磁珠试剂的制作方法

1.本发明涉及一种磁珠试剂。

背景技术：

2.作为提取蛋白质、抗体、肽、核酸等目标分子的方法，已知一种磁珠分离方法。由于磁珠分离方法为通过磁力来分离并回收珠粒的方法，因此能够迅速实施分离操作。
3.例如，在专利文献1中，公开了如下的技术，即：利用具备金属fe的芯和二氧化硅覆膜的高磁化磁珠和溶解结合液，而从血液试样中提取核酸；使对象生物体物质吸附在珠粒表面，并通过和永磁铁的组合，而分离并收集核酸；能够实现核酸提取的自动化。
4.此外，还公开了使高磁化磁珠事先分散在缓冲溶液或者极性有机溶剂中的技术。而且，公开了通过实施这样的操作而提高了核酸回收量。
5.在专利文献1所记载的核酸提取方法中，当使高磁化磁珠事先分散时，存在发生凝集的可能性。当发生高磁化磁珠的凝集时，再分散性会降低，从而在吸附有核酸的高磁化磁珠的清洗和核酸的洗出中会导致效率的降低。
6.此外，若发生高磁化磁珠的凝集，则在被供于由超声波处理实施的搅拌时，会因为高磁化磁珠彼此的摩擦而发生二氧化硅覆膜的损伤。当二氧化硅覆膜损伤时，芯会露出，从而会导致fe离子洗出。已洗出的fe离子成为使核酸的回收量降低的原因。
7.专利文献1：日本特开2009-33995号公报

技术实现要素：

8.本发明的应用例所涉及的磁珠试剂的特征在于，含有：磁珠，其具备fe基金属软磁性粒子以及包覆所述fe基金属软磁性粒子的平均厚度为20nm以上的二氧化硅膜；表面活性剂；分散介质，其使所述磁珠分散。
附图说明
9.图1为用于对利用了磁珠试剂的核酸的提取方法的一个示例进行说明的流程图。
10.图2为示意性地表示实施方式所涉及的磁珠试剂所包含的磁珠的剖视图。
具体实施方式
11.以下，基于附图，对本发明的磁珠试剂的优选的实施方式详细地进行说明。
12.1.目标分子的提取方法
13.首先，对利用了磁珠试剂的目标分子的提取方法的一个示例进行说明。作为目标分子，可以列举例如蛋白质、抗体、肽、核酸等，在以下的说明中对目标分子为核酸的情况进行说明，但以下的说明对于其他的目标分子也相同。另外，核酸例如也可以以包含在细胞或生物体组织等生物体试样、病毒、细菌等中的状态而存在。此外，核酸可以为dna(脱氧核糖核酸)，也可以为rna(核糖核酸)。
14.图1为用于对利用了磁珠试剂的核酸的提取方法的一个示例进行说明的流程图。图2为示意性地表示实施方式所涉及的磁珠试剂所包含的磁珠的剖视图。
15.图1所示的核酸的提取方法具有分散工序s102、混合工序s104、分离工序s106、清洗工序s108和洗出工序s110。
16.1.1.分散工程
17.在分散工序s102中，使图2所示的磁珠2和表面活性剂分散在分散介质中。在该分散中例如利用了超声波照射等。由此，磁珠2大致均匀地分散在分散介质中。
18.表面活性剂使磁珠试剂的表面张力降低，而抑制磁珠2的凝集。由此，提高了相对于分散介质的分散性。
19.1.1.1.磁珠
20.图2所示的磁珠2具备fe基金属软磁性粒子21和包覆fe基金属软磁性粒子21的二氧化硅膜22。fe基金属软磁性粒子21为，由fe基金属构成并且具有软磁性的粒子。二氧化硅膜22为，能够吸附并保持核酸的具有亲水性表面的覆膜。吸附是指可逆的物理结合。通过以预定的厚度而具备二氧化硅膜22，从而即使因超声波照射等而产生磁珠2彼此的摩擦，也可以抑制二氧化硅膜22的损伤。由此，fe基金属软磁性粒子21变得难以露出，因此能够抑制fe离子等的洗出。
21.磁珠2由于存在磁化，因此通过施加外部磁场而被磁吸引。因此，通过利用磁珠2，能够选择性地将吸附有核酸的磁珠2即固相从包含夹杂物的液相中分离。
22.fe基金属为以fe作为主要成分的金属。主要成分是指，在fe基金属中fe的含有率按照原子数比在50％以上。这样的fe基金属与铁氧体(ferrite)等相比，饱和磁化强度更高，韧性和硬度也更高。因此，磁性分离性优异，并且具有良好的耐用性。此外，软磁性是指，矫顽力较低且磁导率较高的性质。
