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-1372-安徽医科大学学报Acta UnCersitatis Meeicinalis Anhui2019Sep；54(9)
网络出版时间：2019-8-1217：30网络出版地址：htt p://knski/kcms/detail/34.1065.R.20190812.1006.008.html
唐俊昌
缪冉，吴立胜，代聪聪，姚寒晖
摘要目的观察抑制KITA1429基因对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响，并探讨其机制。方法将细胞随机分为两组：干扰组、对照组，分别转染针对KITA1429基因的干扰慢病毒及阴性对照空载慢病毒。分别采用qRT-PCR法和Western blot法检测细胞中的KITA1429mRNA和蛋白表达情况；采用Tonswel l实验观察细胞体外迁移及侵袭能力（穿膜细胞数），细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力（24h迁移距离）；采用Western blot法检测细胞上皮间充质转化（EMT）相关分子（E-Cadherin、N-LadheOn）蛋白表达量。结果抑制KITA1429基因表达后,KINA1429mRNA及蛋白表达量降低；与对照组比较，干扰组穿膜细胞数减少,24h迁移距离减少，细胞中N-LadheOn蛋白表达减少，E-LadheOn蛋白表达增加（P<0.05）。结论慢病毒介导的抑制KI-AA1429基因表达，可降低胃癌SGC7901和MGC8O3细胞迁移和侵袭能力；其机制可能与调控NOadherl、ETadherl的表达从而抑制EMT过程有关。
关键词胃癌；KITA1429；细胞迁移；细胞侵袭；上皮间质转化
中图分类号R735.2
uicc文献标志码A文章编号1000-1492（2019）09-1372-05 doi：10.19405//cnki.issnlOOO-1492.2019.09.008
胃癌是世界上最常见的消化道肿瘤之一，超过70%的病例发生在发展中国家，并且仍然是全球癌症死亡的主要原因之一⑴。尽管近几十年来胃癌诊断和取得了相当大的进展，但5年总生存率仍不令人满意［2］。因此，进一步探索胃癌进展中新的生物学标志物对于了解胃癌发展和设计靶标至关重要。
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细胞的RNA，女口mRNA、cioRNA、tRNA等，在不同位点携带数百种不同的转录后加工修饰。6-甲基腺昔（N6-methyladenosine，m6A）是真核生物中mRNA最丰富的内部化学修饰⑶。m6A的动态调控蛋
2019-04-04接收
基金项目：安徽省自然科学基金（编号:1808085MH285）
作者单位：安徽医科大学附属省立医院普通外科，合肥230001
作者简介：缪冉，男，硕士研究生；
吴立胜，男，副教授，硕士生导师，责任作者,E-mail:wlh-
eng1210@163 白包括甲基转移酶（WOteo）、去甲基化酶（Erasers）和读取基因（Readers）⑷。其甲基转移酶是多组分复合物，由METTL3、METTL14、WTAP、KIAA1429、RBM15和ZC3H13组成⑸。最近研究（6"0）表明, m6A相关蛋白参与了不同类型癌症的发生和发展，如急性髓性白血病、胆管癌、胶质母细胞瘤和肝细胞癌的发生发展都有m6A甲基转移酶的参与。然而，作为m6A甲基转移酶复合物的关键组分，KI-AA1429在胃癌的发生和发展中的功能作用仍有待确定，该实验运用慢病毒干扰胃癌细胞KIAA1429的表达，观察其对胃癌细胞生物学性质的影响并初步探讨其机制。
1材料与方法
1-1细胞及细胞培养人胃癌SGC7901和MGC803细胞株均购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。人胃癌SGC7901和MGC803细胞在补充有10%胎牛血清（美国Gibce公司）和1%青霉素-链霉素混合物（美国Gibce公司）的1640培养基（美国Gidce公司）中培养。将细胞置于37C、5%CO2的细胞培养箱（美国Theoa Fisher Scientific公司）中培养。
1-2对照/干扰细胞系的建立人胃癌SGC7901和MGC803细胞用10%牛清的1640培养杨虎城的最后岁月
资产托管
培养至融合度约70%，然后按照制造商（上海Obi ）的，用 KTAA1429干和pLKD CMV-G&PR-O6阴性对照载体转染胃癌细胞，病毒转染24h后更换含有10%血清的新鲜培养基。最后使用含10"g/ml瞟吟霉素的1640培养基筛选14 d后继续扩增。所获得的稳定转染的对照组细胞和干扰组细胞分别命名为shRNA和shKIAA1429。
1.3实时荧光定量PCR检测SGC7901和MGC803细胞中KIAA1429mRNA表达通过TRIzol试剂（美国Invitogen公司）从培养的细胞中提取总RNA，并根据制造商的说明书用POmescOpt RT试剂（日本TaKaRa公司）逆转录合成cDNA。通过使用StepOne Plus Real-time PCR系统（美国Applied Bio-
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