免疫荧光步骤 Revised by Hanlin on 10 January 2021
免疫荧光步骤
粟裕战争回忆录1.脱蜡和水化?
脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；2）无水乙醇中浸泡5min；3）95%乙醇中浸泡5min；4）70%乙醇中浸泡5min；（动作要快，减少暴露在空气中中的时间）2.PBS洗两次各5min。 machine civilization（整个过程中注意切片不能干）
3.抗原修复，用于多聚甲醛固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加
热?0.01M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
联合国千年发展目标4.PBS洗3次每次5min。动力环境监控
5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。
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6.滴加一抗（根据说明书的比例稀释，一般为1:100），室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。
7.PBS洗3次每次5min。
imdvd8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。（注意抗体针对的种属，使用浓度，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。）
9.PBS洗3次每次5min。
10.DAPI染：把DAPI滴在片上，将切片覆盖，50ul/片，染10min。
11.PBS洗3次每次2min。
12.封片：抗荧光淬灭封片剂封片，再拍照。
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