一种球孢白僵菌及其在烟草赤星病防治中的应用

本发明属于植物保护技术领域，具体地说，涉及一种球孢白僵菌及其在烟草赤星病防治中的应用。

烟草赤星病是一种非常普遍并且分布广泛，危害严重的世界性真菌性病害，严重影响烟草的生产并且造成上亿元的经济损失。

1980年之后，中国各地烟区赤星病的发生每日剧增，叶片发病率最高达80％以上，使制烟质量平均下降2个等级。严重发病地区减产高到50％以上，直接影响生产优质香烟的数量。赤星病病害主要为害叶片。最开始为深黄小点，后逐渐扩大半径为0.5cm-1cm的圆圈或不规则的病斑，周围有黄晕圈。如果遇上连续降雨、潮湿、无光照的气候条件，特别容易引发赤星病的爆发。据观察，当每月降雨量在20mm以上，气温在24℃±2℃左右，相对湿度80％以上，旬日照少于3d烟叶表面容易形成水膜时，是赤星病发病的最佳时期。

迄今为止，中国防治植物病害还主要用化学防治，但是化学农药的大量应用，不但让植物对化学农药产生很强的抗性，而且农药的残留和施药时对人体造成很大的损害。所以，用以菌治菌，以菌防菌的方法来控制烟草赤星病就显得至关重要。中国和国外研究表明，土传病害生防真菌有太多种，其中白僵菌是目前研究最多的真菌，白僵菌具有的寄主广泛、适应能力强，并且对一些害虫具有较强的致病性与适应性，使其成为作物害虫防治中使用最多的真菌之一。

虽然国内外已有很多学者研究拮抗菌防治烟草赤星病并发表论文，但目前鲜有白僵菌(尤其为球孢白僵菌)防治烟草赤星病的研究。例如，万科等(万科,黄慧,葛永怡,等.拮抗菌L2代谢产物对烟草赤星病病原菌的抑制效果[J].贵州农业科学,2014,42(6):56-60.)发现拮抗菌L2代谢产物对烟草赤星病病原菌的抑制效果，L2粗代谢物含量在1.5％～20％时对烟草赤星病菌菌丝生长有抑制作用，7d时抑制率最高可达74.8％，增加浓度后，抑制率最高可达78.2％，浓度越高抑制作用越强。

1、要解决的问题

针对现有的烟草赤星病尚无有效采用白僵菌进行抑制的问题，本发明提供一种球孢白僵菌及其在烟草赤星病防治中的应用，它可以有效抑制烟草赤星病。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种球孢白僵菌，所述的球孢白僵菌的编号HFBb009，2017年9月8日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为14158。

优选地，所述的球孢白僵菌的培养条件为：采用SDAY培养基进行培养，培养温度为25℃±1℃，培养时间为7d-15d。

优选地，所述的SDAY培养基的组分为琼脂20g，酵母粉10g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，水1000mL。

一种如上述所述的球孢白僵菌在烟草赤星病防治中的应用。

优选地，所述的球孢白僵菌的剂型是药学上可接受的剂型。

优选地，所述的球孢白僵菌的剂型为孢子悬浮液。

优选地，所述的球孢白僵菌的孢子悬浮液的浓度为1.0×10个孢子/mL-1.0×10个孢子/mL。

优选地，所述的球孢白僵菌的孢子悬浮液的浓度为1.0×10个孢子/mL。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明首次使用球孢白僵菌应用到烟草赤星病的防治中；数据表明，球孢白僵菌(编号为HFBb009)对烟草赤星病抑制率好，随着时间的延长，球孢白僵菌对病原真菌烟草赤星病菌逐渐增强，且浓度为1.0×10的球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病抑制作用最明显。

图1为球孢白僵菌与烟草赤星病的平板对峙培养变化情况；其中(A)为球孢白僵菌HF Bb009菌株单独培养菌落的情况，(B)为球孢白僵菌HFBb009菌株对烟草赤星病的平板对峙培养菌落的情况，(C)为烟草赤星病单独培养菌落的情况。

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

供试材料如下：

(1)菌种来源

供试植物病原烟草赤星病菌均由中国农业科学院烟草研究所病理实验室提供。供试白僵菌为2株球孢白僵菌Beauveria bassiana：其中一株球孢白僵菌的编号为HFBb009，2017年9月8日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为14158；另一株球孢白僵菌的编号为DSXJ-07，其从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心购买，该菌株在2016年5月13日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为3.15657；

(2)供试培养基

SDAY培养基：琼脂20g，酵母粉10g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，水1000mL；

(3)主要设备与仪器

人工气候箱MGC-300H(上海一恒科学仪器有限公司)、恒温培养振荡器HNY-(天津市欧诺仪器仪表有限公司)、立式自动压力蒸汽灭菌器GR60DA(厦门致徽仪器有限公司)。

