利用DNA烷化剂和ATR抑制剂的组合疗法

本发明涉及用于癌症的组合疗法，其利用ATR抑制剂以及与抗体分子附着的DNA烷化剂，从而形成抗体-药物缀合物。

尽管学术界和工业界正在寻求开发越来越高级的疗法来对抗癌症，但全球癌症负担仍然很高，其中每年1-2千万人被诊断有癌症，以及每年高达1千万例癌症有关的死亡。

倍癌霉素是一类高度有效的抗肿瘤药物候选物。倍癌霉素的合成类似物包括阿多来新、比折来新和卡折来新。作为环丙基吡咯并吲哚家族的成员，这些研究物已进展到用于癌症的临床试验。待在体内评估的倍癌霉素家族的第一个成员是CC-1065，并且尽管显示中等的抗肿瘤活性，但肝毒性限制了其有效性。在这个时间点，尚未报告关于倍癌霉素家族的任何成员的临床开发。

在改善基于倍癌霉素的疗法的指数的努力中，已开发了几种ADC，包括BMS-936561 (抗CD70)和SYD985 (抗HER2)。BMS-936561首先在晚期透明细胞癌和B细胞非霍奇金淋巴瘤患者中进行分析；然而，尽管在高达8 mpk的剂量下是耐受的，临床试验仍在I期过程中停止。最近以来，Synthon生成了SYD985 (曲妥珠单抗倍癌霉素)，其利用由可切割的接头与曲妥珠单抗缀合的称为开环-DUBA的倍癌霉素前药，作为ado-恩美曲妥珠单抗的替代物。SYD985目前处于III期临床研究中。

尽管进行了几次尝试，但基于倍癌霉素家族成员的药物尚未批准用于人，既没有基于像这样的倍癌霉素的药物，也没有基于荷有倍癌霉素的ADC的药物。

就有效性和安全性两者而言，本领域仍然存在对于改善的癌症疗法的高度未满足的需求。建立关于ADC的组合疗法可能提出用于增加功效、减小副作用和减慢抗性发展的策略，尤其是因为单一药剂疗法很少是治愈性的。

抑制DNA损伤修复的几种ATRi (共济失调毛细血管扩张症和RAD3相关蛋白抑制剂)目前处于临床开发中。至今这些无一获得批准。

在导致本发明的研究工作过程中，发明人惊讶地发现荷有倍癌霉素的ADC与ATR抑制剂的组合不仅显示了组合功效，而且还显示了高度协同效应。

本发明人假设，DNA损伤应答抑制剂(DDRi)的组合可能提出对基于荷有倍癌霉素的ADC的改善癌症疗法的另外策略。选择了几种不同的DDRi，并且在体外模型和体内模型中进行测试。HCC-1954和MDA-MB-468癌细胞用选择的DDRi以及单独或与抗体附着的倍癌霉素的组合进行，并且将该组合的抗增殖效应与单独的单一药剂的效应进行比较。

将“裸露”倍癌霉素以及荷有倍癌霉素的ADC与本领域已知的几种DDRi组合。此类DDRi的作用模式是多种多样的，例如减少Rad 51表达、CHK1抑制、WEE1激酶抑制、O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶抑制、DN-PK抑制、Parp抑制、MTH1抑制、ATR抑制、CHK1抑制、NEK1抑制、TOP2抑制、Her2抑制及其它。

导致本发明的实验令人惊讶地显示了，激酶ATR的专一抑制剂及其主要下游效应物检查点激酶1 (CHK1) (其在对复制应激的应答中起中心作用)的抑制剂，以高度协同的方式增强了荷有倍癌霉素的ADC的细胞毒性效应。

几种基于倍癌霉素的ADC显示了在体外以及体内与不同的ATR抑制剂组合的强协同效应。荷有HER2表达NCI-N87肿瘤的rag2小鼠，用靶向HER2的倍癌霉素-ADC和两种不同的ATR抑制剂进行。ATR抑制剂单一显示了非常轻微的肿瘤生长抑制，而用浓度低于最大有效剂量的ADC的导致部分肿瘤应答。然而，组合在良好耐受的同时，导致非常强的抗肿瘤效应。这项研究证实，相对于用作为单一药剂的药物，使用抗-HER2-倍癌霉素 ADC将倍癌霉素靶向递送至肿瘤与ATR抑制剂的全身应用组合的优越性。

因为像这样的倍癌霉素由于高毒性似乎不是用于人癌症疗法的有希望的候选物，因此荷有倍癌霉素的ADC与ATRi的组合是高度有前途的。这可能支持在临床场景中评估此类组合的努力。

根据本发明待的癌症的具体类型包括但不限于卵巢癌、腹膜癌、输卵管癌、肺癌、头颈癌、结肠癌、神经内分泌系统癌、尿路上皮癌、前列腺癌、食道癌、膀胱癌、胃癌、间充质癌、乳腺癌、胰腺癌及其组织学亚型。在一些实施方案中，癌症选自小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、结肠直肠癌(CRC)、原发性神经内分泌瘤和肉瘤，或者选自卵巢癌、原发性腹膜癌和输卵管癌的PARPi抗性复发性癌症。

在一些方面，ATR抑制剂由下述式之一表示：

化合物1

化合物2

化合物3

或其药学上可接受的盐。

在进一步的实施方案中，将荷有DNA烷化剂的ADC和ATR抑制剂与放射疗法(RT)、进一步的化学疗法(CT)或化学放射疗法(CRT)组合使用。

在一个进一步方面，本公开内容提供了用于宣传与ATR抑制剂组合的荷有DNA烷化剂的ADC的方法，其包括向目标受众推广该组合用于患有癌症的受试者的用途。

本文还提供的是药物组合物，其包含荷有DNA烷化剂的ADC、ATR抑制剂和至少一种药学上可接受的赋形剂或佐剂。

在一个进一步方面，本发明涉及包括荷有DNA烷化剂的ADC和包装插页的药盒，所述包装插页包含关于使用与ATR抑制剂组合的荷有DNA烷化剂的ADC以在受试者中癌症或延迟癌症进展的说明书。还提供的是包括ATR抑制剂和包装插页的药盒，所述包装插页包含关于使用与荷有DNA烷化剂的ADC组合的ATR抑制剂以在受试者中癌症或延迟癌症进展的说明书。

先前段落的药盒可以进一步需要关于放射疗法、另外的化学疗法或放射化学疗法的说明书。

图1显示了A)抗体的LC通过基序(G4S)3LPETGS在C末端上延长。B)抗体的LC通过基序LPETGS在C末端上延长。C)在一条链上携带scFv，且在另一条链上携带Fab的SEED抗体。Fab通过LPETGS序列在C末端上延长。D)携带总共四个SrtA位点的抗体。(G4S)3LPETGS SrtA识别基序在C末端上融合到LC，且LPETGS序列在C末端上融合到HC。E)天然mAb。

图2显示了用于确定协同作用评分的剂量矩阵测定法的实验设置方案。从左到右浓度渐增的DUBA的系列稀释物、以及从上到下的DDRi的系列稀释物单独或组合加入细胞中。细胞强烈地(深)或较弱地(浅)响应。必须考虑以下三种情况：1)可加性：化合物并不相互作用，并且所得到的细胞应答不超过单一药剂的应答。2)拮抗作用：组合的效应弱于单一药剂的效应。3)对组合的应答强于单一药剂的效应。

图3显示了协同作用筛选的结果。倍癌霉素变体DUBA与DDRi组合用于HCC-1954和MDA-MB-468细胞，并且组合效应报告为协同作用评分。定义了±1的截断协同作用评分。在此范围内，组合的S被假设为可加的，S>1指示协同作用，S<1指示拮抗作用。描述了来自独立实验的各个数据点，以及作为条的生物学重复的平均值。

图4显示了DDM和DUBA对用ATR或非靶向siRNA的细胞的效力。各个数据点和IC50值的平均值作为黑条展示。

图6：以ADC形式研究的倍癌霉素变体DUBA (10)、DDM (38)和DSA (13)的化学结构。药物以开环形式展示。

图7：携带不同的接头-药物的αHER2-倍癌霉素ADC αHER2-1、αHER2-2和αHER2-3、Kadcyla和aHEL-1对呈现HER2的细胞系的选择性指数。通过将各个分子对于HER2阴性细胞系MDA-MB-468的IC50值除以分子对于所指示的HER2阳性细胞系的IC50值，来计算选择性指数。条表示关于每一个ADC的选择性指数的平均值。

图8：抗EGFR αEGFR-1和αEGFR-7 ADC对于EGFR过表达细胞系的选择性指数。通过将各个分子对于EGFR阴性细胞系MCF7的IC50值除以对于所指示的EGFR阳性细胞系的IC50值，来计算选择性。关于不同EGFR阳性细胞系的选择性通过灰阴影指示。条表示用某种ADC的细胞系的选择性指数的平均值。

图9：与AZD6738组合的基于倍癌霉素的ADC和小分子对HCC-1954的协同作用评分。展示了各个数据点以及由条表示的各个点的平均值。

图10：荷有倍癌霉素的ADC αHER2-2和αHER2-6与不同ATRi的组合，对NCI-N87或MDA-MB-453细胞的协同作用评分。作为对照，包括小分子DUBA和吉西他滨以及作为阴性对照的Kadcyla。条代表独立生物学重复的平均值。

图11：对HT29细胞的协同作用评分与细胞CHK1磷酸化抑制之间的相关性。ATRi就CHK1磷酸化抑制而言越有效，协同作用评分越高。对于用于HCC-1954细胞的小分子药物DUBA与几种ATRi的组合，显示了这种相关性。关于用于HCC-1954的与ADC αHER2-2组合的相同ATRi再现了相关性。将ATRi的子集与αHER2-2和另一种基于DUBA的ADC αHER2-6组合用于MDA-MB-453和NCI-N87细胞。

图12：西妥昔单抗-倍癌霉素ADC与ATRi AZD6738的组合，对于EGFR阳性细胞系和EGFR阴性细胞系MCF7的协同作用评分。作为对照，将西妥昔单抗-MMAE与ATRi AZD6738组合。展示了各个数据点以及实验的平均值。

