多元统计分析最短距离法_Graphpadprism8.2荧光定量PCR相对定量法数据处理及。。。

多元统计分析最短距离法_Graphpadprism8.2荧光定量PCR相

对定量法数据处理及。。。

科学研究，做完实验得到的数据如何处理使之可⽤于⽂章发表是许多⼈头疼的问题。

本篇⽬的：以实例解决qPCR数据处理及统计分析作图问题

⽅法：相对定量法

⼯具：Excel、Graphpad prism 8.2

结果：得到⼀幅可说明既定⽬的基因组间表达差异，⽤于⽂章发表的图

正⽂：

正常⼀次qPCR反应可以得到两个曲线，扩增曲线及溶解曲线(能看懂并分析最好，看不懂也不影响单次数据分析)扩增曲线：随着PCR反应进⾏，荧光信号强度随着扩增产物增加⽽增强，进⽽检测扩增产物的变化。溶解曲线：随着温度升⾼DNA双螺旋结构降解程度曲线

使⽤相对定量法⾸要关注的是Ct值(部分软件会显⽰为Cq值)。

愈慢愈美丽

⾸先明确Ct值定义，即：PCR过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。平⾏孔之间Ct值相差最好不要超过0.5。2^-△△Ct为最常⽤的⽅法，表⽰实验组中⽬的基因较对照组中⽬的基因表达的差异倍数，计算公式⾸先：集美大桥

△Ct(实验组)= Ct(实验组⽬的基因)- Ct(实验组内参基因)；

△Ct(对照组)= Ct(对照组⽬的基因)- Ct(对照组内参基因)；

△△Ct=△Ct(实验组)-△Ct(对照组)

最后表达⽔平的差异倍数⽤2^-△△Ct表达。

看不懂公式没关系，结合以下实例操作说明：

⼀、数据整理雷达检测

1、⽤Excel整理内参及⽬的基因表达数据(3个副孔为例)

(图1)

指挥调度中心(图2)

2、空⽩(blank)组：

①△Ct(对照组)= Ct(对照组⽬的基因)- Ct(对照组内参基因)：可得到图2 caspase-1相应△Ct

②△△Ct=△Ct(实验组)-△Ct(对照组)：△Ct取均值“12.28333”，再⽤每个△Ct减去均值，得到△△Ct

3、实验组：以LPS组为例

①△Ct(实验组)= Ct(实验组⽬的基因)- Ct(实验组内参基因)：这⾥的实验组内参基因见图1，计算后得到相应△Ct

②△△Ct=△Ct(实验组)-△Ct(对照组)：上⼀步得到的△Ct减去图中对照组均值“12.28333”，以此类推。

注意，blank组最终值在“1”上下波动，但不能简单认为相对表达量就是1。此

外，△△Ct不可直接⽤平均值计算。

⼆、统计分析并作图

1、打开prism，选择“column”

2、输⼊数据

3、在“Graph”⾥得到相应图形

4、统计分析

点击“analyze”，进⾏相应操作

得到相应数据，使⽤添加⽂本功能，⽤“*”号把有统计学意义数据标注在图上。

路易斯安那州

所谓教授在此感谢韩倩同学指导、协助分析~

本文发布于:2024-09-22 04:28:44，感谢您对本站的认可！

标签：扩增得到曲线基因数据

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