实施例1

球孢白僵菌对烟草赤星病的平板对峙实验

将供试植物病原真菌烟草赤星病菌和球孢白僵菌(编号为HFBb009和DSXJ-07)2个菌株用涂平板法分别转接到SDAY培养基上，在25℃±1℃人工气候箱中黑暗条件下倒置培养7d后(具体应用时，还可以选择8d、9d、10d、11d、12d、13d、14d、15d等数值)，在各菌落的边缘用直径为6mm的打孔器打菌碟，采用平板对峙培养法，将烟草赤星病菌接种于SD AY平板中央，供试球孢白僵菌菌株接种于SDAY平板边缘，两者相距约3.0cm，同时设置只接种球孢白僵菌或烟草赤星病菌平板为对照，每个处理重复3次，放入25℃±1℃人工气候箱中黑暗条件下倒置培养，逐日观察并记录球孢白僵菌和烟草赤星病菌的菌落直径。

按下列公式计算抑制率：

菌落直径(mm)＝测量菌落直径平均值—6.0；

菌丝抑制率(％)＝(单独培养菌落直径—对峙培养菌落直径)/单独培养菌落直径×100。

球孢白僵菌对烟草赤星病的抑制作用结果：

如图1所示，平板对峙培养4d时，烟草赤星病菌株沿接种点连线方向的菌丝生长明显受到球孢白僵菌HFBb009的抑制；如表1所示，平板对峙培养培养5d后，球孢白僵菌HFBb009菌株对烟草赤星病的抑制率为46.37％，且与对照球孢白僵菌DSXJ-07菌株对烟草赤星病的抑制率(29.52％)差异显著；平板对峙培养6d后，球孢白僵菌HFBb009菌株对烟草赤星病的抑制率为52.86％。数据表明，球孢白僵菌HFBb009菌株对烟草赤星病抑制率好，随着时间的延长，球孢白僵菌对病原真菌烟草赤星病菌逐渐增强。

表1平板对峙培养中球孢白僵菌对烟草赤星病的抑制作用(平均值±标准误)

实施例2

不同浓度球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病的平板抑制测定

将2株球孢白僵菌菌株(编号HFBb009和DSXJ-07)分别接种到SDAY液体培养基中，在恒温培养振荡器中培养3d，吸取0.1ml培养物与SDAY固体培养基上涂板培养15d，挑取一定量的菌丝与10ml试管中用0.05％的吐温80水溶液洗涤孢子，用4层擦镜纸过滤菌丝，然后采用系列稀释法将孢子稀释成1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL和1.0×10个孢子/mL浓度的孢子悬浮液，分别进行涂板，将烟草赤星病菌碟(6mm)接种于平板中央，每个处理重复3次，然后以不加球孢白僵菌孢子悬浮液只接烟草赤星病的平板作为对照。将各处理置于25℃±1℃人工气候箱中培养，逐日观察并记录烟草赤星病的菌落直径。

由表2所示，在不同浓度球孢白僵菌HFBb009和DSXJ-07菌株的孢子悬浮液的SDAY平板上，烟草赤星病的菌丝生长均受到抑制，其抑制程度随着球孢白僵菌孢子悬浮液的浓度增大而增加，且各浓度球孢白僵菌HFBb009菌株的孢子悬浮液对烟草赤星病的菌丝抑制率显著高于DSXJ-07菌株。在4d时，球孢白僵菌(编号HFBb009)菌株在浓度为1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL和1.0×10个孢子/mL时，其球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病的菌丝抑制率分别为28.30％、50.15％、58.33％、75.46％、85.79％和86.07％。在6d时，球孢白僵菌(编号HFBb009)菌株在浓度为1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL、1.0×10个孢子/mL和1.0×10个孢子/mL时，其球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病的菌丝抑制率分别为22.36％、44.21％、58.84％、76.67％、86.11％和86.25％。上述实验数据表明，不同浓度的球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病均有抑制作用，都有明显效果，例如4d和6d时，浓度为1.0×10个孢子/mL和1.0×10个孢子/mL的球孢白僵菌(编号HFBb009)孢子悬浮液相对于球孢白僵菌(编号DSXJ-07)对烟草赤星病抑制作用均较好，其中1.0×10个孢子/mL的球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病抑制作用最好，但两者没有显著性差异，因此从应用和经济性考虑，优先选择1.0×10个孢子/mL球孢白僵菌(编号HF Bb009)悬浮液进行抑制赤星病菌的生长。

表2不同浓度球孢白僵菌孢子悬浮液对烟草赤星病(菌丝)的抑制作用(平均值±标准误)

以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。