一种土茯苓醇提物、制备方法及其在制备保健品中的应用

1.本发明属于保健品技术领域，具体公开一种土茯苓醇提物、制备方法及其在制备保健品中的应用。

背景技术：

2.土茯苓是双子叶植物菝葜的干燥根茎，《中国药典》(2020年版第一部)已将其收载。现代药理研究表明，土茯苓具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抑菌、镇痛、利尿等活性，临床上常用于湿热淋浊、筋骨疼痛、头痛、痛风等症状。
3.土茯苓广泛分布于我国的南方地区，其主要含黄酮、多糖、甾醇、生物碱及有机酸类等成分，是国家卫健委颁布的可用于保健食品的中药材。关于土茯苓醇提物在抑菌、抗氧化、降血糖等方面的研究较少，同时未见土茯苓关键活性成分落新妇苷对其醇提物生物活性影响的相关报道。
4.本发明在对土茯苓乙醇提取工艺进行优化的基础上，系统研究土茯苓醇提物在抑制α-糖苷酶和胰脂肪酶、辅助降血糖等方面的活性，基于活性研究结果开展土茯苓醇提物咀嚼片制备工艺以及质量标准的研究与开发，为土茯苓的功能性食品开发提供技术基础。

技术实现要素：

5.第一方面，本发明提供一种土茯苓醇提物的制备方法，所述方法包括如下步骤：
6.(1)将土茯苓饮片称重，干燥，粉碎得到土茯苓粉末；
7.(2)将土茯苓粉末与乙醇溶液混合，常温下进行超声提取，过滤，得到提取液；
8.(3)浓缩提取液，冻干，研磨粉碎，得到土茯苓醇提物。
9.优选的，步骤(2)中乙醇溶液的浓度为50-95％，包括但不限于50％、60％、70％、80％、90％、95％。
10.优选的，步骤(2)中土茯苓粉末与乙醇溶液的料液比为1：(5-40)g/ml，包括但不限于1:5g/ml、1:10g/ml、1:20g/ml、1:30g/ml、1:40g/ml。
11.优选的，步骤(2)中超声提取的提取时间为15-120min，包括但不限于15min、30min、60min、90min、120min。
12.在本发明的最优选实施方式中，所述土茯苓醇提物的制备方法为：
13.(1)将土茯苓饮片称重，干燥，粉碎得到土茯苓粉末；
14.(2)将土茯苓粉末与浓度为70％的乙醇溶液按照料液比为1:10g/ml混合，常温下进行超声提取90min，过滤，得到提取液；
15.(3)浓缩提取液，冻干，研磨粉碎，得到土茯苓醇提物。
16.第二方面，本发明提供一种通过如上所述的方法制备得到的土茯苓醇提物。
17.第三方面，本发明提供一种上述土茯苓醇提物在制备具有减肥和/或降血糖功效的保健品中的应用。
18.优选的，所述保健品的剂型优选为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂。
19.在本发明的优选实施方式中，所述保健品为土茯苓咀嚼片，所述土茯苓咀嚼片通过如下方法制备得到：
20.将上述方法制备得到的土茯苓醇提物作为主药，加入填充剂，主药与填充剂质量比为1：(1-2.5)，混合，加入适量70-95％乙醇湿法制粒，干燥，整粒，加入矫味剂和硬脂酸镁，混合均匀，压片，得到土茯苓咀嚼片。
21.填充剂选自可溶性淀粉、糊精、玉米淀粉、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素中的一种或两种以上的组合。
22.矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖、甜菊糖苷、木糖醇、结晶麦芽糖、柠檬酸中的一种或两种以上的组合。
23.在本发明的最优选实施方式中，所述土茯苓咀嚼片制备方法为：称取0.2g土茯苓醇提物，加入0.24g预胶化淀粉，等量多次混匀，加入0.06g微晶纤维素，混匀，加入适量70％乙醇制软材，18目筛湿法制粒，50℃烘干20min，14目筛整粒，制得干颗粒，加入0.03g木糖醇，0.045g结晶麦芽糖醇，0.015g无水柠檬酸，混合均匀，压片，即得土茯苓咀嚼片。
