温度敏感型UNG酶（TS-UNG）使用说明
货号：U8170
规格：1U/μl
保存：保存于-20℃。并避免保存时反复冻融。
产品介绍:
TS-UNG（Temperature Sensitive UNG）是经大肠杆菌重组表达获得的温度敏感型UNG酶。该酶能够催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，对RNA无活性，主要应用于PCR 扩增中防止产物污染。TS-UNG酶与E.coil基因来源的常规UNG酶相比，对温度敏感、易于灭活，避免了常规UNG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dUTP扩增产物的降解作用。TS-UNG酶可以在20℃~37℃，5~10min反应，以消化含dUTP的模板；然后，在50℃10min或95℃2min进行灭活。 利用TS-UNG酶低温消化、易于灭活的特性，它可以很好地与RT-PCR扩增反应程序相匹配，从而应用于反转录扩增防止产物污染。
活性定义：37℃条件下，1小时降解1µg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。
储存缓冲液：
20mM Tris-HCl，100mM NaCl，0.1mM EDTA，1Mm DTT，0.1%Triton X-100，50%glycerol，pH7.5
反应条件：
1、反应体系:
Component
Volume per
Reaction（μl）
东高地一中
Concentration in Master
Mix
Template*<1μg/reaction Primer11~50.2~1.0μM
Primer21~50.2~1.0μM
销售利润率
d NTPs
（dATP、dGTP、dCTP）
*200μM
d UTP
(replace dTTP）
*400μM 10×PCR Buffer51×
25mM MgCl
2
2~8 1.0~4.0mM Taq（5U/μl）0.25 1.25U
ito粉
TS-UNG（1U/μl）
0.5
(0.1-0.5)
0.5U
(0.1~0.5U)
H
2
O*——
Total volume50μl
2、Incubate the product for10min at37℃；
3、Inactivate TS-UNG by heating to50℃for10min，
or95℃for2min；
质量控制：
1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%；
2、降解活性、批间差异、稳定性；
3、无核酸外切酶和核酸内切酶活性、RNase酶活性；
注意事项:
1、在20℃~37℃范围内，TS-UNG酶的活性随温度的升高有所增加，常用20℃、25℃、我们这一代人的困惑
37℃进行反应，可对酶的用量（0.1~0.5U）及反应时间（5~10min）进行优化；特别适合RT-PCR防污染使用；琥珀酸脱氢酶
2、由于不同待扩增基因对dUTP的利用效率和对UNG酶的敏感度不同，因此，如果采
用UNG体系导致检测灵敏度下降，应对反应体系进行调整优化；
3、避免多次冻融，切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有较大影
响；
遗传漂变
4、扩增前后要使用专用的区域和移液器，戴手套操作并经常更换，PCR反应完成后切勿打开反应管。以最大限度的减少PCR产物对样品的污染。
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