6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质检测的制作方法

1.本发明涉及药物分析领域，涉及6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质检测。

背景技术：

2.(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯常作为匹伐他汀钙和瑞舒伐他汀钙的重要合成原料，瑞舒伐他汀钙是目前主流用于心脑血管疾病的常用药物，在制备瑞舒伐他汀钙原料药过程中，目前可工业化生产的工艺均为使用(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯作为起始物料2(如图4所示)，由于该化合物存在两个手性中心，在制备过程中会出现4种形式的异构体(如图5所示)，故需要重点关注其对映异构体杂质(4s-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯、2-[(4r，6r)-6-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-二恶烷-4-基]乙酸叔丁酯与2-[(4s，6s)-6-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-二恶烷-4-基]乙酸叔丁酯。异构体杂质在生产工艺中产生，不易去除，易残留，如未能有效控制，会引入中间体，并因结构类似，相关理化性质等均较为一致，不易除去，且会参与反应导致原料药中间体中含有较大异构体杂质(如图5所示)，在后续需增加多次精制进行除去，导致整体生产成本的上涨，故需要根据(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯样品中异构体杂质的含量制定合理的后续工艺。因此开发一种可以有效检测上述杂质的方法，对于匹伐他汀钙或瑞舒伐他汀钙原料药的质量及成本的控制有重要的指导意义。
[0003]
已报道的有关物质方法采用气相谱法，用非极性柱对杂质进行分离，无法将主成分与异构体分离，另由于本品与其异构体杂质紫外吸收较弱，检测难度较大，目前没有检索到这些异构体检测的相关报道。
[0004]
因此急需一种可在起始物料中有效检测其另外三种异构体的方法，通过在起始物料中有效控制三个异构体的含量，以避免后续工艺中多次精制导致收率降低及相关物料成本的增加，造成经济损失。

