具有整联蛋白抑制剂特性的环肽衍生物

具有整联蛋白抑制剂特性的环肽衍生物

本发明涉及式Ⅰ的化合物

                 R-Q-X    Ⅰ 其中，

R  是环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中，Z通过侧链与Q连接 或如果Q不存在，与X连接，

O  不存在，或者是-〔CO-R¹-NH-〕_m、 -〔NH-R¹-CO-〕_m、-〔CO-R¹-CO-〕_m、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n、 -(NH-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-CO-)_n、 -(NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂-CO-)_n或 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n-〔CO-R¹-NH-〕_m，

X  是-CO-CH=CH₂、-CO-C(CH₃)=CH₂、 -NH-CH=CH₂、-NH-C(CH₃)=CH₂或-NH-(CH₂)_p-SR¹⁰，

Z  在各情况下彼此独立地是氨基酸残基或者二肽残基或三肽 残基，所述氨基酸彼此独立地选自下组：Ala、Asn、Asp、 Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、His、高-Phe、Ile、Leu、Lys、 Met、Phe、Phg、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或M， 所述氨基酸还可被衍生化，并且氨基酸残基通过α-氨基和α -羧基彼此以肽的方式连接，以及 M总是存在，

M  是NH(R⁸)-CH(R³)-COOH，

R¹  不存在，或是R²、R⁹、R²-R⁹-R²，或是亚苯基，它未被 取代或者被R⁵单取代或二取代，其中，R⁵的链长在各情况 下是彼此独立的，

R²  是具有1～10个C原子的亚烷基，其中，1或2个亚甲基可 被S、-CH=CH-或-C≡C-替代，

R³  是-R⁵-R⁴、-R⁶-R⁴或-R⁷-R⁴，

R⁴  是OH、NH₂、SH或COOH，

R⁵  是具有1～6个C原子的亚烷基，

R⁶  是具有7～14个C原子的烷撑亚苯基，

R⁷  是具有8～15个C原子的烷撑苯基亚烷基，

R⁸  是H、A或具有7～12个C原子的烷撑苯基，

R⁹  是具有3～7个C原子的亚环烷基，

R¹⁰  是H或S保护基，

A   是具有1～6个C原子的烷基，

Hal   是F、Cl、Br或I，

m和n在各情况下彼此独立地是0、1、2或3，以及

p     是1、2或3，

其中，如果涉及旋光的氨基酸和氨基酸衍生物的基，那么就包括D型 和L型二者， 及其盐。

类似的环肽化合物被公开于DE 43 10 643和DE 195 38 741中。 化合物环-(Art-Gly-Asp-Glu(ε-Ahx-Cys-NH₂)-D-Val)由D．Delforge 等公开于分析生物化学(Anal．Biochem．)242，180～186(1996)中。

本发明基于这一目的，即寻具有重要性质的新型化合物，尤其 是那些可用于生产药物的化合物。

已发现式Ⅰ的化合物及其盐具有很重要的药理特性与良好的耐受 性。它们尤其起整联蛋白抑制剂作用，此时，它们特别抑制α_v-、β₃ -或β₅-整联蛋白受体与配体的相互作用，例如，血纤蛋白原与β₃- 整联蛋白受体的结合。所述化合物关于整联蛋白αvβ₃、αvβ₅、αⅡbβ₃ 并且还关于αvβ₁、αvβ₆和αvβ₈表现特别的活性。

该作用例如可通过J．W．Smith等在生物化学杂志(J．Biol．Chem．) 265，12267～12271(1990)中描述的方法证实。

血管发生的起源对于血管整联蛋白和胞外基质蛋白之间相互作用 的依赖性由P．C．Brooks，R．A．Clark和D．A．Cheresh描述于科学 (Science)264，569～71(1994)中。

抑制该相互作用地可能性以及因此由环肽引起生血管细胞的编程 性细胞死亡由P．C．Brooks，A．M．Montgomery，M．Rosenfeld，R．A． Reisfeld，T．-Hu，G．Klier和D．A．Cheresh描述于细胞(Cell)79， 1157～64(1994)中。

封阻整联蛋白受体和配体的相互作用(例如血纤蛋白原对血纤蛋 白原受体(糖蛋白Ⅱb／Ⅲa)的作用)的化合物作为GP Ⅱb／Ⅲa拮抗剂 防止肿瘤细胞通过转移扩散。

该现象通过下列观察结果证实了：

通过由肿瘤细胞与血小板的相互作用形成小颗粒聚集体(小血栓) 发生肿瘤细胞从局部肿瘤进入维管系统的扩散。肿瘤细胞通过在小颗 粒聚集体中的保护被屏蔽了，所以不被免疫系统的细胞识别。小颗粒 聚集体能在脉管壁上聚集，于是便利肿瘤细胞进入组织的进一步渗透。 由于小血栓的形成是通过与活化血小板上的血纤蛋白原受体结合的血 纤蛋白原介导的，所以GP Ⅱa／Ⅲb拮抗剂可被认为是有效的转移抑制 剂。

(甲基)丙烯酸自由基所起作用是将肽共价键合在例如具有游离 的丙烯酸自由基或甲基丙烯酸自由基的植入物的生物相容性表面，所 述植入物例如是聚甲基丙烯酸甲酯模制件(骨粘固粉)或者例如在金 属表面上的含丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的层。

