一种提高皂荚坐果率的方法

1.本发明涉及一种提高皂荚坐果率的方法，属于植物育种技术领域。

背景技术：

2.皂荚(gleditsia sinensis lam.)是苏木科皂荚属植物，是我国特有的多功能生态经济型树种，在全国多地广泛栽培。授粉是荚果产量及品质形成的前提和保证，皂荚是雌雄异株植物，其花粉成熟离体后在自然条件下很快失去活力，自然坐果率低；单花花粉量少，不易收集大量纯花粉，花粉长期保存困难。目前还没有有效的皂荚花粉保存与授粉技术以提高杂交育种和种植园坐果率。

技术实现要素：

3.本发明要解决的技术问题是：提供一种简便易行的提高皂荚坐果率的方法，以方便杂交育种和辅助授粉工作的开展。
4.本发明采取的技术方案为：一种提高皂荚坐果率的方法，包括以下步骤：
5.(1)花粉采集及预处理：采集刚开放尚未散粉的皂荚雄花序，带回室内用工具取下花药；
6.(2)花粉干燥：新鲜花药干燥至含水量为8-12％；
7.(3)花粉冷藏保存：干燥处理后的花药进行防潮包裹后置于2～6℃下预冷1～3h，再转移到-90℃～-70℃长期保存；
8.(4)花粉液的配制：使用时取出花药包，先在2～6℃下放置1～2h使其逐渐解冻；待其温度升至室温后，将其放入制备好的花粉提取液中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣；检测花粉活力，并据此将滤液中的活力花粉浓度调配成400-600粒/ul左右，即为授粉花粉液；(4)花粉提取液用纯净水配制，花粉提取液中含有10～15％蔗糖+0.1％硼酸+0.3％cacl+0.04％黄原胶。
9.(5)授粉及坐果率统计：将花粉液均匀喷洒在预先套袋隔离的雌花序上，喷施处理7d后取下纸袋，统计坐果率。
10.优选的，所述步骤(1)中，新鲜花药干燥后的含水量为9％。
11.优选的，所述步骤(2)中，干燥处理后的花药进行防潮包裹后置于4℃下预冷2h，再转移到-80℃保存。
12.优选的，所述步骤(3)中，使用时取出花药包，4℃下放置1h使其逐渐解冻。
13.优选的，所述步骤(4)中，花粉提取液中含有12％蔗糖+0.1％硼酸+0.3％cacl+0.04％黄原胶。
14.优选的，所述步骤(5)中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣。检测花粉活力，并据此将滤液中的活力花粉浓度调配成500粒/ul左右，即为授粉花粉液。
15.本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明以花药作为保存材料，可提高花粉收集效率，延长花粉保存时间；以保存后的花药制备花粉授粉液，有利于冷藏后花粉的萌发，
本发明中保存的花粉活力较新鲜花粉活力略有下降，但是较自然授粉提高了坐果率，且相比于现有的皂荚保存和授粉方法可显著提高皂荚坐果率；本发明将皂荚的花粉收集、保存、应用三个环节有机衔接，简便易行，可应用于皂荚杂交育种和种植园辅助授粉工作。
附图说明
16.图1花药收集时的皂荚花朵开放状态照片；
17.图2为mtt法测定有活力的皂荚花粉，深为有活力的皂荚花粉；
18.图3用花粉提取液配制的花粉悬浮液喷施处理提高皂荚早期坐果率的照片，施用蒸馏水配制花粉悬浮液处理的皂荚坐果情况照片(左)，施用花粉提取液配制的花粉悬浮液处理的皂荚坐果情况照片(右)。
具体实施方式
19.下面结合附图及具体的实施例对本发明进行进一步介绍。
20.实施例1：
21.一种提高皂荚坐果率的方法，包括以下步骤：
22.(1)花粉采集及预处理：花粉采集及前处理：清晨用镊子采集皂荚雄花花序上刚开放的花朵，此时花朵刚刚开放，花冠展开，露出花药，花药为嫩黄尚未开裂散粉；花朵带回实验室后，用镊子取下花药，随后将收集的未开裂的花药自然干燥至花药开裂露出花粉；
23.(2)花粉干燥：新鲜花药用硅胶快速干燥至含水量9％；
24.(3)花粉冷藏保存：干燥处理后的花药包置于4℃下预冷2h，最后转移到-80℃保存；
25.(4)花粉液的配制：将解冻后花粉加入花粉提取液中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣；用1％的mtt染法检测花粉活力，并据此将过滤后花粉液中活力花粉的浓度调配成500粒/ul，即为授粉花粉液；花粉提取液用纯净水配制，花粉提取液中含有15％蔗糖+0.1％硼酸+0.2％cacl+0.04％黄原胶；
26.(5)授粉及坐果率统计：将花粉液均匀喷洒在预先套袋隔离的雌花序上，喷施处理7d后取下纸袋，统计坐果率。
27.对比例1
28.一种提高皂荚坐果率的方法，包括以下步骤：
29.(1)花粉采集及预处理：清晨用镊子采集皂荚雄花花序上刚开放的花朵，此时花朵刚刚开放，花冠展开，露出花药，花药为嫩黄尚未开裂散粉；花朵带回实验室后，用镊子取下花药，随后将收集的未开裂的花药自然干燥至花药开裂露出花粉；
30.(2)花粉的常温保存：将干燥好的花药包裹好，置于室温下贮藏备用；
31.(3)花粉液的配制：保存后的花粉用蒸馏水制成浓度为500粒/ul的花粉悬浮液，混匀后的花粉液用滤网过滤花药残渣后，即为待用花粉液；
32.(4)授粉及坐果率统计：将花粉液均匀喷洒在预先套袋隔离的雌花序上，喷施处理7d后取下纸袋，统计坐果率。
33.对比例2
34.一种带花药保存的皂荚花粉保存及应用方法，包括以下步骤：
35.(1)花粉采集及预处理：清晨用镊子采集皂荚雄花花序上刚开放的花朵，此时花朵刚刚开放，花冠展开，露出花药，花药为嫩黄尚未开裂散粉；花朵带回实验室后，用镊子取下花药，随后将收集的未开裂的花药自然干燥至花药开裂露出花粉；
36.(2)花粉干燥：新鲜花药用硅胶快速干燥至含水量9％；
37.(3)花粉冷藏保存：干燥处理后的花药包置于4℃下预冷2h，最后转移到-80℃保存；
38.(4)花粉液的配制：将解冻后花粉加入蒸馏水中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣；用1％的mtt染法检测花粉活力，并据此将过滤后花粉液中活力花粉的浓度调配成500粒/ul，即为备用花粉液。
39.(5)授粉及坐果率统计：将花粉液均匀喷洒在预先套袋隔离的雌花序上，喷施处理7d后取下纸袋，统计坐果率。
40.实施结果如下表所示：
41.表1皂荚花粉保存与使用效果
[0042][0043]
对比例1中，未进行冷藏保存的皂荚花粉室温下放置30d后，mtt法测得的花粉活力为0；液体花粉喷施授粉后，坐果率全部为零。
[0044]
对比例2中，干燥后的花粉进行冷藏保存30d后，mtt法测得的花粉活力为41.3％，说明该方法可以提高花粉活力；用蒸馏水配制花粉悬浮液时，发现冷藏后的花粉管易破裂，喷施处理后皂荚坐果率并不高于自然授粉状态下的坐果率。说明冷藏后的花粉直接用蒸馏水配制的花粉液可能不利于坐果。
[0045]
实施例1在对比例2基础上，用花粉提取液代替蒸馏水配制花粉液，该提取液可减少花粉在萌发过程中的花粉管破裂问题；进行液体授粉可以较自然授粉提高皂荚坐果率。
[0046]
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

