第29卷第5期黄牛杂志VO1-29NO-5 2003年9月JOurnal Of YellOW Cattle Science Sep.2003文章编号:1001-9111(2003D05-0032-03
选择及适宜解冻速度唐山发票
朱大年1~王中身2~张岩1~巩美荣3~常喜奎4
(1.陕西省家畜改良站~陕西泾阳713702; 2.延安市畜牧兽医中心~陕西延安716000
3.泾阳县畜牧兽医站~陕西泾阳713700;
4.陕西宜川县畜牧兽医站~陕西宜川717200D
摘要：用不同配方的解冻液解冻秦川牛颗粒冷冻精液与2.9%柠檬酸钠对比~结果表明解冻
后精子活力差异不显著~但在35C条件下的存活时间和在5C条件下保持受精能力的差异极显
著；对用不同解冻速度解冻后精子的活力及5C条件下保持受精能力时间的对比结果表明~
75C/S秒的解冻速度效果最好~组间差异极显著O
关键词：颗粒冷冻精液；解冻液；解冻速度
中图分类号:S823.3+4文献标识码:A
目前~在黄牛改良上使用细管冷冻精液已较为普及~但还有一部分基层人工授精员喜欢使用颗粒冻精~特别是边远地区的一些~老人工授精员因技术或成本等因素的限制~仍在使用O在边远地区~冷冻精液仍受诸如冷藏设备~冷源和交通工具的限制而不方便应用~目前解决这一问题的办法还是利用解冻后的颗粒冻精进行低温~送精配种O影响使用颗粒冷冻精液的效果除应注意影响细管冷冻精液使用效果的一些因素外~解冻液配方和解冻速度的选择也是一个很重要的因素O为了提高颗粒冷冻精液低温送精配种的使用效果~我们做了这方面的试验~试图选出较好地解冻液配方与适宜地解冻速度~以便基层人工授精员能更好的利用颗粒冷冻精液开展配种工作O 1试验材料 试验用颗粒冷冻精液为陕西省家畜改良站生产的秦川牛颗粒冷冻精液~其稀释液配方为12.0%蔗糖液75mL~卵黄20.0mL~甘油5.0mL~青霉素和链霉素各10万单位O
2试验设计与方法
共设计出5组解冻液配方为试验组~以我国通用的2.9%柠檬酸钠解冻液为对照组~对解冻后的活力以及精子在5C时保持受精能力的时间和37C 时的存活时间进行对比试验O解冻液配方组成见表1O
表1试验组与对照组解冻液配方g 配方
对照试验试验试验试验试验
123456柠檬酸钠 2.9 1.40.588 1.7 1.7
酒石酸钾钠0.56碳酸氢钠0.090.09
磷酸二氢钾0.3250.325蔗糖 4.565 1.15 1.15
皮肤感染葡萄糖 3.0 2.7 4.6
以上配方均加入青霉素~链霉素各10万单位
注:1号配方为对照组~2~3~4~5~6号配方为试验组；上述配方中溶质的量为100mL蒸馏水中所含的量O
收稿日期:2003-01-20
作者简介：朱大年(1957 D~男~陕西渭南人~现任陕西省家畜改良站生产科科长~畜牧师~主要从事家畜改良工作.