相应地，硫羟自由基所起作用是将肽结合到例如金的表面。 因此，本发明尤其涉及式Ⅰ的化合物，用于通过自由基X的官能 团以共价键结合到生物相容性表面。

如果X=-NH-(CH₂)_p-SR¹⁰，则结合到表面的官能团是SH自由基，即如果R¹⁰=H。

本发明的肽现在通过其涂覆使得生物材料(尤其对于所有可能器 官的植入物)有可能生物官能化，主要是那些受刺激的细胞种(它们 在各情况下旨在实现合适的生物材料的组织整合)的粘着。应用这样 的涂层，可实现具有改善的长期稳定性的各种生物材料／植入物在其引 入体内后的加速和增强的整合。

在这方面，可参考本申请人在同一天提出的第二件申请，其中， 描述了合适的生物材料及其含本发明化合物的涂层。

本发明的肽选择性地与整联蛋白结合。在生物相容性表面(例如 植入物)上固定后，它们刺激携带整联蛋白的细胞的粘着。将所述化 合物涂在所述表面后，那些细胞种可被选择性地刺激而粘合(它们也 旨在实现植入物在植入后整合入天然组织)。所以，例如，成骨细胞、 破骨细胞和内皮细胞是携带α_v的细胞种。

因此，本发明涉及作为整联蛋白抑制剂、用于植入物上选择性细 胞加富的式Ⅰ的化合物。

固着在生物相容性表面之后，式Ⅰ的化合物可用作人医学和兽医学 中的药剂，特别是它们可被用作整联蛋白抑制剂供由植入物引起 的障碍、缺损和炎症(例如生物材料和植入物不适当的和延迟的整合)， 由植入物引起的血栓形成，骨和牙齿的缺损，还供溶骨性疾病(例 如骨质疏松症)，血栓形成，心肌梗死，动脉硬化，在创伤愈合中有助 于愈合过程，以及供加速和增强植入物或生物相容性表面在组织中的 整合过程。

式Ⅰ的化合物可被用作应用生物材料、植入物、导管和心搏器的手 术中的抗微生物活性物质。它们在这里具有防腐作用。抗微生物活性 的效能可通过P．Valentin-Weigund等在传染与免疫(Infection and Immunity)，2851～2855(1988)中描述的方法证明。

因此，本发明涉及作为整联蛋白抑制剂用于下列用途的式Ⅰ化合 物，即用于由植入物引起的障碍，缺损，炎症，以及溶骨性疾病 (例如骨质疏松症)，血栓形成，心肌梗死和动脉硬化，还用于加速和 增强植入物或生物相容性表面在组织中的整合过程。

本发明进一步涉及式Ⅰ的化合物在生产用于下列用途的药物方面 的应用，即供由植入物引起的障碍，缺损，炎症，以及溶骨性疾 病(例如骨质疏松症)，血栓形成，心肌梗死和动脉硬化，还供加速和 增强植入物或生物相容性表面在组织中的整合过程。

携带合适的硫羟固定基的肽可被共价键合到镀金载体(例如植入 物、亲和层析介质或微量滴定板)上。

本发明还涉及式Ⅰ的新型化合物在亲和层析中洗脱结合的蛋白质 的应用。

具体地说，它们可被用作洗脱整联蛋白的整联蛋白配体。

上下文中提及的氨基酸残基的缩写代表下列氨基酸：

Abu    4-氨基丁酸

Aha    6-氨基己酸

Ala    丙氨酸

Asn    天冬酰胺

Asp    天冬氨酸

Arg    精氨酸

Cys    半胱氨酸

Dab    2，4-二氨基丁酸

Dap    2，3-二氨基丙酸

Gln    谷氨酰胺

Glp    焦谷氨酸

Glu    谷氨酸

Gly    甘氨酸

His    组氨酸

高-Phe 高苯丙氨酸

Ile    异亮氨酸

Leu    亮氨酸

Lys    赖氨酸

Met    甲硫氨酸

Nle    亮氨酸

Orn    鸟氨酸

Phe          苯丙氨酸

Phg          苯基甘氨酸

4-Hal-Phe    4-卤苯丙氨酸

Pmc          2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰

Pro          脯氨酸

Ser          丝氨酸

Thr          苏氨酸

Trp          氨酸

Tyr          酪氨酸

Val          缬氨酸

此外，下列缩写具有如下给定的含义：

Ac        乙酰

Boc       叔丁氧基羰基

CBZ或Z    苄氧羰基

BCCl      二环己基碳二亚胺

DMF       二甲基甲酰胺

EDCl      N-乙基-N，N′-(二甲氨基丙基)碳二亚胺

Et        乙基

FCA       荧光素羧酸

FITC      异硫氰酸荧光素

Fmoc      9-芴甲氧羰基

FTH       荧光素硫脲

HOBt      1-羟基苯并三唑

Me        甲基

MBHA      4-甲基二苯甲基胺(4-Methylbenzydrylamine)