图13：作为3步方法，用于确定剂量降低指数的MNED曲线位移测定法。1) ADC αHER2-1的细胞毒性在细胞活力实验中进行确认。2)滴定ATRi 1 的抑制剂效力以鉴定MNED。3)通过将ADC αHER2-1系列稀释来执行MNED曲线位移测定法。将αHER2-1的系列稀释物单独或与ATRi 1一起以先前确定的MNED加入HCC-1954细胞中。这导致ADC朝向较低效力的左移。将作为质量对照的抑制剂以MNED加入细胞中，证实了对细胞活力没有作用。

图14：αHER2-1与AZD6738或VE-822的组合，对HER2阳性细胞系和HER2阴性细胞系MDA-MB-468的实验对象组的剂量降低指数。ATRi在组合组中以其各个MNED (表11表)给予。

图15：ADC αHER2-1与ATRi AZD6738、VE-822、ATRi 1和BAY73的组合用于HCC-1954细胞。ATRi在组合组中以其各个MNED给予，如表11中所概括的。A)单一药剂和组合组的IC50值作为各个数据点进行描绘。黑条指示了关于每组的IC50值的平均值。B)绘制了与ATRi组合的αHER2-1的DRI。DRI根据A)中所示的IC50值进行计算。

图16：当与恒定浓度的ATRi AZD6738和VE-822组合时，αHER2-1、αHER2-2和αHER2-3与Kadcyla的DRI比较。DRI使用表12和表13中的IC50值进行计算。将ATRi以MNED加入ADC中(表11表)。

图17：与ATRi组合的荷有倍癌霉素的ADC的DRI。A) ATRi与荷有倍癌霉素的ADC αHER2-1、αHER2-2和αHER2-3以及Kadcyla的组合的DRI是缩减的，与细胞系无关。展示了各个数据点，并且通过黑条指示了平均值。这些数据已经呈现。B)与荷有倍癌霉素的ADC组合的ATRi的DRI。结果是缩减的，与使用哪个ADC变量无关。展示了各个数据点，并且通过黑条指示了平均值。

图18：强化效应的剂量依赖性。用ADC αHER2-1和渐增剂量的VE-822 (左)或AZD6738 (右)MDA-MB-468细胞。展示了各个数据点，并且通过黑条表示了平均值。

图19：在分别的MNED下，αHER2-1单一疗法以及αHER2-1与AZD6378或VE-822组合的组合疗法的选择性指数比较。对于仅用ADC的细胞，根据等式2计算选择性指数。

图20：αGP-1作为单一药剂或与恒定剂量的ATRi AZD6738和VE-822组合，对GP阳性细胞MDA-MB-468和WISH的效力。抑制剂以MNED给予细胞。展示了生物学重复实验的各个IC50值。

图21：与ATR抑制剂AZD6738和ATRi 1组合的αHER2-6，在荷有NCI-N87异种移植物的H2d Rag2小鼠中的功效。A)将抗肿瘤活性评价为与媒介物以及单一药剂αHER2-6、AZD6738和ATRi 1相比，肿瘤体积的变化。因此，在第0天开始，小鼠(N=10/组)用静脉内的1.0 mg kg-1 αHER2-6、经口的50 mg kg-1 AZD6738或ATRi 1进行，每天一次，共两周，或者用以与单一药剂相同的剂量和时间表的αHER2-6加上AZD6738或αHER2-6加上ATRi 1的组合进行，如通过箭头指示的。与第0天相比，较高的虚线指示了73%的肿瘤体积增加，而较低的虚线指示了66%的肿瘤体积减少。虚线之间的范围指示了肿瘤停滞，并且低于较低的线指示了肿瘤消退。B)在个别动物的水平上，组合组αHER2-6加上AZD6738或αHER2-6加上ATRi 1的肿瘤体积。用αHER2-6加上AZD6738的导致1/10的治愈，而用αHER2-6加上ATRi1的导致2/10的治愈。

图22：在荷有NCI-N87-异种移植物的H2d Rag2小鼠中，与ATR抑制剂AZD6738和ATRi 1组合的αHER2-6的耐受性。体重作为组合以及相应的单一药剂αHER2-6、AZD6738和ATRi 1的耐受性量度进行评价。

图23：以ADC形式应用的倍癌霉素衍生物的化学结构。描绘了DC1 (19)、DC4 (20)、DC44 (21)、DU-257 (22)、小沟结合剂(23)、开环-DUBA (10)、DSA (13)、CBI-TMI (24)和该分子的衍生物(26)的结构。虚线框指示了接头的附着点。

定义

除非上下文另外明确指出，否则“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数指示物。因此，例如，提及抗体指一种或多种抗体或至少一种抗体。因此，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个/一种或多种”和“至少一个/种”在本文中可互换使用。

当用于修饰数字定义的参数(例如，本文所述的化合物的剂量或用组合疗法的时间的长度)时，“约”意指该参数可以由低于或高于该参数的所述数值多达10%而变。例如，约10 mg/kg的剂量可以在9 mg/kg和11 mg/kg之间变化。

抗体-药物缀合物或ADC是本领域众所周知的。存在用于将药物与抗体连接的几种技术。这些例如在Beck等人，Nature reviews，第16卷，2017年5月中进行综述。

抗体-药物缀合物也称为ADC或免疫缀合物，是靶向的化学分子，通过将有效的细胞毒物靶向表达抗原的肿瘤细胞，来组合抗体和细胞毒物两者的特性，从而增强其抗肿瘤活性。对于给定的靶抗原，成功的抗体-药物缀合物开发取决于抗体选择、接头稳定性、细胞毒物效力以及接头-药物与抗体缀合模式的优化。更特别地，选择性抗体-药物缀合物的特征在于下述中的至少一种或多种：

(i)抗体-药物缀合物的形成方法，其中所述抗体保留对靶抗原足够的特异性，并且其中药物功效得到维持；(ii)抗体-药物缀合物的稳定性足以限制血液中的药物释放以及对非靶向细胞的伴随损伤；(iii)足够的细胞膜转运效率(胞吞作用)，以达到性细胞内抗体-药物缀合物的浓度；(iv)来自抗体-药物缀合物的足够的细胞内药物释放，足以达到药物浓度；以及(v)以纳摩尔或亚纳摩尔量的药物细胞毒性。

抗体-药物缀合物允许将药物部分靶向递送至肿瘤，并且在其中细胞内累积的一些实施方案中，其中未缀合药物的全身施用可能导致对正常细胞的无法接受的毒性水平(Polakis P. (2005) Current Opinion in Pharmacology 5:382-387)。

抗体-药物缀合物是靶向的化学分子，其通过将有效的细胞毒物靶向表达抗原的肿瘤细胞，来组合抗体和细胞毒物两者的性质(Teicher，B.A. (2009)Current Cancer Drug Targets 9:982-1004)，从而通过使功效达到最大且使脱靶活性降到最低来增强指数(Carter，P.J.和Senter P.D. (2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169；Chari，RV. (2008) Acc. Chem. Res. 41:98-107。

在一些实施方案中，本发明的ADC针对选自下述蛋白质(1)-(87)的肿瘤相关抗原或细胞表面受体。

(1) BMPR1B (骨形态发生蛋白受体1B型，Genbank登录号NM_0012033)

(2) E16 (LAT1、SLC7A5，Genbank登录号NM_003486)

(3) STEAP1 (前列腺的六次跨膜上皮抗原，Genbank登录号NM_Ol2449)

(4) 0772P (CA125、MUC16，Genbank登录号AF361486)

(5) MPF (MPF、MSLN、SMR、巨核细胞增效因子、间皮素，Genbank登录号NM_005823)

(6) Napi2b (Napi3b，NAPI-3B，NPTIIb，SLC34A2，溶质载体家族34 (磷酸钠)，成员2，II型钠依赖性磷酸转运蛋白3b，Genbank登录号NM_ 006424)

(7) Serna Sb (FLJ10372、KIAA144S、Mm.4201S、SEMASB、SEMAG、Semaphorin SbHlog、sema结构域、七血小板反应蛋白重复(I型和I型样)、跨膜5结构域(TM)和短细胞质结构域、(semaphorin) SB，Genbank登录号AB040878)

(8) PSCA hlg (27000SOC12Rik、CS30008016Rik、RIKEN cDNA 27000SOC12、RIKENcDNA 27000SOC 12基因，Genbank登录号AY3S8628)；

(9) ETBR (内皮素B型受体，Genbank登录号AY27S463)；

(10) MSG783 (RNF124、假定蛋白FLJ20315，Genbank登录号NM_Ol7763)；

(11) STEAP2 (HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相关基因1、前列腺癌相关蛋白1、前列腺的六次跨膜上皮细胞抗原2、六次跨膜前列腺蛋白，Genbank登录号AF455138)

(12) TrpM4 (BR22450，FLJ20041，TRPM4，TRPM4B，瞬时受体电位阳离子通道，亚家族M，成员4，Genbank登录号NM_ 017636)

(13) CRIPTO (CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤衍生的生长因子，Genbank登录号NP 003203或NM_003212)

(14) CD21 (CR2(补体受体2)或C3DR (C3d/EB病毒受体)或Hs.73792 Genbank登录号M26004)

(15) CD79b (CD79B、CD79~、IGb (免疫球蛋白相关的β)、B29，Genbank登录号NM_000626或11038674)

(16) FcRH2 (IFGP4、IRTA4、SPAP1A (含SH2结构域的磷酸酶锚定蛋白la)、SPAP1B、SPAP1C，Genbank登录号NM_030764、AY358130)

(17) HER2 (ErbB2，Genbank登录号Ml 1730)

(18) NCA (CEACAM6，Genbank登记号Ml8728)；

(19) MDP (DPEP1，Genbank登录号BC017023)

(20) IL20Ra (IL20Ra、ZCYTOR7，Genbank登录号AF184971)；

(21) Brevican (BCAN、BEHAB，Genbank登录号AF229053)

(22) EphB2R (DRT、ERK、Hek5、EPHT3、Tyro5，Genbank登录号NM_ 004442)

(23) ASLG659 (B7h，Genbank登录号AX092328)

(24) PSCA (前列腺干细胞抗原前体，Genbank登录号AJ297436)