3方法步骤
3.1解冻液的选择
3.l.l解冻液的配制与消毒用l/lOOOO天平准确称量溶质后~加新鲜双重蒸馏水至lOO mL刻度处~每次配制l OO mL~用常规方法灭菌后备用0
3.l.2解冻方法每个试管加入l.5mL解冻液后放入37C~4OC水浴中~然后迅速加入2粒颗粒冷冻精液~待颗粒溶化为原来体积的l/3时~将试管从水浴中取出~放在试管架降温分装0
3.l.3降温分装待解冻好的精液温度降至室温后~分装到灭菌消毒过的链霉素小瓶中0
3.l.4镜检镜检时温度保持37C0
3.l.5保存与观察将分装于小瓶的精液分别放在5C冷藏箱和35C温箱中保存~放进冷藏箱的小瓶要用纱布包裹~以免温度急剧下降引起冷休克0然后在下列时间内进行观察(镜检D:35C时镜检时间为3~6~9~lO~l l~l2h(自解冻时算起D5C时镜检时间为l2~24~36~48~6O~72~84~96~lOO~lO2~lO4~ l O6~l lO h(自解冻时算起D03.2解冻速度的选择
解冻速度指单位时间内温度上升的快慢~和解冻液温度与解冻时间有关0本次试验对解冻速度的选择使用的解冻液是在对解冻液选择中效果较好的5号解冻液0我们通过预试试验~结合在细管冷冻精液上的经验选择了下列6种解冻速度:5C~3min~ l5C~2min~55C~7S~75C~5S~9OC~3S~lOOC~O ~l S0
解冻前先将加入解冻液的试管放入水浴中平衡至要求的温度0
解冻时间指将颗粒冻精放入解冻液后到解冻管从水浴中取出为止0
4结果
4.1解冻液选择
用不同解冻液解冻后所观察到的精子的活力均为O.5~说明各解冻液在解冻时的活力无差异0各组精子在35C时的存活时间及在5C时活力降到O.3的对比结果见表20
表2精子在35C和5C保持受精能力的时间对比h 配方对照l试验2试验3试验4试验5试验6 N l2l2l2l2l2l2
X S 35C 5.75 l.l8 6.54 l.l4l l.O8 O.959.75 2.66l2.O O.969.58 O.92 5C l5.l2 3.722O.8 5.2354.8 l5.6352.2 l2.4464.8 8.4248.44 8.75
表内数据为X S.D.
经统计分析~对精子在5C时保持受精能力的平均时间进行显著性检验~表明以5号配方效果最好~3号~4号~6号次之(P<O.O5D~l号~2号效果较差0 4.2适宜解冻速度
4.2.l不同解冻速度解冻后精子活力的比较及检验(见表3D
经统计学分析~以75C5S秒和55C7S秒解冻条件下活力为好(P<O.OlD0
4.2.2不同速度解冻后精子在5C时保持受精能力和35C时存活时间见表40
表3不同解冻速度解冻后精子活力的比较
速度5C~3min l5C~2min55C~7S75C~5S9OC~3S
l OOC~
O~l S N l2l4l2l6l4l2
X O.348O.388O.524O.549O.359O.282 S O.O62l O.O78O O.O738O.O28O.O78O.O6l3 CV l7.82l9.79 4.54 5.l l2l.652l.77
表45C时保持受精能力和35C时存活时间比较
速度5C~3min l5C~2min55C~7S75C~5S9OC~3S
2013北京中考物理l OOC~
维思通O~l秒
N 5C888888 35C666666
X S 5C22.25 O.824O.4 l5.462 l3.9665 l.5824 7.48O
35C 5.4 O.5O8.6 O.65l l.7 O.74l2.3 O.388 O.79 5.28 O.9
33
第5期朱大年等：秦川牛颗粒冷冻精液解冻液配方的选择及适宜解冻速度的测定
5配种受胎试验
用3号和5号解冻液解冻秦川牛颗粒冷冻精液在5C保存24h后输精的情期受胎率分别为6O.O5%(23/38D和62.9%(34/54D显著高于1号液的43.85%(21/48D
6结论和讨论
6.1用不同解冻液解冻后的精子活力相同镜检结果均为O.5 但用不同解冻液解冻后精子在5C保存时活力的下降速度不同差异极显著在此次试验中以3号和5号配方最优
6.2用5号解冻液在不同解冻速度条件下解冻解冻后精子的活力不同此次试验表明在5C~