Mtr       4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰

HONSu     N-羟基琥珀酰亚胺

OBut      叔丁酯

Oct    辛酰

OMe    甲酯

OEt    酯

POA    苯氧基乙酰

Pbf    五甲基苯并呋喃基

Sal    水杨酰

Su     琥珀酰

TFA    三氟乙酸

Trt    三苯甲基。

如果上述氨基酸可存在数种对映异构形成，那么上下文中包括所 有这些形式及其混合物(例如DL形式)，例如作为式Ⅰ化合物的组成 部分。此外，可提供具有本来已知的适当保护基的氨基酸例如作为式 Ⅰ化合物的组成部分。特别是精氨酸的侧链改性，例如已对于非肽αvβ3 拮抗剂进行了该改性(例如，R．Keenan等，第211届美国化学学会 国家会议论文摘要(Abstr．Pap．211th ACS National Meeting)(New Orleans，USA)1996，MEDI 236)，也可被用于环肽的情况，例如，苯 并咪唑衍生物代替胍基。

所谓的前体药物衍生物也包括在本发明的化合物中，即这样的式Ⅰ 化合物：已用例如烷基或酰基、糖或低聚肽改性了，并且它们在体内 迅速分解而给出本发明的活性化合物。

这些化合物还包括本发明化合物的生物降解性聚合物衍生物，例 如描述于药学杂志(J．Pharm．)115，61～67(1995)中的化合物。

本发明还涉及制备权利要求1的式Ⅰ化合物及其盐的方法，其特征 在于：

(a)制备式Ⅰ化合物的方法

其中，

Q  不存在，或者是-〔CO-R¹-NH-〕_m、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n或-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n-〔CO-R¹-NH-〕_m，

X  是-CO-CH=CH₂或-CO-C(CH₃)=CH₂，

并且R具有权利要求1中所示含义，

ⅰ)

将式Ⅱ的化合物

                 R-H    Ⅱ

其中，

R具有权利要求1中所示含义，

与式Ⅲ的化合物反应

                 L-Q-X    Ⅲ

其中，

Q  不存在，或者是-〔CO-R¹-NH-〕_m、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n或-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n-〔CO-R¹-NH-〕_m，

X  是-CO-CH=CH₂或-CO-C(CH₃)=CH₂，

并且

L  是Cl、Br、I或是游离的或活性官能改性的OH基，

或者

ⅱ)

将式Ⅳ的化合物

                 R-Q-H    Ⅳ

其中，

Q  不存在，或者是-〔CO-R¹-NH-〕_m、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n或-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)_n-〔CO-R¹-NH-〕_m，

并且

R具有权利要求1中所示含义，

与式Ⅴ的化合物反应

                L-X    Ⅴ

其中，

X  是-CO-CH=CH₂或-CO-C(CH₃)=CH₂，

并且

L  是Cl、Br、I或是游离的或活性官能改性的OH基；

或者

(b)制备式Ⅰ化合物的方法

其中，

Q  不存在，或者是-〔NH-R¹-CO-〕_m、 -〔CO-R¹-CO-〕_m、 -(NH-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-CO-)_n或 -(NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂-CO-)_n，

X  是-NH-CH=CH₂、-NH-C(CH₃)=CH₂或 -NH-(CH₂)_p-SR¹⁰，

R¹⁰  是S保护基，

并且R具有权利要求1中所示含义，

ⅰ)

将式Ⅵ的化合物

                  R-L    Ⅵ

其中，

L  是Cl、Br、I或是游离的或活性官能改性的OH基，

并且R具有权利要求1中所示含义，

与式Ⅶ的化合物反应

                 H-Q-X    Ⅶ

其中，

Q  不存在，或者是-〔NH-R¹-CO-〕_m、 -(NH-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-CO-)_n或-(NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂-CO-)_n，

X  是-NH-CH=CH₂、-NH-C(CH₃)=CH₂或 -NH-(CH₂)_p-SR¹⁰，

R¹⁰  是S保护基，

或者

ⅱ)

将式Ⅷ的化合物

                R-Q-L    Ⅷ

其中，

Q  不存在，或者是-〔NH-R¹-CO-〕_m、 -〔CO-R¹-CO-〕_m、 -(NH-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-CO-)_n或 -(NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂-CO-)_n，

L  是Cl、Br、I或是游离的或活性官能改性的OH基，

并且R具有权利要求1中所示含义，

与式Ⅸ的化合物反应

                H-X    Ⅸ

其中，

X  是-NH-CH=CH₂、-NH-C(CH₃)=CH₂或 -NH-(CH₂)_p-SR¹⁰，

R¹⁰  是S保护基，

或者

(c)特征在于，通过用溶剂解剂或氢解剂处理使它从其官能衍生 物之一释出，

和／或特征在于，通过用酸或碱处理将式Ⅰ的碱性或酸性化合物转 化成它的盐之一。

上下文中，如果不另外明确指出，自由基R、Q、X和L就具有式 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ中所示的含义。

在前述式中，烷基优选是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异 丁基、仲丁基或叔丁基，另外，还可以是戊基，1-、2-或3-甲基 丁基，1，1-、1，2-或2，2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基，1 -、2-、3-或4-甲基戊基，1，1-、1，2-、1，3-、2，2-、2， 3-或3，3-二甲基丁基，1-或2-乙基丁基，1-乙基-1-甲基丙 基，1-乙基-2-甲基丙基，1，1，2-或1，2，2-三甲基丙基。

R¹是R²、R⁹、R²-R⁹-R²、亚苯基，它未被取代或者被R⁵单取 代或二取代，其中，R⁵的链长在各情况下是彼此独立的，或者R¹不 存在；R¹尤其是具有1～10个C原子的亚烷基。