(25) GEDA (Genbank登录号AY260763)；

(26) BAFF-R (B细胞活化因子受体、BLyS受体3、BR3，Genbank登录号AF116456)；BAFF受体/pid=NP 443177.1 –

(27) CD22 (B细胞受体CD22-B同种型、BL-CAM、Lyb-8、Lyb8、SIGLEC-2、FLJ22814，Genbank登录号AK026467)；

(28) CD79a (CD79A，CD79a，免疫球蛋白相关的α，B细胞特异性蛋白，其与lg β(CD79B)共价相互作用并与lgM分子在表面上形成复合物，转导涉及B细胞分化的信号)，Genbank登录号NP_001774.10

(29) CXCR5 (伯基特淋巴瘤受体1，G蛋白偶联受体，其由CXCL13趋化因子激活，在淋巴细胞迁移和体液防御中起作用，在HIV-2感染以及可能的AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病发展中起作用)；372 aa，pl: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P]基因染体：l lq23.3，Genbank登录号NP_001707.l)

(30) HLA-DOB (II类MHC分子的β亚基(Ia抗原)，其结合肽并将其呈递给CD4+ T淋巴细胞；273 aa，pl: 6.56 MW: 30820 TM: 1 [P]基因染体：6p21.3，Genbank登录号NP002111.1)

(31) P2X5 (Genbank登录号NP 002552.2)

(32) CD72 (B细胞分化抗原CD72、Lyb-2) Genbank登录号NP 001773.1)

(33) LY64 (淋巴细胞抗原64 (RP105)，富含亮氨酸重复(LRR)家族的I型膜蛋白，调节B细胞活化和细胞凋亡，功能丧失与系统性红斑狼疮患者中增加的疾病活动性相关) ；661 aa，Genbank登记号NP 005573.1)

(34) FcRHl (Genbank登录号NP_ 443170.1)

(35) FCRH5 Genbank登录号人：AF343662、AF343663、AF343664、AF343665、AF369794、AF397453、AK.090423、AK.090475、AL834187、AY358085；小鼠：AK.089756、AY158090、AY506558；NP 112571.1

(36) TENB2 (TMEFF2、tomoregulin、TPEF、HPPl、TR，推定的跨膜蛋白聚糖，与生长因子的EGF/heregulin家族和卵泡抑素有关)，NCBI登录：AAD55776、AAF91397、AAG49451、NCBI RefSeq: NP 057276；NCBI基因: 23671；OMIM: 605734；SwissProt Q9UIK5；Genbank登录号AFl 79274；AY358907、CAF85723、CQ782436

(37) PMELl (银同源物；SIL V；Dl2S53E；PMELl 7；SI；SIL)；ME20；gp100)BC001414；BT007202；M32295；M77348；NM_006928；

(38) TMEFFl；H7365；C9orf2；C90RF2；Ul9878；X83961；NM_080655；NM_003692；

(39) GDNF-Ral (GDNF家族受体α1；GFRAl；GDNFR；GDNFRA；RETLl；TRNRl；RETlL；GDNFR-αl；GFR-ALPHA-1)；U95847；BC014962；NM_l45793，NM_ 005264；

(40) Ly6E (淋巴细胞抗原6复合物，基因座E，Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)；15 NP002337.1；NM_002346.2；

(41) TMEM46 (shisa同源物2 (非洲爪蟾(Xenopus laevis))；SHISA2)；NP001007539.1；NM_001007538。

(42) Ly6G6D (淋巴细胞抗原6复合物，基因座G6D；Ly6-D，MEGTl)；NP 067079.2；NM_021246.2；

(43) LGR5 NP 003658.1；NM_003667.2；

(44) RET (ret原癌基因；MEN2A；HSCRl；MEN2B；MTCl；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET5 l；RET-ELEl )；NP_ 066124.1；NM_ 020975 .4；

(45) LY6K (淋巴细胞抗原6复合物，基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；NP_059997.3；NM_Ol7527.3；

(46) GPR19 (G蛋白偶联受体19；Mm.4787)；NP 006134.1；NM_006143.2；

(47) GPR54 (KISS1受体；KISS1R；GPR54；HOT7Tl 75；AXOR12)；NP 115940.2；10NM_032551.4；

(48) ASPHDl (含天冬氨酸β-羟化酶结构域1；LOC253982)；NP 859069.2；NM_l81718.3；

(49)酪氨酸酶(TYR；OCAIA；OCAlA；酪氨酸酶；SHEP3)；NP 000363.1；NM_000372.4；

(50) TMEMl 18 (环指蛋白，跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；NP Ishikawa，N.等人(2007) Cancer Res. 67 (24):11601-11611；de Nooij-van Dalen，A.G等人；NM_001109903.1；

(51) GPRl 72A (G蛋白偶联受体172A；GPCR41；FLJ11856；Dl5Ertd747e)；NP078807.1；NM_024531.3

(52) CD33

(53) CLL-1 (CLEC12A、MICL和DCAL2)，

(54) CEACAM-5

(55) MUC-1

(56) EGFR

(57) c-Met

(58) avb6

(59) ROR1

(60)叶酸R1

(61) HER2

(62) 5T4

(63) Trop-2

(64) gpNMB

(65) CanAg

(66)钙粘蛋白-3

(67)钙粘蛋白-6

(68) CD44v6

(69) CD138

(70) CD174

(71) EpCAM

(72) cKit

(73) EphA2

(74) EphA4

(75) FGFR2

(76) FGFR3

(77) GCC

(78) IGFR1

(79)间皮素

(80) NaPi2B

(81) PSMA

(82) TIM1

(83) PTK7

(84) TF (组织因子)

(85) IL13RA2

(86) GRP78

(87) γGT

在一个实施方案中，本发明的ADC可以携带倍癌霉素作为DNA烷化剂。可用于本发明中的倍癌霉素的实例在表4和5以及图23中进行阐述。

已用于ADC中的DNA烷化剂的进一步类别是吲哚啉苯并二氮杂䓬，例如Miller等人，Mol Cancer Ther，August 1，2016 (15) (8) 1870-1878。

对于BMS-936561和SYD985，描述了可用于本发明中的进一步倍癌霉素。

SYD985中的倍癌霉素是开环-DUBA (参见图6，(10))。

在一些实施方案中，可用于本发明中的非倍癌霉素DNA-烷化剂具有下式(x)：

(x)

或其药学上可接受的盐。N和C之间的双线=表示单键或双键，条件是当它是双键时，X不存在且Y是氢；并且当它是单键时，X是氢且Y是-S03H。术语"A"是如下定义的抗体或抗原结合片段。

药物“施用(Administering)”于患者或药物对患者的“施用(administration)”(以及该短语的语法等价形式)指直接施用，其可以是通过医疗专业人员对患者的施用或可以是自施用，和/或间接施用，其可以是开出药物处方的行为。例如，指示患者自施用药物或向患者提供药物处方的医生将药物施用于患者。

“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子可变区中的至少一个抗原识别位点，与靶如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文使用的，术语“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，还包括(除非另有说明)与完整抗体竞争特异性结合的其任何抗原结合片段或抗体片段、包含抗原结合部分的融合蛋白(例如抗体-药物缀合物)、包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它修饰的构型、具有多表位特异性的抗体组合物和多特异性抗体(例如双特异性抗体)。

抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”包含完整抗体的一部分，其仍能够具有完整抗体的抗原结合和/或可变区。抗原结合片段包括例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd和Fv片段、结构域抗体(dAb，例如鲨鱼和骆驼科抗体)、包括互补决定区(CDR)的片段、单链可变片段抗体(scFv)、单链抗体分子、由抗体片段形成的多特异性抗体、大抗体(maxibody)、微型抗体、细胞内抗体、双抗体、三抗体、四抗体、v-NAR和双scFv、线性抗体(参见例如，美国专利5,641,870，实施例2；Zapata等人(1995) Protein Eng. 8HO: 1057)、以及含有免疫球蛋白的至少一部分的多肽，所述部分足以对多肽赋予特异性的抗原结合。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个等同的称为"Fab"片段的抗原结合片段和残留的"Fc"片段，该名称反映了容易结晶的能力。Fab片段由整条L链连同H链的可变区结构域(VH)、以及一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段就抗原结合而言是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生单个大的F(ab')2片段，其大致对应于具有不同抗原结合活性且仍能够交联抗原的两个二硫键连接的Fab片段。Fab′片段与Fab片段的不同之处在于：在CH1结构域的羧基末端处具有少数另外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab′-SH是本文关于Fab′的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基荷有游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初作为在其之间具有铰链半胱氨酸的成对的Fab'片段产生。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。

“ATR抑制剂”或“ATRi”指介导DNA损伤应答的ATR激酶途径的抑制剂。优选地，ATR抑制剂是抑制ATR激酶的酶促活性的分子。可用于本发明的方法、药物和用途中的ATR抑制剂的实例包括化合物1至5中的任一种或其药学上可接受的盐。进一步的ATR抑制剂在以下中描述：WO 2013/049726、WO 2013/152298、WO 2013/049859、US-2013-0089625、US-2013-0115312、US-2014-0107093、US-2013-0096139、WO 2011/143426、US-2013-0095193、WO 2014/055756、WO 2011/143419、WO 2011/143422、WO 2011/143425、US-2013-0115311、US-2013-0115312、US-2013-0115313、US-2013-0115314、WO 2011/163527、WO 2012/178123、WO 2012/178124、WO 2012/178125、US-2014-0113005、WO2013/049726、WO 2013/071085、WO 2010/071837、WO 2014/089379、WO 2014/143242、WO 2014/143241、WO 2015/084384、WO 2014/143240、WO 2015/187451、WO 2015/085132、WO 2014/062604、WO 2014/143240、WO 2013/071094、WO 2013/071093、WO 2013/071090、WO 2013/071088、WO 2013/049859、WO 2013/049719、WO 2013/049720、WO 2013/049722、WO 2012/138,938、WO 2011/163527、WO 2011/143,423、WO 2011/143,426、WO 2011/143,399和/或WO 2010/054398，所述所有专利整体引入本文作为参考。