23.fe基金属除了fe之外，可以包含如ni或者co那样单独显示出强磁性的元素，也可以根据设为目标的特性而包含从由cr、nb、cu、al、mn、mo、si、sn、b、c、p、ti以及zr组成的中选择出来的至少一种。此外，在fe基金属中，在不损害实施方式的效果的范围内，也可以包含不可避免的杂质。
24.不可避免的杂质是指，在原料或者制造时无意中混入的杂质。作为不可避免的杂质，例如可以列举出o、n、s、na、mg、k等。
25.作为这样的fe基金属，虽然并不特别地被限定，例如，除了纯铁、羰基铁之外，还可以列举出如铁硅铝(sendust)这样的fe-si-al系合金、如fe-ni系、fe-co系、fe-ni-co系、fe-si-b系、fe-si-b-c系、fe-si-b-cr-c系、fe-si-cr系、fe-b系、fe-p-c系、fe-co-si-b系、fe-si-b-nb系、fe-si-b-nb-cu系、fe-zr-b系、fe-cr系、fe-cr-al系这样的fe基合金等。
26.此外，fe基金属可以为fe基非晶态金属，也可以为fe基结晶金属，优选为，使用fe基非晶态金属。由于非晶态金属与例如金属氧化物等相比韧性以及硬度更高，因此，能够抑制磨损和缺损以及伴随磨损和缺损的金属离子的洗出、特别是fe离子的洗出。
27.fe基金属软磁性粒子21也可以为通过任何方法制造的粒子。作为制造方法的示例，例如，除了水雾化法、气体雾化法、旋转水流雾化法等各种雾化法之外，还可以列举出粉碎法等。其中，根据雾化法，可以获得粒子形状更加接近于正球体的fe基金属软磁性粒子21。这样的fe基金属软磁性粒子21填充率较高，有助于实现每单位体积的核酸的回收量较
多的磁珠2。
28.此外，也可以通过各种分级机对利用上述制造方法制造出的金属粉末进行分级，并将调节了粒径后的金属粉末作为fe基金属软磁性粒子21。
29.磁珠2的饱和磁化强度优选为，50emu/g以上且250emu/g以下，更加优选为，100emu/g以上且200emu/g以下。如果磁珠2的饱和磁化强度在上述范围内，则有充分的磁吸引力作用于磁珠2，从而能够更加可靠地固定磁珠2。由此，能够更加高精度地分离液相和固相。
30.磁珠2的饱和磁化强度例如利用振动试样磁强计(vsm)进行测量。此外，也可以将fe基金属软磁性粒子21的饱和磁化强度看作磁珠2的饱和磁化强度。
31.磁珠2的矫顽力优选为100[oe]以下，更加优选为30[oe]以下，进一步优选为10[oe]以下。这样的磁珠2由于矫顽力足够低，因此仅在施加外部磁场时被磁化，当停止外部磁场的施加时则恢复至原来状态。因此，当通过利用这样的磁珠2来执行由外部磁场进行的磁吸引的操作，或者在其后执行解除磁吸引的操作时，能够提高其操作性。
[0032]
磁珠2的矫顽力例如可以利用振动试样磁强计(vsm)进行测量。此外，也可以将fe基金属软磁性粒子21的矫顽力看作磁珠2的矫顽力。
[0033]
磁珠2的平均粒径优选为，0.05μm以上且10.0μm以下，更加优选为，0.10μm以上且5.0μm以下，进一步优选为，0.3μm以上且2.0μm以下。如果磁珠2的平均粒径在上述范围内，则磁珠2的比表面积足够大，从而能够增加核酸的回收量。另外，当磁珠2的平均粒径低于上述下限值时，磁珠2变得易于凝集，从而有可能使核酸的吸附效率降低而导致回收量减少。另一方面，当磁珠2的平均粒径高于上述上限值时，由于磁珠2的比表面积变小，因此有可能使核酸的回收量减少。此外，根据磁吸引力的大小，有可能使利用磁吸引来固定磁珠2操作的操作性降低。
[0034]
另外，磁珠2的平均粒径作为在通过激光衍射法而取得的体积基准的粒度分布中从小径侧起的累积粒径成为50％时的粒径d50而被求出。
[0035]
