遗传学实验实验报告
姓名：刘乐乐 班级：生计11.3 学号：201100140084 时间：11月25日
摘要：微核是真核细胞经辐射或化学药物的作用而产生的异常结构，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，所以可以用微核实验来检测诱变物质。本实验通过叠氮化钠诱变大蒜根为阳性对照，以自来水培养为阴性对照，观察果粒橙果汁、花露水、洗发露、爽肤水等日常用品成分对大蒜根的诱变作用。实验表明，所测试的果汁等材料安全无污染。 关键词：微核 诱变检测 大蒜根尖
1、 引言
1.1微核
微核（Micronucleus）是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物
的作用而产生的。
细胞中染体结构的变异起因于染体的断裂，通常染体断裂后有三条发展途径：
黄曲霉菌1） 两个断裂端重新愈合回复到原来的染体结构；
2） 断裂的连接修复发生错误，产生染体变异：缺失、重复、倒位、异位等；
3） 断裂的染体不愈合，细胞分裂时逐渐丢失。
细胞的染体发生断裂后，细胞进入下一次分裂时,染体片段不能随有丝分裂进入子细胞，而在细胞浆中形成直径小于主核的圆形或椭圆形微小核，其直径小于主核1/3。
有实验证明，整条染体或几条染体在纺锤体受损时也能形成微核。
1.2诱变物质的检测
人类日常生活中使用接触的物品如农药、化工产品、食品添加剂、水源等是否含诱变物质的检测具有重要的意义。沙门氏菌缺陷型回复突变检测诱变能力。微核测试直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害。
已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验的安全评价以及染体遗传疾病和癌症前期诊断等各方面。
最常用方法是小鼠骨髓红细胞微核检测方法。
1.3微核率与污染指数
微核率是指一个视野中微核数与细胞数的比值。
人们常用微核率来反映环境中有害物质的污染程度，一般认为，微核率在10‰以下时无污染，为环境本底；10-18‰时，有轻度污染；18-30‰时，有中度污染；＞30‰，有重度污染。
污染指数=。
电碳制品0-1.5 无污染；
1.5-2 轻度污染；
2-3.5 中度污染；
大于3.5 重度污染。
2、 实验材料
新雅迪传媒
2.1实验仪器
显微镜、玻片、刀片、培养箱、培养皿等。
2.2实验试剂
叠氮化钠 、水、卡诺固定液（乙醇：冰醋酸=3:1）、1M盐酸、改良苯酚品红染液
2.3实验样品
大蒜、果粒橙果汁、爽肤水、花露水、洗发露。
3、 实验步骤
3.1大蒜发根
氢能 大蒜发根，自来水中根生长至0.5cm左右时（48h）进行诱变物质处理。
3.2诱变处理
采用叠氮化钠处理作为阳性对照，水作为阴性对照，其余四种分别用果粒橙果汁、爽肤水、花露水、洗发露自选，处理时间为24h，注意写好标记。
3.3恢复培养
换用没有诱变剂的自来水恢复培养24h。
3.4固定与储存
将各组大蒜根尖剪下，卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中4℃下保存。
3.5制片观察
切取近根尖分生区的伸长区组织，1M HCl解离 10min；水洗三次，每次1min；苯酚品
红染15-20min；压片观察；计算微核率。
4、 实验结果及分析
在阴性对照实验中，我们没有到微核的存在，我们取其微核率为1‰。
栅栏组织
在阳性对照实验中，我们观察到了典型的微核（见图1、图2），统计整张装片，一共发现6个细胞中含有微核，装片上细胞数量估算为300个，得到微核率是2%，继而得到污染指数是20，大于3.5，属于重度污染，可以说明叠氮化钠是强的诱变物质，作为阳性对照也说明了实验的可靠性。
在实验组中，果汁组和爽肤水的装片中没有发现为微核，微核率取为1‰，污染指数为1，无污染；洗发露的装片中发现1个微核，微核率为3‰，污染指数为3，属于中度污染；花露水的装片中发现2个微核，微核率为6‰，污染指数为6，属于重度污染。
图 1 大蒜根尖阳性对照组细胞中的微核观察（10*40）
图 2大蒜根尖阳性对照组细胞中的微核形态（经图片处理软件处理过）
5、 思考与讨论
对于本次实验结果，实际上非常不可靠的。
转基因快速检测仪（1）最后观测的样本容量过小。在实验操作中，我们忽视了样本容量的选择，每一组只制作了一个装片，导致样本容量过小。这样的结果是，阴性对照估计为1‰后，假使每张装片的微核数为1即为中度污染，微核数为2即为重度污染，这使得结果有很大的随机性。本着科学严谨的态度，每组必须做3个以上的装片以减少这种随机性导致的错误。
（2）可以换用其他评估标准。虽然我们设有阴性对照组，可以计算污染指数，判断诱导物质的诱变性，但是实际上由于取的样本量过少等原因没有在阴性对照观察到观察到微核，针对至观察了300多细胞的我们组来说，微核率定为1‰是不准确的。为此，我们直接参照微核率的标准划分污染等级（标准见引言），阳性对照中叠氮化钠的污染等级为中度污染，其他组低于10‰，为无污染。
（3）诱导物浓度不适宜。在实验组中，我们选取的花露水、爽肤水、洗发膏、果汁的
加入量是没有任何参考依据的，不是定量，使得结果也没有说服力。例如，花露水加入的量太多，浓度太高，导致大蒜无法在其中正常代谢生长，甚至有腐烂变质的倾向，在这种极端环境下导致的染体变化，并不是我们想要的。如果时间充足，我们应该做预备实验确定浓度。
（4）在阳性对照中，出现的微核也不是很多，原因可能是叠氮化钠浓度太低。在操作中，切取的位置不准确也可能是原因之一。
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