24.本发明通过将土茯苓乙醇提取方法优化得到最佳提取工艺，并且将提取得到的土茯苓醇提物制备成咀嚼片，方便携带和储存，并且具有减肥和降低血糖的功效。
附图说明
25.图1乙醇浓度和料液比交互作用对土茯苓醇提物落新妇苷影响的响应面图。
26.图2乙醇浓度和提取时间交互作用对土茯苓醇提物落新妇苷影响的响应面图。
27.图3提取时间和料液比交互作用对土茯苓醇提物落新妇苷影响的响应面图。
28.图4土茯苓醇提物及落新妇苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。
29.图5土茯苓醇提物及落新妇苷对胰脂肪酶的抑制作用。
30.图6不同剂量醇提物对糖尿病小鼠体重的影响。
31.图7不同剂量醇提物对糖尿病小鼠血糖值的影响。
32.图8不同剂量醇提物对糖尿病小鼠葡萄糖耐受量的影响。
33.图9不同剂量醇提物对糖尿病小鼠血清指标的影响。
34.图10醇提物对糖尿病小鼠脏器外脂肪堆积效果的影响。
35.图11咀嚼片制备流程。
36.图12土茯苓咀嚼片形貌图。
具体实施方式
37.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
38.土茯苓醇提取物的制备
39.(1)实验材料
40.本发明使用的土茯苓饮片购自千方中药股份有限公司，生产批号为18080279。落新妇苷对照品(纯度≥99％)购自普锐法科技开发有限公司，生产批号为14070401。无水乙醇购自科龙化学品有限公司，生产批号为2018122602。
41.(2)实验方法
42.取一定量的土茯苓饮片，称重，干燥2h后再次称重，粉碎，过4号筛(60目)即得土茯苓粉末，向土茯苓粉末中加入乙醇超声提取，过滤，浓缩，冻干，研磨粉碎得到茯苓醇提物。
43.(3)响应面法优化土茯苓乙醇提取工艺
44.响应面试验设计
45.根据单因素实验结果，选取乙醇浓度(x1)，提取时间(x2)和料液比(x3)3个因素作为自变量，以土茯苓提取液中落新妇苷含量为因变量，进行响应面分析，优化土茯苓中落新妇苷的提取工艺，因素水平见下表。
46.表1土茯苓中落新妇苷提取工艺的因素水平及编码
[0047][0048]
按照响应面所得的土茯苓中落新妇苷提取最优工艺条件进行3次验证试验，以验证试验理论值和实际值是否相符。
[0049]
根据box-behnken试验设计原理和单因素实验结果，以乙醇浓度、料液比、提取时间为研究因素，提取液中落新妇苷含量为响应值。采用三因素三水平响应面分析方法，进行响应面分析实验。以提取液中落新妇苷含量为响应值的线性回归方程为：
[0050]
y＝0.046+1.750e-003a+6.500e-003b-4.500e-003c+2.500e-004ab+5.750e-003ac-3.750e-003bc-0.016a
2-0.016b
2-9.125e-003c2(r2＝0.951)。
[0051]
表2土茯苓中落新妇苷提取工艺响应面方案设计及实验结果
[0052][0053]
表3土茯苓中落新妇苷提取工艺回归分析结果
[0054][0055]
由表2.6可知回归模型达到显著水平，失拟项不显著(p》0.05)，说明方程对实验的拟合程度较高，使用该方程模拟真实的三因素三水平分析是可行的，即本试验所得二次回归方程与实际情况吻合度较好。a、c、ab、ac、c2对结果的影响表现为显著(p《0.05)，各因素对土茯苓中落新妇苷提取工艺的影响大小依次为提取时间、乙醇浓度、料液比。
[0056]
为了进一步研究变量之间的相互作用，应用designexpert8.0.6软件模拟各个因素对落新妇苷含量影响的3d响应曲面图和等高线图，结果见图1、图2和图3。
[0057]
从图1可以看出响应面曲线变化相对陡峭，等高线呈椭圆形，表明乙醇浓度和料液比的交互作用明显，对土茯苓提取液中落新妇苷含量的影响也较为显著。当乙醇浓度以及提取时间适当增加时，落新妇苷的含量也随之增大，且有稳定的最大值。