75C范围内随着解冻速度的提高解冻后精子的活力也提高其中以55C~7S和75C~5S这两个解冻速度解冻后精子的活力最好分别比37C~4OC的活力提高了O.O24和O.O49 差异极显著但在9OC~3S及1OOC~O~1S解冻速度下的活力下降这个结果与Rodrguez Wiggin和AlmguiSt用O.25 mL细管冷冻精液在75C~9OC下所做的试验不同他们认为解冻温度升到9OC后精子的活力不再提高75C~9OC的活力显著高于75C这可能与细管冷冻精液解冻时塑料细管吸收部分热量有关6.3通过用5号解冻液在不同解冻速度条件下解冻后的十多次重复试验证实精子在5C及35C的存活时间随着解冻后活力的提高而延长也证实高温快速冷冻对精子的保存无不良影响
6.4将解冻后的精液低温保存24h后输精其受胎率正常这对在交通不便的地区开展冷配工作有较大的实际意义
6.5细管冷冻精液无论在受胎率~输精卫生和使用方便程度上都优于颗粒冷冻精液建议基层人工授精员应尽早掌握细管冷冻精液的使用方法以代替颗粒冷冻精液
参考文献:
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爱在钢琴上
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selection of thawing f luid composition and thawing speed of
Granule f rozen semen
Z~U Da-nian1WANG Zhong-Shen2Z~ANG Yan1G0NG Mei-ron3C~ANG X i-kui4
(1.Shaanxz Domestzc Anzmal fmplozement Statzon zngyang Shaanxz7137O2 Chzna;
2.Yanf an Anzmal P/andl y and vetelznal y medzczne Statzon Yanf an Shaanxz716OOO Chzna;
4.Yzch/an Anznam P/sbandl y and vetelznal y medzczne Statzon Yzch/an Shaanxz7172OO Chzna D
Ab stract:T hra W ing e ff ect o f di ff erent tha W ing f luid W aS com P ared W ith2.9P ercent o f citrate Sodium Solution V igor o f f rozen Semen a f ter tha W ing W ith di ff erent tha W ing f luid W aS not di ff erent Signi f icantl y I ut Sur V i V ing P eriod at35C and P eriod kee P ing f ertilizing ca P a I ilit y at5C W ere Same.ReSultS alSo Sho W ed tha W ing e ff ectS o f75C f or3Second iS the I eSt.
K e S words:Granule f rozen S P erm;T ha W ing f luid;T ha W ing S P eed
43黄牛杂志第29卷
罗尔斯
秦川牛颗粒冷冻精液解冻液配方的选择及适宜解冻速度
作者：朱大年， 王中身， 张岩， 巩美荣， 常喜奎
作者单位：朱大年，张岩(陕西省家畜改良站，陕西泾阳,713702)， 王中身(延安市畜牧兽医中心，陕西延安,716000)， 巩美荣(泾阳县畜牧兽医站，陕西泾阳,713700)， 常喜奎(陕西宜川县畜牧
兽医站，陕西宜川,717200)
刊名：
黄牛杂志
英文刊名：JOURNAL OF YELLOW CATTLE SCIENCE
年，卷(期)：2003,29(5)
被引用次数：1次
1.GrahamEF;larson E V;Grado B G牛精子的冷冻和冻干 1984
2.Pickett B W Berndtson W E Sullion J J精液添加物和包装方式对牛冷冻精子授精能力的影响 国外养牛新技术 1984
3.冯仰廉实用肉牛学 1984
4.农业部畜牧兽医司畜牧业标准汇编 1993
5.李建国；冀一伦养牛手册 1997
6.北京农业大学家畜繁殖学 1996
1.邱世华授精环境对奶牛性别比例和受胎率的影响的试验研究[学位论文]硕士 2006
引用本文格式：朱大年.王中身.张岩.巩美荣.常喜奎秦川牛颗粒冷冻精液解冻液配方的选择及适宜解冻速度[期刊论文]-黄牛杂志 2003(5)
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