李春; 赵东兴; 张建春; 李芹
【期刊名称】《《安徽农业科学》》
【年(卷),期】2019(047)018
【总页数】3页(P150-151,166)
核酸提取
【关键词】中草药; 乙醇; 香蕉; 根结线虫; 毒杀活性【作 者】李春; 赵东兴; 张建春; 李芹
【作者单位】云南省红河热带农业科学研究所 云南河口661399
【正文语种】中 文
【中图分类】S432.4+5
郑福双
香蕉根结线虫病(Meloidogyne incognita)由根结线虫属(Meloidogyne spp.)的线虫引起，是危害香蕉的重要病害之一，各香蕉种植区均有发生，发病率一般为20%～30%，严重的达60%以上，影响香蕉产业的可持续发展[1-5]。侯曲昌等[6]研究表明，10%苦参的水提液对番茄根结线虫有较强的毒杀效果，处理后5 d的平均校正死亡率达90.46%；刘凤淮等[7]、杜小凤等[8]、徐瑛等[9]研究表明，牛心朴子叶和苦豆子甲醇提取物对线虫具有较好的防效，3 000 mg/L牛心朴子叶甲醇提取物处理48 h后，线虫校正死亡率达93.30%，3 200 mg/L苦豆子甲醇提取物处理48 h后，线虫校正死亡率达95.5%。张红瑞等[10]用15种中草药提取液处理怀牛膝根结线虫的幼虫和卵，结果显示，用徐长卿、黄姜、喜树、藜芦提取液处理后，二龄幼虫72 h的校正死亡率在90.0%以上。但这些研究均集中在番茄、黄瓜、花生[6-14]等作物上，对香蕉根结线虫的防治主要以化学防治为主，无公害防治方面的研究较少，仅见杨秀娟[15]研究了茶籽饼对香蕉根结线虫的防治效果，而中草药提取液对香蕉根结线虫的毒杀作用鲜见报道。笔者选取艾叶、苦豆子、牛心朴子草等12种中药材，利用乙醇、丙酮和水进行提取，研究这些中药材提取物对香蕉根结线虫的毒杀作用，以期出一种对香蕉根结线虫有较强毒杀活性的植物，旨在为香蕉根结线虫的防治提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料 中药材：供试12种中草药购于中药市场，其名称、部位及产地见表1。供试线虫：香蕉根采自于云南省红河热带农业科学研究所的香蕉种植基地，将采集的香蕉根洗净，收集带根结病根，将病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎机中粉碎，过滤，收集500目筛子中的线虫卵，配成300个/ mL的根结线虫卵悬浮液。
表1 12种供试中草药名称、部位及产地
Table 1 Names, parts and places of 12 kinds of Chinese herbal medicines
植物名称The name of the plant供试部位Test part产地Place of origin艾叶Artemisia Vant.叶云南鸡屎藤Paederia scandens (Lour.) Merr.茎云南穿心莲Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees茎云南苦豆子Sophora alopecuroides L.种子西藏牛心朴子草Cynanchun Komarovii AL.叶、茎湖南川芎Ligusticum chuanxiong Hort.全草云南马齿笕Portulaca oleracea L.全草四川黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge.茎甘肃银杏叶Ginkgobiloba叶云南叶下珠Phyllanthus urinaria L.全株云南细辛Asarum sieboldii Miq.根 四川紫茎泽兰Eupatorium odoratum L.叶云南
1.2 中草药提取液的制备 将供试中草药置于烘箱内在60 ℃下烘干，粉碎至40目，贮于黑塑料袋中，备用。称取各药材15 g于200 mL具塞三角瓶中，加入150 mL无水乙醇浸泡过夜，于振荡机上振荡提取2 h，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至近干，放置在4 ℃冰箱中保存备用。
1.3 二龄线虫的培养 将采集的香蕉根洗净，收集带根结病根，将病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎机中粉碎，过滤，收集500目筛子中的卵，放于26 ℃恒温培养箱中培养6 d，得到大量的二龄幼虫(J2)。
1.4 中草药提取物对香蕉根结线虫的毒杀作用 称取“1.2”制备的中草药提取物0.5 g，用少量溶剂溶解后用蒸馏水稀释至100 mL，得5 mg/mL溶液。分别量取2 mL稀释液加入直径3.5 cm的培养皿中，随后加入60条“1.3”培养的二龄线虫，每处理重复3次，并以蒸馏水为对照，放置于26 ℃培养箱中，分别在24、48、72 h后于显微镜下观察线虫死亡数量，按Abbott公式计算校正死亡率。线虫死亡计数标准参考文艳华等[16]的方法，即线虫呈僵直不动为死虫，线虫呈弯曲蠕动状态为活虫，各中药材对香蕉根结线虫的毒杀活性参照文献[17]的方法进行分级。
亟待解决
二苯乙烯线虫死亡率=线虫死亡数/供试线虫数×100
校正死亡率=(处理组线虫死亡率-对照组线虫死亡率)/(1-对照组线虫死亡率)×100
2 结果与分析
12种中草药乙醇提取物对香蕉根结线虫的毒杀效果见表2。由表2可知，艾叶、鸡屎藤、苦豆子、牛心朴子草、细辛和紫茎泽兰的乙醇提取物在24 h内对香蕉根结线虫有较强的毒杀活性，线虫校正死亡率分别为68.95%、65.44%、77.71%、72.19%、70.21%和63.92%，其杀线虫活性强度均为“+++”，显著高于其他药材的毒杀活性；穿心莲、川芎、银杏叶、叶下珠提取物的杀线虫活性中等，处理24 h校正死亡率在26.32%～47.37%；马齿笕、黄芪提取物的杀线虫活性弱，处理24 h校正死亡率均低于30%。