[0058]
从图2可以看出乙醇浓度和提取时间的交互作用对土茯苓提取液中落新妇苷含量的影响明显，等高线稀疏且呈椭圆形，而且弧度较大，说明两因素的交互作用比较明显。
[0059]
图3中响应曲面变化较平缓，等高线近似圆形，说明料液比和提取时间的交互作用不明显，且对土茯苓提取液中落新妇苷含量的影响相对不显著，随着提取时间和乙醇浓度的同时增大，落新妇苷的含量呈先增大后降低的抛物线趋势。
[0060]
利用designexpert 8.0.6软件对回归模型进一步分析，得到土茯苓中落新妇苷提取工艺最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为67.7％，提取时间为87.5min，料液比为1:10.3，在上述提取工艺条件下土茯苓提取液中落新妇苷的含量理论值为0.0621mg/ml。
[0061]
为了验证响应面结果的可靠性，采用上述优化条件进行实验验证，考虑到实际情况和操作方便，修正后的优化条件为提取时间90min，乙醇浓度70％，料液比1:10，进行三次平行试验，取平均值并将预测值与实测值进行统计，结果如表5。
[0062]
表4实验验证结果
[0063][0064][0065]
实验验证结果显示，预测值与实测值之间的平均偏差为1.61％，说明本实验所建
立的数学模型具有良好的预测性，该提取工艺准确可行。根据优化结果和实验操作条件，最终确定土茯苓乙醇提取工艺为，提取时间90min，乙醇浓度70％，料液比1:10，实验测定醇提物中落新妇苷平均含量为0.0614mg/ml。
[0066]
土茯苓醇提物效果验证
[0067]
一、土茯苓醇提物和落新妇苷的体外抑制α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶活性
[0068]
胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶是人体内的两大消化酶，抑制这两种酶是肥胖症和糖尿病症状的有效途径之一。本发明以土茯苓醇提物及落新妇苷为原料，研究它们对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的抑制作用，以及对两种酶荧光强度的影响，探究土茯苓醇提物及落新妇苷的体外降糖和肥胖的效果，为土茯苓功能性食品开发提供技术基础。
[0069]
1.1实验材料
[0070][0071]
实验仪器
[0072][0073][0074]
1.2实验方法
[0075]
(1)醇提物及落新妇苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
[0076]
准确称取土茯苓醇提物和落新妇苷各0.10g，用pbs溶液溶解配制成浓度为0.02、0.04、0.10、0.20、1.00mg/ml的醇提物和落新妇苷样品溶液。测定醇提物及落新妇苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，阿卡波糖为阳性对照，以下公式计算抑制率。
[0077][0078]
其中b1为阴性对照组，b0为实验组，a1为空白对照组，a0为空白实验组。
[0079]
(2)醇提物及落新妇苷对胰脂肪酶的抑制作用
[0080]
准确称取土茯苓醇提物和落新妇苷0.10g，pbs溶液配制成浓度为0.02、0.04、0.10、0.20、1.00mg/ml的样品溶液。96孔板中先加入pbs缓冲液、样品溶液和酶溶液。混合均匀，37℃水浴10min，后加入pnpp底物溶液，水浴反应20min，按照表5进行加样，奥利司他作
为阳性对照。405nm下用酶标仪测定吸光值，计算抑制率。
[0081][0082]
其中b1为样品对照组，b0为样品实验组，a1为空白对照组，a0为空白实验组。
