用于病毒感染的化合物

本发明提供共济失调毛细血管扩张(ataxia telangiectasia)和Rad3-相关蛋白(ATR)抑制剂在病毒感染，包括诸如COVID-19的SARS-CoV感染中的用途。

ATR激酶参与对某种形式的DNA损伤(例如双链断裂和复制压力)的细胞应答的蛋白激酶。ATR激酶与ATM (“共济失调毛细血管扩张突变”)激酶和许多其他蛋白一起作用，来调节对双链DNA断裂和复制压力的细胞应答，通常被称为DNA损伤应答("DDR")。DDR通过激活细胞周期检查点刺激DNA修复，促进存活并停滞细胞周期进展，这为修复提供了时间。在没有DDR的情况下，细胞对DNA损伤敏感得多，并且容易因由诸如DNA复制的内源性细胞过程或癌症疗法中通常使用的外源性DNA损伤剂诱导的DNA损害而死亡。

ATR在各种癌症细胞类型中上调，并在DNA修复、细胞周期进展和生存中起关键作用。它由DNA复制相关压力期间引起的DNA损伤激活。共济失调毛细血管扩张和rad3-相关(ATR)激酶的抑制剂阻止ATR-检查点激酶1 (Chk1)信号传导通路中ATR-介导的信号传导。这阻止了DNA损伤检查点激活，破坏DNA损伤修复并诱导肿瘤细胞凋亡。ATR抑制剂处于对各种实体肿瘤例如小细胞癌、尿道上皮癌和卵巢癌的临床开发中。

冠状病毒

冠状病毒(CoV)为套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)中正义单链RNA (ssRNA)病毒。存在四种冠状病毒亚型，即α、β、γ和δ，其中α冠状病毒(Alphacoronavirus)和β冠状病毒(Betacoronavirus)主要感染哺乳动物，包括人类。在过去二十年中，已出现三种从非人类哺乳动物宿主跳出来感染人类的重要新型冠状病毒：出现于2002年的严重急性呼吸综合征(SARS-CoV-1)，出现于2012年的中东呼吸综合征(MERS-CoV)和出现于2019年末的COVID-19 (SARS-CoV-2)。到2020年6月中，已知超过七百八十万人已感染，以及超过432,000人已死亡。这两个数字都很可能代表了对该疾病所造成的破坏的显著低估。

COVID-19

SARS-CoV-2与SARS-CoV-1非常相似，SARS-CoV-1为2002年3月的SARS流行病的病原体(Fung等人，Annu. Rev. Microbiol. 2019. 73:529–57)。在大约15%的感染SARS-CoV-2的患者中报道了重度疾病，所述患者中三分之一进展为危重疾病(例如、休克或多器官功能障碍(Siddiqi等人；J. Heart和Lung Trans. (2020), doi: https://doi.org/10.1016/j.healun.2020.03.012；Zhou等人，Lancet 2020; 395: 1054–62.https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30566-3)。充分理解由SARS-CoV-2引发的病毒发病原因和免疫应答的机制对合理设计抗病毒和支持性护理之外的干预将为极其重要的。关于COVID-19影响患病者健康的各种方式，仍有许多正在被发现。

严重急性呼吸综合征(SARS)-冠状病毒-2 (CoV-2)是2019年冠状病毒疾病(COVID-19)的病原体，截止2020年6月已引起影响全球近八百万人的大流行，病例死亡率为2-4%。该病毒具有高传播率，可能与高早期病毒载量和缺乏预存免疫相关(He等人，Nat Med2020 https://doi.org/10.1038/s41591-020-0869-5)。它引起重度疾病，尤其是在老年人和有共病的个体中。COVID-19的全球负担是巨大的，并且方法对解决该疾病越来越必要。凭直觉得到的抗病毒方法，包括为包膜RNA病毒如HIV-1 (洛匹那韦+利托那韦)和埃博拉病毒(瑞德西韦)开发的那些，已作为研究物实施测试(Grein等人，NEJM 2020https://doi.org/10.1056/NEJMoa2007016；Cao等人，NEJM 2020 DOI: 10.1056/NEJMoa2001282)。但鉴于许多患重度疾病的患者出现免疫病理，也正考虑宿主导向的免疫调节方法，以分阶段方法或与抗病毒剂同时使用(Metha等人，The Lancet 2020; 395(10229) DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30628-0；Stebbing等人，Lancet Infect Dis 2020. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30132-8)。

尽管正考虑将许多疗法用于COVID-19，但目前还没有获准来该疾病的药物，并且没有可用的疫苗。迄今为止，一般只由症状管理、氧气疗法以及为的患者进行机械通气的可用临床主要支持组成。因此，迫切需要新型疗法来处理SARS-CoV-2感染周期不同阶段(Siddiqi等人)。

人类巨细胞病毒(cytomegalovirus) (HCMV)

人类巨细胞病毒(HCMV) (也是人类β疱疹病毒(betaherpesvirus) 5 (HHV-5)、巨细胞病毒(ZMV)、巨细胞病毒(CMV))为包膜双链DNA病毒(dsDNA)，属于疱疹病毒科(Herpesviridae)巨细胞病毒属，并且分布于全世界。传播经由唾液、尿液、精液分泌物和在输血期间发生。