“生物标记物”一般指的是指示疾病状态的生物分子及其定量和定性测量。“预后性生物标记物”与疾病结果相关联，不依赖于疗法。例如，肿瘤缺氧是负面预后性标记物 –肿瘤缺氧越高，疾病结果为负面的可能性越高。“预测性生物标记物”指示患者是否可能积极响应特定疗法。例如，HER2概况分析通常用于乳腺癌患者中，以确定这些患者是否可能响应赫赛汀(曲妥珠单抗，Genentech)。“应答性生物标记物”提供了对疗法的应答的测量，并且因此提供了疗法是否有效的指示。例如，前列腺特异性抗原的水平减少一般指示用于前列腺癌患者的抗癌疗法是有效的。当将标记物用作鉴定或选择患者用于本文所述的基础时，可以在之前和/或过程中测量标记物，并且获得的值由临床医生用于评价下述中的任一种：(a)个体最初接受的大概或可能适合性；(b)个体最初接受的大概或可能不适合性；(c)对的应答性；(d)个体继续接受的大概或可能适合性；(e)个体继续接受的大概或可能不适合性；(f)调整剂量；(g)预测临床益处的可能性；或(h)毒性。如本领域技术人员将充分理解的，在临床场景中生物标记物的测量是这种参数用作用于启动、继续、调整和/或停止本文所述的施用的基础的明确指示。

“癌症”、“癌性”或“恶性”指的是或描述哺乳动物中通常以不受控制的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、白血病、母细胞瘤和肉瘤。此类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌、骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样白血病、多发性骨髓瘤、胃肠(道)癌、肾癌、卵巢癌、肝癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑素瘤、软骨肉瘤、成神经细胞瘤、胰腺癌、多形性成胶质细胞瘤、宫颈癌、脑癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、尿路上皮癌和头颈癌。

“化学疗法”是涉及化学剂的疗法，所述化学剂是可用于癌症中的化合物。化学疗法剂的实例包括烷化剂，例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙撑亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；乙酸原化合物(acetogenin) (尤其是布拉他辛和布拉他辛酮)；δ-9-四氢酚(屈酚)；β-拉帕酮；拉帕醇；秋水仙碱；白桦脂酸；苔藓抑素；培美曲塞；callystatin；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；TLK- 286；CDP323，经口α-4整联蛋白抑制剂；sarcodictyin；海绵抑素；氮芥，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氯乙胺、盐酸氧化氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺和尿嘧啶芥末；亚，例如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀和雷莫斯汀；达内霉素，包括达内霉素A；埃波霉素；以及新制癌菌素生团和相关的蛋白烯二炔抗生素生团、阿克拉霉素、放线菌素D、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、霉素(chromomycini)、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星、多柔比星HCl脂质体注射剂和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物，例如氨甲蝶呤、吉西他滨、替加氟、卡培他滨、埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟鸟苷、依诺他滨、氟尿苷和伊马替尼(2-苯基氨基嘧啶衍生物)、以及其它c-Kit抑制剂；抗肾上腺素，例如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；乙酰葡醛酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登木素生物碱，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝氨丙吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷("Ara-C")；噻替哌；类紫杉烷，例如紫杉醇、白蛋白改造的紫杉醇纳米制剂和多西他赛；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物，例如顺铂和卡铂；长春碱；铂；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；奥沙利铂；甲酰四氢叶酸(leucovovin)；长春瑞滨；诺肖林；依达曲沙；道诺霉素；氨甲蝶呤；伊班膦酸盐；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸，例如视黄酸，以及上述任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合，例如CHOP，关于环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙的组合疗法的缩写，或者FOLFOX，关于用与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的奥沙利铂的方案的缩写。

“临床结果”、“临床参数”、“临床应答”或“临床终点”指与患者对疗法的反应有关的任何临床观察或测量。临床结果的非限制性实例包括肿瘤应答(TR)、总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)、无疾病生存期、肿瘤复发时间(TTR)、肿瘤进展时间(TTP)、相对风险(RR)、毒性或副作用。

“完全应答”或“完全缓解”指响应的所有癌症体征消失。这并不一定意味着癌症已治愈。

如本文使用的，“包含”预期意指组合物和方法包括所列举的要素，但不排除其它要素。当用于限定组合物和方法时，“基本上由……组成”应该意指排除对组合物或方法具有任何重要意义的其它要素。“由……组成”应该意指对于请求保护的组合物和基本方法步骤，排除不仅仅是微量要素的其它成分。由这些过渡术语各自限定的实施方案都在本发明的范围内。相应地，预期方法和组合物可以包括另外的步骤和组分(包含)，或者可替代地包括不重要的步骤和组合物(基本上由其组成)，或者可替代地仅预期所述的方法步骤或组合物(由其组成)。

“剂量(Dose)”和“剂量(dosage)”指用于施用的活性剂或剂的具体量。此类量包括在“剂型”中，其指适合作为用于人受试者和其它哺乳动物的单位剂量的物理上不连续的单位，每个单位含有计算为产生所需起效、耐受性和疗效的预定数量的活性剂，与一种或多种合适的药物赋形剂如载体结合。

“Fc”是包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分的片段。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，所述区域也被某些类型细胞上存在的Fc受体(FcR)识别。

本发明的抗体的“功能片段”包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合区域或可变区、或者保留或具有修饰的FcR结合能力的抗体的Fc区。功能性抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子、以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

“Fv”是最小的抗体片段，其含有完整的抗原识别和抗原结合位点。该片段由紧密非共价结合的一个重链和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中，产生六个高变环(各自来自H链和L链的3个环)，所述环贡献了用于抗原结合的氨基酸残基，并且对抗体赋予抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含对于抗原特异性的三个HVR的一半Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于整个结合位点。

“人抗体”是具有氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于由人产生的抗体的氨基酸序列，和/或已使用如本文公开的用于制备人抗体的任何技术进行制备。人抗体的这个定义具体地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体，所述技术包括噬菌体展示文库(参见例如，Hoogenboom和Winter (1991)，JMB 227: 381；Marks等人(1991) JMB 222: 581)。还可用于制备人单克隆抗体的是在Cole等人(1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R. Liss，第77页；Boerner等人(1991)，J. Immunol 147(l): 86；van Dijk和van de Winkel (2001) Curr.Opin. Pharmacol 5: 368)中描述的方法。人抗体可以通过将抗原施用于转基因动物进行制备，所述转基因动物已进行修饰以响应抗原攻击而产生此类抗体，但其内源基因座已丧失能力，例如免疫的异种小鼠(xenomice) (参见例如，关于XENOMOUSE技术的美国专利号6,075,181；和6,150,584)。关于经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体，还参见例如Li等人(2006) PNAS USA，103: 3557。

非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体，其含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体HVR的残基被替换为来自非人物种(供体抗体)的HVR的残基，所述非人物种例如具有所需特异性、亲和力和/或能力的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。在一些情况下，人免疫球蛋白的构架(“FR”)残基被替换为相应的非人残基。此外，人源化抗体可以包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。可以进行这些修饰以进一步改善抗体性能，例如结合亲和力。一般而言，人源化抗体将包含至少一个可变结构域，并且通常是两个可变结构域的基本上全部，其中高变环的全部或基本上全部对应于非人免疫球蛋白序列的那些，并且FR区的全部或基本上全部是人免疫球蛋白序列的那些，尽管FR区可以包括改善抗体性能的一个或多个个别FR残基取代，所述抗体性能例如结合亲和力、异构化、免疫原性等。FR中这些氨基酸取代的数目通常在H链中不多于6，且在L链中不多于3。人源化抗体还任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的那种。关于进一步细节，参见例如，Jones等人(1986) Nature 321: 522；Riechmann等人(1988)，Nature 332: 323；Presta (1992)Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593；Vaswani和Hamilton (1998)，Ann. Allergy，Asthma &Immunol. 1: 105；Harris (1995) Biochem. Soc. Transactions 23: 1035；Hurle和Gross (1994) Curr. Op. Biotech. 5: 428；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。

“免疫球蛋白” (Ig)在本文中可与“抗体”互换使用。基本的4链抗体单元是由两条等同的轻(L)链和两条等同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本异四聚体单元连同称为J链的另外多肽组成，并且含有10个抗原结合位点，而IgA抗体包含2-5个基本4链单元，其可以聚合形成与J链组合的多价装配物。在IgG的情况下，4链单元一般为约150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键与H链相连，而两条H链取决于H链同种型通过一个或多个二硫键彼此相连。每条H链和L链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条H链在N末端处具有可变结构域(VH)，随后为关于α链和γ链各自的三个恒定结构域(CH)、以及关于μ和ε同种型的四个CH结构域。每条L链在N末端处具有可变结构域(VL)，随后为在其另一端处的恒定结构域。VL与VH对齐，且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。VH和VL的配对一起形成单个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如，Basic and Clinical Immunology，第8版，Sties等人(编辑)，Appleton & Lange，Norwalk，CT，1994，第71页和第6章。基于其恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可以被指定为两种明显不同的类型之一，称为κ和λ。取决于其重链(CH)恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被指定为不同类别或同种型。存在五个类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有指定为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能的相对较小差异，将γ和α类别进一步分成子类，例如，人表达下述子类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。

“输注(Infusion)”或“输注(infusing)”指通过静脉将含有药物的溶液引入体内，用于目的。一般地，这经由静脉(IV)袋来实现。

“与……组合”或“与……联合”指一种化合物加上一种或多种其它化合物的施用。因此，“与……组合”或“与……联合”指一种化合物的施用，加上以任何次序的一种或多种其它化合物的施用。例如，一种化合物可以在一种或多种其它化合物施用于个体之前、过程中或之后施用。如本文使用的，就包含荷有DNA烷化剂的ADC和ATR抑制剂的组合的施用而言，术语“组合”意指将这些化合物以任何次序施用于患者。例如，化合物可以同时或序贯地施用。另外，在存在另外的化学疗法的情况下，可以同时施用两种化合物，随后为第三种化合物的序贯施用。另外，化合物可以作为单一或分开的组合物、制剂或单位剂型施用。另外，两种化合物可以作为单一组合物、制剂或单位剂型施用，而第三种化合物作为分开的组合物、制剂或单位剂型施用。应了解，荷有DNA烷化剂的ADC、ATR抑制剂和潜在的另外的化学剂或放射疗法或放射化学疗法，在同一天或不同天时以及根据适当的给药方案以任何次序施用。