[0083]
表5加样顺序及剂量
[0084][0085]
1.3数据分析
[0086]
所有实验平行重复三次，数据均为平均值
±
标准偏差，用spss17.0对ic50值进行计算，用origin2019进行绘图。
[0087]
1.4结果与讨论
[0088]
(1)醇提物和落新妇苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
[0089]
由图4可知随着醇提物浓度的增加，对α-葡萄糖苷酶的抑制率也在增加，呈一定的剂量依赖关系。当醇提物浓度大于0.2mg/ml时，抑制率与阳性对照阿卡波糖的抑制率相当，达到90％。在实验测试浓度范围下，用spss软件计算醇提物对α-葡萄糖苷酶的ic50值为0.051mg/ml。相较于醇提物，落新妇苷对α-葡萄糖苷酶有微弱的抑制率，抑制效果不明显，说明醇提物中还有其他成分具有抑制α-葡萄糖苷酶的效果，落新妇苷与其他成分一起联合达到抑制效果。
[0090]
(2)提取物和落新妇苷对胰脂肪酶的抑制作用
[0091]
由图5可知，土茯苓醇提物以及落新妇苷对胰脂肪酶均有一定的抑制作用，随着土茯苓醇提物和落新妇苷浓度增大，抑制率也逐渐上升。当浓度为1.0mg/ml时，醇提物的抑制率为72.73％，落新妇苷为56.50％，奥利司他为97.36％。在试验浓度范围内(0.01-1.00mg/ml)，醇提物对胰脂肪酶的抑制率从45.02％增加到72.73％，spss软件计算ic50值为0.021mg/ml；落新妇苷对胰脂肪酶的抑制率从15.32％增加到56.50％。两者抑制率均低于阳性对照奥利司他，说明落新妇苷对胰脂肪酶有一定的抑制作用，并且与土茯苓中的其他活性成分联合起到抑制作用。
[0092]
二、土茯苓醇提物体内降血糖作用
[0093]
2.1实验材料与仪器
[0094]
(1)实验动物
[0095]
在成都达硕实验动物有限公司购买体重在22～25g之间的昆明种小鼠50只，喂养7天让小鼠适应环境，室内温度保持在20～26℃，湿度保持在40～70％。
[0096]
(2)药物及试剂
[0097][0098]
(3)实验仪器
[0099][0100]
2.2实验方法
[0101]
(1)药物的制备及溶液的配制
[0102]
120mg/kg四氧嘧啶溶液的配制：取0.24g的四氧嘧啶溶解于10ml的无菌生理盐水中，配制成浓度为24mg/ml的溶液。小鼠体重除以200即为腹腔注射体积。
[0103]
140mg/kg四氧嘧啶溶液的配制：取0.28g的四氧嘧啶溶解于10ml的无菌生理盐水中，配制成浓度为28mg/ml的溶液。小鼠体重除以200即为腹腔注射体积。
[0104]
二甲基双胍片溶液的制备：取二甲基双胍片若干片，研磨至粉末状，称取一定量的药品粉末，用蒸馏水配制成浓度为100mg/kg的溶液。
[0105]
土茯苓醇提物溶液的制备：称取土茯苓醇提物80g溶解于200ml 2％的cmcna中，配置成浓度为0.4g/ml的醇提物溶液。
[0106]
土茯苓醇提物高剂量的制备(4g/kg)：将浓度为0.4g/ml的土茯苓醇提物以小鼠的体重除以100为灌胃体积即为高剂量组。
[0107]
土茯苓醇提物中剂量的制备(2g/kg)：将浓度为0.4g/ml的土茯苓醇提物以小鼠的体重除以200为灌胃体积即为中剂量组。
[0108]
土茯苓醇提物低剂量的制备(1g/kg)：将浓度为0.4g/ml的土茯苓醇提物以小鼠的体重除以400为灌胃体积即为低剂量组。
[0109]
落新妇苷溶液的制备：精密称取一定量的落新妇苷，用蒸馏水配制成浓度为20mg/kg的落新妇苷溶液。
[0110]
(2)小鼠糖尿病模型的建立
[0111]
选取雄性昆明种小鼠50只，正常喂养一周后，所有小鼠禁食不禁水12h，称其体重，选取6只小鼠作为正常对照组，剩余44只腹腔注射最佳剂量四氧嘧啶(120mg/kg)诱导糖尿病症。注射3天后，禁食12h，尾部采血测小鼠空腹血糖，血糖值》11.1mmol/l的小鼠即确定为糖尿病小鼠。