人类巨细胞病毒(HCMV)为出生缺陷和免疫抑制的个体机会性感染的主要原因，以及某些癌症可能的辅因子，免疫抑制疗法下的器官移植患者处于病毒感染的高风险下；潜伏病毒的激活以及供体或社区获得的原发性感染可引起严重的并发症，包括移植物排斥反应、发病和死亡。疱疹病毒(Herpesvirus) (例如HCMV、HSVl)、多瘤病毒(polyomavirus)(例如BKV和JCV)、肝炎病毒(HBV和HCV)和呼吸道病毒(例如甲型流感、腺病毒)为感染这些患者的4种主要的病毒类别。巨细胞病毒(HCMV)为最普遍的移植后病原体，HCMV可感染大多数器官，并且尽管诸如阿昔洛韦或更昔洛韦的HCMV抗病毒剂可用，但肾毒性副作用和增加的药物抗性率显著降低移植物和患者的存活率。此外，HCMV-介导的免疫调节可再激活大多数成年人携带的不同潜伏病毒。

登革黄病毒(Flavivirus Dengue)

由蚊子或蜱虫传播的黄病毒在人类中引起威胁生命的感染，诸如脑炎和出血热。四种不同但但密切相关的登革黄病毒血清型为已知的，即所谓的DENV-1、-2、-3和-4。登革热流行于全世界大多数热带和亚热带地区，主要在城市和半城市区域。根据世界卫生组织(WHO)，25亿人(其中10亿儿童)处于DENV感染的风险中(WHO，2002)。估计全球每年发生五千万至一亿例登革热[DF]，五十万例严重登革热病(即登革出血热[DHF]和登革休克综合征[DSS])，和多于20,000人死亡。DHF已成为流行地区儿童中住院和死亡的主要原因。总的来说，登革热代表虫媒病毒疾病的最常见的原因。因为最近在位于拉丁美洲、东南亚和西太平洋的国家(包括巴西、波多黎各、委内瑞拉、柬埔寨、印度尼西亚、越南、泰国)的大爆发，登革热病例数在过去几年已大幅上升。不只是登革热病例数随着该疾病扩散至新的区域而增加，而且爆发也倾向于变得严重。

在第一实施方案中，本发明提供本发明的ATR抑制剂，其用于在对其有需要的受试者中病毒感染。在该实施方案的一个方面，病毒感染为单链RNA病毒感染。在该实施方案的另一方面，病毒感染为冠状病毒感染。在该实施方案进一步的方面，病毒感染为SARS-CoV1、MERS-CoV或SARS-CoV-2感染。在该实施方案的最后的方面，病毒感染为SARS-CoV-2感染。

第二实施方案为在对其有需要的受试者中冠状病毒感染的方法，其包含向受试者施用有效量的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。在该实施方案的一个方面中，施用化合物

和/或

减少受试者中的病毒载量。在该实施方案的一个方面，ATR抑制剂在COVID-19肺炎进展前施用。在该实施方案进一步的方面，受试者患有轻度至中度SARS-CoV-2感染。在该实施方案另外的方面中，受试者在开始施用方案时为无症状的。

在另一实施方案中，病毒感染为双链DNA病毒感染。在该实施方案的一个方面，病毒感染为HCMV感染。优选的实施方案为在对其有需要的受试者中巨细胞病毒感染的方法，其包含向受试者施用有效量的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。在该实施方案的一个方面中，施用化合物

和/或

减少受试者中的病毒载量。

在另一实施方案中，病毒感染为登革黄病毒感染。在该实施方案的一个方面中，病毒感染为DENV-1、-2、-3和-4感染。在该实施方案的最后的方面，病毒感染为登革病毒血清型2 (DENV-2)感染，优选的实施方案为在对其有需要的受试者中登革黄病毒的病毒感染的方法，其包含向受试者施用有效量的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。在该实施方案的一个方面，施用化合物

和/或

减少受试者中的病毒载量。

本专利申请的发明还可概括如下：用于冠状病毒感染的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。ATR抑制剂或其药学上可接受的盐在制造用于冠状病毒感染的药剂中的用途。用于巨细胞病毒感染的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。ATR抑制剂或其药学上可接受的盐在制造用于登革黄病毒感染的药剂中的用途。用于登革病毒感染的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物。ATR抑制剂或其药学上可接受的盐在制造用于登革黄病毒感染的药剂中的用途。

图1显示了描述与未感染的细胞和未暴露至剂的经SARS-Cov-2感染的细胞相比较，当在1µM至81µM的浓度范围中用本发明的化合物1时Calu-3细胞的汇合度的图表(对照的感染的细胞(绿圆圈)；对照的未感染的细胞(红方块)；使用81µm(尖端向上的蓝三角)、27 µm (尖端向下的蓝三角)、9µm (蓝菱形)、3µm (蓝方块)、1µm (蓝圆圈)浓度的化合物1)。

图2显示了描述与未感染的细胞和未暴露至剂的经SARS-Cov-2感染的细胞相比较，当在9µM至81µM的浓度范围中用本发明的化合物2时Calu-3细胞的汇合度的图表(对照的感染的细胞(绿圆圈)；对照的未感染的细胞(红方块)；使用81µm (尖端向上的黑三角)、27 µm (尖端向下的黑三角)、9µm (黑菱形)浓度的化合物1)。