亚烷基优选是亚甲基、亚乙基、亚丁基、亚戊基或亚己基，另外， 还可以是亚庚基、亚辛基、亚壬基或亚癸基。

烷撑苯基优选是苄基或苯乙基。

烷撑苯基亚烷基优选是4-亚甲基苄基或4-亚乙基苄基。

Q优选例如是6-氨基己酸自由基、琥珀酰基、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH)-基、 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)CO-(CH₂)₅-NH-基、 -(CO-(CH₂)₅-NH)₂-基或是 -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)₂CO-(CH₂)₅-NH-基。

M优选是Dap、Ser、Cys、Asp、D-Asp、Dab、高丝氨酸、高 半胱氨酸、Glu、D-Glu、Thr、Orn、Lys、D-Lys、4-氨甲基- Phe或4-氨甲基-D-Phe。

关于Z的含义中提及的氨基酸和氨基酸残基还可被衍生化，N-甲 基、N-乙基、N-丙基、N-苄基和C_α-甲基衍生物是优选的。Asp 和Glu的衍生物，尤其是侧链羧基的甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、叔丁 酯、新戊酯或苄酯也是优选的。另外，还有Arg的衍生物，该衍生物 可在-NH-C(=NH)-NH₂-基上被乙酰、苯甲酰、甲氧羰基或乙 氧羰基取代。

Z优选是M，此外，优选是高-Phe-M、苯基甘氨酸、D-Phe-M、 D-Trp-M、  D-Tyr-M、  D-Phe-Lys、  D-Phe-D-Lys、  D-Trp-Lys、 D-Trp-D-Lys、 D-Tyr-Lys、 D-Tyr-D-Lys、 D-Phe-Orn、 D-Phe-Dab、 D-Phe-Dap、 D-Phe-D-Orn、 D-Phe-D-Dab、 D-Phe-D-Dap、 D-Phe-4- 氨甲基-Phe、D-Phe-4-氨甲基-D-Phe、D-Trp-4-氨甲基-Phe、D-Trp-4- 氨甲基-D-Phe、D-Tyr-4-氨甲基-Phe、D-Tyr-4-氨甲基-D-Phe、 D-Phe-Asp、 D-Phe-D-Asp、 D-Trp-Asp、 D-Trp-D-Asp、 D-Tyr-Asp、 D-Tyr-D-Asp、 D-Phe-Cys、 D-Phe-D-Cys、 D-Trp-Cys、 D-Trp-D-Cys、 D-Tyr-Cys、 D-Tyr-D-Cys、 Phe-D-Lys、 Trp-D-Lys、 Tyr-D-Lys、 Phe-Orn、 Phe-Dab、 Phe-Dap、 Trp-Orn、 Trp-Dab、 Trp-Dap、 Tyr-Orn、 Tyr-Dab、Tyr-Dap、Phe-4-氨甲基-D-Phe、Trp-4-氨甲基-D-Phe、Tyr-4- 氨甲基-D-Phe、Phe-D-Asp、Trp-D-Asp、Tyr-D-Asp、Phe-D-Cys、 Trp-D-Cys、 Tyr-D-Cys、 Phg-M、 D-Phe-Lys-Gly、 D-Phe-M-Gly、 D-Trp-Lys-Gly、  D-Trp-M-Gly、  D-Tyr-Lys-Gly、  D-Tyr-M-Gly、 D-Phe-Val-Lys、 D-Phe-Gly-Lys、 D-Phe-Ala-Lys、 D-Phe-Ile-Lys、 D-Phe-Leu-Lys、 D-Trp-Val-Lys、 D-Trp-Gly-Lys、 D-Trp-Ala-Lys、 D-Trp-Ile-Lys、  D-Trp-Leu-Lys、 D-Tyr-Val-Lys、 D-Tyr-Gly-Lys、 D-Tyr-Ala-Lys、 D-Tyr-Ile-Lys、 D-Tyr-Leu-Lys。

自由基-R⁶-R⁴优选是2-、3-或4-羟基苄基，2-、3-或4 -氨基苄基，2-、3-或4-巯基苄基，2-、3-或4-羧基苄基，另 外，还优选是2-、3-或4-羟基苯乙基，2-、3-或4-氨基苯乙 基，2-、3-或4-巯基苯乙基，2-、3-或4-羧基苯乙基。

亚环烷基优选是亚环丙基，1，2-或1，3-亚环丁基，1，2-或 1，3-亚环戊基，1，2-、1，3-或1，4-亚环己基，另外，还可以 是1，2-、1，3-或1，4-亚环庚基。

R¹⁰是H或S保护基(例如三苯甲基)。

氨基保护基优选是乙酰、丙酰、丁酰、苯乙酰、苯甲酰、甲苯甲 酰、POA、甲氧羰基、乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、BOC、2 -碘乙氧羰基、CBZ(“苄氧羰基”)、4-甲氧基苄氧羰基、FMOC、 Mtr、苄基、Pbf或Pmc。

