxp3缺失前Tregs基因表达的变化, 选取Tregs (未处理的Foxp3YFP-CreRosaRFP 命运图谱小鼠中获取的CD4+ YFP+ RFP+细胞)和将Foxp3YFP-CreRosaRFPTregs和同源naïve T细胞共转移到Rag1KO（免疫缺陷型）小鼠体内后在第5, 10, 和 15天获取 CD4+ YFP- RFP+ ex-Foxp3细胞(图4A和图S10A)。降维聚类(UMAP)分析产生6个细胞亚(图4B)。Foxp3基因在所有ex-Foxp3细胞体中均无表达，与分选报告相对应(图4C)。依据不同时间点样本进行差异表达分析，发现了三大类基因:快速丢失基因（Treg相关marker）、瞬时富集基因（稳定性丧失中起主要作用的基因）和后期富集基因（高度激活的表型相关基因）(图4D)。
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