[0112]
(3)动物分组及给药
[0113]
实验共分成7组，每组6只，糖尿病小鼠分为6组，1组为正常组(nc)小鼠。糖尿病对照组(mc)每天灌胃生理盐水，持续28天；土茯苓醇提物高剂量组(rsg-h)、土茯苓醇提物中剂量组(rsg-m)、土茯苓醇提物低剂量组(rsg-l)每天灌胃醇提物，持续28天；阳性对照组(pc)每天灌胃盐酸二甲双胍溶液，持续28天；落新妇苷组(ab)每天灌胃落新妇苷溶液，持续28天；正常组(nc)每天灌胃生理盐水28天。具体分组见表6。
[0114]
表6分组及给药情况
[0115][0116]
(4)小鼠空腹血糖及体重的测定
[0117]
实验期间，各组小鼠在相同条件下正常饲养，观察小鼠饮食量、饮水量和行为体态的变化，每隔一周记录小鼠的体重变化，隔一周尾部采血测定一次血糖值，记录小鼠体重和血糖值变化。随着时间的变化考察醇提物对小鼠体重和血糖值的影响。
[0118]
(5)小鼠口服葡萄糖耐量实验(ogtt)
[0119]
在给药后的第29天进行小鼠口服葡萄糖耐量实验。各实验组小鼠禁食8h后，灌胃剂量为3g/kg的葡萄糖溶液，在0、0.5、2.0h分别尾部采血测量各组小鼠血糖值。绘制各组小鼠葡萄糖耐受量趋势变化图。
[0120]
(6)小鼠血清指标检测
[0121]
小鼠在最后一天给药后，禁食12h，眼部采血；采血后4℃，3000r/min离心10min，分离血清，按照试剂盒操作步骤用全波长酶标仪分别测定各组小鼠血清中tc、tg的含量；解剖小鼠获取其肝脏和肾脏组织，分别测定肝脏指数(肝脏与体重的重量比)、肾脏指数(肾脏与体重的重量比)。
[0122]
2.3数据分析
[0123]
所有数据均为平均值
±
标准偏差，用spss17.0对数据进行显著性分析，用origin2019进行绘图。
[0124]
2.4实验结果与讨论
[0125]
(1)醇提物对糖尿病小鼠体重的影响
[0126]
不同剂量的土茯苓醇提物对糖尿病小鼠体重的影响如图6所示(##表示与nc组有极显著性差异(p《0.01))，相比较于正常组，糖尿病对照组小鼠的体重极显著下降(p《0.01)从37.2减少到29.8，表明糖尿病组小鼠有明显的糖尿病症状；与糖尿病对照组相比，阳性对照组与醇提物高剂量组小鼠的体重有缓慢上升的趋势；醇提物中剂量组和醇提物低剂量组对糖尿病小鼠体重的影响无明显规律；表明醇提物高剂量对糖尿病小鼠体重的减轻有所缓
解。
[0127]
(3)醇提物对糖尿病小鼠血糖的影响
[0128]
在灌胃不同剂量醇提物后，各组糖尿病小鼠的血糖值均有所变化。如图7所示(**表示与mc组相比，有极显著性影响(p《0.01)；*表示与mc相比，有显著性影响(p《0.05))，在持续灌胃28d后，与糖尿病对照组相比，阳性对照组小鼠的血糖值随着灌胃时间的变化极显著降低(p《0.01)；醇提物高剂量组小鼠的血糖值显著降低(p《0.05)；醇提物中剂量组小鼠的血糖值有降低趋势，但降低程度弱于醇提物高剂量组和阳性对照组；醇提物低剂量组小鼠的血糖值无变化；灌胃15d后，落新妇苷组与醇提物低剂量组相比血糖值明显有下降趋势。表明高剂量的土茯苓醇提物对降低糖尿病小鼠的血糖有极显著效果，落新妇苷对降低糖尿病小鼠的血糖有影响。
[0129]
(4)醇提物对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐受量的影响
[0130]