“转移性”癌症指已从身体的一个部分(例如，肺)扩散到身体的另一部分的癌症。

如本文使用的，“单克隆抗体”指从基本上同质的抗体体中获得的抗体，即，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化和酰胺化)之外，构成体的个别抗体是等同的。单克隆抗体针对单个抗原位点是高度特异性的。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂形成对比，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除其特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们通过杂交瘤培养物合成，并且不受其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”指示抗体的特征为从基本上同质的抗体体中获得，而不应解释为要求通过任何特定方法的抗体生产。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可以通过各种技术进行制备，所述技术包括例如杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein (1975) Nature 256: 495；Hongo等人(1995) Hybridoma 14 (3): 253；Harlow等人(1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor LaboratoryPress，第2版；Hammerling等人(1981) In: Monoclonal Antibodies and T-CeIlHybridomas 563 (Elsevier，N.Y.)，重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)，噬菌体展示技术(参见例如，Clackson等人(1991) Nature 352: 624；Marks等人(1992) JMB222: 581；Sidhu等人(2004) JMB 338(2): 299；Lee等人(2004) JMB 340(5): 1073；Fellouse (2004) PNAS USA 101(34): 12467；和Lee等人(2004) J. Immunol. Methods284(1-2): 119)，以及在具有人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的部分或全部的动物中，用于产生人或人样抗体的技术(参见例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人(1993) PNAS USA 90: 2551；Jakobovits等人(1993) Nature 362: 255；Bruggemann等人(1993) Year in Immunol. 7:33；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016；Marks等人(1992) Bio/Technology 10: 779；Lonberg等人(1994) Nature 368: 856；Morrison (1994) Nature 368: 812；Fishwild等人(1996) Nature Biotechnol. 14:845；Neuberger (1996)，Nature Biotechnol. 14: 826；以及Lonberg和Huszar (1995)，Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93)。本文的单克隆抗体特别包括嵌合抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或者属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列等同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或者属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列等同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们显示出所需的生物学活性。(参见例如，美国专利号4,816,567；4,816,567；Morrison等人(1984) PNAS USA，81:6851)。

“客观应答”指可测量的应答，包括完全应答(CR)或部分应答(PR)。

“部分应答”指响应，一种或多种肿瘤或病损的大小、或体内癌症的程度的减少。

“患者”和“受试者”在本文中可互换使用，以指需要癌症的哺乳动物。一般地，患者是被诊断为患有癌症的一种或多种症状或者处于患有癌症的一种或多种症状的风险中的人。在某些实施方案中，“患者”或“受试者”可以指非人哺乳动物，例如非人灵长类动物、犬、猫、兔、猪、小鼠或大鼠，或者用于筛选、表征并评估药物和疗法的动物。

“药学上可接受的”指示物质或组合物必须在化学上和/或毒理学上适合于哺乳动物的。

术语“药学上可接受的佐剂”指增强机体对抗原的免疫应答的任何和所有物质。药学上可接受的佐剂的非限制性实例是：明矾、弗氏不完全佐剂、MF59、dsRNA的合成类似物例如聚(I:C)、细菌LPS、细菌鞭毛蛋白、咪唑并喹啉、含有特异性CpG基序的寡聚脱氧核苷酸、细菌细胞壁的片段例如胞壁酰二肽和Quil-A®。

如本文使用的，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的稀释剂”意指与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂。此类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域众所周知的。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且在不限制本发明范围的情况下包括：另外的缓冲剂；防腐剂；助溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；螯合剂，例如EDTA；金属络合物(例如Zn蛋白络合物)；可生物降解的聚合物，例如聚酯；成盐抗衡离子，例如钠、多元糖醇；氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸和苏氨酸；有机糖或糖醇，例如乳糖醇、水苏糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌醇糖(myoinisitose)、肌醇、半乳糖、半乳糖醇、甘油、环醇(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫的还原剂，例如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、[α]-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量蛋白质，例如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或其它免疫球蛋白；和亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮。其它药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，例如Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编辑(1980)中描述的那些，也可以包括在本文所述的药物组合物中，条件是它们不会不利地影响药物组合物的所需特性。

分子的“药学上可接受的盐”指分子的盐形式。药学上可接受的盐可以涉及另一种分子，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包括。抗衡离子可以是稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐可以在其结构中具有多于一个荷电原子。其中多重荷电原子是药学上可接受的盐的部分的情况可以具有多重抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可以具有一个或多个荷电原子和/或一个或多个抗衡离子。如果本发明的化合物是碱，则所需药学上可接受的盐可以通过本领域中可用的任何合适的方法来制备，例如，用无机酸或有机酸处理游离碱，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等等，所述有机酸例如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖基酸(pyranosidyl acid)如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、α羟酸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如对甲苯磺酸或乙磺酸等等。如果本发明的化合物是酸，则可以通过任何合适的方法来制备所需的药学上可接受的盐，例如，用无机碱或有机碱例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等等处理游离酸。合适的盐的说明性实例包括但不限于衍生自氨基酸例如甘氨酸和精氨酸，氨，伯胺、仲胺和叔胺，以及环胺例如、吗啉和哌嗪的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

“复发性”癌症是在对初始疗法如手术的应答后，在初始部位或远处部位已再生的癌症。局部“复发性”癌症是在与先前的癌症相同的位置中，在后复发的癌症。

一种或多种症状的“减轻”(以及该短语的语法等价形式)指减少一种或多种症状的严重程度或频率，或者一种或多种症状的消除。

“血清”指可以与凝固的血液分开的透明液体。血清与血浆(正常未凝固血液的液体部分)不同，所述血浆含有红细胞和白细胞以及血小板。血清是这样的组分，其既不是血细胞(血清不含白血细胞或红血细胞)，也不是凝血因子。不包括纤维蛋白原的血浆帮助血凝块形成。凝块使得血清和血浆之间存在差异。

“单链Fv”，也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成单条多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽进一步包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于sFv的综述，参见例如，Pluckthun (1994)，In: ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore (编辑)，Springer-Verlag，New York，第269页。

“持续应答”意指在用本文所述的剂或组合疗法的停止后的持续疗效。在一些实施方案中，持续应答具有的持续时间至少与持续时间相同，或者是持续时间的至少1.5、2.0、2.5或3倍。

“全身”是其中药物物质通过血液运输，到达并影响遍及全身的细胞的。

在本发明的每种情况下，荷有DNA烷化剂的ADC或ATR抑制剂的“有效量”，指在必要的剂量和时间段下有效的量，当施用于患有癌症的患者时，所述量具有预期的疗效，例如缓和、改善、减轻或消除患者中的一种或多种癌症表现，或者在癌症患者的过程中的任何其它临床结果。疗效通过一个剂量的施用不一定出现，并且可能仅在一系列剂量的施用后才出现。因此，可以以一次或多次施用来施用有效量。此类有效量可以根据以下因素而变：如个体的疾病状态、年龄、性别和重量，以及荷有烷化剂的ADC或ATR抑制剂在个体中引发所需应答的能力。有效量也是这样的量，其中荷有烷化剂的ADC或ATR抑制剂的有益效应超过了任何毒性或有害效应。

“(treating)” 状况或患者或者状况或患者的“(treatment)”，指采取步骤以获得有益结果或所需结果，包括临床结果。为了本发明的目的，有益临床结果或所需临床结果包括但不限于一种或多种癌症症状的缓和、改善；疾病程度的缩小；疾病进展的延迟或减缓；疾病状态的改善、减轻或稳定；或其它有益结果。应了解，对“(treating)”或“(treatment)”的提及包括所确定的状况症状的预防以及缓和。因此，状态、病症或状况的“(treating)”或“(treatment)”包括：(1)预防或延迟受试者中发展的状态、病症或状况的临床症状的出现，所述受试者可能患有或易患状态、病症或状况，但尚未经历或展示状态、病症或状况的临床症状或亚临床症状，(2)抑制状态、病症或状况，即，阻止、降低或延迟疾病或其复发(在维持的情况下)或者其至少一种临床症状或亚临床症状的发展，或(3)缓解或减弱疾病，即，引起状态、病症或状况或者其至少一种临床症状或亚临床症状的消退。

当“肿瘤”应用于诊断有或怀疑患有癌症的受试者时，它指任何大小的恶性或潜在恶性的赘生物或组织团块，并且包括原发性肿瘤和继发性赘生物。实体瘤是通常不含囊肿或液体区域的异常生长或组织团块。不同类型的实体瘤因形成其的细胞类型而命名。实体瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液中的癌症)一般不形成实体瘤。

如本文使用的，“单位剂型”指适合于待的受试者的制剂的物理上不连续的单位。然而，应理解，本发明的组合物的日总用量由主治医生在合理的医学判断范围内决定。关于任何特定受试者或生物体的具体有效剂量水平取决于各种因素，包括待的病症和病症的严重程度；所采用的具体活性剂的活性；所采用的具体组合物；受试者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；所采用的具体活性剂的施用时间和排泄率；持续时间；与所采用的具体化合物组合或同时使用的药物和/或另外疗法，以及医学领域众所周知的类似因素。

“可变的”指可变结构域的某些区段在抗体中的序列方面广泛不同的事实。V结构域介导抗原结合，并且限定特定抗体对于其特定抗原的特异性。然而，可变性并非跨越可变结构域的整个跨度均匀分布的。相反，它集中在轻链和重链可变结构域两者中、称为高变区(HVR)的三个区段中。可变结构域的更高度保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含由三个HVR连接的四个FR区，在很大程度上采取β-片层构型，所述三个HVR形成连接β-片层结构并在一些情况下形成其部分的环。每条链中的HVR通过FR区紧密结合在一起，并且与来自另一条链的HVR一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人(1991) Sequences of Immunological Interest，第5版，National Institute ofHealth，Bethesda，MD)。恒定结构域并不直接涉及抗体与抗原的结合，而是显示出各种效应子功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

抗体的“可变区”或“可变结构域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可以分别被称为“VH”和“VL”。这些结构域一般是抗体的最可变部分(相对于相同类别的其它抗体)，并且含有抗原结合位点。

