叶酸又称为维生素B,,是重要的水溶性维生素。缺乏叶酸也可能导致冠心病、肿瘤和阿尔茨海默病,孕妇缺乏叶酸可能导致胎儿神经系统畸形"。但是叶酸等维生素的稳定性不高,而且食品基体比较复杂,所以叶酸的高准确度分析是有待研究的课题。
本文采用"C, 叶酸同位素标记物作为分析的内标物,使用高效液相谱同位素稀释质谱联用法( HPLC-IDMS)测定奶粉中叶酸。针对维生素不稳定的特点,使用液相谱法、热重分析法、卡尔费休法测定了作为标准品的叶酸纯品的纯度。现代农村科技
1实验部分
1.1仪 器和试剂6410液相谱-三重四极杆质谱联用仪(Agilent)。1100 液相谱仪(DAD检测器)(Agilent)。Pyris 热重分析仪( Perkin-Elmer )。DL39库仑法卡尔费休仪。库仑法卡尔费休试剂。叶酸、"C,-叶酸。甲醇为谱纯,其余为分析纯试剂。实验用水为二次去离子水。1.2叶酸纯品纯度测定液相谱法:谱柱250 mm x4. 6x5 μm;流动相为0.1%甲酸:甲醇=70: 30(V/V);流速0. 8 mL/min;进样量15 μL,样品为1 mg/ mL叶酸水溶液。检测波长选择叶酸与杂质最大波长280 nm。以面积归- -法确定叶酸的有机物纯度C有机。 商业银行流动性风险管理指引
叶酸纯品的水分测定采用两种不同原理的方法:热重分析法、卡尔费休法。分析比较两种方法的结果差异,取两者平均值为了水分含量值C*。
叶酸纯度P= (100%-C水) xC有机。
饮食与健康的关系1.3 前处理方法
所有操作在暗室中进行，使用重量法配制溶液与称取溶液,准确称量至0.1 mg。
高标溶液:根据初步实验配制含叶酸0.22 μg/g和'Cs -叶酸0.20 μg/g的水溶液。
低标溶液:根据初步实验配制含叶酸0.18 μe/g和"Cs一叶酸0.20 μg/g的水溶液。
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样品制备:称取2g样品,加入0.1g维生素C,加入2g含2.5 μg/g 的"Cs -叶酸水溶液。加人10 mL0. 01 mol/L HCI溶液和5 mL 5%三
溶液,振荡10s,在95C水浴30min,冷却至室温，加入0.1 mL5 mol/L NaOH溶液。转移至25 mL容量瓶,以水定容,以滤纸过滤。
1.4液相谱-质谱分析
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条件:谱柱为Waters Atlantis ODS 150 mm x2.1 mmx5 μm。流动相为0. 1%甲酸:甲醇=70:30(V/V) ;进样量8 μL;流速0.25 mL/min;ESI正离子模式,MRM检测模式,检测离子为m/z =442- +295(叶酸)和m/z=447- +295("C, -叶酸)。
样品分析顺序为:“低标溶液”-“样品”-“高标溶液”-“样品”-“低标溶液”-“样品”-“高标溶液”,如此反复。其中样品至少被测定6次。
样品的每次检测,通过与其相邻两个标准溶液计算的校准曲线进行校准计算。最后将6次检测的平均值作为该样品的结果。
2结果
叶酸的纯品检测结果表明:液相谱法结果的标准偏差较小,但是在叶酸纯品的水分测定中,两种的方法的结果相差1% ,考虑到两种原理的检测方法的系统误差来源不同,以两者的平均值作为水分含量值,估计水分引起的相对合成不确定为1.5%。使用本叶酸纯品作为标准品,采用LC-IDMS方法检测了美国标准物质SRM 1849 ,检测结果与其标准物质证书上的标准值基本一致。
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