结果如图8(##表示与mc相比，血糖有极显著性变化(p《0.01)；**表示与mc组相比，葡萄糖耐受量有极显著性变化(p《0.01)；*表示与mc组相比，葡萄糖耐受量有显著性变化(p《0.05))，表示在给各实验组口服葡萄糖2h内的血糖变化，由图可知，0.5h时，各组小鼠血糖浓度均达到最大值，后逐渐下降；糖尿病对照组小鼠的血糖值远大于正常组(p《0.01)，表明糖尿病组小鼠的葡萄糖耐受量已受损；土茯苓醇提物高剂量极显著改善糖尿病小鼠葡萄糖耐受性(p《0.01)；醇提物中剂量显著改善糖尿病小鼠葡萄糖耐受量(p《0.05)；计算口服葡萄糖耐受量试验期间血糖药时曲线下面积(auc)发现，与糖尿病对照组相比，阳性对照组、醇提物高剂量组、醇提物中剂量组和落新妇苷组均可改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐受量，其auc分别降低了34.8％,17.14％,12.02％和10.88％。表明醇提物能改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐受量，且落新妇苷对糖尿病小鼠葡萄糖耐受量有一定影响。
[0131]
(5)醇提物对糖尿病小鼠血清指标的影响
[0132]
土茯苓醇提物对小鼠血清中总胆固醇(tc)和甘油三酯(tg)的影响如图9所示(a-e不同字母表示同组数据之间有显著性差异(p《0.05))，由图可知，与正常组相比，糖尿病对照组的tc和tg含量均有显著性的升高(p《0.05)分别达到4.56和7.64，表明糖尿病组小鼠有明显的高血脂的症状；连续灌胃28天后，与糖尿病对照组相比较，阳性对照组小鼠血清中的tc和tg含量显著性降低(p《0.05)，分别下降了2.1和3.5；醇提物高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠血清中tc和tg含量显著性降低(p《0.05)；对于tc含量，三组组间无显著性差异，对于tg含量，中剂量组与低剂量组组间无显著性差异；ab对糖尿病小鼠血清中的tc含量有显著性影响(p《0.05)，对tg含量无显著性影响。实验结果表明，醇提物可以降低高血糖小鼠的血清中tg和tc的含量，具有降血脂作用。落新妇苷可以降低糖尿病小鼠血清中的tc含量。
[0133]
(6)醇提物对糖尿病小鼠肝脏和肾脏指数的影响
[0134]
由表7可知，与正常组相比，糖尿病对照组小鼠的肝脏指数和肾脏指数显著增大(p《0.05)，解剖实验肉眼可观察到糖尿病能导致小鼠的肝脏和肾脏明显肿大；持续灌胃28天后，相较于糖尿病对照组，阳性对照组小鼠的肝脏指数和肾脏指数都显著性降低(p《0.05)，分别为3.61
±
0.32c和0.68
±
0.17b，与正常组无显著性差异；落新妇苷组小鼠的肝脏指数与糖尿病对照组相比显著性降低(p《0.05)，肾脏指数无显著性差异；与糖尿病对照组相比，醇提物高剂量组、醇提物中剂量组、醇提物低剂量组的肝脏指数显著降低(p《0.05)，从4.91
±
0.21a降低到3.72
±
0.12
bc
，但醇提物高中低剂量组之间无显著性差异；醇提物高剂量组的
肾脏指数显著性降低(p《0.05)，中剂量和低剂量组无显著性影响。说明土茯苓醇提物可明显抑制糖尿病小鼠的肝脏肿大，醇提物高剂量能明显抑制糖尿病小鼠的肾脏肿大，阳性对照组二甲双胍对糖尿病小鼠肾脏的保护作用与正常组无显著差异。
[0135]
表7不同剂量醇提物对糖尿病小鼠肝脏和肾脏指数的影响
[0136][0137][0138]
注1：a-c不同字母表示同列数据之间有显著性差异(p《0.05)。
[0139]
此外，解剖过程中发现，对照其他实验组，持续灌胃醇提物高剂量28天后，小鼠肝脏和肾脏周围连接的脂肪组织较少，且易于从小鼠体重到肝脏和肾脏，未灌胃醇提物的小鼠肝脏和肾脏周围脂肪组织较多。表明土茯苓提取物可改善肝脏和肾脏周围脂肪组织的生长(图10，a和c为糖尿病对照实验组解剖的肝脏和肾脏组织，b和d图为灌胃土茯苓醇提物高剂量后解剖出的肝脏和肾脏)。
[0140]
土茯苓醇提物咀嚼片的制备
[0141]
实验材料与仪器
[0142]
实验材料
[0143]
[0144][0145]
