实验目的：探讨饮用水消毒副产物是否能引起蚕豆根尖细胞产生微核，是否具有诱变性。 实验任务：验证饮用水消毒副产物是否具有诱变性。
实验原理：外源性诱变剂或物理诱变因素可诱导蚕豆根尖细胞内染体发生畸变, 影响纺锤丝和中心粒正常形成而产生微核。因形成微核的数量与外界诱变因子的强弱成正比，所以可用微核出现的百分率来评价饮用水消毒副产物对生物遗传物质影响的程度。
实验条件：
1.实验材料：松滋青皮豆。松滋青皮豆是从蚕豆不同品种中筛选出较为敏感的品种。
2.设备与器材：显微镜、光照培养箱、恒温水浴锅，冰箱，手揿计数器，解剖盘，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，烧杯，10ml青霉素瓶（25个），250 ml三角烧瓶（1），培养皿（25），200 ml棕试剂瓶（1个），100 ml容量瓶（5个）。
3.实验试剂
1）5 mol/L HCl：4.17 ml浓盐酸，超纯水定容于100 ml容量瓶。 2）卡诺氏液：3份无水乙醇（或95 %乙醇）加1份冰醋酸。固定根尖时随用随配。
3）席夫氏（Schiff）试剂：0.5 g碱性品红（Fuchsin Basic）加超纯水100 ml置三角烧瓶中煮沸5 min，并不断搅拌使之溶解。冷却到58°C时，过滤于深棕瓶中，待滤液冷至25°C时，加入10 ml 1mol/L HCl和1 g 偏重亚硫酸钠（NaSfromthenon2O5）充分振荡使其溶解。塞紧瓶口，用锡箔纸包好，置于暗处至少24 h,若该溶液为透明无可使用。此染液可4°C保存6个月左右。若出现沉淀则不可使用。
4）SO2洗涤液
贮存液：10 % NaS2O5溶液为10 g NaS2O5超纯水定容于100 ml容量瓶；1 mol/L HCl为20 ml 5 mol/L HCl，超纯水定容于100 ml容量瓶。
使用液：10 % NaS2O5溶液5ml加1 mol/L HCl 5ml，超纯水定容于100 ml容量瓶，现用现配。
操作步骤：
1、蚕豆浸种、催芽:将蚕豆（按实验需量定数目）放入烧杯中, 用超纯水润洗3次, 每次5min, 然后向烧杯中加入适量的超纯水。放入 25°C 的光照培养箱中浸泡26-30 h, 期间至少换水2次, 直至种子完全吸水膨胀。再将其置于用超纯水充分湿润的脱脂棉上, 在 25°C 的光照培养箱中催芽48 h, 至初生根长至 2~ 3 cm。此时可选择粗细、长短一致且根尖发育良好的种子，用来进行染毒(后续操作)。
2、根尖染毒:每一处理组选取上述种子 6-8粒，放入盛有待测液的培养皿（编好号）中，被测液淹没根尖即可，放入 25°C的培养箱中进行染毒处理, 处理时间为 4-6 h。另设超纯水对照组。
3、根尖细胞恢复培养:倒掉各培养皿中的处理液, 分别用超纯水浸洗蚕豆 3次, 每次 5m in, 洗净后的种子再放入铺好湿脱脂棉的培养皿中，放回 25°C 的光照培养箱中进行恢复培养, 时间22-24 h。
4、 固定、保存：将恢复后的种子，从根尖顶端切下约 1 cm长的幼根放入对应编号的青霉素空瓶中，加入卡诺固定液 (无水酒精 ：冰醋酸 = 3：1)约 10mL， 固定 24 h。（固定后的幼根如不及时制片，可用超纯水清洗根尖, 用吸水纸吸净水分, 浸入 70%乙醇中, 置于 4 ° C冰箱保存备用。）
5、孚尔根染
克隆人1）固定好的幼根，在青霉素瓶中用超纯水浸洗2次，每次5 min。吸水纸吸净超纯水后，再加入5 mol/L HCl将幼根浸泡住，连瓶放入28°C水浴锅中水解幼根10 min 左右（视根软化的程度适当增减时间），至幼根被软化即可。
2）用超纯水浸洗幼根2次，每次5 min。吸水纸吸净超纯水后，在暗室或遮光的条件下加席夫氏（Schiff）试剂，用量以淹住幼根液面高出2 mm为宜。
3）除去染液，并用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min，然后再用超纯水浸洗5 min。
4）将幼根放入新换的超纯水中，置4°C保存。
dkyy6、制片
将幼根放在擦净的载玻片上，用解剖针截下1 mm左右的根尖，滴上少许45%的醋酸溶液，用解剖针将根尖捣碎，然后加一清洁的盖玻片，并在盖玻片上加一小块滤纸，轻轻敲
打压片。
7、镜检及微核识别标标准
每一处理观察 5 个根尖, 每个根尖在高倍镜（物镜40x）下至少观察 1000 个细胞, 然后分别计算各水样处理的微核细胞数和微核率( MCN‰) 。
微核细胞率( MCN‰) = 含有微核的细胞数/ 观察细胞总数x 1000‰ 。
抗体亲和力污染指数（PI）=样品实测MCN‰平均值/标准水（对照组）条形码标签MCN‰平均值
式中污染指数： 0-0.5 区间定为基本无污染,0.5-1.0 区间定为轻度污染, 1.0-3.0 区间定为中度污染, 3.0 以上定为重度污染。
注意事项：KU波可调电衰减器不要在实验室温度超过35°C的条件进行操作。
技术难点：
1） 污染物的浓度确定，若浓度过高会造成根尖细胞死亡，浓度过低对根尖细胞不具有诱变性。
2） 细胞观察区的选择具有随机性，可能会引起结果的不确定性。
需要购买的试剂：冰醋酸、偏重亚硫酸钠（NaS2O5）、碱性品红。
需要购买的仪器：手揿计数器，解剖盘，解剖针。
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