随着时间的增长，各中药材乙醇提取物对香蕉根结线虫的毒杀活性均有所增加。处理48 h艾叶、鸡屎藤、苦豆子、牛心朴子草、细辛和紫茎泽兰乙醇提取物对香蕉根结线虫的毒杀活性增加，线虫的校正死亡率分别为83.02%、84.13%、93.69%、86.19%、89.95%和84.91%，杀线虫活性强度均为“++++”；穿心莲、川芎、银杏叶、叶下珠提取物的杀线虫活
性中等，处理48 h校正死亡率在43.39%～62.26%；马齿笕、黄芪提取物的杀线虫活性仍较弱，处理48 h校正死亡率分别为34.96%和39.65%。
处理72 h艾叶、鸡屎藤、苦豆子、牛心朴子草、细辛和紫茎泽兰乙醇提取物对香蕉根结线虫的毒杀活性进一步增加，线虫的校正死亡率分别为94.01%、91.02%、94.98%、92.56%、96.41%和91.71%，杀线虫活性强度仍为“++++”；穿心莲、川芎、银杏叶、叶下珠提取物的杀线虫活性为强活性，活性强度达到“+++”，处理72 h校正死亡率在50.04%～76.02%；马齿笕、黄芪提取物的杀线虫活性仍较弱，处理72 h校正死亡率分别为42.08%和46.74%。
表2 12种中草药乙醇提取物对香蕉根结线虫的毒杀效果Table 2 Toxic effect of 12 kinds of Chinese herbal ethanol extracts on banana root knot nematode 中草药Chinese herbal medicine校正死亡(24 h)Adjusted mortality rate∥%活性强度Activity intensity校正死亡率(48 h)Adjusted mortality rate∥%活性强度Activity intensity校正死亡率(72 h)Adjusted mortality rate∥%活性强度Activity intensity艾叶Artemisia Vant.68.95+++83.02++++94.01++++鸡屎藤Paederia scandens (Lour.) Merr.65.44+++84.
13++++91.02++++穿心莲Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees47.37++62.26+++76.02+++苦豆子Sophora alopecuroides L.77.71+++93.69++++94.98++++牛心朴子草Cynanchun Komarovii AL.72.19+++86.19++++92.56++++川芎Ligusticum chuanxiong Hort.31.58+43.39++50.34+++马齿笕Portulaca oleracea L.18.83+39.65++46.74++黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge.26.32+34.96++42.08++银杏叶Ginkgobiloba35.09++45.28++62.09+++叶下珠Phyllanthus urinaria L.31.58++42.73++50.04+++细辛Asarum sieboldii Miq.70.21+++89.85++++96.41++++紫茎泽兰Eupatorium odoratum L.63.92+++84.91++++91.71++++对照Control5.0111.6716.58
注: “-”表示无活性，校正死亡率≤10%；“+”表示弱活性，校正死亡率为10%～30%；“++”表示中等活性，校正死亡率为30%～50%；“+++”表示较强活性，校正死亡率为50%～ 80%；“++++”表示强活性，校正死亡率>80%
Note: "-" means no activity,and corrected mortality is below 10%; "+" represents weak acti
vity, and the adjusted mortality rate is 10%-30%. "++" indicates moderate activity, and the adjusted mortality rate is 30%-50%. "+++" indicates strong activity, and the corrected mortality rate is 50%-80%."++++" indicates strong activity and correctd mortality rate is above 80%架空电线
3 结论与讨论
据文献报道，苦豆子、紫茎泽兰、牛心朴子叶、细辛[7-10,18-19]等植物对南方根结线虫有较强的毒杀活性，在供试的12种中药材中，艾叶、鸡屎藤、苦豆子、牛心朴子草、细辛和紫茎泽兰提取物对香蕉根结线虫的毒杀活性效果较好， 且随着处理时间的增长，对香蕉根结线虫的毒杀作用增强，其中处理24 h线虫校正死亡率达63.92% 以上，处理48 h线虫校正死亡率达83.02% 以上，72 h后达91.71% 以上。这与文献报道相符，可能是因为南方根结线虫是试验地区香蕉根结线虫的优势种引起的[2]。另外，穿心莲、川芎、银杏叶、叶下珠提取物的杀线虫活性中等，处理24 h校正死亡率在26.32%～47.37%，处理48 h校正死亡率在43.39%～62.26%，处理72 h校正死亡率在50.04%～76.02%；马齿笕、黄芪提取物的杀线虫活性较弱，处理24 h校正死亡率均低于30%，处理48 h校正死亡率分别为34.96%和39.65%，处理72 h校正死亡率分别为42.08%和46.74%。
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