eIF4E抑制剂与PARP抑制剂药物联合在制备肺癌药物中的用途

eif4e抑制剂与parp抑制剂药物联合在制备肺癌药物中的用途
技术领域
1.本公开属于医药领域，涉及eif4e抑制剂与parp抑制剂类药物联合在制备肺癌药物中的用途。

背景技术：

2.恶性肿瘤严重威胁着人类健康，近年来肺癌的发病率和死亡率居高不下。肺癌患者的手段包括手术，放疗以及化疗等。对于早期肺癌患者，手术是最佳方案，但多数确诊时处于中晚期的肺癌患者丧失手术机会，化疗成为改善患者生存质量的重要手段。但目前常规化疗药物易产生耐药和副作用，因此增强传统化疗药物的抗癌活性并降低其不良反应具有重要的临床意义。
3.近年来，随着肿瘤生物学及“精准医疗”的飞速发展，针对肿瘤细胞内特定靶点的特异性抗肿瘤药物是新药研发的焦点。真核细胞翻译起始因子4e(eukaryotic initiation factor 4e，eif4e)也被称为帽结合蛋白，在调节真核细胞的翻译过程中起着极为关键的作用，成为肿瘤研究的重要靶标分子。2020年1月9日，effector therapeutics发布公告称，已与辉瑞签署独家许可合作协议，共同开发eif4e的小分子抑制剂(https://effector/)。说明eif4e是极具潜力的药物新靶点，正受到广泛关注。本发明中式(i)所示化合物为第一个开发的靶向抑制eif4e的小分子化合物，但由于其生物活性偏低，限制了其进一步应用。
4.聚adp核糖聚合酶(parp)抑制剂可靶向杀灭brca缺陷型的肿瘤细胞，使得parp抑制剂的研发成为热点。聚adp核糖聚合酶(parp)是一种dna修复酶，在dna损伤修复过程中起重要的作用。parp抑制剂通过阻断parp参与dna损伤修复，加重细胞dna损伤，最终导致细胞的死亡。奥拉帕利(olaparib)是第一个获批上市的parp抑制剂，用于晚期卵巢癌。尽管奥拉帕尼卵巢癌取得一定进展，但其有着严格的适应症，即对brca缺陷型的患者疗效好，而对于无brca突变的人则难以受益。另一方面，parp抑制剂的耐药性同样限制了其应用。近年来越来越多的研究将parp抑制剂与其他化疗药物联合应用，以增加其应用范围，但至今未取得更好的疗效。
5.本发明首次公开了eif4e抑制剂与parp抑制剂类药物联合在肺癌中的用途。此药物组合可发挥协同抗肺癌作用，可通过诱导肺癌细胞dna损伤发挥协同增效作用。本发明为有效肺癌提供新的途径和手段，具有良好的应用前景。

