南方医科大学药学院实验中心
二0一0年八月
目 录
实验一、药物急性毒性实验（马克思主义唯物史观LD50测定）
实验二、急性肺损伤实验
实验四、小鼠骨髓细胞微核试验
实验五、小鼠精子畸形实验
实验六、药物生殖毒性实验
实验一 急性毒性试验
［盐酸二甲弗林（回苏灵）LD50测定］
一、实验目的
化学物急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。本实验的目的是学习急性毒性试验的实验设计、实验原理和实验操作方法。
二、基本原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原料则将动物分成数个染毒组。一次或24h内多次给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计算半数致死量（LD50）。据此分析受试物毒性反应与剂量的关系，并根据LD50值对化学物进行毒性分级。 三、实验材料
1、器材 1ml注射器、烧杯、电子天平、、镊子、剪刀、酒精棉球等。
2、药品 0.4％回苏灵注射液（经预试验后按比例稀释）。
3、动物 健康成年小白鼠若干只，体重18-22g，雌雄各半。
四、实验方法
1、预试验
（1）探索剂量范围：先出100%与0%的致死量为实验的上下限剂量，即Dmax和Dmin。取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4地球物理勘探技术倍，作为Dmax。同法出Dmin。
（2）确定合适的剂量分组方案：组数（n）以5-8组为宜，根据下面公式计算组间剂量公比r。
r=1/
各组剂量分别Dmax、(Dmax) r、(Dmax)r2、(Dmax)r3……。
2、正式试验
uhlsport（1）动物的称重、编号和分组： 每组10只动物（雌雄各半），随机分组和用编号。
（2）受试物的配制： 根据预试验得出Dmin为4.0mg/kg，Dmax为8.0mg/kg，分为5个剂量组，根据公式计算r0.85。配制时取第一个剂量组17ml加生理盐水3.0ml（按1：0.85稀释）作为第二个剂量组，依此类推配制其它剂量组。
（3）给药： 本次试验是用腹腔注射方法给药，0.2ml/10g非理性信念体重。
（4）观察：给完受试物后即刻观察和记录30min内动物反应，包括一般活动情况、中毒体征、死亡前的特征、死亡动物数、死亡时间。
五、结果记录
1. 描述动物中毒和死亡反应的特征。
2. 华能国际商务平台参照下表和改良寇氏法的计算方法，计算回苏灵的LD50。
表1. 急性毒性实验结果列表
剂量（mg/kg） | 对数剂量（X） | 动物数 （只） | 死亡数（只） | 死亡率 （p） | 存活率（q） | pq |
4.18 4.91 5.78 6.80 8.00 | 0.621 0.691 0.762 0.832 0.903 | 10 10 10 10 10 | 0 2 5 7 10 | 0 0.2 0.5 0.7 1.0 | 1.0 0.8 0.5 0.3 0 | 0 0.16 0.25 0.21 0 |
| i=0.07 | | | ∑p=2.4 | | |
| | | | | | |
计算公式如下：
Lg(LD50)= Xm－i（∑p－0.5）
Xm=最大剂量对数值
P=动物死亡率
∑p=各组死亡率的总和
i=相邻两组剂量比值的对数（高剂量做分子）
将数据代入公式，经计算得回苏灵注射液LD50=5.87mg/kg
中华民居
实验二 急性肺损伤实验
一、实验目的
通过比较染毒动物与正常动物肺脏重量和形态的变化，学习评价外源性化学物急性肺损伤的基本方法。
二、基本原理
肺脏组织结构疏松，血流丰富，化合物引起的急性肺损伤以渗出、水肿和出血为主，通过比较肺形态、肺重量和肺灌洗液的变化，可以反应急性肺损伤的严重程度。
三、实验材料
1、器材 1ml注射器、5ml试管，电子天平、、镊子、剪刀、止血钳、硫酸纸等。
2、药品 生理盐水、含4％油酸和16%二甲基亚砜(DMSO)的生理盐水混悬液。
3、动物 健康小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。
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