技术实现要素：

[0005]
为了解决上述问题，本发明提供了一种基于液相谱分离检测(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的方法。
[0006]
本发明的第一个目的在于提供(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的分离检测方法，包括如下步骤：
[0007]
(1)样品液配制：将(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯样品分散在乙腈中，溶解、稀释，得到样品贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，然后加入样品贮备液，混匀，膜过滤，得到样品液；
[0008]
(2)杂质定位溶液配制：取(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸
叔丁酯异构体杂质，分别用乙腈稀释成相应混合溶液，得到各杂质定位贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，分别加入相应的杂质定位贮备液；混匀，膜过滤，得到杂质定位溶液；
[0009]
(3)高效液相谱检测：以正己烷-无水乙醇作为流动相，对杂质定位溶液进行高效液相谱检测，实现杂质分离，获得相应的谱信息；然后再对样品液进行高效液相谱检测，对照杂质定位溶液的谱信息分离检测样品中的杂质。
[0010]
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，样品贮备液中样品浓度为50mg/ml。
[0011]
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，样品液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。
[0012]
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，样品液中供试品贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。
[0013]
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质包括：
[0014][0015]
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，各杂质定位贮备液的浓度为1mg/ml。
[0016]
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，杂质定位溶液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。
[0017]
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，杂质定位溶液中杂质定位贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。
[0018]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为80:20。
[0019]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，记录谱图至主成分峰保留时间的7倍。
[0020]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，高效液相谱中的流速为1.0ml/min。
[0021]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，高效液相谱中的谱柱温为35℃。
[0022]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，高效液相谱柱中的进样量为20μl。
[0023]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，高效液相谱柱中的检测波长为350nm。
[0024]
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中，高效液相谱的谱柱为chiralcel ay-3手性4.6mm
×
250mm，5μm。
[0025]
在本发明的一种实施方式中，上述高效液相谱检测的谱条件具体包括：谱柱：chiralcel ay-3(4.6mm
×
250mm,5μm)；流动相为正己烷-无水乙醇(80:20)流动相；检测波长：350nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl；记录至主峰保留时间的7倍。
[0026]
本发明的第二个目的在于提供(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的含量测定方法，包括如下步骤：
[0027]
s1配制供试品溶液：将(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯样品分散在乙腈中，溶解、稀释制成供试品贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，加入供试品贮备液，混匀，膜过滤，得到供试品溶液；
[0028]
s2配制对照溶液：取用s1中供试品贮备液，稀释，作为自身对照贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，加入自身对照贮备液，混匀，膜过滤，
得到对照溶液；
[0029]
s3配制杂质定位溶液：取(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质，分别用乙腈稀释成相应混合溶液，得到各杂质定位贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，分别加入相应的杂质定位贮备液；混匀，膜过滤，得到杂质定位溶液；
[0030]
s4高效液相谱测定：分别将s1所得供试品溶液、s2所得对照溶液、s3所得杂质定位溶液进行高效液相谱检测，其中流动相为正己烷-无水乙醇；通过杂质定位溶液对各杂质进行分离定位；再分别采集供试品溶液中各杂质的峰面积，对照溶液中主成分峰面积，通过自身对照法，测定各杂质的含量。
[0031]
在本发明的一种实施方式中，s1中，供试品贮备液中样品浓度为50mg/ml。
[0032]
在本发明的一种实施方式中，s1中，供试品溶液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。
[0033]
在本发明的一种实施方式中，s1中，供试品溶液中供试品贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。
[0034]
在本发明的一种实施方式中，s2中，供试品贮备液稀释的倍数为200倍，得到自身对照贮备液。
[0035]
在本发明的一种实施方式中，s2中，对照溶液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。
[0036]