技术特征：

1.一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：包括以下步骤：花粉采集及预处理：采集刚开放尚未散粉的皂荚雄花序，带回室内用工具取下花药；花粉干燥：新鲜花药干燥至含水量为8-12%；花粉冷藏保存：干燥处理后的花药进行防潮包裹后置于2~6℃下预冷1~3h，再转移到-90℃~-70℃长期保存；花粉液的配制：使用时取出花药包，先在2~6℃下放置1~2h使其逐渐解冻；待其温度升至室温后，将其放入制备好的花粉提取液中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣；检测花粉活力，并据此将滤液中的活力花粉浓度调配成400-600粒/ul左右，即为授粉花粉液；花粉提取液用纯净水配制，花粉提取液中含有10~15%蔗糖+0.1%硼酸+0.3%cacl+0.04% 黄原胶；授粉及坐果率统计：将花粉液均匀喷洒在预先套袋隔离的雌花序上，喷施处理7d后取下纸袋，统计坐果率。2.根据权利要求1所述的一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，新鲜花药干燥后的含水量为9%。3.根据权利要求1所述的一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，干燥处理后的花药进行防潮包裹后置于4℃下预冷2h，再转移到-80℃保存。4.根据权利要求1所述的一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，使用时取出花药包，4℃下放置1h使其逐渐解冻。5.根据权利要求1所述的一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，花粉提取液中含有12%蔗糖+0.1%硼酸+0.3%cacl+0.04% 黄原胶。6.根据权利要求1所述的一种提高皂荚坐果率的方法，其特征在于：所述步骤（5）中，玻璃棒搅拌至花粉脱离花药后过滤掉花药残渣；检测花粉活力，并据此将滤液中的活力花粉浓度调配成500粒/ul左右，即为授粉花粉液。

技术总结

本发明公开了一种提高皂荚坐果率的方法，属于植物育种技术领域。本发明以刚开放皂荚雄花的花药为保存材料，硅胶快速干燥处理降低花药含水量至9%，逐渐降温后于-80℃中冷藏保存。使用时取出逐渐升温至室温后，置于花粉提取液中制备授粉花粉液，在皂荚花序小花开放时将授粉花粉液均匀喷洒在雌花上，进行液体授粉，利用该方法保存的花粉活力较新鲜花粉活力略有下降，较自然授粉提高了坐果率；本发明将皂荚的花粉收集、保存、应用三个环节有机衔接，简便易行，可应用于皂荚杂交育种和种植园辅助授粉工作。工作。工作。