图3显示了描述化合物1对感染巨细胞病毒的人类包皮成纤维细胞中的病毒复制(黑点)和对细胞活力(灰方块)的影响的图表。

图4显示了描述化合物2对感染DENV-2的Vero细胞中的病毒复制的影响的图表。虚线的交点指示半数最大有效浓度(EC50)，其为0.46 µm。

图5显示描述化合物2对Vero细胞活力的影响的图表。虚线的交点指示半数最大细胞毒性浓度(CC50)，其为6.80 µm。

冠状病毒包含引起若干种人类疾病的一组多样的包膜正链RNA病毒，最值得注意的是2003年和2020年的严重急性呼吸综合征(SARS)流行病。

传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus) (IBV)为高度传染性禽类γ-冠状病毒，主要靶向呼吸道细胞，可通过在经感染的细胞中诱导细胞周期停滞于G2和S-期来抑制细胞生长(Dove B等人：Cell cycle perturbations induced by infectionwith the coronavirus infectious bronchitis virus and their effect on virusreplication. J. Virol. 80, 4147–4156, 2006；Li, F.Q等人：Cell cycle arrest andapoptosis induced by the coronavirus infectious bronchitis virus in theabsence of p53. Virology 365, 435–445, 2007)。Xu等人已显示激活细胞DNA损伤应答为冠状病毒所利用来诱导细胞周期停滞的机制之一，以及通过化学抑制剂和siRNA-介导的ATR敲低抑制ATR激酶活性，减少IBV-诱导的ATR信号传导和抑制IBV复制(Xu L.H.等人：Coronavirus Infection Induces DNA Replication Stress Partly throughInteraction of Its Nonstructural Protein 13 with the p125 Subunit of DNAPolymerase J Biol Chem 286: 39546-39559, 2011)。

最近的论文已表明SARS-CoV-2病毒载量、症状严重性和病毒排毒之间的相关性(He等人；Liu等人，Lancet Infect Dis 2020. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30232-2)。一些在症状发作时施用以减弱冠状病毒复制的抗病毒药物正处于测试阶段(Grein等人；Taccone等人)，但迄今为止还没有药物显示出很大前景。能够在感染早期阶段减慢病毒繁殖可令受试者避免重度疾病。

据信，本发明的化合物抑制由冠状病毒诱导的DNA损伤应答，并通过抑制病毒诱导的细胞DNA损伤应答激活而在宿主中抑制冠状病毒复制。据设想，本发明的化合物可抑制核酸复制、病毒组装、新病毒颗粒运输和/或病毒释放。施用本发明的化合物的结果为减少病毒复制，这反过来将减少病毒载量以及降低疾病严重性。

无论本发明化合物的抗病毒特性的确切作用机制是什么，据提议，其施用可能具有一种或多种临床益处，如本文进一步描述的。

“COVID-19”为由SARS-CoV-2感染引起的疾病的名称。尽管注意用准确术语描述感染和疾病两者，但“COVID-19”和“SARS-CoV-2感染”意指大体上等同的术语。

截至撰写本申请时，COVID-19患者/症状的严重性的确定和特征尚未明确确立。然而，在本发明的上下文中，当受试者表现为无症状的或具有较不严重的临床症状(例如低热或无发热(<39.1℃)、咳嗽、轻度至中度不适)且无肺炎迹象时发生“轻度至中度”COVID-19，并且通常不需要医疗护理。当指涉“中度至重度”感染时，通常患者表现出更严重的临床症状(例如发热>39.1℃、呼吸短促、持续咳嗽、肺炎等等)。如本文所用，“中度至重度”感染一般地需要医疗干预，包括住院。在疾病进展期间，受试者可在一场感染发作中从“轻度至中度”过渡至“中度至重度”，并再次返回。

使用本发明的方法COVID-19包括在感染的任何阶段施用有效量的本发明的ATR抑制剂，以预防或减少与其相关的症状。一般而言，将在明确诊断和表现出与SARS-CoV2感染一致的症状后向受试者施用有效量的本发明的ATR抑制剂，并且施用将降低感染的严重性和/或预防感染进展至更严重的状态。在以下部分中更详细描述此类施用后的临床益处。

使用本发明的方法HCMV感染包括在感染的任何阶段施用有效量的本发明的ATR抑制剂，以预防或减少与其相关的症状。一般而言，将在明确诊断和表现出与HCMV感染一致的症状后向受试者施用有效量的本发明的ATR抑制剂，并且施用将降低感染的严重性和/或预防感染进展至更严重的状态。在以下部分中详细描述此类施用后的临床益处。

使用本发明的方法登革黄病毒感染包括在感染的任何阶段施用有效量的本发明的ATR抑制剂，以预防或减少与其相关的症状。一般而言，将在明确诊断和表现出与登革黄病毒感染一致的症状后向受试者施用有效量的本发明的ATR抑制剂，并且施用将降低感染的严重性和/或预防感染进展至更严重的状态。在以下部分中详细描述此类施用后的临床益处。