Hal优选是F、Cl或Br，但也可以是I。

式Ⅰ的化合物可具有一个或多个手性中心，所以存在各种立体异构 形式。式Ⅰ包括所有这些形式。

因此，本发明尤其涉及式Ⅰ的那些化合物，其中，至少一个所述自 由基具有如前所示优选的含义之一。一些优选的化合物可由下列派生 式Ⅰa～Ⅰf表示，它们相应于式Ⅰ，并且，其中未更详细指定的自由基 具有式Ⅰ中所示含义，但其中，

a)中，Z 是D-Phe-M、Phe-M、D-Trp-M、Trp-M、D-Tyr-M、             Tyr-M、D-Phg-M、Phg-M、D-高-Phe-M、高-Phe-M             或D-Phe-Lys-Gly；

b)中，Z 是D-Phe-M、Phe-M、D-Trp-M、Trp-M、D-Tyr-M、             Tyr-M、D-Phg-M、Phg-M、D-高-Phe-M、高-Phe-M             或D-Phe-Lys-Gly，           X 是-CO-CH=CH₂、-NH-CH=CH₂、或            -NH-(CH₂)_p-SH；

c)中，Z 是D-Phe-M、Phe-M、D-Trp-M、Trp-M、D-Tyr-M、             Tyr-M、D-Phg-M、Phg-M、D-高-Phe-M、高-Phe-M             或D-Phe-Lys-Gly，           X 是-CO-CH=CH₂或-NH-(CH₂)_p-SH；

d)中，Z 是D-Phe-M、Phe-M、D-Trp-M、Trp-M、D-Tyr-M、             Tyr-M、D-Phg-M、Phg-M、D-高-Phe-M、高-Phe-M             或D-Phe-Lys-Gly，           X 是-CO-CH=CH₂、-NH-CH=CH₂或             -NH-(CH₂)_p-SH，

      R¹  是R²，

e)中，R 是环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-M)或D-Phe-Lys-Gly，           X 是-CO-CH=CH₂、-NH-CH=CH₂或            -NH-(CH₂)_p-SH，

f)中，R 是环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-M)或D-Phe-Lys-Gly，           Q 是-CO-(CH₂)₅-NH、-CO-(CH₂)₂-CO-、            -CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-、            -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)₂-CO-(CH₂)₅-NH-、             -(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)₁-CO-(CH₂)₅-NH-或            -(CO-(CH₂)₅-NH)₂-，           X 是-CO-CH=CH₂、-NH-CH=CH₂或              -NH-(CH₂)_p-SH，           R¹ 是R²。

式Ⅰ的化合物以及制备它们的原料是另外通过本来已知的方法制 备的，例如文献中描述的方法(例如描述于标准著作中的方法，例如 Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie〔有机化学方法〕， Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)，即在已知的并且适合所述反应 的反应条件下。在该情况下，还可应用本来已知的、但本文未更详细 提及的改进方法。

如果需要的话，所述原料还可以这种方式现场形成，即不将它们 从反应混合物分离，而是立即进一步反应给出式Ⅰ的化合物。

式Ⅰ的化合物可优选通过式Ⅱ的化合物与式Ⅲ的化合物反应而获 得。

一般说来，式Ⅱ和Ⅲ的化合物是已知的。如果它们不是已知的， 也可通过本来已知的方法制备。

在式Ⅲ的化合物中，自由基L优选是预活化的羧酸，优选是羧酸 卤(carboxylic acid halide)，对称酐或混合酐，或是活性酯。用于在典 型的酰化反应中活化羧基的这类自由基被描述于文献中(例如描述于 标准著作中，例如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie 〔有机化学方法〕，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。

活性酯就便现场形成，例如通过添加HOBt或N-羟基琥珀酰亚 胺而形成。

L优选是H、F、Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。

通常，该反应是在惰性溶剂中，在酸结合剂存在下进行的，所述 酸结合剂优选是有机碱，例如DIPEA、三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或 喹啉或是过量的式Ⅲ羧基成分。

添加碱金属的或碱土金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或者其 它弱酸的碱金属或碱土金属(优选为钾、钠、钙或铯)盐可能是有利 的。

由应用的条件而定，反应时间在数分钟和14天之间，反应温度在 大约-30°和140°之间，-般在-10°和90°之间，尤其在大约0°和大 约70°之间。

适合的惰性溶剂例如是：烃、例如己烷、石油醚、苯、甲苯或二 甲苯；氯代烃，例如三氯乙烯、1，2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或 二氯甲烷；醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇； 醚，例如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃(THF)或二噁烷；乙二醇醚， 例如乙二醇单甲醚或单乙醚(甲基乙二醇或乙基乙二醇)、乙二醇二甲 醚(二甘醇二甲醚)；酮，例如丙酮或丁酮；酰胺，例如乙酰胺、N- 甲基吡咯烷酮、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，例如乙 腈；亚砜，例如二甲亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，例如甲酸或乙 酸；硝基化合物，例如硝基甲烷或硝基苯；酯，例如乙酸乙酯；水或 者所述溶剂的混合物。

式Ⅰ的化合物还可通过式Ⅳ的化合物与式Ⅴ的化合物的反应获得。

通常，式Ⅳ和Ⅴ的化合物是已知的。如果它们不是已知的，也可 通过本来已知的方法制备。

在式Ⅴ的化合物中，自由基L优选是预活化的羧酸，优选是羧酸 卤，对称酐或混合酐，或是活性酯。用于在典型的酰化反应中活化羧 基的这类自由基被描述于文献中(例如描述于标准著作中，例如 Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie〔有机化学方法〕， Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。