实验方法与结果
[0146]
咀嚼片的制备流程如图11所示。根据《中国药典》(2020年版第一部)，土茯苓的每日用量为15-25g，取最小量15g，醇沉后的浸膏收率为8.15％；按照每日服用土茯苓咀嚼片的量为1.2225g，咀嚼片中主药含量为34.16％，咀嚼片片重为0.6g/片，初步测算成人每日服用量为6片，一天3次，一次2片。
[0147]
处方筛选
[0148]
①
填充剂筛选
[0149]
取适量的醇提物粉末(主药)，加入适量填充剂，混合，再加入适量95％乙醇；湿法制粒(18目筛)，干燥，整粒(14目)，加入1％的硬脂酸镁，混合均匀，压片。以咀嚼片的组织状态和硬度作为指标，确定最佳的填充剂搭配方案。实验结果见表8，5
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和6
#
实验组合咀嚼片组织状态成型良好，6
#
实验组合片剂的硬度也符合要求，因此筛选预胶化淀粉与微晶纤维素组合作为填充剂。
[0150]
表8填充剂筛选
[0151][0152]
②
主药与辅料比例筛选
[0153]
取适量的主药，加入适量预胶化淀粉和微晶纤维素，过筛(80目)，混合，再加入适量95％的乙醇；湿法制粒(18目筛)，干燥，整粒，加入1％的硬脂酸镁混合均匀，压片。以咀嚼片的成型状态和硬度为指标，确定主药与辅料最佳比例。实验结果见表9，4
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实验组合咀嚼片组织状态成型良好，表面光滑，其硬度也符合要求，因此筛选主药与辅料比例为3.4:6.6。
[0154]
表9主药与辅料比例筛选
[0155][0156]
③
矫味剂及添加量筛选
[0157]
矫味剂选用阿斯巴甜、蔗糖、甜菊糖苷、木糖醇、结晶麦芽糖和柠檬酸。称取主药和辅料(比例为3.3:6.6)，均匀混合，过筛，加入适量95％乙醇；湿法制粒(18目筛)，干燥，整粒(14目)，加入不同的矫味剂和硬脂酸镁，混合均匀，压片。以咀嚼片的酸甜度为指标，确定矫味剂的添加量。实验结果见表10，4
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实验组合咀嚼片酸甜适中，因此筛选0.05％柠檬酸+0.75％结晶麦芽糖醇+0.25％木糖醇作为矫味剂。
[0158]
表10矫味剂及添加量筛选
[0159][0160]
④
湿润剂筛选
[0161]
准确称取主药和辅料(比例为3.3:6.6)，混合均匀，加入适量不同浓度的乙醇；湿法制粒(18目筛)，干燥，整粒(14目)，加入矫味剂和硬脂酸镁，混合均匀，压片。以咀嚼片干颗粒的流动性为指标，确定湿润剂。实验结果见表11，1
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实验组干颗粒流动性较好，因此筛选70％乙醇作为湿润剂。
[0162]
表11湿润剂选择
[0163][0164]
综合单因素筛选，土茯苓咀嚼片的最佳工艺为：准确称取0.2g的土茯苓醇提物，加入0.24g预胶化淀粉，等量多次混匀，然后加入0.06g微晶纤维素，混匀，再加入适量的70％乙醇制软材，湿法制粒(18目筛)，50℃烘干20分钟，整粒(14目)，最后加入0.03g木糖醇，0.045g结晶麦芽糖醇，0.015g柠檬酸，混合均匀，压片，制成土茯苓咀嚼片。
[0165]
制备得到的咀嚼片如图12所示，咀嚼片表面光滑，泽均匀，边缘整齐，呈棕褐，酸甜适中，微苦。平均硬度为41.2n，片重范围在0.570～0.630g之间，片重差异检查、硬度检查均符合药典规定。土茯苓咀嚼片中总黄酮的平均含量为12.48％，落新妇苷的含量为0.03496mg/g。对干颗粒理化指标进行测定，测得干颗粒休止角平均值为28.15
°
，水分含量为4.93％，平均堆密度为0.3225kg/m3，均符合药典要求。