1. 化合物和定义

一个实施方案为选自以下的化合物：

(2-氨基-6-氟-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸[5'-氟-4-(4-氧杂环丁-3-基-哌嗪-1-羰基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶基-3'-基]-酰胺) (下文中也被称为“化合物1”)，

和

2-氨基-6-氟-N-[5-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(下文中也被称为“化合物2”)

或其药学上可接受的盐用于病毒感染的用途。

化合物1在WO 2014/089379 A1中被公开为化合物I-G-32 (实施例3f)，化合物2在WO 2014/089379 A1中被公开为化合物I-C-79。

以上化合物可以其游离形式或作为药学上可接受的盐进行使用。游离化合物可通过与酸反应，例如通过等量的碱和酸在诸如乙醇的惰性溶剂中反应，以及随后蒸发，来转换成相关的酸加成盐。用于该反应的适合的酸特别是为产生生理上可接受的盐的那些酸，例如卤化氢(例如氯化氢、溴化氢或碘化氢)、其他无机酸和其相应的盐(例如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等等)、烷基-和单芳基磺酸盐(例如乙二磺酸盐(ethanedisulfonate) (乙二磺酸盐(edisylate))、甲苯磺酸盐、萘-2-磺酸盐(萘磺酸盐)、苯磺酸盐)以及其他有机酸和其相应的盐(例如富马酸盐、草酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等等)。

药学上可接受的非毒性酸加成盐的示例性实施方案为与诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸的无机酸，或与诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸的有机酸，或通过使用诸如离子交换的本领域中所用的其他方法形成的氨基盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、帕莫酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等等。

另外，除非另外阐明，否则本文所述结构还意指包括仅在存在一个或多个同位素富集的原子方面不同的化合物。例如，具有本结构的包括用氘或氚代替氢或用13C-或14C-富集碳代替碳的化合物在本发明的范围内。在一些实施方案中，基团包含一个或多个氘原子。

2. 用途、配制和施用

如本文所用，术语“患者”或“受试者”意指动物，优选为人类。然而，“受试者”可包括伴侣动物，诸如狗和猫。在一个实施方案中，受试者为成年人类患者。在另一实施方案中，受试者为儿科患者。儿科患者包括开始时不满18岁的任何人类。成年患者包括开始时为18岁及更大的任何人类。在一个实施方案中，受试者为高风险组的成员，诸如年龄超过65岁的人、任何年龄的免疫受损的人类、具有慢性肺部病况(诸如哮喘、COPD、囊性纤维化等等)的人类以及具有其他共病的人类。在该实施方案的一个方面，其他共病为肥胖、糖尿病和/或高血压。

本发明的组合物口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、颊、阴道或经由植入的储库施用。优选地，组合物口服施用。在一个实施方案中，本发明化合物的口服制剂呈片剂或胶囊形式。在另一实施方案中，口服制剂为可经由嘴或鼻胃管给予对其有需要的受试者的溶液或悬浮液。本发明的任何口服制剂可在有或没有食物的情况下施用。在一些实施方案中，药学上可接受的本发明的组合物在没有食物的情况下施用。在其他实施方案中，药学上可接受的本发明的组合物在有食物的情况下施用。

药学上可接受的本发明的组合物以任何口服可接受的剂型口服施用。示例性口服剂型为胶囊、片剂、水悬浮液或溶液。在用于口服用途的片剂的情况下，通常使用的载剂包括乳糖和玉米淀粉。一般还添加诸如硬脂酸镁的润滑剂。用于以胶囊形式口服施用的有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要水悬浮液用于口服用途时，活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，还可任选地添加某些甜味剂、风味剂或着剂。

任选地与载剂材料组合以产生呈单剂型的组合物的本发明化合物的量将取决于所的宿主、施用的具体模式而变化。优选地，应当配制所提供的组合物，使得可将在0.01-100 mg/kg体重/天之间的化合物剂量施用至接受这些组合物的患者。

在一个实施方案中，施用至对其有需要的受试者的ATR抑制剂的总量为约20 mg至约2000 mg之间，其可每天一次至四次至每周一次地进行施用。在该实施方案的一个方面，所施用ATR抑制剂的总量为每天约50 mg至约350 mg之间，并且优选地每天施用一次。

在另一实施方案中，ATR抑制剂每天施用一次。在该实施方案的另一方面，ATR抑制剂每天施用两次。

在以上实施方案的任一项中，ATR抑制剂在约7天至约28天的时间段中施用。在以上实施方案的任一项的一个方面，ATR抑制剂施用约14天。

在本发明的一个实施方案中，受试者正患有COVID-19肺炎。在本发明的一个实施方案中，受试者患有选自以下的一种或多种症状：胸闷、咳嗽、血氧饱和度(SpO2)水平低于94%、呼吸短促、呼吸困难、发热、发冷、伴随发冷的反复颤抖、肌肉痛和/或虚弱、头痛、喉咙痛和/或新近味觉或嗅觉丧失。

在本发明的一个实施方案中，受试者正在医院环境中住院。在另一实施方案中，受试者正在门诊环境中。在前述实施方案的一个方面，受试者可在处于住院医院环境中转至门诊环境后继续施用ATR抑制剂。

