蚕豆根尖微核监测技术

实验三蚕豆根尖微核监测技术(MVT)一、目的
学习如何利用高等植物间期细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理顺势疗法
在细胞分裂早期,若受到有害因子的攻击,从使染体发生断裂,产生染体片断。在这些片断中,有些可能愈合恢复正常为,随细胞分裂进入子细胞,有些则由于缺乏着丝点,不能移向细胞的级部而变成圆球体,象卫星一样分布在主核的周围,这便是微核,由于染体片段的大小的数量不一,所以微核的大小和数量也不相同,而蚕豆根尖细胞的染体大,DNA含量多,因而对诱变物的反应敏感,通过显微镜下的观察和计数,便可以监测环境污染。
三、器材与试剂:
(一)显微镜、温箱、恒温水浴箱、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微压片试验用具。
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(二)试剂
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5N HCl 、45%醋酸、卡诺氏液化、席夫氏试剂、SO2 洗涤剂
四、操作步骤
误码率1、蚕豆浸种催芽。
2、被监测液处理根尖。
3、根尖细胞恢复培养。
4、固定根尖细胞。(这四步由实验人员完成)
5、孚尔根染
(1)固定后的幼根,在青霉素瓶中用蒸馏水浸泡2次,每次5分钟。(2)吸净蒸馏水,再加入5N HCl 将幼泡住,连瓶放入28度的水浴锅中水解幼根25分钟左右,至幼根被软化即可。
(3)用蒸馏水浸泡幼根2次,每次5分钟。
(4)在暗室或遮光条件下加席夫试剂,每瓶用量以淹住幼根液面高出两毫米为好。浸洗衣两次
(5)除去染液,用SO2洗涤剂浸洗衣两次,每次五分钟。
(6)用蒸馏水浸洗一次,五分钟
(7)将幼根放入新换的蒸馏水中,置4度的冰箱内保存,可供随时制片之用。
6、制片
(1)将幼根放在擦净的载玻片上,用解剖针截除根寇区,截留一毫米的根据尖分生区。
(2)滴上少许的45%醋酸溶液,用解剖针将根尖捣碎。
(3)加盖一清洁盖玻片,注意不要有气泡。
(4)再在盖玻片上加一小块滤纸,轻轻敲打压片。
腐蚀科学与防护技术
7、镜检及微核识别标识:
将制片先置于显微镜低倍镜下,到分生组织区细胞分分散均匀,膨大,分裂相较多的部位,于转到高倍镜下进行观察。
毛果绣线菊微核的识别标准:
凡是主核大小的三分之一以下,并与主核分离的小核。
小核着与主核相当或稍浅。
小核形态可以是圆形,椭圆形,不规则形。
每处理观察3 个根尖,每个根尖计数一千个细胞微核数。
五、实验数据的统计处理和污染程度的划分
将微核观察记载表上所得数据,按如下步骤进行统计学处理。(1)各测试样品微核千分率的计算
MCN‰=某测试样点观察到的MCN数 ×1000‰
某测试样点观察的细胞数(说明:可能由于研磨不充分,不是观察的一层细胞的膜,从而导致了观察时没看见很清楚的微核)
(2)如果被监测的物样品不多可直接用各样品MCN率平均值与对照比较,从差异的显著性判断水质污染是否。

本文发布于:2024-09-21 17:44:35,感谢您对本站的认可!

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