二氧化硅膜22的构成材料只要是可以形成上述亲水性表面的材料即可，并不特别地被限定，例如为含有二氧化硅的材料。具体而言，可以列举出硅石、含硅玻璃、硅藻土等。此外，也可以为，在任意的材料的表面上涂敷了这些含有氧化硅的材料的复合材料。
[0036]
二氧化硅膜22的平均厚度设为20nm以上，优选为30nm以上，更加优选为40nm以上。若二氧化硅膜22的平均厚度在上述范围内，则可以使二氧化硅膜22均匀地成膜，因此能够更加可靠地抑制伴随超声波照射的fe离子等的洗出。
[0037]
另外，二氧化硅膜22的平均厚度的上限值并不特别地被限定，如果考虑磁珠2整体的金属的比率、二氧化硅膜22的密接性等，则优选为1000nm以下，更加优选为500nm以下。
[0038]
二氧化硅膜22的平均厚度为，通过电子显微镜对磁珠2的截面进行观察，并且将十处以上的膜厚平均后的值。另外，优选为，测量部位跨及不同的磁珠2。
[0039]
二氧化硅膜22的成膜方法并不特别地被限定，例如可以列举出如溶胶凝胶法那样的湿式成膜法、如气相成膜法那样的干式成膜法等。其中，由于通过溶胶凝胶法能够低成本且均匀地形成二氧化硅膜22，因此有用。
[0040]
磁珠2中的fe基金属的含有率优选为，50体积％以上，更加优选为，70体积％以上，进一步优选为，90体积％以上。由于这种磁珠2的fe基金属的含有率十分地高，因此即使是
小径也能够获得较大的磁吸引力。另一方面，当fe基金属的含有率低于上述下限值时，磁吸引力会降低，从而存在磁珠2和液相的分离性降低的可能性。
[0041]
另外，磁珠2中的fe基金属的含有率是通过利用电子显微镜对磁珠2的截面进行观察，并基于fe基金属所占的面积率计算出来的。根据需要，也可以设为进行元素映射，从而计算出fe基金属所占的面积率的方式。
[0042]
磁珠试剂中的磁珠2的含有率并不特别地被限定，优选为，10质量％以上且70质量％以下，更加优选为，20质量％以上且50质量％以下，进一步优选为，30质量％以上且45质量％以下。通过将磁珠2的含有率设定在上述范围内，能够高效地对核酸进行回收。此外，能够抑制因超声波照射等导致的磁珠2彼此的碰撞频率变高的情况，从而能够控制二氧化硅膜22的磨损。
[0043]
1.1.2.表面活性剂
[0044]
作为表面活性剂，例如，可以列举出非离子性表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂等，优选为使用非离子性表面活性剂。由此，在对提取后的核酸进行分析时，可以抑制由离子性表面活性剂引起的影响。其结果为，能够进行通过电泳法实施的分析，从而能够扩大分析方法的选择范围。
[0045]
作为非离子性表面活性剂，例如，可以列举出如triton(注册商标)-x那样的曲拉通(triton)类表面活性剂、如tween(注册商标)20那样的吐温(tween)类表面活性剂、酰基脱水山梨糖醇(acyl sorbitan)等。作为阳离子性表面活性剂，例如，可以列举出十二烷基三甲基溴化铵(dodecyltrimethylammonium bromide)、十二烷基三甲基氯化铵(dodecyltrimethylammonium chloride)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammonium bromide)等。作为阴离子性表面活性剂，例如，可以列举出十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，sds)、n-月桂酰肌氨酸钠(n-lauroylsarcosine)、胆酸钠(sodium cholate)、十二烷基硫酸钠(sodium lauryl sulfate，sls)、肌氨酸(sarcosine)等。作为两性离子表面活性剂，例如，可以列举磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine)等。这些表面活性剂可以以单独的方式或者组合两种以上来使用。