在一个实施方案中，施用ATR抑制剂导致一种或多种临床益处。在该实施方案的一个方面，所述一种或多种临床益处选自：减少住院持续期间、减少在重症监护室(ICU)中的时间的持续期间、减少受试者被送入ICU的可能性、减少死亡率、减少需要透析的肾衰竭的可能性，减少被置于非侵入性或侵入性机械通气的可能性、减少恢复时间、减少将需要补充氧气的可能性、在没有机械干预的情况下改善周围毛细血管氧饱和度(SpO2水平)或使其正常化、减少如通过胸部成像(例如CT或胸部X光)确定的肺炎严重性、减少细胞因子产生、减少急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的严重性、减少进展为ARDS的可能性、临床消退COVID-19肺炎和改善受试者中的PaO2/FiO2比率。

在另一实施方案中，所述一种或多种临床益处包括在没有机械通气或体外膜氧合的情况下改善受试者中周围毛细血管氧饱和度(SpO2水平)或使其正常化。

在进一步的实施方案中，一种或多种临床益处为减少住院的可能性、减少送入ICU的可能性、减少被插管(侵入性机械通气)的可能性、减少将需要补充氧气的可能性、减少住院时长、减少死亡的可能性和/或减少复发的可能性，包括再次住院的可能性。

本发明还提供在对其有需要的受试者中病毒感染的方法，其包含向受试者施用有效量的本发明的化合物。有效或抑制病毒感染的量为与未的对照受试者相比将会引起一种或多种病毒感染的表现减少的量，所述表现诸如病毒损害、病毒载量、病毒产生率和死亡。

本发明的一个实施方案为在对其有需要的受试者中冠状病毒感染的方法，其包含向受试者施用有效量的ATR抑制剂或其药学上可接受的盐。在该实施方案的一个方面，该受试者感染了SARS-CoV-2。在该实施方案的另一方面，施用ATR抑制剂导致受试者中病毒载量减少。

在一个实施方案中，ATR抑制剂在COVID-19肺炎进展前进行施用。在另一实施方案中，受试者患有轻度至中度的SARS-CoV-2感染。在进一步的实施方案中，受试者在开始施用方案时为无症状的。在另一实施方案中，已经已知受试者与被诊断有SARS-CoV-2感染的患者有接触。在另外的实施方案中，受试者在被正式诊断有COVID-19之前开始施用ATR抑制剂。

一个实施方案为有COVID-19的受试者的方法，其包含向受试者施用有效量的ATR抑制剂。在该实施方案的一个方面，受试者先前已接种SARS-CoV-2疫苗并进展疫苗相关的感染恶化，例如抗体依赖性增强或相关抗体介导的疫苗/抗体相关的恶化的机制。

在以上实施方案的任一项中，施用ATR抑制剂导致对受试者的一种或多种临床益处。在该实施方案的一个方面，该一种或多种临床益处为缩短感染的持续期间、减少住院的可能性、减少死亡的可能性、减少送入ICU的可能性、减少被置于机械通气的可能性、减少将需要补充氧气的可能性和/或减少住院时长。在该实施方案进一步的方面中，该一种或多种临床益处是受试者未能进展出COVID-19的显著症状。

本发明的化合物可在SARS-CoV-2感染发作之前或之后施用，或在受试者诊断出急性感染后施用。前述本发明用途的化合物和医疗产品特别地被用于性。相关的效果在一定程度上缓解病症的一种或多种症状，或者使与疾病或病理状况相关或引起疾病或病理状况的一种或多种生理或生化参数部分或完全地恢复正常。监测被认为是一种，条件是化合物以明确间隔进行施用，例如为了增进应答和消除疾病的病原体和/或症状。本发明的方法还可在表现轻度至中度疾病前被用于减少进展为病症的可能性或甚至预防与COVID-19相关的病症的开始，或者用于急性感染引起和持续的症状。

轻度至中度COVID-19的一般在门诊环境中完成。中度至重度COVID-19的一般在医院环境中住院完成。另外，可在受试者已出院后在门诊环境中继续。

此外，本发明涉及药剂，其包含至少一种根据本发明的化合物或其药学上的盐。

本发明意义上的“药剂”为医学领域中的任何药物，其包含一种或多种本发明的化合物或其制剂(例如药物组合物或药物制剂)，并且可被用于患有临床症状和/或已知暴露于包括COVID-19在内的病毒感染的患者的预防、疗法、随访或后续护理。