如本文使用的，为了方便起见，多个项目、结构元件、组成元件和/或材料可以存在于共同的列表中。然而，这些列表应该被解释为如同列表的每个成员个别地鉴定为分开且唯一的成员。因此，仅基于其在共同组中的存在而无相反指示，此类列表的各个成员都不应该被解释为同一列表中任何其它成员的事实上的等价物。

浓度、量和其它数值数据可以在本文中以范围格式表述或呈现。应理解，此类范围形式仅为了方便和简洁起见而使用，并且因此应该被灵活地解释为不仅包括明确叙述为范围界限的数值，而且还包括包含在该范围内的所有个别的数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确叙述一样。作为说明，“约1至约5”的数值范围应该被解释为不仅包括约1至约5的明确叙述的值，而且还包括在所指示范围内的个别值和子范围。因此，在该数值范围内包括的是个别值，例如2、3和4，以及子范围，例如1-3、2-4和3-5等，以及个别地1、2 3、4和5。同样的原理适用于仅叙述一个数值作为最小值或最大值的范围。此外，不管所描述范围或特点的广度如何，此类解释都应该适用。

缩写

说明书中使用的一些缩写包括：

ATR：共济失调毛细血管扩张症和RAD3相关蛋白

BID：每天两次

CDR：互补决定区

CRC：结肠直肠癌

CRT：化学放射疗法

CT：化学疗法

DNA：脱氧核糖核酸

Ig：免疫球蛋白

IHC：免疫组织化学

IV：静脉内

mCRC：转移性结肠直肠癌

MSI-H：高微卫星不稳定性状态

MSI-L：低微卫星不稳定性状态

MSS：微卫星稳定性状态

NK：天然杀伤

NSCLC：非小细胞肺癌

OS：总生存期

PFS：无进展生存期

QD：每天一次

QID：一天四次

Q2W：每两周一次

Q3W：每三周一次

RNA：核糖核酸

RR：相对风险

RT：放射疗法

SCCHN：头颈部鳞状细胞癌

SCLC：小细胞肺癌

SoC：护理标准

TID：一天三次

TR：肿瘤应答

TTP：肿瘤进展时间

TTR：肿瘤复发时间

首先从链霉菌属(Streptomyces)物种的培养肉汤中分离的倍癌霉素是抗肿瘤抗生素家族的成员，其包括倍癌霉素A、倍癌霉素SA和CC-1065。倍癌霉素与DNA的小沟结合，并且随后引起不可逆的DNA烷基化。这破坏了核酸体系结构，其最终导致肿瘤细胞死亡。

倍癌霉素是最初从链霉菌属中分离的一类天然化合物。这些高度有效的分子具有共同的分子构成，由DNA烷基化单元和DNA结合单元组成，如通过倍癌霉素衍生物DUBA (11)所示出的。在结合DNA双链的富含AT区域的小沟后，出现腺嘌呤的N3加入DUBA的活化环丙烷环上，导致DNA的烷基化。尽管倍癌霉素包含反应性环丙烷环，但它们在水性介质中是相当稳定的。然而，倍癌霉素在DNA的存在下显示出显著的烷基化效率和速率。使用核磁共振(NMR)光谱学研究了倍癌霉素SA (DSA，13)和DNA的复合物，以阐明这种现象。在不存在配体的情况下，倍癌霉素的两个亚基是共面的。在DNA的小沟中结合后，疏水性接触达到最大，导致DSA的构象变化。这两个亚基就彼此而言是扭曲的，激活分子用于烷基化。

荷兰制药公司Synthon的目前处于临床开发中的基于倍癌霉素的ADC是SYD985。这种ADC由倍癌霉素前药开环-DUBA组成，所述开环-DUBA经由组织蛋白酶B可切割的二肽接头与抗HER2抗体曲妥珠单抗连接。

WO2015/104373公开了荷有倍癌霉素的ADC用于子宫内膜癌的用途。

WO 2011/133039公开了DNA烷化剂CC-1065及其靶向HER2的ADC的一系列类似物。在实施例15中，许多曲妥珠单抗-倍癌霉素缀合物针对裸鼠中的N87 (即，HER2 IHC (免疫组织化学) 3+胃肿瘤)异种移植物进行测试。结果显示于WO 2011/133039的图4A、4B和4C中。与抗体曲妥珠单抗本身和对照媒介物相比，在用12 mg/kg i.v.的单次剂量后，所有六种ADC都降低了肿瘤体积并改善了存活，而不影响体重。

WO 2015/104385公开了含有倍癌霉素的ADC，其用于表达HER2的人实体瘤和血液恶性肿瘤。

本领域中所述的倍癌霉素及其衍生物可以用于本发明的目的。

本发明部分起于DNA烷基化ADC和ATR抑制剂的组合益处的发现。令人惊讶的是，本发明的组合显示为优于仅组合。发明人已显示了，该组合的强化效应在细胞培养物和体内模型中是协同的。

因此，在一个方面，本发明提供了DNA烷基化ADC和ATR抑制剂，其用于在有此需要的受试者中的癌症的方法中使用，所述方法包括向受试者施用DNA烷基化ADC和ATR抑制剂。类似地，本发明提供了该组合在用于有此需要的受试者中的癌症的方法中的用途，所述方法包括向受试者施用DNA烷基化ADC和ATR抑制剂。类似地，本发明提供了DNA烷基化ADC和ATR抑制剂用于制造用于有此需要的受试者中的癌症的药物的用途，其包括向受试者施用DNA烷基化ADC和ATR抑制剂。

应当理解，在本发明的所有实施方案中，应用有效量的DNA烷基化ADC和ATR抑制剂。

在一些方面，ATR抑制剂是由式A-I表示的化合物：

A-I

或其药学上可接受的盐，

其中：

R1是具有独立地选自氮、氧和硫的0-4个杂原子的5-6元单环芳基或杂芳基环，其中所述单环芳基或杂芳基环任选地稠合至另一个环，以形成具有独立地选自氮、氧和硫的0-6个杂原子的8-10元双环芳基或杂芳基环；每个R1任选地由1-5个J1基团取代；

R2是具有独立地选自氮、氧和硫的0-3个杂原子的5-6元单环芳基或杂芳基环，其中所述单环芳基或杂芳基环任选地稠合至另一个环，以形成具有独立地选自氮、氧和硫的0-4个杂原子的8-10元双环芳基或杂芳基环；每个R2任选地由1-5个J2基团取代；

L是–C(O)NH–或–C(O)N(C1-6烷基)–；

n是0或1；

每个J1和J2独立地是卤素、–CN、–NO2、–V1–R或–(V2)m–Q；

V1是C1-10脂族链，其中0-3个亚甲基单元任选地并且独立地由O、NR”、S、C(O)、S(O)或S(O)2替换；V1任选地由1-6次出现的JV1取代；

V2是C1-10脂族链，其中0-3个亚甲基单元任选地并且独立地由O、NR”、S、C(O)、S(O)或S(O)2替换；V2任选地由1-6次出现的JV2取代；

m是0或1；

Q是具有独立地选自氮、氧和硫的0-4个杂原子的3-8元饱和或不饱和单环，或者是具有独立地选自氮、氧和硫的0-6个杂原子的9-10元饱和或不饱和双环；每个Q任选地由0-5个JQ取代；

每个JV1或JV2独立地是卤素、CN、NH2、NO2、C1-4脂族基、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、OH、O(C1-4脂族基)、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-4脂族基)、C(O)N(C1-4脂族基)2、NHCO(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)CO(C1-4脂族基)、SO2(C1-4脂族基)、NHSO2(C1-4脂族基)或N(C1-4脂族基) SO2(C1-4脂族基)，其中所述C1-4脂族基任选地由卤素取代；

R是H或C1-6脂族基，其中所述C1-6脂族基任选地由1-4次出现的以下取代：NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、卤素、C1-4脂族基，OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、CO(C1-4脂族基)、O(卤代C1-4脂族基)或卤代C1-4脂族基；

每个JQ独立地是卤素、氧代、CN、NO2、X-R或–(X)p-Q4；

p是0或1；

X是C1-10脂族基，其中所述C1-10脂族基的1-3个亚甲基单元任选地由-NR、-O-、-S-、C(O)、S(O)2或S(O)替换；其中X任选地且独立地由1-4次出现的以下取代：NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、卤素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO(C1-4脂族基)、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-4脂族基)、C(O)N(C1-4脂族基)2、SO(C1-4脂族基)、SO2(C1-4脂族基)、SO2NH(C1-4脂族基)、SO2N(C1-4脂族基)2、NHC(O)(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)C(O)(C1-4脂族基)，其中所述C1-4脂族基任选地由1-3次出现的卤素取代；

Q4是具有独立地选自氮、氧和硫的0-4个杂原子的3-8元饱和或不饱和单环，或者是具有独立地选自氮、氧和硫的0-6个杂原子的8-10元饱和或不饱和双环；每个Q4任选地由1-5个JQ4取代；

JQ4是卤素、CN或C1-4烷基，其中至多2个亚甲基单元任选地由O、NR*、S、C(O)、S(O)或S(O)2替换；

R是H或C1-4烷基，其中所述C1-4烷基任选地由1-4个卤素取代；

R”和R*各自独立地是H、C1-4烷基或不存在；其中所述C1-4烷基任选地由1-4个卤素取代。

在一些实施方案中，L是–C(O)NH–；且R1和R2是苯基。

在另一个实施方案中，ATR抑制剂是由式A-I-a表示的化合物：

A-I-a

或其药学上可接受的盐，

其中：

环A是或，

J5o是H、F、Cl、C1-4脂族基，O(C1-3脂族基)或OH；

J5p是；

J5p1是H、C1-4脂族基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基；其中J5p1任选地由1-2次出现的OH或卤素取代；

J5p2是H、甲基、乙基、CH2F、CF3或CH2OH；

J2o是H、CN或SO2CH3；

J2m是H、F、Cl或甲基；

J2p是-SO2(C1-6烷基)、-SO2(C3-6环烷基)、-SO2(4-6元杂环基)、-SO2(C1-4烷基)N(C1-4烷基)2或-SO2(C1-4烷基)-(4-6元杂环基)，其中所述杂环基含有选自氧、氮和硫的1个杂原子；并且其中所述J2p任选地由1-3次出现的卤素、OH或O(C1-4烷基)取代。