[0046]
优选为，磁珠试剂中的表面活性剂的含有量在表面活性剂的临界胶束浓度以上。临界胶束浓度也被称为cmc(critical micelle concentration)，是指分散在溶液中的表面活性剂的分子缔合而形成胶束时的浓度。通过使表面活性剂的含有量在临界胶束浓度以上，从而使表面活性剂变得易于在磁珠2的周围处形成层。由此，能够进一步提高对磁珠2的凝集进行抑制这样的效果。
[0047]
另外，表面活性剂的含有量并不被限定在临界胶束浓度以上，也可以低于临界胶束浓度。例如，不论临界胶束浓度为何，磁珠试剂中的表面活性剂的含有量均优选为0.05质量％以上且3.0质量％以下。
[0048]
在超声波照射中，例如可以使用超声波均质器等超声波分散器。通过超声波照射，从而产生微小的气泡(气蚀效应，cavitation)，能够使磁珠2以及表面活性剂更加均匀地分散。
[0049]
另一方面，当通过超声波照射而对磁珠2施加冲击时，存在二氧化硅膜22受到损伤的可能性。作为二氧化硅膜22受到损伤的原因，除了磁珠2彼此的碰撞之外，还可以考虑空
蚀磨损(cavitations erosion)。如果二氧化硅膜22受到损伤，则存在fe基金属软磁性粒子21露出，从而导致fe离子等洗出的可能性。
[0050]
相对于此，如果在磁珠试剂中添加表面活性剂，并且，二氧化硅膜22的平均厚度在上述范围内，则可以充分地抑制因超声波照射导致的二氧化硅膜22的损伤。其结果为，可以抑制fe离子等的洗出。此外，由于可以抑制磁珠2的凝集，并且能够在磁珠试剂中使磁珠2良好地分散，因此能够容易地提高核酸的吸附效率。
[0051]
另外，认为表面活性剂通过使磁珠试剂的表面张力降低，从而抑制了由空蚀磨损引起的物质的磨损。当添加表面活性剂，则磁珠试剂的表面张力降低。已知在表面张力与由空蚀磨损导致的物质的磨损之间，存在正的相关关系。因此，通过利用表面活性剂的作用，从而使磁珠试剂的表面张力降低，进而能够对由空蚀磨损导致的二氧化硅膜22的损伤进行抑制。
[0052]
超声波照射的时间并不特别地被限定，优选为，1分钟以上且60分钟以下，更加优选为，5分钟以上且40分钟以下。
[0053]
1.1.3.分散介质
[0054]
作为分散介质，例如，可以列举出水、食盐水、醇类这样的极性有机溶剂或者其水溶液等。
[0055]
作为水，例如可以列举出灭菌水、纯水等。作为醇类，例如可以列举出乙醇、异丙醇等。
[0056]
另外，在磁珠试剂中也可以包含上述物质以外的成分。
[0057]
如上所述，实施方式所涉及的磁珠试剂含有磁珠2、表面活性剂和使磁珠2分散的分散介质。磁珠2具备fe基金属软磁性粒子21、以及包覆fe基金属软磁性粒子21的平均厚度为20nm以上的二氧化硅膜22。
[0058]
根据这样的结构，通过磁珠2具备磁化高于铁氧体等的fe基金属软磁性粒子21，并具备厚度充足的二氧化硅膜22，并且磁珠试剂含有表面活性剂，从而能够对因超声波照射等导致的二氧化硅膜22的损伤进行抑制，进而能够对fe离子的洗出进行抑制。此外，由于通过表面活性剂而使磁珠试剂的表面张力降低，从而能够使磁珠2良好地分散。由此，能够提高核酸的吸附效率。
[0059]
1.2.混合工序
[0060]
在混合工序s104中，将包含核酸的试样放入容器中，并在该容器中混合磁珠试剂以及溶解吸附液。由此，核酸吸附在磁珠2上。
[0061]
关于溶解吸附液，例如可以使用包含离液物质的液体。离液物质在水溶液中产生离液离子，从而具有使疏水性分子的水溶性增加的作用，进而有助于核酸吸附到磁珠2上。离液离子为大离子半径的单价阴离子。作为离液物质，例如可以列举出硫氰酸胍(guanidine thiocyanate)、盐酸胍(guanidine hydrochloride)、碘化钠、碘化钾、高氯酸钠等。其中，优选为，使用具有强蛋白质改性作用的硫氰酸胍或盐酸胍。
