(Bone marrow cell micronucleus test)
⏹
指存在于细胞中主核之外的一种颗粒，大小相当于细胞直径的1/20~1/5，呈圆形或杏仁状，其染与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。
2
微核(micronucleus ，MN)
细胞核微核
⏹
细胞有丝分裂后期染体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染单体或染体的无着丝粒断片/环，也可以是纺锤体受损而丢失的整个染体。
⏹
它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞质内而形成，由于比核小得多故称微核。张莜
⏹
一般认为微核是细胞受到染体断裂剂或纺锤体毒物作用的结果。
3微核(micronucleus ，MN)
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
⏹
嗜多染红细胞(polychromatic erythrocyte ，PCE)细胞质内仍含有核糖体的未成熟红细胞。
4
⏹
正染红细胞(normochromatic erythrocyte ，NCE)核糖体已消失的成熟红细胞。
为何选择PCE (polychromatic erythrocytes)
⏹
PCE ：指在红细胞成熟之前，最后一次分离后数小时将主核排出的细胞，而微核仍保留在细胞质中。
⏹
微核可以出现在多种细胞，但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区别。
5为何选择PCE ？
⏹PCE ：Giemsa 染呈灰蓝(胞质内含核糖体)
⏹
NCE(正染红细胞/成熟红细胞，normochromatic erythrocyte ，NCE))：淡桔红
⏹杰出民营企业家
骨髓中PCE 数量充足，微核容易辨认，且微核自发率低，因此，成为微核试验的首选细胞。
6
一.实验目的和意义
⏹1.了解小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验的实验原理及
毒理学意义。
⏹2. 掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核测定方法。
回转半径7二.实验原理
海宁宏达高级中学⏹微核试验检测外源化学物诱导产生的染体完整性改变和
染体分离改变这两种遗传学终点。
⏹凡能使染体发生断裂或使染体和纺锤体联结损伤的化
学物，都可用微核试验来检测，主要用于检测染体断裂
剂和非整倍体致突变剂。
8
三.实验内容
⏹1. 实验动物的选择
⏹2. 性别鉴定、称重、编号和标记
⏹3. 实验动物的分组
⏹4. 实验动物染毒(灌胃)
⏹5. 实验动物称重、处死
⏹6.骨髓细胞微核标本制备与观察计数
9实验动物的选择与处理
⏹动物选择：小鼠(常规)，18~25 g，每组10只，雌雄各半。
⏹分组和剂量选择：共5组，每组2-4只小鼠
阴性对照组：NS (2只)
阳性对照组：环磷酰胺40 mg/kg (4只)
受试物组：丙烯酰胺(LD
50
为180 mg/kg)
设3个剂量组(1/2 LD
50
、1/4 LD
50
、1/8 LD
50
)⏹染毒途径：经口灌胃(也可腹腔注射)。
⏹染毒次数：
(1) 多次染毒法(每天染毒一次，连续5天，第6天取样)
(2) 30 h给受试物法：两次给受试物间隔24 h，第二次给受试
物后6 h，颈椎脱臼处死动物。
10
动物分组和染毒情况记录表
11标本制备
1.骨髓液的制备和涂片：取胸骨，擦净血污，剔去肌肉，剪去
骨骺，用小型弯止血钳将骨髓挤于有一滴小牛血清的清洁载玻片(标记)上，混合均匀后常规涂片(注意：胸骨一分为二，制2张涂片)。
2.固定：涂片自然晾干后放入染缸，甲醇固定10分钟，取出
晾干。
出则谦谦以自悔
3.染：平置载玻片于培养皿内，滴加染液A(蓝)1滴，→直
接滴加染液B(无)16滴，洗耳球吹气使染液充分混合，染10分钟→细流水冲洗玻片背面(冲掉染液)，干燥后阅片。
12
观察与计数(阅片)
⏹选择细胞完整、分散均匀、着适当的区域，油镜下观察。⏹
观察PCE 的微核，Giemsa 染法，PCE 细胞呈灰蓝，NCE 细胞呈淡桔红。典型的微核多为单个、圆形，边缘光滑整齐，嗜性与核质一致，呈紫红或蓝紫，直径通常为红细胞的1/20~1/5。
13
正染红细胞
嗜多染红细胞及微核
观察与计数
⏹选择细胞完整、分散均匀、着适当的区域，油镜下观察。⏹
观察PCE 的微核，Giemsa 染法，PCE 细胞呈灰蓝，NCE 细胞呈粉红。典型的微核多为单个、圆形，边缘光滑整齐，嗜性与核质一致，呈紫红或蓝紫，直径通常为红细胞的1/20~1/5。
⏹
双盲法阅片，每只动物计数1000个PCE ，观察含微核的PCE 数，微核率以千分率(‰)表示。并且计数200个细胞中PCE 与NCE 的比值。
14
结果分析与评价
⏹
每组雌、雄动物分别计算微核PCE 的均值。若雌、雄动物之间无明显性别差异可合并计算。
⏹
正常的PCE/NCE 比值约为1(正常范围0.6~1.2)。例如比值<0.1，则表示PCE 形成受到严重抑制，受
试化学物的剂量过大，试验结果不可靠。
⏹
阴性、阳性对照组的微核发生率，应与试验所用动物种属及品系的文献报道结果或与研究的历史数据相一致。钟炳明
⏹
微核试验所获数据资料的频数分布尚无定论，多种统计学方法(Poinsson 分布、二项分布、X 2检验等)均有人应用。
15
结果判定
⏹
试验组与对照组相比，试验结果微核率有明显的剂量-反应关系并有统计学意义时，即可确认为阳性结果。
⏹
若统计学上差异有显著性，但无剂量-反应关系时，应重复试验。结果能重复者可确定为阳性。⏹
一般阴性对照组的微核发生率<5‰ 。
16
实验报告与讨论
⏹
实验记录和结果：1.实验的目的和意义；
2. 实验动物的称重、标记、分组；
3.染毒途径和方法(灌胃)；
4.动物的处死方法；
5. 微核率；PCE/NCE;
6.心得体会及见解。
⏹
分析和讨论:
1. 查阅资料，举例说明微核试验在毒理学中的应用和发展趋势。
2. 该试验有何优缺点？
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注意事项
18
⏹小鼠处死前称重、记录
⏹
剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块胸骨取下来，以防不小心把胸骨剪断，肌肉要剔除干净
⏹滴到玻片上的小牛血清不要太多，涂时要涂匀，以便推片⏹染前先看一下整体涂片情况，细胞分散度是否良好⏹
关键步骤是制作良好的骨髓涂片及优良的染(吹匀)
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