L优选是F、Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。

就反应时间、温度和溶剂来说，式IV化合物与式Ⅴ化合物的反应 是在同所述关于式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物的反应相同的条件下进行 的。

式Ⅰ的化合物还可通过式Ⅵ的化合物与式Ⅶ的化合物的反应获 得。

通常，式Ⅵ和Ⅶ的起始化合物是已知的。如果它们不是已知的， 也可通过本来已知的方法制备。

在式Ⅵ的化合物中，自由基L优选是预活化的羧酸，优选是羧酸 卤，对称酐或混合酐，或是活性酯。用于在典型的酰化反应中活化羧 基的这类自由基被描述于文献中(例如描述于标准著作中，例如 Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie〔有机化学方法〕， Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。

L优选是F、Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。

就反应时间、温度和溶剂来说，式Ⅵ化合物与式Ⅶ化合物的反 应是在同所述关于式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物的反应相同的条件下进 行的。

式Ⅰ的化合物还可通过式Ⅷ的化合物与式Ⅸ的化合物的反应获 得。

通常，式Ⅷ和Ⅸ的起始化合物是已知的。如果它们不是已知 的，也可通过本来已知的方法制备。

在式Ⅷ的化合物中，自由基L优选是预活化的羧酸，优选是羧 酸卤，对称酐或混合酐，或是活性酯。用于在典型的酰化反应中活化 羧基的这类自由基被描述于文献中(例如描述于标准著作中，例如 Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie〔有机化学方法〕， Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。

L优选是F、Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。

就反应时间、温度和溶剂来说，式Ⅷ化合物与式Ⅸ化合物的 反应是在同所述关于式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物的反应相同的条件下 进行的。

式Ⅱ的环状化合物可通过线型化合物的环化制备，例如描述于下 列文献中的方法：DE 43 10 643；Houben-Weyl，l．c．，Vol．15／Ⅱ，PP． 1～806(1974)或者S．Zimmer，E．Hoffmann，G．Jung和H．Kessler，李 必希化学记事(Liebig’s Ann．Chem．)1993，497～501。

所述线型肽例如可按R．B．Merrifield描述于应用化学(Angew． Chemie)1985，97，801～812中的方法合成。

开链线型化合物(例如式Ⅲ的化合物)另外可通过氨基酸和肽合 成的常规方法制备，例如还可按Merrifield的固相合成法(例如还可 参见B．F．Gysin和R．B．Merrifield，美国化学学会会志(J．Am．Chem． Soc．)94，3012ff．(1972))制备。

式I的化合物还可通过溶剂解(尤其是水解)或通过氢解从它们的 官能衍生物释放来获得。

用于溶剂解或氢解的优选的起始物质是那些，即代替一个或多个 游离氨基和／或羟基而含相应的被保护氨基和／或羟基，优选是那些，即 代替与N原子键合的H原子而携带氨基保护基，例如那些相应于式Ⅰ， 但代替NH₂基而含NHR′基(其中，R′是氨基保护基，例如BOC或 CBZ)的物质。

另外优选的起始物质是：代替羟基的H原子而携带羟基保护基， 例如那些相应于式Ⅰ，但代替羟苯基而含R″O-苯基(其中，R″是羟 基保护基)的物质。

所述起始物质的分子中还可能存在一些相同的或不同的被保护氨 基和／或羟基。如果存在的保护基彼此不同，在很多情况下它们可被选 择性地除去。

术语“氨基保护基”通常是已知的，它涉及适合保护(用于封闭) 氨基以免化学反应的基，但在分子的其它位置进行了所需的化学反应 之后应容易除去它们。典型的这类基具体是：未取代的或取代的酰基、 芳基、芳代烷氧甲基或芳烷基。由于该保护基在所需的反应(或反应 顺序)后将被除去，所以它们的性质和大小不是关键的；但是，那些 具有1～20个、尤其1～8个C原子的保护基是优选的。本发明中术 语“酰基”应理解为最广的含义。它包括得自脂族、芳代脂族、芳族 或杂环羧酸或磺酸的酰基，尤其还包括烷氧羰基、芳氧羰基以及特别 是芳代烷氧羰基。这类酰基的实例有：烷酰基，例如乙酰、丙酰、丁 酰；芳代烷酰基，例如苯乙酰；芳酰基，例如苯甲酰或甲苯甲酰；芳 氧烷酰基，例如POA；烷氧羰基，例如甲氧羰基、乙氧羰基、2，2， 2-三氯乙氧羰基、BOC、2-碘乙氧羰基；芳代烷氧羰基，例如CBZ (“苄氧羰基”)、4-甲氧基苄氧羰基、FMOC；芳磺酰，例如Mtr、 Pbf或Pmc。优选的氨基保护基是BOC和Mtr，另外还有CBZ、Fmoc、 苄基和乙酰。

术语“羟基保护基”同样通常是已知的，它涉及适合保护羟基以 免化学反应的基，但在分子的其它位置进行了所需的化学反应之后应 容易除去它们。典型的这类基有上述未取代的或取代的芳基、芳烷基 或酰基，另外还有烷基。羟基保护基的性质和大小不是关键的，因为 在所需的化学反应或反应顺序后它们又将被除去；含1～20个、尤其 1～10个C原子的基是优选的。羟基保护基的实例尤其是苄基、对- 硝基苄基、对-甲苯磺酰、叔丁基和乙酰，苄基和叔丁基是特别优选 的。天冬氨酸和谷氨酸中的COOH基优选以它们的叔丁酯形式(例如 Asp(OBut))被保护。