[0062]
溶解吸附液中的离液物质的浓度根据离液物质而不同，例如优选为1.0m以上且8.0m以下。此外，特别是在使用硫氰酸胍的情况下，优选为3.0m以上且5.5m以下。另外，特别是在使用盐酸胍的情况下，优选为4.0m以上且7.5m以下。
[0063]
溶解吸附液也可以包含表面活性剂。表面活性剂用于，破坏细胞膜或者使细胞中
所包含的蛋白质改性的目的。作为表面活性剂并不特别地被限定，例如可以列举出如triton类表面活性剂和tween类表面活性剂等非离子性表面活性剂、以及十二烷基硫酸钠(sds)等阴离子表面活性剂。其中，优选为非离子性表面活性剂。由此，在对提取后的核酸进行分析时，可以抑制由离子性表面活性剂引起的影响。其结果为，能够进行由电泳法实施的分析，从而能够扩大分析方法的选择范围。
[0064]
溶解吸附液中的表面活性剂的浓度并不特别地被限定，优选为，0.1质量％以上且2.0质量％以下。
[0065]
溶解吸附液也可以包含还原剂以及螯合剂中的至少一种。作为还原剂，例如可以列举出2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol)、二硫苏糖醇(dithiothreitol，dtt)等。作为螯合剂，例如可以列举出edta(二钠盐二水合物)等。
[0066]
溶解吸附液中的还原剂的浓度并不特别地被限定，优选为0.2m以下。溶解吸附液中的螯合剂的浓度并不特别地被限定，优选为0.2mm以下。
[0067]
溶解吸附液的ph并不特别地被限定，优选为6以上且8以下的中性。
[0068]
在混合工序s104中，根据需要，通过超声波均质器、涡旋混合器、手摇振动器等，对容器的收纳物进行搅拌。搅拌的时间并不特别地被限定，优选为5秒钟以上且30分钟以下。
[0069]
1.3.分离工序
[0070]
在分离工序s106中，使外部磁场作用于吸附有核酸的磁珠2，来进行磁吸引。由此，使磁珠2移动至容器的壁面并固定。其结果为，能够使作为固相的磁珠2和液相分离。
[0071]
在分离工序s106中，在施加了外部磁场的状态下，根据需要，通过超声波均质器、涡旋混合器、手摇振动器等，对容器的收纳物进行搅拌。由此，使磁珠2被外部磁场磁吸引的概率变高。
[0072]
另外，也可以设为在固定了磁珠2之后，根据需要，对容器施加加速度。由此，能够使附着在磁珠2上的液体震落，从而更加高精度地使固相和液相分离。加速度也可以为离心加速度。关于离心加速度的施加，可以使用离心分离机。
[0073]
通过以上所述的方式，在分离了磁珠2和液相之后，在处于将磁珠2固定在容器的壁面上的状态下，通过移液管等而将容器内的液相排出。
[0074]
1.4.清洗工序
[0075]
在清洗工序s108中，进行吸附有核酸的磁珠2的清洗。清洗是指，为了去除吸附在磁珠2上的夹杂物，在使吸附有核酸的磁珠2和清洗液接触之后，通过再次进行分离来去除夹杂物的操作。
[0076]
具体而言，首先，通过移液管等，向容器内供给清洗液。然后，对磁珠2以及清洗液进行搅拌。由此，使清洗液和磁珠2接触，来对吸附有核酸的磁珠2进行清洗。此时，也可以临时性地去除外部磁场。由此，磁珠2分散在清洗液中，从而能够更加提高清洗效率。
[0077]
接下来，再次固定磁珠2，并排出清洗液。通过将如以上那样的清洗液的供给以及排出重复一次以上，从而能够对磁珠2进行清洗。
[0078]
清洗液只要是不促使核酸的洗出并且不促使夹杂物与磁珠2结合的液体即可，并不特别地被限定，可以列举出例如乙醇、异丙醇、丙酮等有机溶剂或其水溶液、低盐浓度水溶液等。作为低盐浓度水溶液，例如可以列举出缓冲液。低盐浓度水溶液的盐浓度优选为0.1mm以上且100mm以下，更加优选为1mm以上且50mm以下。用作缓冲液的盐并不特别地被限
定，优选为使用tris、hepes、pipes、磷酸等的盐。
