一株在高盐环境中除去黄曲霉毒素B1的假丝酵母菌的使用

一株在高盐环境中除去黄曲霉毒素B ₁的假丝酵母菌的使用

技术领域

本发明涉及一株在高盐环境中除去AFB₁的假丝酵母菌，已经于2010年4月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，保藏编号为CGMCC No.3790，属于微生物领域。

背景技术

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学机构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）等产生的次级代谢产物，主要存在于土壤，动植物，各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆，稻谷，玉米，通心粉，调味品，牛奶，奶制品，食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。黄曲霉毒素尤其是黄曲霉毒素B₁（以下简称AFB₁）具有较强的致癌作用，因此，各国对其在食品、饲料中的含量有严格的限制标准。

目前去除黄曲霉毒素的措施有很多种，主要包括物理方法、化学方法、生物学方法和酶解法。物理方法主要有（1）挑选霉粒，碾磨加工，反复搓洗；（2）吸附法：常用的吸附剂有沸石、活性白陶土、活性炭等，选择毒素吸附剂时，一方面应注意吸附能力必须具备实验室及动物实验双重资料方能证明有效，另一方面考虑吸附剂的高度吸附能力。（3）辐射处理：黄曲霉毒素在紫外光下照射不稳定，可用紫外光照射下去毒。化学方法有（1）碱处理法：黄曲霉毒素的内酯环可被碱破坏，形成香豆素钠盐；（2）有机溶剂萃取法：黄曲霉毒素易溶于有机溶剂，可用有机溶剂进行提取分离、去毒；（3）氧化去除法：漂白粉、、双氧水、臭氧等氧化剂可以迅速将黄曲霉毒素氧化去除；（4）中草药去毒：1976年我国首次发现山苍子中的挥发油可以彻底除去食品中的黄曲霉毒素。挥发油中的某些成分与黄曲霉毒素发生反应，改变毒素的结构，从而达到去毒的目的。生物学方法是通过微生物的作用达到去除黄曲霉毒素的目的。酶解法是利用酶的专一性达到去除黄曲霉毒素的目的。

本发明的目的是通过一种微生物学的方法，分离筛选得到一株具有较高耐盐性（其在6%～12%的含盐量下具有较高的生长速度）的假丝酵母菌（保藏编号为CGMCC No.3790）应用于AFB₁的去除和生物修复，该菌株属于益生菌类，不仅可以去除样品中污染的AFB₁，而且能够提高产品的芳香成分；同时，本发明从实际生产中论证了该菌株的去除效果。

发明内容

为了减少AFB₁对人和动物的危害，减少真菌毒素对传统酿造调味品的污染，保证食品安全，本文将该菌株应用于实际生产中的AFB₁的生物修复，AFB₁的去除率达到20.15%。

本发明所要解决的技术问题是提供一株去除黄曲霉毒素B₁效果较好的假丝酵母菌及其在AFB₁污染样品上的应用。

本发明要求假丝酵母菌（C. versatilis）的菌龄处于为对数初期，菌体浓度在使用对象中的浓度为1.0×10⁶ ～3.0×10⁶ cfu/g(ml)，以湿基计。

本发明去除AFB₁的具体方法为：待处理的酱油醪、豆酱醅或豆瓣酱醅中接种菌龄是对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液，初始菌体浓度为1.0×10⁶ ～3.0×10⁶ cfu/g(ml)，以湿基计，混匀后置于25℃～35℃,发酵10～30天。

本发明具有如下优点：

1、本发明方法能够在高盐环境中有效除去AFB₁，去除率达到20.15％。本发明使用假丝酵母菌系源于酱油醪，是东方传统酿造调味品常用的微生物菌种，并经Ames实验等方法验证是安全的。

2、本发明方法是采用适合高盐发酵调味品生产的耐盐微生物菌株，去除生产过程中AFB₁的污染，为其安全生产提供了一种可行、合理的方法。

具体实施方式

下面结合具体实施范例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1 在高盐液态物料体系中除去AFB₁

在含12%NaCl 的麦芽汁液体培养基中添加AFB₁ ，使其浓度到达10ng/ml ，接入假丝酵母菌(C. versatilis)悬液 ，初始菌体浓度1.0×10⁶cfu/ml，未接种的样品作对照，置于30±2℃的培养箱中培养72hr，取样分析，本发明假丝酵母菌除去了样品中52.97%的AFB₁。

实施例2  在高盐半固态物料体系中除去AFB₁

以产黄曲霉毒素的菌株As3.4408（中国科学院普通微生物研究所订购）为出发菌株，以蚕豆瓣为原料生产瓣曲，采用豆瓣酱生产工艺加入盐水使其盐分为13.5% ，水分含量为 55.0%。 将预先繁殖进入对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液接入瓣醅，初始菌体浓度为1.0×10⁶cfu/g(ml)，置于30±2℃培养箱中保温培养30d，瓣醅中黄曲霉毒素B₁的除去率达55.65%。

实施例3 采用本方法除去被污染样品中的AFB₁

以一定量的已污染了AFB₁的豆瓣酱为研究对象。将预先繁殖至对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液接入污染的豆瓣酱，初始菌体浓度为1.0×10⁶cfu/g(ml)，模拟工厂生产环境，25℃～35℃下培养30d，AFB₁的除去率达到20.15%。

26SrDNA序列为：

TTACGCCAACATCCTTGCATAAAGCGCGGTCCTCAATCCCGCCGGGACGTATTTGATAAAGCTATAACACATTCGAAAATGCCACTTTCTTTACCATTTA TCCATCCGGCAAAACTGATGTTAGCCCCTTCCGAAGAAGGTGTGTAGCTTTAAGCCCTTCCACTTCAACGATTTCACGTGCTATTTCACTCTCTTTTCA A AGTGCTTTTCATCTTTCCTTTACAGTACTTGTTCGCTATCGGTCTCTCGCCAATATTTAGCCTTAGATGGAATTTACCACCCACTTAGCGCTGCATTC CC AAACAACGCGACTCGTAGAAAGAGTACTACACAGACACAGGACCTCCGTGGCACGGGGCTATCACCCTCCAAGGCGCGGCTTTCCAGCCAACTTCCA CAG AGCTGAGTCCAGCACTCCATCTCCAAATTACAACTCCTCAAAAGAGGATTTCAAATTTGGGCTTTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTAGGGCAATC

ITS区域序列：

TTCAGCGGGTAGTCTTGCCTGATACGAGGTCTTTTAAAGAAAGCTTGGTGTACAAGTTTCACTAACGTGTACATCTCCATTCTTTTCGACACTCTGCATAGCGTCAGCAACCACCATTGGTGAGAAAGATAGACGCTCGCACAGGCATGCTGTTAGGAGAACCTAACAGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCAATGACTCACGTCTGCAATTCGCATTACCTATCGCGCTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAACCGAGAGATCCGTCGTTGAAGCTTGTATAATTTATAGTTAATCTGAATAAATAATAATGGTTGAGTTTTGTATGATTGGCGGCTTGCTATAAAAGCGCCCCGCCAAAACACAATGAGAAGGTTCACAGAAATGTGATAGTAATCTCAGAAATGATCCTTC。