在一些实施方案中，环A是。

在其它实施方案中，环A是。

在一些优选的实施方案中，ATR抑制剂是由下式表示的化合物(化合物1)：

化合物1

或其药学上可接受的盐。化合物1也称为3-[3-(4-甲基氨基甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-5-[4-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]吡嗪-2-基胺。

在另一个方面，ATR抑制剂由式A-II表示：

A-II

或者其药学上可接受的盐或衍生物，

其中：

R10选自氟、氯或–C(J10)2CN；

J10独立地是H或C1-2烷基；或

两次出现的J10连同它们与之附着的碳原子一起，形成3-4元的任选取代的碳环；

R20是H、卤素、-CN、NH2、任选地由0-3次出现的氟取代的C1-2烷基；或C1-3脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；

R3是H、卤素、任选地由1-3次出现的卤素取代的C1-4烷基、C3-4环烷基、-CN或C1-3脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；

R4是Q1或C1-10脂族链，其中所述脂族链的至多四个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或-S(O)z替换；每个R4任选地由0-5次出现的JQ1取代；或

R3和R4连同它们与之结合的原子一起，形成具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的5-6元芳族或非芳族环；由R3和R4形成的环任选地由0-3次出现的JZ取代；

Q1是3-7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环，所述3-7元环具有选自氧、氮和硫的0-3个杂原子；或者具有选自氧、氮和硫的0-5个杂原子的7-12元完全饱和、部分不饱和或芳族双环；

JZ独立地是C1-6脂族基、=O、卤素或O；

JQ1独立地是–CN、卤素、=O、Q2或C1-8脂族链，其中所述脂族链中至多三个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或-S(O)z-替换；每次出现的JQ1任选地由0-3次出现的JR取代；或

在同一原子上两次出现的JQ1连同它们与之相连的原子一起，形成具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元环；其中由两次出现的JQ1形成的环任选地由0-3次出现的JX取代；或

两次出现的JQ1连同Q1一起形成6-10元饱和或部分不饱和的桥环系统；

Q2独立地选自具有选自氧、氮或硫的0-3个杂原子的3-7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环；或者具有选自氧、氮或硫的0-5个杂原子的7-12元完全饱和、部分不饱和或芳族双环；

JR独立地是–CN、卤素、=O、O；Q3或C1-6脂族链，其中所述脂族链的至多三个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或-S(O)z-替换；每个JR任选地由0-3次出现的JT取代；或

在同一原子上两次出现的JR连同它们与之相连的原子一起，形成具有选自氧、氮或硫的0-2个杂原子的3-6元环；其中由两次出现的JR形成的环任选地由0-3次出现的JX取代；或

两次出现的JR连同Q2一起形成6-10元饱和或部分不饱和的桥环系统；

Q3是具有选自氧、氮和硫的0-3个杂原子的3-7元完全饱和、部分不饱和或芳族单环；或者具有选自氧、氮和硫的0-5个杂原子的7-12元完全饱和、部分不饱和或芳族双环；

JX独立地是–CN、=O、卤素或C1-4脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或-S(O)z-替换；

JT独立地是卤素、-CN、O；=O、-OH、C1-6脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或-S(O)z-替换；或者具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元非芳族环；每次出现的JT任选地由0-3个出现的JM取代；或

在同一原子上两次出现的JT连同它们与之相连的原子一起，形成具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元环；或

两次出现的JT连同Q3一起形成6-10元的饱和或部分不饱和的桥环系统；

JM独立地是卤素或C1-6脂族基；

z是0、1或2；和

Ra独立地是H或C1-4脂族基。

在一些实施方案中，R10和R3是氟。

在其它实施方案中，R4是Q1。

在另外其它实施方案中，Q1独立地是基和咪唑基。

在另一个实施方案中，ATR抑制剂由式A-II-a表示：

A-II-a

或者其药学上可接受的盐或前药，

其中：

R10是氟、氯或–C(J10)2CN；

J10独立地是H或C1-2烷基；或

两次出现的J10连同它们与之附着的碳原子一起，形成任选取代的3-4元碳环；

R3是H；氯；氟；任选地由1-3次出现的卤素取代的C1-4烷基；C3-4环烷基；-CN；或C1-3脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；

L1是H；具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-7元芳族或非芳族环；或C1-6脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；每个L1任选地由以下取代：C1-4脂族基；-CN；卤素；-OH；或具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元非芳族环；

L2是H；具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-7元芳族或非芳族环；或C1-6脂族链，其中所述脂族链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；每个L2任选地由以下取代：C1-4脂族基；-CN；卤素；-OH；或具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元非芳族环；或

L1和L2连同它们与之附着的氮一起形成环D；环D任选地由0-5次出现的JG取代；

L3是H、C1-3脂族基或CN；

环D是具有选自氧、氮和硫的1-2个杂原子的3-7元杂环基环；或具有选自氧、氮和硫的1-5个杂原子的7-12元完全饱和或部分不饱和的双环；

JG是独立的卤素；-CN；-N(R°)2；O；3-6元碳环基；具有选自氧、氮和硫的1-2个杂原子的3-6元杂环基；或C1-4烷基链，其中所述烷基链的至多两个亚甲基单元任选地由-O-、-NRa-、-C(O)-或–S(O)z替换；每个JG任选地由0-2次出现的JK取代；

在同一原子上两次出现的JG连同它们与之相连的原子一起，形成具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-6元环；或

两次出现的JG连同D环一起，形成6-10元饱和或部分不饱和的桥环系统；

JK是具有选自氧、氮和硫的0-2个杂原子的3-7元芳族或非芳族环；

z是0、1或2；和

Ra和R°独立地是H或C1-4烷基。

在另一个实施方案中，R10和R3是氟。

在其它优选的实施方案中，ATR抑制剂是由下式表示的化合物(化合物2)：

化合物2

或其药学上可接受的盐。化合物2也称为2-氨基-6-氟-N-(5-氟-4-{4-[4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羰基]-1-基}吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。

在一些优选的实施方案中，ATR抑制剂是由下式表示的化合物(化合物3)：

化合物3

或其药学上可接受的盐。化合物3也称为2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。

另一种优选的ATR抑制剂是AZD6738，其也称为ceralasertib (CAS注册号1352226-88-0)，或其药学上可接受的盐。它具有化学式4-{4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[1-(S-甲基磺酰亚胺酰基(methylsulfonimidoyl))环丙基]嘧啶-2-基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶，并且由下式(化合物4)表示：

化合物4

或其药学上可接受的盐。

另一种优选的ATR抑制剂具有化学式2-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-8-(1H-吡唑-5-基)-1,7-萘啶，并且由下式(化合物5)表示：

化合物5

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，ATR抑制剂选自下述：

化合物6，

化合物7，

化合物8，

或其药学上可接受的盐。

可以用于本发明的组合疗法中的ATR抑制剂的进一步优选实例是下式I的化合物

其中

R1表示C(CH3)2SO2A’、CH2OSO2A’、C(CH3)2OH、-[C(R3)2]nHet1或1-甲磺酰基-环丙-1-基，

R2表示Het2、NR3(CH2)nHet2、OHet2、Ar1、CONHHet3、COHet3或CONHA，

R3表示H或A’，

Het1表示咪唑基、吡唑基、三唑基或吡啶基，其各自是未取代的，或者被COOH、COOA’、CH2OH、CH2OA’或A单取代的，

Het2表示1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吲哚基、苯并咪唑基、咪唑基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、吡啶基、三唑基、吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基或1,3-二氢-2λ6-2,2-二氧代-1-苯并噻唑基，其各自是未取代的，或者被Hal、A’、-[C(R3)2]nOR3、CONH2、SO2苯基、苄基、CN、-[C(R3)2]nNH2、-[C(R3)2]nNHA、氧杂环丁烷基-NH-和/或NHCOA单取代或二取代的，

Het3表示三唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡唑基或吡咯烷基，其各自是未取代的，或者被-[C(R3)2]nOR3、-[C(R3)2]nNH2或=O单取代的，

Ar1表示被-[C(R3)2]nOR3、咪唑基、-[C(R3)2]nNH2、吡唑基、氮杂环丙基或氧杂环丁烷基单取代的苯基，其各自可以是未取代的，或者被[C(R3)2]nOR3 或-[C(R3)2]nNH2单取代的，

A表示具有1-6个C原子的无分支烷基或分支烷基，其中1-7个H原子可以被OH、F、Cl和/或Br替换，和/或其中一个或两个不相邻的CH2基团可以由O和/或NH基团替换，

A’表示具有1-4个C原子的无分支烷基或分支烷基，

Hal表示F、Cl、Br或I，

n表示0、1、2或3，

以及其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物。

在优选的实施方案中，R1表示C(CH3)2SO2A’或C(CH3)2OH。

在进一步优选的实施方案中，R2表示Het2。

在进一步优选的实施方案中，R3表示H。

在进一步优选的实施方案中，A表示具有1-6个C原子的无分支烷基或分支烷基，其中1-5个H原子可以被OH和/或F替换。

在进一步优选的实施方案中，Het2表示1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吲哚基、苯并咪唑基或咪唑基，其各自是被Hal、-[C(R3)2]nNH2和/或-[C(R3)2]nNHA单取代或二取代的，

在进一步优选的实施方案中，R1表示C(CH3)2SO2A’或C(CH3)2OH，

R2表示Het2，

Het2表示1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吲哚基、苯并咪唑基或咪唑基，其各自是未取代的，或者被Hal、OH、-[C(R3)2]nNH2、-[C(R3)2]nNHA、氧杂环丁烷基-NH-和/或NHCOA单取代或二取代的，

A表示具有1-6个C原子的无分支烷基或分支烷基，其中1-5个H原子可以被OH和/或F替换，

A’表示具有1-4个C原子的无分支烷基或分支烷基，

Hal表示F、Cl、Br或I，

n表示0、1、2或3。

在进一步优选的实施方案中，R1表示C(CH3)2SO2CH3或C(CH3)2OH，

R2表示Het2，R3表示H，Het2表示1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吲哚基、苯并咪唑基或咪唑基，其各自是被Hal、-[C(R3)2]nNH2和/或-[C(R3)2]nNHA单取代或二取代的，