从它们的官能衍生物释放式Ⅰ的化合物是这样进行的：依赖于应用 的保护基，例如应用强酸，就便应用TFA或高氯酸，但也可应用其它 强无机酸(例如盐酸或硫酸)，强有机羧酸(例如三)或者磺酸 (例如苯磺酸或对-甲苯磺酸。其它惰性溶剂的存在是可能的，但并 非总是必须的。合适的惰性溶剂优选是有机溶剂，例如羧酸(诸如乙 酸)，醚(例如四氢呋喃或二噁烷)，酰胺(例如DMF)，卤代烃(例 如二氯甲烷)，另外还有醇(例如甲醇、乙醇或异丙醇)，还可以是水。 此外，上述溶剂的混合物也是合适的。优选应用过量的TFA而不用添 加另外的溶剂，高氯酸呈9∶1比率的乙酸和70％高氯酸的混合物形 式。用于所述分解的反应温度就便在大约0°和大约50°之间，该反应 优选在15°和30°(室温)之间进行。

BOC、OBut、Pbf、Pmc和Mtr这些基可这样除去：例如，在15～ 30°下，优选应用TFA在二氯甲烷中或者应用约3～5N HCl在二噁烷中； FMOC基则是应用二甲胺、二乙胺或于DMF中的约5～50％溶液 在15～30°下除去的。

三苯甲基被用于保护下列氨基酸：组氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺 和半胱氨酸。去保护是这样进行的：由所需的终产品而定，应用TFA／10 ％苯硫酚，就从所有上述氨基酸除去三苯甲基；如果应用TFA／苯甲醚 或TFA／苯硫基甲烷，就只从His、Asn和Gln除去三苯甲基，与它们 相比，Cys侧链上的三苯甲基则保留了。Pbf(五甲基苯并呋喃基)被 用于Arg的保护。去保护例如是应用TFA在二氯甲烷中进行的。

氢解可除去的保护基(例如CBZ或苄基)例如可通过用氢在催化 剂(例如贵金属催化剂，诸如钯，就便在例如碳的载体上)的存在下 处理而除去。该场合中合适的溶剂有上面指出的那些，具体地说，例 如有醇(例如甲醇或乙醇)或者酰胺(例如DMF)。通常，氢解是在 大约0和100°之间的温度下和大约1和200巴之间的压力下进行的， 优选在20～30°和1～10巴下进行的。CBZ基的氢解容易地例如在5～ 10％Pd／C上于甲醇中进行，或者应用甲酸铵(代替氢)在Pd／C上于 甲醇／DMF中在20～30°下进行。

可应用酸将式Ⅰ的碱转化成相应的酸加合盐，例如通过等当量的碱 和酸在惰性溶剂(例如乙醇)中反应，接着蒸发。用于该反应的可行 的酸尤其是给出生理上可接受的盐的那些。所以，可应用无机酸，例 如硫酸、硝酸、氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、磷酸(例如正磷酸)、 氨基磺酸，另外还可应用有机酸，尤其是脂族、脂环族、芳代脂族、 芳族或杂环的一元或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、 新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸，庚二酸、富马酸、马来酸、 乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、 甲磺酸或乙磺酸、乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、 萘磺酸和萘二磺酸、以及月桂基硫酸。与生理上不可接受的酸的盐(例 如盐)可被用于分离和／或纯化式Ⅰ的化合物。

另一方面，式Ⅰ的酸可通过与碱反应而转化成其生理上可接受的金 属盐或铵盐之一。该场合中合适的盐具体是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐 和铵盐，另外，还有取代铵盐，例如二甲铵盐、二乙胺盐或二异丙铵 盐，单乙醇铵盐、二乙醇铵盐或二异丙铵盐，环己铵盐或二环己基铵 盐，二苄基乙二铵盐，此外，例如与精氨酸或赖氨酸的盐。

上下文中，所有温度都以℃表示。在下述实施例中，“常规处理” 表示：如果需要的话，添加水，如果需要的话，根据终产品的组成而 将混合物调节至2～10之间的pH，用乙酸乙酯或二氯甲烷提取，分离 有机相，在硫酸钠上干燥再蒸发，接着通过谱法在硅胶上和／或通过 结晶纯化残余物。在硅胶上的Rf值：洗脱液：乙酸乙酯／甲醇9∶1。 RT=下列体系中在HPLC上的保留时间(分)： [A] 柱：    YMC ODS A RP 5C₁₈，250×4．6mm 洗脱液A：0．1％TFA于水中 洗脱液B：0．1％TFA于乙腈中 流速：   1ml／min 梯度：   0～50％B／30min。 [B] 如[A]； 梯度：5～50％B／30min。 [C] 如[A]； 梯度：10～50％B／30min 质谱(MS)：

