实验名称:不同浓度的Na夫妻生活指南Cl溶液下植物根尖细胞毒性探究 一.实验目的
1、了解染体畸变的类型原理。
3、掌握豌豆根尖的微核检测技术。
二. 实验原理
微核(MCN),是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染体畸变在间期细胞中的一种表现形式。是有丝分裂后期丧失着丝粒的染体拍片段,在间期细胞中形成的一个人或多个圆形或杏仁状结构。
许多理化因素,如化学药剂作用于分裂细胞而产生微核,形成微核的染体断片或染体在有分裂过程中行动滞后,在末期未进入主核,当子细胞进入下一次分裂间期,他们便形成主核之外的小核,即微核。已证实可用简易微核计数来代替复杂中期畸变染体数。用
微核技术可了解化学药剂对植物体潜在的遗传危害。
三.实验材料
1、材料:豌豆(2n=14)实验室提供。
2、试剂:蒸馏水(空白对照)、0.5mol∕LNaCl、曾泽生1.0mol∕LNaCl、2mol∕LNaCl、70%乙醇、卡宝品红,冰醋酸,6mol∕L盐酸。
3、器材:培养皿、镊子、移液管、滤纸、载玻片、盖玻片、显微镜、烧杯、离心管、刀片等。 四.实验方法步骤
1.浸种催芽 将实验用的豌豆浸入盛有清水的烧杯中,浸泡1-2d,期间至少换水两次,种子吸胀后在25。C温箱中催芽12-24h,待初生根长出1-2cm左右,选取根部发育良好的作为检测材料。
2.根尖处理 选24粒初生根生长良好,根长一致的种子,每处理选6粒,分别放入盛有自然码10m
l0.5mol∕LNaCl、1.0mol∕LNaCl、2mol∕LNaCl溶液和蒸馏水的培养皿中,蒸馏水处理作对照。根尖处理24h。
3.根尖细胞恢复培养畸胎 处理后的种子用自来水浸洗3次,洗净后再置入铺有湿润滤纸的培养皿中,恢复培养24h。
4.根尖细胞固定 将恢复后的种子,从根尖顶端切下1cm长幼根,换入70%乙醇中置4。C冰箱中保存备用。 5.酸解 用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次,每次5min,加入6mol∕L盐酸,将幼根浸没,酸解10min,使幼根软化。
6. 染 吸取盐酸。用蒸馏水清洗幼根3次,置于载玻片上,截下1-2mm长的根尖,滴一滴卡宝品红染8min,加盖玻片。
7.镜检第一口奶事件 在40倍镜显微镜下,凡小于主核1/3以下的,同主核有相同染效果的,圆形、椭圆形或其他类似的形状的染物质都可以算作微核。
五、结果与分析
表1 NaCl溶液对有丝分裂的影响
NaCl溶液浓度 | 细胞数 | 分裂相 | 有丝分裂指数(%) |
0(蒸馏水) | | | |
0.5mol∕L 1.0mol∕L 2mol∕ | | | |
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表2中小学数学网 NaCl溶液对有丝分裂的影响
NaCl溶液浓度 细胞数 | 微核数 畸变数 | 微核率(‰) | 畸变率 |
0(蒸馏水) | | | |
0.5mol∕L 1.0mol∕L 2mol∕ | | | |
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(微核率=微核数/总细胞数、 畸变率=畸变数/总细胞数)
3.画出染体畸变图
六、讨论