在本发明的一种实施方式中，s2中，对照溶液中自身对照贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。
[0037]
在本发明的一种实施方式中，s3中，(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质包括：
[0038][0039]
在本发明的一种实施方式中，s3中，各杂质定位贮备液的浓度为1mg/ml。
[0040]
在本发明的一种实施方式中，s3，杂质定位溶液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。
[0041]
在本发明的一种实施方式中，s3中，杂质定位溶液中杂质定位贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。
[0042]
在本发明的一种实施方式中，s4中，流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为80:20。
[0043]
在本发明的一种实施方式中，s4中，记录谱图至主成分峰保留时间的7倍。
[0044]
在本发明的一种实施方式中，s4中，高效液相谱中的流速为1.0ml/min。
[0045]
在本发明的一种实施方式中，s4中，高效液相谱中的谱柱温为35℃。
[0046]
在本发明的一种实施方式中，s4中，高效液相谱柱中的进样量为20μl。
[0047]
在本发明的一种实施方式中，s4中，高效液相谱柱中的检测波长为350nm。
[0048]
在本发明的一种实施方式中，s4中，高效液相谱的谱柱为chiralcel ay-3手性4.6mm
×
250mm，5μm。
[0049]
在本发明的一种实施方式中，s4中，自身对照法的计算公式如下：
[0050]
杂质％＝(a
杂质
/a
对照
)*(c
对照
/c
供试品
)*100％
[0051]
其中：a
杂质
为供试品中各异构体杂质峰面积；a
对照
为对照溶液中主成分峰面积；c
对照
为对照溶液浓度(对照溶液中本品(主成分)的浓度)；c
供试品
为供试品溶液浓度(供试品溶液中本品(主成分)的浓度)。
[0052]
在本发明的一种实施方式中，上述高效液相谱检测的谱条件具体包括：谱柱：chiralcel ay-3(4.6mm
×
250mm,5μm)；流动相为正己烷-无水乙醇(80:20)流动相；检测波长：350nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl；记录至主峰保留时间的7倍。
[0053]
本发明的有益效果：
[0054]
本发明的方法能将(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯和异构体杂质进行有效分离(各杂质峰之间的分离度≥1.5)，从而能准确测定各杂质的含量，且稳定性高，可靠性高，为(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯杂质的控制提供了可靠的依据，有利于保证下游产品的质量。
附图说明
[0055]
图1为供试品溶液的谱图。
[0056]
图2为对照溶液的谱图。
[0057]
图3为杂质定位溶液的谱图。
[0058]
图4为瑞舒伐他汀钙合成路线示意图。
[0059]
图5为瑞舒伐他汀钙异构体杂质衍生图。
具体实施方式
[0060]
下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。
[0061]
各异构体杂质结构式如下：
[0062][0063]
(4s-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯(简称z1)
[0064][0065]
2-[(4r，6r)-6-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-二恶烷-4-基]乙酸叔丁酯(简称z2)
[0066][0067]
2-[(4s，6s)-6-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-二恶烷-4-基]乙酸叔丁酯(简称z3)
[0068]
实施例1(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯杂质的分离检测
[0069]
(1)供试品溶液制备：取本品((4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯)，加乙腈溶解并稀释制成每1ml中含本品50mg的溶液，摇匀，作为供试品贮备液；取1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪20mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入10ml无水乙醇，超声5分钟，精密加入供试品贮备液0.3ml，在30℃～40℃下强力振摇10分钟，立即用0.45μm滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。
[0070]
(2)对照溶液制备：精密量取供试品贮备液1ml，置200ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为自身对照贮备液；取1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪20mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入10ml无水乙醇，超声5分钟，精密加入自身对照贮备液0.3ml，在30℃～40℃下强力振摇10分钟，立即用0.45μm滤膜滤过，取滤液作为对照溶液。
[0071]
(3)杂质定位溶液制备：取异构体杂质z1、z2、z3各适量，加乙腈稀释制成每1ml中含杂质z1、z2、z3各为1mg的混合溶液，作为杂质定位贮备液；取1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪20mg，置25ml量瓶中，精密加入10ml无水乙醇，超声5分钟，精密加入杂质定位贮备液0.3ml，在30℃～40℃下强力振摇10分钟，立即用0.45μm滤膜滤过，取滤液作为杂质定位溶液。
[0072]
(4)高效液相谱分离检测：
[0073]
谱条件如下：谱柱：chiralcel ay-3(4.6mm
×
250mm,5μm)；流动相为正己烷-无水乙醇(80:20)流动相；检测波长：350nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl；记录至主峰保留时间的7倍。
[0074]
将步骤(1)中的供试品溶液注入高效液相谱仪中，记录谱图(如图1)。
[0075]
将步骤(2)中的对照溶液注入高效液相谱仪中，记录谱图(如图2，其中，9.420min为对照溶液中主成分的保留时间)。
[0076]
将步骤(3)中的杂质定位溶液注入高效液相谱仪中，记录谱图(如图3)。
[0077]
依据对照溶液的峰面积与供试品溶液杂质的峰面积进行比对(称作为自身对照法)，确定供试品中的杂质的含量，计算公式如下：
[0078]
杂质％＝(a
杂质
/a
对照
)*(c
对照
/c
供试品
)*100％
[0079]
其中：a
杂质
为供试品中各异构体杂质峰面积；a