EI(电子碰撞电离)M⁺

FAB(快原子轰击)(M+H)⁺

ESI(电雾化电离)(M+H)⁺

DMPP树脂表示4-(2′，4′-二甲氧苯基羟甲基)苯氧基树脂， 它能例如合成侧链保护的肽；TCP树脂是指三苯甲基氯聚苯乙烯树脂。

实施例1

a)将0．2mmol琥珀酐加到0．1mmol环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp (OBut)-D-Phe-Lys(“A”)[可通过H-Asp(OBut)-D-Phe -Lys(Z)-Arg(Pbf)-Gly-OH至环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp (OBut)-D-Phe-Lys(Z)的环化再通过氢解选择性地除去Z基 而得)于5ml DMF的溶液中。

在室温下搅拌该混合物达5小时，在常规处理后得环-(Arg(Pbf) -Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-Su))(“B”)。

b)在60°下，将1当量半胱胺盐酸化物和1当量三苯基甲醇溶于 冰醋酸并在搅拌下用1．1当量BF3醚合物处理。搅拌该混合物达一小 时，再按常规方法处理而得Trt-半胱胺盐酸化物(“C”)。

通过“B”与“C”在添加了EDCI盐酸化物的二氯甲烷中反应， 常规处理后得环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-S-Trt))。

在除去保护基后，得环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))； RT[B]18．3；FAB 763。

类似地，通过“C”与环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-Su)-Gly)的反应和除去保护基，得化合物：环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)-Gly)。

实施例2

a)在0°下，将1．2当量烯丙酰氯加到10mmol 6-氨基己酸和1．8 当量氢氧化钙的水悬浮液中。将混合物过滤，常规处理后得6-丙烯 酰氨基己酸(“D”)。

b)在0°下，用1．2当量EDCI盐酸化物处理10mmol“D”和1当 量N-羟基琥珀酰亚胺于50ml二氯甲烷中的溶液并搅拌1小时。添加 10μl冰醋酸，按常规方法处理该混合物，得HOBT 6-丙烯酰氨基己 酸酯(“E”)。

c)通过“A”与“E”在DMF中反应，经常规处理后得环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))。

除去保护基后，得环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))； RT[A]22．8；ESI 771。

类似地得化合物：环 -(Arg-Asy-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)-Gly)。

实施例3

a)在0°下，将2mmol溶于乙醇／氯仿的“E”加到10mmol 6-氨 基己酸的磷酸钠缓冲水溶液(pH8)中。过滤该混合物，常规处理后 得6-(6-丙烯酰氨基-己酰氨基)己酸(“F”)。

b)通过“A”与“F”在添加了EDCI盐酸化物的DMF中反应， 常规处理后得环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))。

除去保护基后，得环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO -(CH₂)₅-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))；RT[C]23．5； ESI 884。

类似地，得化合物：环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)-Gly)。

实施例4

a)通过在添加了HOBt和TBTu的NMP中将6-丙烯酰氨基己酸 与[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酸-TCP树脂偶合，得{2-[2-(6 -丙烯酰氨基己酰氨基)乙氧基]乙氧基}乙酸-DMPP树脂。

用二氯甲烷／乙酸／三氟乙醇(6∶3∶1)洗涤该树脂，得{2-[2-(6 -丙烯酰氨基己酰氨基)乙氧基]乙氧基}乙酸(“G”)。

b)通过“G”与“A”在添加了EDCl×HCl的DMF中反应，得化 合物：环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))。

除去保护基后，得环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))； RT[C]22．5；ESI 916。

类似地，得化合物：环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)-Gly)。

类似地，通过{2-[2-(2-{2-[2-(6-丙烯酰氨基己酰氨基) 乙氧基]乙氧基}乙酰氨基)乙氧基]乙氧基}乙酸 与“A”的反应，得化合物：环 -(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ε-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH)₂-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))。除去保护基后，得环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH)₂-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))； RT[C]22．75； ESI 1061。

类似地，得环 -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-(CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH)₂-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)-Gly)。

实施例5

与实施例1类似，通过下列(“G”)-环肽

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Val-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(O But)-D-Tyr-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-D-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Dab)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-D-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-D-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Trp-D-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Tyr-D-Lys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-D-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-Dab)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Trp-D-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Tyr-D-Cys)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-D-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-D-Om)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-Dab)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Dab)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-Dap)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Dap)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-B-Phe-Dap)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-D-Dap)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Dap)

环-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-D-Dap) 与

a)琥珀酐，b)“C”的反应，以及C)除去保护基后，得下列化 合物：

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab(N^γ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(N^γ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Om(N^δ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab(N^γ-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab(N^γ-C O-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-phe-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(N^β-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

与实施例2类似，通过“G”环肽 与

a)“E”反应，以及b)除去保护基后，得下列化合物：

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab(N^γ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))

环-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(N^γ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Om(N^δ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab(N^γ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab(N^γ-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(N^β-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))。 细胞粘着试验的实例

研究了小鼠MC3T3 H1成骨细胞培养物在体外对涂覆了RGD肽的 材料表面的粘附。在该过程中，接种了50，000个细胞／cm²，在37°／95％ 大气湿度下无血清的培养基中培养一小时后，测定粘着的细胞比例。

细胞粘着率[％]=粘着的细胞／接种的细胞×100

肽：细胞粘着率[％]

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))： 11．3；

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-(CH₂)₅-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))： 92．4；

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂-O- CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO- CH=CH₂))：109．0；

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH))： 86．2；

环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ε-CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH)₂-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂))： 110．5。