[0079]
清洗液也可以含有triton(注册商标)、tween(注册商标)、sds等表面活性剂。此外，清洗液的ph并不特别地被限定。
[0080]
在清洗工序s108中，在使清洗液与磁珠2接触的状态下，根据需要，通过超声波均质器、涡旋混合器、手摇振动器等，对容器的收纳物进行搅拌。由此，能够提高清洗效率。
[0081]
另外，清洗工序s108只需根据需要执行即可，在不需要清洗的情况下，也可以省略。
[0082]
1.5.洗出工序
[0083]
在洗出工序s110中，从吸附有核酸的磁珠2中，使核酸洗出。洗出是指，在使吸附有核酸的磁珠2与洗出液接触之后，再次进行分离，从而使核酸转移至洗出液中的操作。
[0084]
具体而言，首先，通过移液管等向容器内供给洗出液。然后，对磁珠2以及洗出液进行搅拌。由此，使洗出液与磁珠2接触，从而能够使核酸洗出。此时，也可以临时性地去除外部磁场。由此，使磁珠2分散在洗出液中，从而能够更加提高洗出效率。
[0085]
接下来，再次固定磁珠2，并排出核酸洗出后的洗出液。由此，能够回收核酸。
[0086]
洗出液只要是促使从吸附有核酸的磁珠2中洗出核酸的液体即可，并不特别地被限定，例如，除了使用如灭菌水、纯水那样的水之外，还优选使用te缓冲液、即包含10mm的tris盐酸缓冲液和1mm的edta并且ph为8的水溶液。
[0087]
洗出液还可以含有triton(注册商标)、tween(注册商标)、sds等表面活性剂。
[0088]
在洗出工序s110中，在使洗出液与吸附有核酸的磁珠2接触的状态下，根据需要，通过超声波均质器、涡旋混合器、手摇振动器等，对容器的收纳物进行搅拌。由此，能够提高洗出效率。
[0089]
此外，在洗出工序s110中，也可以对洗出液进行加热。由此，能够促进核酸的洗出。洗出液的加热温度并不特别地被限定，优选为70℃以上且200℃以下，更加优选为80℃以上且150℃以下，进一步优选为95℃以上且125℃以下。
[0090]
作为加热方法，例如可以列举出供给预先加热后的洗出液的方法、在将未加热的洗出液供给至容器之后进行加热的方法等。加热时间并不特别地被限定，优选为30秒钟以上且10分钟以下。
[0091]
另外，洗出工序s110只需根据需要执行即可，例如，在仅以分离工序s106中的磁珠2和液相的分离为目的的情况下，也可以省略。
[0092]
以上，基于图示的实施方式对本发明的磁珠试剂进行了说明，但是本发明并不被限定于此。例如，本发明的磁珠试剂也可以为，上述实施方式的各部分被替换成为具有相同的功能的任意构成的物质，还可以为在上述实施方式中添加了任意构成物的物质。
[0093]
实施例
[0094]
接下来，对本发明的具体的实施例进行说明。
[0095]
2.核酸的回收
[0096]
2.1.实施例1
[0097]
首先，实施对放入到容器的磁珠试剂照射30分钟超声波的处理，使磁珠分散。使用的磁珠的质量为23mg。
[0098]
接下来，对磁珠试剂和大肠杆菌dna(试样)以及溶解吸附液进行混合。然后，通过
涡旋混合器对容器的收纳物搅拌10分钟。另外，大肠杆菌dna相对于容器的收纳物的体积的含有率为20ng/μl。
[0099]
接下来，在对磁珠实施了磁性分离的状态下，排出液相，而供给清洗液。然后，对容器的收纳物进行搅拌并清洗。关于清洗液，使用了浓度8m的盐酸胍水溶液以及浓度为70％的乙醇水溶液。然后，在进行两次使用了前者清洗液的清洗之后，进行两次使用了后者清洗液的清洗。
[0100]
接下来，在对磁珠实施了磁性分离后的状态下，排出液相，而供给洗出液。然后，对容器的收纳物进行搅拌而实施核酸的洗出。关于洗出液，使用了纯水。
[0101]
接下来，在对磁珠实施了磁性分离后的状态下，排出洗出液，并回收。由此，回收了试样中的核酸。
[0102]
2.2.实施例2～8
[0103]