对照
为对照溶液中主成分峰面积；c
对照
为对照溶液浓度(对照溶液中本品(主成分)的浓度)；c
供试品
为供试品溶液浓度(供试品溶液中本品(主成分)的浓度)。
[0080]
精密量取杂质定位溶液20μl注入液相谱，记录谱图，杂质定位考察结果见表1。
[0081]
表1系统适用性考察结果
[0082][0083][0084]
由表1可知：任意相邻峰之间的分离度均大于1.5，这说明(4r-cis)-6-甲醛基-2,2
二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯与异构体杂质实现了很好的分离，为准确测试(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的含量提供了有利的前提条件。
[0085]
实施例2进样精密度考察
[0086]
溶液配制：取杂质z1、z2、z3对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成每1ml均含1.5μg的溶液，作为进样精密度溶液，精密量取20μl注入液相谱仪，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的相对标准偏差，结果见表2。
[0087]
表2进样精密度考察结果
[0088][0089]
实施例3(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯杂质的线性范围考察
[0090]
溶液配制：取杂质z1、z2、z3对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成系列浓度(12～2000μg/ml，相当于供试品浓度的0.024％～4％)的溶液，作为线性溶液。
[0091]
分别称取1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪20mg置于25ml量瓶中，精密加入10ml无水乙醇，超声5分钟，精密加入各0.3ml线性溶液，在30℃～40℃下强力振摇10分钟，立即用0.45μm滤膜滤过，精密量取续滤液20μl，按照实施例1步骤(4)中的高效液相谱分离检测过程，注入液相谱仪，记录谱图，获得峰面积值；用峰面积值与相应浓度进行线性关联，即为定量检测模型。计算斜率、y轴截距和相关系数。
[0092]
线性结果为：
[0093]
杂质z1在12.04～1925.80μg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，定量检测模型为y＝292.2494x-1684.0854，r2＝0.9998，大于0.9990。
[0094]
杂质z2在12.51～2001.60μg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，定量检测模型为y＝398.8017x-8298.8876，r2＝0.9997，大于0.9990。
[0095]
杂质z3在12.69～2031.00μg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，定量检测模型为y＝351.7258x-3080.2099，r2＝0.9998，大于0.9990。
[0096]
检测限与定量限：
[0097]
溶液配制：取z1、z2、z3对照品，精密称定，加乙腈溶解并逐级稀释，按仪器噪音的三倍响应值测定其检测限，按仪器噪音的十倍响应值测定其定量限。试验结果见表3。
[0098]
表3灵敏度结果
[0099][0100]
结论：实施例1中的检测方法灵敏度较高，满足检测要求。
[0101]
实施例4溶液稳定性
[0102]
按照实施例中本品检测方法，配制供试品溶液1份，在冷冻条件下放置24小时，杂质含量及杂质个数没有明显变化，溶液稳定性良好。
[0103]
实施例5准确度考察
[0104]
测试液配制：
[0105]
对照品溶液配制：取异构体杂质z1、z2、z3各适量，加乙腈稀释制成每1ml中含杂质z1、z2、z3各为50μg的混合溶液，作为对照品溶液。
[0106]
回收率溶液配制：取本品250mg，平行9份，精密称定，分别置5ml量瓶中，分别精密加入高、中、低三个浓度的杂质z1、z2、z3贮备液，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。
[0107]
操作：取1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪20mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入10ml无水乙醇，超声5分钟，精密加入对照品溶液及回收率溶液0.3ml，在30℃～40℃下强力振摇10分钟，立即用0.45μm滤膜滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相谱仪，记录谱图，计算回收率。
[0108]
准确度结果表明杂质z1、z2与z3回收率均在80％～120％之间，方法准确度高。
[0109]
对比例1
[0110]
混合溶液制备：取本品、z1对照品、z2对照品及z3对照品适量，用二甲基亚砜溶解制成每1ml中各含0.5mg的溶液。
[0111]
采用气相谱法的测定，气相手性谱柱agelient cyclosil-b(30m
×
0.25mm,0.25μm)；升温程序为初始柱温100℃，以5℃/min的速率升温至200℃，保持20分钟；进样口温度为250℃；检测器温度为280℃；氮气流量0.5ml/min；分离比20:1；进样量1μl。
[0112]
结果表明：主成分与杂质z3保留时间均约为20.5分钟，无法分离。
[0113]
对比例2
[0114]
采用高效液相谱法的测定，谱柱、流动相、流速、柱温、进样量与实施例1相同，不同之处在于样品及杂质未进行衍生
[0115]
杂质定位溶液制备：取杂质z1对照品、z2对照品及z3对照品适量，分别用流动相(正己烷-无水乙醇80:20)制成每1ml中各含0.5mg的溶液。
[0116]
结果表明：杂质浓度为0.5mg/ml时，样品及杂质不出峰，可见不添加1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪无法进行检测。
[0117]
对比例3
[0118]
检测过程与实施例1相同，差异在于手性谱柱的选择不同：
[0119]
采用高效液相谱法的测定，谱柱为chiralcel ad-h；流动相为正己烷-无水乙醇(80:20)检测波长：350nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl。
[0120]
结果表明：杂质z1与z2保留时间均为16分钟左右，完全重合。
[0121]
对比例4
[0122]
检测过程与实施例1相同，差异在于高效液相谱法中流动相条件不同：
[0123]
谱条件如下：谱柱：chiralcel ay-3(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相条件如表4所示；检测波长：350nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：20μl；记录至主峰保留时间的7倍。
[0124]
表4不同流动相的检测结果
[0125]

