【摘要】目的：通过泥鳅红细胞微核检测技术，定量分析洗面奶内月桂醇聚醚硫酸酯钠（以下简称硫酸酯钠）对水体环境影响。结果表明，硫酸酯钠浓度与泥鳅红细胞微核率变化有明显关系（相关系数K²分别为5.69与1.561），且根据图像分析发现泥鳅红细胞微核率与硫酸酯钠浓度成正相关。结论：硫酸酯钠可在质量分数为0.1%0~0.25%时对泥鳅生存环境造成影响。 【关键词】 微核率；月桂醇聚醚硫酸酯钠；泥鳅
1研究目的
护肤品已经成为人们日常生活中必不可少的一部分。在使用护肤品过后，其中的硫酸酯钠随污水一同排入下水道，可能对水生生物造成影响。微核技术是检查环境污染物对遗传物质 ——染体损伤效应的一种简便 、快速 、有效的生物监测方法[1]。通过计算微核率，可量化硫酸酯钠不同浓度下对泥鳅生存环境的影响，从而对生态环境治理提出建议。
2材料与方法
2.1 材料
2.1.1仪器和耗材
水桶，显微镜（20×40），载玻片，盖玻片，医用手套，量筒，托盘天平，一次性手术防护服，一次性医用手套，吸水纸，1L量杯、自来水（曝气）。
2.1.2 样品试剂
月桂醇聚醚硫酸酯钠、卡诺固定液、瑞氏-Giemsa复合染液、磷酸缓冲液（pH6.8）
泥鳅（体长8cm±2cm）：均购买自同一菜市场，在实验进行的全过程不喂养任何饲料，置于32℃～38℃室温下，均使用曝气自来水进行培养。 2.2方法
图1 实验流程图
2.2.1预实验
不公平的游戏在5个盛有经曝气的自来水塑料桶内各放置5条泥鳅与2L经过滤后的自来水，其中一组设为对照组，其余4组各放入硫酸酯钠，使桶内溶液质量分数达到1%（20g）,3%（60g）,4%（80g）,5%（100g），（称量过程采用塑料杯重量为7g），培养6小时后，将泥鳅取出迅速处死，并将体表粘液与水擦干，在距离尾部1.5cm处用解剖刀将其分离并取出外周血，后将血液涂抹至载玻片上，迅速用另外一片载玻片将其推成单层细胞的薄片。用球将血涂片吹干，使用胶头滴管取卡诺固定液10ml。固定15min并将剩余固定液蒸发后，滴加A液（瑞氏-Giemsa染液，0.5~0.8ml）。染1min后，取B液（磷酸缓冲液，为A液的2~3倍）滴加于A液上，用球吹出微风使液面产生涟漪，充分混合两液。滴加B液4min后用胶头滴管吸取纯净水直接对染液进行冲洗。将表面染液与少部分沉淀冲洗完成后晾干，在显微镜下观察。（总染时长：22min）。
2.2.1精细实验
在进行预实验的基础上，确定浓度影响微核率的准确区间。重新调整桶内硫酸酯钠质量分数，使之达到0.05%（1g），0.1%（2g），0.25%（5g），0.45%（9g）。制片步骤和观察步骤与预实验一致。
数据记录与分析：对应5个不同浓度分别制取5张涂片，选取合适厚度的区域进行观察，并选取视野内全部红细胞作为总数，计算微核细胞与全部细胞的比值，用千分率（‰）表示计算所得的微核率。微核率（‰）=微核细胞数/观察细胞数。所得数据列入2×2列联表进行独立性检验，后使用折线统计图判断微核率与处理浓度之间的关系。
3结果与分析
3.1 预实验
3.1.1泥鳅个体活力现象
对照组：表现平和，入水后活性正常，可见鳃部正常活动。
1%组别：出现少数黏液，大多数实验对象活性低，肚皮朝上，个别对象鳃部侧边出现溃烂。
3%组别：体表及出血处出现大量黏液，个别实验对象鳃部、口部出血，仅有一条偶尔进行活动，且迫切离开溶液。
图2 3%质量分数泥鳅入水后体表与鳃部出血
4%组别：基本全部对象鳃部、口部出血，个别对象鱼鳍出现充血，全无活力。5%组别：实验现象与3%、4%组别差异很小，个别对象通体充血，少数个体有活力。
3.1.2红细胞微核率统计
玉田县实验小学该组实验随机变量K²值为5.69>5.024，由临界值表可知判断处理浓度与微核率有关的概率在99.75%。由表1可知，泥鳅红细胞微核率随硫酸酯钠处理浓度的增加而增加，且在3%处有下降趋势，可能是由于统计数据不够精确导致的误差。该实验表明，质量分数1%的硫酸酯钠可以对微核率造成影响，且可使泥鳅致死。
表1 预实验所得细胞总数及微核数
| 总数 | 微核数 | 微核率 |
1%浓度 | 514 | 3 | 5.83‰ |
3%浓度 | 头孢曲松391 | 2 | 疯狂的金条5.11‰ |
4%浓度 | 481 | 3 | 6.23‰ |
福永中心小学5%浓度 | 430 | 3 | 6.97‰ |
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图3 硫酸酯钠与泥鳅红细胞微核率折线图（预实验）
3.2 精细实验
在我的开始是我的结束该组实验随机变量K²值为1.561>1.323，有75%的把握说明微核率与硫酸酯钠处理浓度有关系，可知该组实验数据有所误差。比较预实验数据与精细实验数据，发现硫酸酯钠质量分数在0.45%至1%变化很显著，前后微核率相差1.79‰。从表4可知，硫酸酯钠质量分数在0.10%至0.25%间，微核率变化显著，说明硫酸酯钠质量分数在0.10%至0.25%之间对泥鳅有毒害作用。
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