组合

在各种实施方案中，活性成分可单独地或与一种或多种另外的剂组合地进行施用。通过在药物组合物使用多于一种化合物，可实现协同或增强的效果。活性成分可同时或序贯地进行使用。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种另外的剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述一种或多种另外的剂选自抗炎剂、抗生素、抗凝剂、抗寄生虫剂、抗血小板剂和双重抗血小板疗法、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β-阻滞剂、他汀类和其他联合降胆固醇剂、特异性细胞因子抑制剂、补体抑制剂、抗-VEGF、JAK抑制剂、免疫调节剂、抗炎性体疗法、鞘氨醇-1磷酸受体结合剂、N-甲基-d-天冬氨酸(NDMA)受体谷氨酸受体拮抗剂、皮质类固醇、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、抗-GM-CSF、干扰素、血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂、钙通道阻滞剂、血管扩张剂、利尿剂、肌肉松弛剂和抗病毒药物。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与抗病毒剂组合施用。在该实施方案的一个方面中，所述抗病毒剂为瑞德西韦。在该实施方案的另一方面中，所述抗病毒剂为洛匹那韦-利托那韦，单独或与利巴韦林和干扰素-β组合。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与广谱抗生素组合施用。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与氯喹或羟氯喹组合施用。在该实施方案的一个方面，ATR抑制剂进一步与阿奇霉素组合。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与干扰素-1-β (Rebif®)组合施用。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：羟氯喹、氯喹、伊维菌素、氨甲环酸、萘莫司他、病毒唑(virazole)、利巴韦林、洛匹那韦/利托那韦、法匹拉韦、阿比朵尔、乐利单抗(leronlimab)、干扰素β-1a、干扰素β-1b、β-干扰素、阿奇霉素、硝唑尼特(nitrazoxamide)、洛伐他汀、克拉扎珠单抗、阿达木单抗、依那西普、戈利木单抗、英夫利昔单抗、沙利鲁单抗、托珠单抗、阿那白滞素、依帕伐单抗、吡非尼酮、贝利木单抗(belimumab)、利妥昔单抗、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、阿尼鲁单抗(anifrolumab)、雷夫利珠单抗-cwvz (ravulizumab-cwvz)、依库珠单抗(eculizumab)、贝伐珠单抗、肝素、依诺肝素、阿普斯特、香豆定(coumadin)、巴瑞替尼、鲁索替尼(ruxolitinib)、达格列净(dapafliflozin)、甲氨蝶呤、来氟米特、硫唑嘌呤、柳氮磺吡啶、霉酚酸酯、秋水仙碱、芬戈莫德、艾芬地尔、泼尼松、皮质醇、地塞米松、甲基泼尼松龙、褪黑素、奥替利单抗(otilimab)、ATR-002、APN-01、甲磺酸卡莫司他、brilacidin、IFX-1、PAX-1-001、BXT-25、NP-120、静脉注射免疫球蛋白(IVIG)和索那肽。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种抗炎剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述抗炎剂选自皮质类固醇、类固醇、COX-2抑制剂和非甾体抗炎药物(NSAID)。在该实施方案的一个方面，所述抗炎剂为双氯芬酸、依托度酸、菲诺洛芬、氟比洛芬(flurbirprofen)、布洛芬、吲哚美辛、甲氯芬盐、甲芬那酸、美洛昔康、萘丁美酮、萘普生、奥沙普嗪、吡罗昔康、舒林酸、托美汀、塞来昔布、泼尼松、氢化可的松、氟氢可的松(fludocortisone)、倍他米松(bethamethasone)、泼尼松龙、曲安西龙、甲基泼尼松、地塞米松、氟替卡松和布地奈德(单独或与福莫特罗、沙美特罗或维兰特罗组合)。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种免疫调节剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述免疫调节剂为钙调神经磷酸酶抑制剂、抗代谢剂或烷基化剂。在该实施方案的另一方面，所述免疫调节剂选自硫唑嘌呤、霉酚酸酯、甲氨蝶呤、氨苯砜、环孢霉素(cyclosporine)、环磷酰胺等等。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种抗生素组合施用。在该实施方案的一个方面，所述抗生素为广谱抗生素。在该实施方案的另一方面，所述抗生素为青霉素、抗葡萄球菌青霉素、头孢菌素、氨基青霉素(通常与β内酰胺酶抑制剂一起施用)、单酰胺菌素(monobactam)、喹啉、氨基糖苷、林可酰胺、大环内酯、四环素、糖肽、抗代谢剂或硝基咪唑。在该实施方案进一步的方面中，所述抗生素选自青霉素G、苯唑西林、阿莫西林、头孢唑林、头孢氨苄、头孢替坦(cephotetan)、头孢西丁、头孢曲松、奥格门汀(augmentin)、阿莫西林、氨苄青霉素(+舒巴坦)、哌拉西林(+他唑巴坦)、艾他培南、环丙沙星、亚胺培南、美罗培南、左氟沙星、莫西沙星、阿米卡星、克林霉素、阿奇霉素、多西环素、万古霉素、复方新诺明和甲硝唑。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种抗凝剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述抗凝剂选自阿哌沙班、达比加、依度沙班(edoxaban)、肝素、利伐沙班和华法林。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种抗血小板剂和/或双重抗血小板疗法组合施用。在该实施方案的一个方面，所述抗血小板剂和/或双重抗血小板疗法选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、普拉格雷和替格瑞洛。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种ACE抑制剂组合施用。在该实施方案的一个方面中，所述ACE抑制剂选自苯扎普利(benazepril)、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利和多普利。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种血管紧张素II受体阻滞剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述血管紧张素II受体阻滞剂选自阿齐沙坦、坎地沙坦、依普沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦酯、替米沙坦和缬沙坦。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种β-阻滞剂组合施用。在该实施方案的一个方面中，所述β-阻滞剂选自醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔/氢氯噻嗪、比索洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、普萘洛尔和索他洛尔。

