石蜡切片免疫荧光操作规程
试剂
1) 二甲苯
2) PBS缓冲液
3) 0.01mol/L载荷步柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。
4) goat血清
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5) 一抗稀释液： 3%BSA in TBS，pH7.4
操作流程 1.脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。 1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min； 2）无水乙醇中浸泡5min； 3）95%乙醇中浸泡5min；
4）70%乙醇中浸泡5min1973号决议；
2.PBS洗两次各5min。
3.雯雯工地农民工灌浆抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热 0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0青岛华臣影城今日影讯）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
4.PBS洗5min。 5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。 6.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。 7.PBS洗3次每次5min。 8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。（注意抗体针对的种属，使用浓度：Alexa488、 Alexa555为1：无瑕号事件1000，Cy3、FITC为1：200，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。） 9.PBS洗3次每次5min。
10. Hoechst染：把1000×Hoechst用PBS稀释，50ul/片，染10min。
11. PBS洗3次每次2 min。
12.封片： Mounting Medium封片，等Mounting Medium凝固后再拍照。
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