技术特征：

1.一种(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的分离检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品液配制：将(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯样品分散在乙腈中，溶解、稀释，得到样品贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，然后加入样品贮备液，混匀，膜过滤，得到样品液；(2)杂质定位溶液配制：取(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质，分别用乙腈稀释成相应混合溶液，得到各杂质定位贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，分别加入相应的杂质定位贮备液；混匀，膜过滤，得到杂质定位溶液；(3)高效液相谱检测：以正己烷-无水乙醇作为流动相，对杂质定位溶液进行高效液相谱检测，实现杂质分离，获得相应的谱信息；然后再对样品液进行高效液相谱检测，对照杂质定位溶液的谱信息分离检测样品中的杂质。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，样品贮备液中样品浓度为50mg/ml。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，样品液中1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪相对无水乙醇的浓度为2mg/ml。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，样品液中供试品贮备液与无水乙醇的体积比为0.3:10。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质包括：6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，各杂质定位贮备液的浓度为1mg/ml。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为80:20。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相谱的谱柱为chiralcel ay-3手性4.6mm
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250mm，5μm。9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，高效液相谱中的流速为1.0ml/min；谱柱温为35℃。10.一种(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：s1配制供试品溶液：将(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯样品分散在乙腈中，溶解、稀释制成供试品贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，加入供试品贮备液，混匀，膜过滤，得到供试品溶液；s2配制对照溶液：取用s1中供试品贮备液，稀释，作为自身对照贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，加入自身对照贮备液，混匀，膜过滤，得到对照溶液；
s3配制杂质定位溶液：取(4r-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质，分别用乙腈稀释成相应混合溶液，得到各杂质定位贮备液；将1-(5-肼基-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪分散在无水乙醇中，分别加入相应的杂质定位贮备液；混匀，膜过滤，得到杂质定位溶液；s4高效液相谱测定：分别将s1所得供试品溶液、s2所得对照溶液、s3所得杂质定位溶液进行高效液相谱检测，其中流动相为正己烷-无水乙醇；通过杂质定位溶液对各杂质进行分离定位；再分别采集供试品溶液中各杂质的峰面积，对照溶液中主成分峰面积，通过自身对照法，测定各杂质的含量。

技术总结

本发明公开了6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质检测，属于药物分析领域。本发明方法包括如下步骤：1)配制(4R-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯供试品溶液、对照溶液、异构体杂质定位溶液；2)使用高效液相谱仪测定杂质定位的谱图，各杂质峰之间的分离度≥1.5；3)使用高效液相谱仪测定对照溶液的谱图；4)使用高效液相谱仪测定供试品溶液的谱图，依据对照溶液的谱图，确定供试品溶液中异构体杂质的含量。本发明的方法能将(4R-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯和各异构体进行有效分离，为(4R-cis)-6-甲醛基-2,2二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯异构体杂质的控制提供了可靠的依据，有利于保证下游产品的质量。下游产品的质量。下游产品的质量。