在另一实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种α和β-阻滞剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述α和β-阻滞剂为卡维地洛或盐酸拉贝洛尔。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种干扰素组合施用。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂组合施用。在该实施方案的一个方面中，所述血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂为沙库必曲/缬沙坦。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种钙通道阻滞剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述钙通道阻滞剂选自氨氯地平、地尔硫卓、非洛地平、硝苯地平、尼莫地平、尼索地平和维拉帕米。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种血管扩张剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述一种或多种血管扩张剂选自硝酸异山梨酯、单硝酸异山梨酯、和米诺地尔。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种利尿剂组合施用。在该实施方案的一个方面，所述一种或多种利尿剂选自乙酰唑胺、阿米洛利、布美他尼、氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、螺内酯和托拉塞米。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种肌肉松弛剂组合施用。在该实施方案的一个方面，肌肉松弛剂为解痉挛剂或抗痉挛剂。在该实施方案的另一方面，一种或多种肌肉松弛剂选自卡立普多、氯唑沙宗、环苯扎林、美他沙酮、美索巴莫、奥芬那君(orphenadrine)、替扎尼定、巴氯芬、丹曲林和。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种抗病毒药物组合施用。在该实施方案的一个方面，抗病毒药物为瑞德西韦。

在一个实施方案中，ATR抑制剂与一种或多种另外的剂组合施用，所述另外的剂选自抗寄生虫药物(包括但不限于羟氯喹、氯喹、伊维菌素)、抗病毒剂(包括但不限于氨甲环酸、萘莫司他、病毒唑[利巴韦林]、洛匹那韦/利托那韦、法匹拉韦、乐利单抗、干扰素β-1a、干扰素β-1b、β-干扰素)、具有细胞内活性的抗生素(包括但不限于阿奇霉素、硝唑尼特)、他汀类和其他联合降胆固醇和抗炎药物(包括但不限于洛伐他汀)、特异性细胞因子抑制剂(包括但不限于克拉扎珠单抗、阿达木单抗、依那西普、戈利木单抗、英夫利昔单抗、沙利鲁单抗、托珠单抗、阿那白滞素、依帕伐单抗、吡非尼酮)、补体抑制剂(包括但不限于雷夫利珠单抗-cwvz、依库珠单抗)、抗-VEGF(包括但不限于贝伐珠单抗)、抗凝剂(包括但不限于肝素、依诺肝素、阿普斯特、香豆定)、JAK抑制剂(包括但不限于巴瑞替尼、鲁索替尼、达格列净)、抗炎性体疗法(包括但不限于秋水仙碱)、鞘氨醇-1磷酸受体结合剂(包括但不限于芬戈莫德)、N-甲基-d-天冬氨酸(NDMA)受体谷氨酸受体拮抗剂(包括但不限于艾芬地尔)、皮质类固醇(包括但不限于泼尼松、皮质醇、地塞米松、甲基泼尼松龙)、GM-CSF、抗-GM-CSF (奥替利单抗)、ATR-002、APN-01、甲磺酸卡莫司他、阿比朵尔、brilacidin、IFX-1、PAX-1-001、BXT-25、NP-120、静脉注射免疫球蛋白(IVIG)和索那肽。

在一些实施方案中，与当ATR抑制剂或另外的剂单独施用时所施用的有效量相比，ATR抑制剂与一种或多种另外的剂的组合减少施用以实现相同结果的ATR抑制剂和/或一种或多种另外的剂的有效量(包括但不限于所施用的剂量体积、剂量浓度和/或总药物剂量)。在一些实施方案中，与单独施用另外的剂相比，ATR抑制剂与另外的剂的组合减少的总持续期间。在一些实施方案中，ATR抑制剂与另外的剂的组合减少与单独施用另外的剂相关的副作用。在一些实施方案中，与单独的有效量的ATR抑制剂或另外的剂相比，有效量的ATR抑制剂与另外的剂的组合更有效。在一个实施方案中，有效量的ATR抑制剂与一种或多种另外的剂的组合导致了单独施用其中一种药剂之外的一种或多种另外的临床益处。

如本文所用，术语“(treatment)”、“(treat)”和“(treating)”是指逆转、减轻、延迟病毒感染或其一种或多种症状的发作或者抑制其进展，如本文所述。在一些实施方案中，在已进展一种或多种症状后施用。在其他实施方案中，在不存在症状的情况下施用。例如，在症状发作前将施用至易感个体(例如鉴于已知暴露于感染者和/或鉴于作为严重疾病预测因素的共病或其他易感因素)。

实施例

实施例1：化合物的抗病毒测试

将Calu-3细胞接种于两个384孔板上。板1含有化合物+病毒SARS-CoV2/ZG/297-20第6传0.05感染复数，而板2仅含有化合物。对每个孔，将15,000个Calu-3细胞接种于50 μL/孔的完全生长培养基(EMEM，10% FCS，1%青霉素/链霉素)中。细胞在37℃和5% CO2下生长48小时。在此时间后，更换两个板中的培养基并将新鲜培养基添加至每孔。

在板1上：将5 µL具有各自浓度的每种化合物一式两份地加入指定孔中持续1小时，并且之后用MOI为0.05的SARS-Cov-2感染。对于每孔总计50 µL，各孔的最终体积含有5µL化合物、5 µL病毒(被稀释并且调整量至0.05 MOI)和40 µL EMEM完全培养基。在添加病毒后以2小时的间隔通过Incucyte显微术监测板，持续总计120小时的观察时间，

