免疫组化基本操作流程
操作流程：
1、脱蜡和水化
脱蜡前，将组织切片放在60℃恒温箱中烘烤30-90分钟。
（1）置于二甲苯 I中浸泡 10分钟，在二甲苯 II中再浸泡 10分钟；
（2）无水乙醇 I中浸泡 5分钟，在无水乙醇 II中再浸泡 5分钟；
（3）95%乙醇中浸泡3-5分钟；
（4）80%乙醇中浸泡 3-5 分钟；
（5）75%乙醇中浸泡3-5分钟；
（6）蒸馏水中浸泡 3-5分钟；
2、去除内源性过氧化氢酶
用蒸馏水或 PBS配置新鲜的 3%H2O2，室温封闭 10分钟，PBS/蒸馏水洗3次，每次3-5分钟。
3、抗原修复
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片
（1）微波热修复：取一定量的抗原修复液于微波盒中，微波加热至沸腾；将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中， 中高档微波P-60继续处理10-20分钟；取出微波盒冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水洗两次后用PBS洗3-5次，每次 5分钟。 （2）酶消化方法：常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃，切片也预热至 37℃，消化时间约为 5-30分钟；胃蛋白酶消化 37℃时间为 10-30 分钟。 4、免疫组织化学染
（1）滴加正常山羊血清封闭液，37℃，30分钟。
（2）甩去多余液体，滴加一抗，37℃孵育1小时或4℃过夜（4℃过夜后在37℃复温30-45分钟）。
（3）PBS洗3次，每次5分钟。
（4）滴加二抗，孵育条件参见所用试剂盒。
（5）PBS洗3次，每次5分钟。
（6）DAB显，在显微镜下掌握染程度。
（7）自来水/蒸馏水洗终止染，苏木素复染，盐酸酒精分化；
（8）脱水、透明、封片、镜检。
操作规程
1、脱蜡和水化
（1）脱蜡前，将组织切片放在 60℃恒温箱中烘烤1-3小时，恒温箱温度不得高于70℃，恒
温箱内不得长期（超过24小时）存放物品，烤片结束后且恒温箱内没有其他切片等物品，请及时关闭恒温箱，避免恒温箱使用时间过长。
（2）使用通风橱内的二甲苯和梯度乙醇脱蜡，不得将二甲苯和梯度乙醇拿到通风橱外使用。
（3）每两周的周一，值日生需全部更换玻璃缸内的二甲苯和梯度乙醇，每次免疫组化平台二甲苯领取量不得超过6瓶，无水乙醇不得超过8瓶，75%乙醇不得超过2瓶。使用过的废弃二甲苯必须倒入通风橱里的二甲苯专用废液桶内，并拧紧废液桶盖，放置在通风橱内指定位置，待医院综合服务处统一收集，严禁将二甲苯倒入水池、下水道中，管理老师及时补上新的废液桶，并贴好标签，标签上应注明该废液的名称、组成、浓度，值日生需在废液换液登记表上注明废液更换日期；使用过的乙醇需在专用的水桶内加水进行稀释处理，再倒入水槽。有机试剂的空瓶需丢到实验室专用垃圾桶内。
（4）值日生换液后，需在免疫组化预约里通知免疫组化平台已换液，并在值日表上登记。
（5）请使用免疫组化专用切片架，材质需耐弱酸弱碱（不锈钢或塑料），以避免切片架与二甲苯、乙醇等有机溶剂发生反应。
2、抗原修复（用于石蜡包埋组织切片）
（1）微波炉热修复：取一定量的抗原修复缓冲液于免疫组化塑料染缸中，微波高火（微波选P100）加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上（不可使用金属切片架）放入已沸腾的缓冲液中，中档（微波选P60）继续处理10-20分钟取出塑料染缸冷却至室温。微波炉加热过程中，实验操作人员要全程关注微波炉，不得离开微波炉所在的实验室，以免发生爆沸。
3、免疫组织化学染
（1）如孵育杂交需要使用原位杂交仪，请提前2小时跟管理老师预约仪器。
（2）使用过的DAB（包括终止DAB染的液体）必须倒入4B-15实验室的DAB专用废液桶内，并拧紧废液桶盖，放置在4B-15实验室内，与二甲苯废液相同，待医院综合服务处统一收集，管理老师及时补上新的废液桶，并贴好标签，标签上应注明该废液的名称、组成
、浓度。
4、脱水、透明、封片
（1）脱水、透明、封片都必须要在4B-15实验室的通风橱内进行，严禁在通风橱外封片。
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