A表示具有1-6个碳原子的无分支烷基或分支烷基，其中1-5个H原子可以被OH和/或F取代，A’表示具有1-4个碳原子的无分支烷基或分支烷基，Hal表示F、Cl、Br或I，n表示0、1、2或3。

下面描绘了本发明的ATRi的特别优选的实施方案。

以及其药学上可接受的溶剂化物、盐、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物。

表6中描绘了可用于本发明中的ATRi的进一步优选的实施方案。

在一个实施方案中，本发明的组合用于人受试者的中。对于这些人患者，在用组合的中的主要预计益处是风险/利益比中的增益。

在各个实施方案中，本发明的组合被用作一线、二线、三线或以后线的。线指由患者接受的用不同药物或其它疗法的次序的放置。一线疗法方案是首先给予的，而二线疗法或三线疗法分别在一线疗法后或在二线疗法后给予。因此，一线疗法是用于疾病或状况的第一。在患有癌症的患者中，一线疗法(有时称为初级疗法或初级)可以是手术、化学疗法、放射疗法或这些疗法的组合。通常，患者被给予后续的化学疗法方案(二线疗法或三线疗法)，是因为患者并未对一线疗法或二线疗法显示阳性临床结果，或仅显示亚临床应答，或者显示阳性临床应答，但后来经历了复发，有时患有目前对引发较早阳性应答的较早疗法抗性的疾病。

由于ATR抑制剂和DNA烷基化ADC之间的作用模式不同，因此具有增强的免疫有关不利事件的机会很低。在非临床发现或公开的临床结果中不存在重叠的免疫特征，使得本发明的组合疗法显示高于当单独施用时在这些药剂中一般观察到的增强不利事件的低风险。对于在每种情况下作为单一药剂的DNA烷基化ADC和ATR抑制剂，优选本发明的化合物1或2，鉴定和潜在的风险也被视为代表组合的潜在风险。

优选本发明的组合应用于癌症的以后的线中，特别是二线或后续线中。对于先前疗法次数没有限制，条件是受试者经历了至少一轮先前癌症疗法。先前轮的癌症疗法指对于用例如一种或多种化学剂、放射疗法或化学放射疗法来受试者的确定的时间表/阶段，并且该受试者对于此类先前失败，所述先前或完成或提前终止。一个原因可能是癌症对先前疗法抗性或变得抗性。用于癌症患者的当前护理标准(SoC)经常涉及毒性和旧式化学疗法方案的施用。SoC与强烈不利事件的高风险相关，所述不利事件很可能干扰生活质量(例如继发性癌症)。在一个实施方案中，在对单一化学疗法和/或多重化学疗法、放射疗法或化学放射疗法抗性的癌症患者中，ATR抑制剂和DNA烷化剂的组合可以与SoC化学疗法一样有效，并且比SoC化学疗法更好地耐受。

在一些实施方案中，ATR抑制剂静脉内或经口施用。在一些实施方案中，通过连续输注来施用ATR抑制剂。化合物1或其药学上可接受的盐优选静脉内施用。化合物2或其药学上可接受的盐、化合物3或其药学上可接受的盐、以及化合物4或其药学上可接受的盐优选经口施用。在一些实施方案中，在组合疗法中采用的ATR抑制剂可以以下述剂量施用：约20mg/m2至约300 mg/m2、约30 mg/m2至约240 mg/m2、约40 mg/m2至约240 mg/m2、约40 mg/m2至约180 mg/m2、约60 mg/m2至约120 mg/m2、约80 mg/m2至约120 mg/m2、约90 mg/m2至约120mg/m2、或约80 mg/m2至约100 mg/m2。在某些实施方案中，ATR抑制剂可以以约40 mg/m2至约300 mg/m2 (例如约240 mg/m2)的剂量施用。在一些情况下，ATR抑制剂可以以约60 mg/m2至约180 mg/m2 (例如120 mg/m2)的剂量施用。在某些情况下，ATR抑制剂可以以约80 mg/m2至约100 mg/m2 (例如约90 mg/m2)的剂量施用。在一些实施方案中，ATR抑制剂可以以约40mg/m2、约60 mg/m2、约90 mg/m2或约120 mg/m2的剂量施用。优选地，组合的ATR抑制剂以约90 mg/m2的剂量施用。

在一些实施方案中，ATR抑制剂是化合物1或其药学上可接受的盐，并且以下述剂量施用：约20 mg/m2至约300 mg/m2、约30 mg/m2至约240 mg/m2、约40 mg/m2至约240 mg/m2、约40 mg/m2至约180 mg/m2、约60 mg/m2至约120 mg/m2、约80 mg/m2至约120 mg/m2、约90mg/m2至约120 mg/m2、或约80 mg/m2至约100 mg/m2。在一些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐以约40 mg/m2、约60 mg/m2、约90 mg/m2或约120 mg/m2的剂量，优选以约90mg/m2的剂量施用。

应当理解，如本文所述，用于组合疗法中的剂量的上文提及范围的所有组合都是可能的。另外，在组合疗法中采用的两种化合物的给药可以彼此适应，以改善便利性和依从性。

在一些实施方案中，组合方案包括先导阶段，任选地随后为在先导阶段完成后的维持阶段。如本文使用的，组合包括限定的期(即，第一阶段或先导阶段)。在此类时期或阶段完成后，可以随后为另一确定的期(即，第二阶段或维持阶段)。

ATR抑制剂和DNA烷基化ADC可以以任何次序施用。例如，全部可以基本上同时或序贯地施用。ATR抑制剂和DNA烷基化ADC在分开的组合物、制剂或单位剂型中，以任何次序施用于患者，或者化合物在一种组合物、制剂或单位剂型中一起施用。

在某些实施方案中，患者进一步获得放射疗法。在某些实施方案中，放射疗法包含约35-70 Gy/20-35分割。在一些实施方案中，放射疗法以标准分割(fractionation) (1.8至2 Gy，一周5天)给予，直到每天一次50-70 Gy的总剂量。在一个实施方案中，使用立体定向放射疗法以及伽玛刀。在姑息性场景中，还广泛使用其它分割方案，例如以5次分割的25Gy或以10次分割的30 Gy。对于放射疗法，的持续时间是当给予放射疗法时的时帧。这些干预适用于以电子、光子和质子、α-发射体或其它离子给予的，用放射性核苷酸的，例如，用给予甲状腺癌患者的131I的，以及用硼中子俘获疗法的患者中。

示例性的此类药学上可接受的组合物在下文和本文中进一步描述。

通常，将ATR抑制剂或DNA烷基化ADC掺入适合施用于受试者的药物组合物内，其中所述药物组合物包含化合物和药学上可接受的载体。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。药学上可接受的载体可以进一步包含少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强了化合物的贮存期限或有效性。

本发明的组合物可以为各种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如可注射和可输注的溶液)、分散体或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和应用。在一个优选的实施方案中，DNA烷基化ADC通过静脉内输注或注射进行施用。在另一个优选的实施方案中，DNA烷基化ADC通过肌内或皮下注射进行施用。在一个优选的实施方案中，ATR抑制剂通过静脉内输注、注射或经口进行施用。

组合物通常在生产和贮存条件下必须是无菌的和稳定的。可以将组合物配制为溶液、微乳剂、分散体、脂质体或适合于高药物浓度的其它有序结构。可以通过将所需量的活性化合物与根据需要的上文列举的成分之一或组合一起掺入适当的溶剂中，随后为过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。一般地，通过将活性成分和来自上文列举的所需其它成分掺入无菌媒介物内来制备分散体，所述无菌媒介物含有基本分散介质。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。溶液的适当流动性可以例如通过以下得到维持：使用包衣例如卵磷脂、在分散体的情况下维持所需粒子大小、以及使用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂来实现，所述试剂例如单硬脂酸盐和明胶。

在一个进一步方面，提供了包含DNA烷基化ADC和ATR抑制剂的药盒。

在一个进一步方面，提供了包括DNA烷基化ADC和包装插页的药盒，所述包装插页包含关于使用与ATR抑制剂组合的DNA烷基化ADC以在受试者中癌症或延迟癌症进展的说明书。还提供的是包括ATR抑制剂和包装插页的药盒，所述包装插页包含关于使用与DNA烷基化ADC组合的ATR抑制剂以在受试者中癌症或延迟癌症进展的说明书。药盒可以包括第一容器和第二容器以及包装插页，其中所述第一容器包含至少一个剂量的包含DNA烷基化ADC的药物，并且所述第二容器包含至少一个剂量的包含ATR抑制剂的药物，并且所述包装插页包含关于使用药物受试者的癌症的说明书。ATR抑制剂和DNA烷基化ADC也可以包含在单个容器中。容器可以由相同或不同的形状(例如，小瓶、注射器和瓶子)和/或材料(例如，塑料或玻璃)组成。药盒可以进一步包含可以用于施用药物的其它材料，例如稀释剂、过滤器、IV袋和管线、针和注射器。

图23显示了倍癌霉素的几个实例。

从Dharmacon购买具有下述序列的针对CHK1 (CHEK1)、ATR、PLK1的siRNA以及非靶向siRNA的库：

siGENOME人CHEK1 (1111) SMARTpool siRNA：

GCAACAGUAUUUCGGUAUA

GGACUUCUCUCCAGUAAAC

AAAGAUAGAUGGUACAACA

AGAUAUGAAGCGUGCCGUA

ON-TARGETplus人ATR (545) SMARTpool siRNA：

GAGAAAGGAUUGUAGACUA

GCAACUCGCCUAACAGAUA

CCACGAAUGUUAACUCUAU

CCGCUAAUCUUCUAACAUU

ON-TARGETplus人PLK1 (5347) SMARTpool siRNA：

GCACAUACCGCCUGAGUCU

CCACCAAGGUUUUCGAUUG

GCUCUUCAAUGACUCAACA

UCUCAAGGCCUCCUAAUAG

siGenome非靶向siRNA库