细胞活力用Cell Glo试剂(Promega)确定；将50 µL试剂添加至各孔，在室温下在黑暗中孵育10分钟，然后用Biotek板读取仪测量发光。

如图1和2中显而易见的，化合物1和化合物2两者都导致细胞汇合度显著改善，使汇合度水平回复至未感染细胞的水平附近。图1和2中显示的结果为可再现的。

实施例2：抗病毒测试-巨细胞病毒

为确定化合物的抗病毒活性，在感染前人类包皮成纤维细胞(HFF)用范围在100 µM至0.0128 µM的各化合物的5倍连续稀释液处理1小时。在五天后确定抗病毒活性，使用基于免疫荧光的测定。使用MTT测定确定对于用相同浓度的化合物和持续相同时间长度进行的未感染细胞的细胞毒性。将阿昔洛韦包括在内作为测定对照。

实验程序

在用HCMV感染前1小时进行施用后，研究了各化合物的8个稀释液的抗病毒活性。在研究的整个持续期间(5天)，将化合物和病毒留在细胞上。相同浓度范围的化合物的细胞毒性通过MTT测定来确定。

细胞铺板

在四个96孔板中将细胞以4,000个细胞/100µl/孔接种于补充有10% FBS (Gibco10500064)和1X p/s (Gibco 15070063))的完全培养基(DMEM (Gibco, 61965026)中：两个板用于细胞毒性测定而两个板用于感染性测定。接种后，将板在室温下孵育5分钟以分布均匀，并然后在37℃，5% CO2下孵育直至次日。在补充培养基(DMEM (Gibco, 61965026)补充有5% FBS (Gibco 10500064)和1X p/s (Gibco 15070063))中，将化合物1和对照(阿昔洛韦)从10 mM储备溶液1:50稀释至200 µM，并将225µl这些稀释的储备液或仅稀释剂(1%DMSO)一式三份地添加至圆底96孔板的顶行(A)。

将180 µl的0.2% DMSO稀释剂添加在所有其他孔(B-H行)中。以此方式，使DMSO的百分比在连续稀释液中保持恒定在0.2%。DMSO的浓度仅在A行中为1% (在未感染/未的对照中也如此)，反映来自储备液的第一次稀释液中的DMSO浓度。通过将45 µl从A行转移至B中，混合，并然后再次从B行转移至C中等等直至H行，进行五倍连续稀释。

细胞的预处理

在各板(感染性和细胞毒性)中，将每孔50 µl的补充培养基添加至细胞。将来自稀释板的50 µl每孔的处理液转移至在各板(感染性和细胞毒性)的相应位置中的细胞。所有板均在37℃，5% CO2下孵育。

感染

将病毒储备(HCMV Merlin株，1x106 IU/ml)用补充培养基稀释5倍以使浓度达到2x105 IU/ml。1小时预处理后，将培养基/处理液从细胞去除，并将50 µl每孔的处理液从稀释板中再次转移至在感染性板的相应位置中的细胞。添加每孔50 µl的病毒(MOI ~1)，除了未感染对照，其中添加不含病毒的50 µl补充培养基。

定影和显影

五天后，将感染的板用PBS洗涤，用4%甲醛定影30分钟，用PBS再次洗涤，并在4℃下于PBS中储存过夜直至染。用MTT处理细胞毒性板以确定细胞活力。

感染性读取

将细胞进行免疫染。为此，用50 mM氯化铵淬灭任何残留的甲醛，在这之后将细胞透化(0.1% Triton X100)并用识别HCMV gB的抗体(The Native Antigen Company)染。用Alexa-488缀合二抗(Life Technologies, A21207)检测一抗，并用Hoechst染核。使用10X物镜在Opera Phenix高内涵共聚焦显微镜(Perkin Elmer)上获取图像，并使用Columbus软件计算感染百分比(感染的细胞/总细胞x 100)。

细胞毒性读取

通过MTT测定检测细胞毒性。为此，将MTT试剂(Sigma，M5655)添加至细胞，在37℃，5% CO2下持续2小时，在这之后去除培养基并将沉淀物用1:1异丙醇:DMSO混合物溶解20分钟。将上清液转移至干净的板，并在570nm处读取信号。

实施例3 抗病毒测试–登革黄病毒

使用细胞病变效应(CPE)抑制测定，评价化合物针对登革病毒血清型2 (DENV-2)的抗病毒效果。并行地评估细胞毒性作用。

以50µM的起始浓度制备化合物2的五倍连续稀释液，并在一天前将其一式三份地添加至接种于锥形96-孔板中的1.00E+04个Vero细胞，并在37℃和5% CO2下孵育一小时。在孵育时间期间，解冻病毒并在感染培养基中制备接种物。将储备和接种物始终维持在湿冰中。然后将病毒添加至化合物2稀释液/细胞(1:1)中，并将板在37℃和5% CO2下孵育3-5天。

细胞进行免疫染。然后去除培养基，将细胞用PBS进行洗涤，用冷的80%/20% (v/v)乙醇/甲醇进行定影并在-20℃下孵育20分钟。去除定影剂后，将板风干、洗涤并用特异性Ab