[0166]
以上具体实施方式只是对本发明内容的示意性说明，不代表本发明内容的限制。本领域技术人员可以想到的是本发明中具体结构可以有其它的变化形式。

技术特征：

1.一种土茯苓醇提物的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)将土茯苓饮片称重，干燥，粉碎得到土茯苓粉末；(2)将土茯苓粉末与乙醇溶液混合，常温下进行超声提取，过滤，得到提取液；(3)浓缩提取液，冻干，研磨粉碎，得到土茯苓醇提物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中乙醇溶液的浓度为50-95％，具体如50％、60％、70％、80％、90％、95％。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中土茯苓粉末与乙醇溶液的料液比为1：(5-40)g/ml，具体如1:5g/ml、1:10g/ml、1:20g/ml、1:30g/ml、1:40g/ml。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声提取的提取时间为15-120min，具体如15min、30min、60min、90min、120min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述土茯苓醇提物的制备方法为：(1)将土茯苓饮片称重，干燥，粉碎得到土茯苓粉末；(2)将土茯苓粉末与浓度为70％的乙醇溶液按照料液比为1:10g/ml混合，常温下进行超声提取90min，过滤，得到提取液；(3)浓缩提取液，冻干，研磨粉碎，得到土茯苓醇提物。6.一种通过权利要求1-5任一所述的方法制备得到的土茯苓醇提物。7.一种权利要求6所述的土茯苓醇提物在制备具有减肥和/或降血糖功效的保健品中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述保健品的剂型为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述保健品为土茯苓咀嚼片，所述土茯苓咀嚼片通过如下方法制备得到：将上述方法制备得到的土茯苓醇提物作为主药，加入填充剂，主药与填充剂质量比为1：(1-2.5)，混合，加入适量70-95％乙醇湿法制粒，干燥，整粒，加入矫味剂和硬脂酸镁，混合均匀，压片，得到土茯苓咀嚼片；填充剂选自可溶性淀粉、糊精、玉米淀粉、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素中的一种或两种以上的组合；矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖、甜菊糖苷、木糖醇、结晶麦芽糖、柠檬酸中的一种或两种以上的组合。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述土茯苓咀嚼片制备方法为：称取0.2g土茯苓醇提物，加入0.24g预胶化淀粉，等量多次混匀，加入0.06g微晶纤维素，混匀，加入适量70％乙醇制软材，18目筛湿法制粒，50℃烘干20min，14目筛整粒，制得干颗粒，加入0.03g木糖醇，0.045g结晶麦芽糖醇，0.015g无水柠檬酸，混合均匀，压片，即得土茯苓咀嚼片。

技术总结

本发明公开一种土茯苓醇提物的制备方法，以及以制备得到的土茯苓醇提物作为主药制备的土茯苓咀嚼片。本发明提供的土茯苓咀嚼片具有易携带、易储存、制作工艺简单、成本低等优势，经过生物活性研究证明所述土茯苓咀嚼片还具有降低血糖，肥胖症的功效。本发明提供的土茯苓咀嚼片的制备工艺为土茯苓在功能性食品领域的研究与开发提供技术支持。食品领域的研究与开发提供技术支持。食品领域的研究与开发提供技术支持。