除了将磁珠试剂的成分如表1中所示那样进行了变更以外，通过与实施例1相同的方式回收了试样中的核酸。
[0104]
2.3.比较例1
[0105]
除了省略了表面活性剂的添加以外，通过与实施例1相同的方式回收了试样中的核酸。
[0106]
2.4.比较例2
[0107]
除了将二氧化硅膜的平均厚度设为10nm以外，通过与实施例2相同的方式回收了试样中的核酸。
[0108]
2.5.比较例3
[0109]
除了省略了表面活性剂的添加以外，通过与实施例3相同的方式回收了试样中的核酸。
[0110]
3.回收的核酸的评价
[0111]
3.1.回收的核酸的浓度
[0112]
对于利用各实施例以及各比较例的磁珠试剂而回收的核酸，通过thermo fisher scientific公司制造的实时pcr装置，对回收量进行测量，并计算出洗出液中的核酸的浓度。然后，对照以下的评价标准来评价计算出来的浓度。
[0113]
aa：回收的核酸的浓度为12ng/μl以上。
[0114]
a：回收的核酸的浓度为8ng/μl以上且低于12ng/μl。
[0115]
b：回收的核酸的浓度为4ng/μl以上且低于8ng/μl。
[0116]
c：回收的核酸的浓度低于4ng/μl。
[0117]
在表1中示出评价结果。
[0118]
3.2.由电泳法实施的分析的可否
[0119]
对于利用各实施例以及各比较例的磁珠试剂而回收的核酸，对照以下的评价标准来评价由电泳法实施的分析的可否。
[0120]
可：能够进行由电泳法实施的分析
[0121]
否：不能进行由电泳法实施的分析
[0122]
在表1中示出评价结果。
[0123]
表1
[0124]
表1
[0125][0126]
如表1中所示那样，确认了通过利用各实施例的磁珠试剂，能够以高浓度来回收核酸。此外，特别是，确认了通过使磁珠试剂包含非离子性表面活性剂，能够进行由电泳法实施的分析。另外，在各实施例的磁珠试剂中，即使在超声波照射后，也未发现fe离子的增加。
[0127]
相对于此，由于比较例1、3的磁珠试剂并未含有表面活性剂，因此利用其回收的核酸的浓度较低。此外，比较例2的磁珠试剂由于磁珠中的二氧化硅膜的平均厚度较薄，因此利用其回收的核酸的浓度较低。
[0128]
另外，在各个比较例的磁珠试剂中，在超声波照射后，确认到fe离子的增加。因此，认为回收的核酸的浓度降低是受到洗出的fe离子的影响。此外，利用各个比较例的磁珠试剂回收的核酸因fe离子的洗出的影响而无法进行由电泳法实施的分析。
[0129]
符号说明
[0130]2…
磁珠；21
…
fe基金属软磁性粒子；22
…
二氧化硅膜；s102
…
分散工序；s104
…
混合工序；s106
…
分离工序；s108
…
清洗工序；s110
…
洗出工序。

技术特征：

1.一种磁珠试剂，其特征在于，含有：磁珠，其具备fe基金属软磁性粒子以及包覆所述fe基金属软磁性粒子的平均厚度为20nm以上的二氧化硅膜；表面活性剂；分散介质，其使所述磁珠分散。2.如权利要求1所述的磁珠试剂，其中，所述表面活性剂为非离子性表面活性剂。3.如权利要求1或2所述的磁珠试剂，其中，所述表面活性剂的含有量为所述表面活性剂的临界胶束浓度以上。4.如权利要求1所述的磁珠试剂，其中，所述磁珠的平均粒径为0.05μm以上且10.0μm以下。5.如权利要求1所述的磁珠试剂，其中，所述磁珠的饱和磁化强度为50emu/g以上且250emu/g以下。6.如权利要求1所述的磁珠试剂，其中，所述fe基金属软磁性粒子包含fe基非晶态金属。

技术总结

本发明提供一种磁珠的分散性良好并且抑制了通过超声波处理导致的Fe离子的洗出的磁珠试剂。该磁珠试剂的特征在于，含有：磁珠，其具备Fe基金属软磁性粒子以及包覆所述Fe基金属软磁性粒子的平均厚度为20nm以上的二氧化硅膜；表面活性剂；分散介质，其使所述磁珠分散。此外，所述表面活性剂优选为非离子性表面活性剂。活性剂。活性剂。