技术实现要素：

6.为解决上述问题，本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的药物组合物，它包括a)eif4e抑制剂，和b)parp抑制剂类药物。
7.在某些实施方案中，本公开中所述的eif4e抑制剂选自eif4e-in-3、eif4e-in-2、eif4e-in-1、4e2rcat、tomivosertib和式(i)所示化合物或其可药用盐中的一种或多种，优
选式(i)所示化合物或其可药用盐，
8.本在某些实施方案中，本公开中所述的parp类药物有奥拉帕利(olaparib)、尼拉帕利(niraparib)、他拉唑帕尼(talzenna/talazoparib)、氟唑帕利(fluzoparib)、帕米帕利(pamiparib)和pj34，优选所述奥拉帕利。
9.在某些实施方式中，所述肺癌选自非小细胞肺癌和小细胞肺癌。优选非小细胞肺癌。
10.进一步，药物组合物还包括药用辅料。
11.所述药用辅料选自稀释剂、矫味剂、润滑剂、助流剂、以及任选的崩解剂和粘合剂中的一种或多种。
12.进一步，eif4e抑制剂(i)与parp抑制剂重量比为1:0.05～1。优选的，eif4e抑制剂与parp抑制剂重量比为1:0.1～1:0.5；更优选的，eif4e抑制剂与parp抑制剂重量比为1:0.25。
13.eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.05～1，优选的，eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.1～1:0.5；更优选的，eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.25。
14.本发明的目的在于提供上述药物组合物在制备肿瘤药物中的应用。
15.本公开所述的方案中，所述的联合任选的还包含其他组分，所述其他组分包括但不限于其他抗肿瘤药等。
16.本发明具有抗肿瘤作用的药物组合物，将eif4e抑制剂和parp抑制剂类药物联合用药，可调控机体免疫应答，诱导细胞dna损伤，达到协同增效的作用。最终，本发明的联合用药物效果显著优于eif4e抑制剂或parp抑制剂类药物的药物任意一种单独使用，具有临床推广价值。
附图说明
17.图1单药或联合用药对a549细胞dna损伤的影响
18.图2单药或联合用药对a549细胞凋亡的影响
具体实施方式
19.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
20.实施例1：体外mtt法检测eif4e抑制剂(i)联合奥拉帕利对肺癌细胞的抑制作用及药物联合作用的评价
21.1、材料
22.药品：奥拉帕利(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，eif4e抑制剂(i)(上海阿拉
丁生化科技股份有限公司)。
23.细胞株：a549细胞(人非小细胞肺癌)
24.2、实验方法
25.2.1单药及联合用药mtt实验
26.将对数生长期的a549细胞用质量分数为0.25％的胰蛋白酶消化离心，重悬后将细胞接种于96孔板，每孔3000个细胞，并放置于37℃，含5％co2的细胞培养箱中培养过夜。第二天进行分组给药(如表1)，作用时间为48小时。给药结束后每孔加入5mg/ml的mtt溶液20μl，继续孵育4h后吸弃上清液，每孔加入150μl的dmso，震荡10分钟后与酶标仪检测490nm处的吸光值并计算抑制率。
[0027][0028]
表1不同药物的浓度及组合(μg/ml)表1不同药物的浓度及组合(μg/ml)
[0029]
2.2药物联合作用的评价
[0030]
两药合并指数q＝e(a+b)/(ea+eb-ea
×
eb)计算，其中e(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，ea和eb为两药单用时的抑制率，分母(ea+eb-ea
×
eb)为期望合并效应，q为两者比值。q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，q值在1.15～20时为协同(++)，q值＞20为明显协同(+++)，q值在0.05～0.85时为拮抗，q值＜0.05为明显拮抗。
[0031]
3、实验结果
[0032]
对上述实验结果按照联合用药指数法进行分析后，算得联合用药的联合用药的q值，结果如表2
[0033]
表2不同浓度的eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合作用于a549细胞的联合指数
[0034]
由表2可以看出：不同浓度eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合作用于a549细胞，其联合用药的q值均在1.15至20之间，尤其是当eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为4:1时表现出强烈协同作用(q＞20)。表明eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合在抑制a549细胞增殖上表
现为协同作用。
[0035]
实施例2：eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合用药对a549细胞dna损伤的影响
[0036]
1、材料同实施例1
[0037]
2、细胞株同实施例1
[0038]
3、实验方法：
[0039]
将对数生长期的a549细胞用质量分数为0.25％的胰蛋白酶消化离心，重悬后将细胞接种于12孔板，每孔10000个细胞，并放置于37℃，含5％co2的细胞培养箱中培养过夜。药物分为四组：空白组、eif4e抑制剂(i)组、奥拉帕利组、eif4e抑制剂(i)组+奥拉帕利组。作用48小时后吸弃培养基，每孔加入1ml的4％多聚甲醛固定10分钟。用pbs洗涤3次后加入质量分数为5％的脱脂奶粉封闭1小时，pbs洗涤3次。加入γh2ax抗体在4℃下孵育过夜，pbs洗涤3次。加入荧光标记的二抗，室温下孵育1小时，pbs洗涤3次。加入dapi染细胞核5分钟，pbs洗涤3次。与荧光显微镜下观察并拍照。
[0040]
4、实验结果
[0041]
免疫荧光结果如图1所示，单独的eif4e抑制剂(i)组或奥拉帕利组诱导a549细胞产生微弱的荧光，表明两者单独用药并未诱导a549细胞产生显著的dna损伤。eif4e抑制剂(i)组+奥拉帕利联合用药组观察到显著的γh2ax荧光，证明了eif4e抑制剂(i)组+奥拉帕利联合用药诱导a549细胞发生显著的dna损伤。
[0042]
实施例3eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合用药对a549细胞凋亡的影响
[0043]
1、材料同实施例1
[0044]
2、细胞株同实施例1
[0045]
3、实验方法：将对数生长期的a549细胞用质量分数为0.25％的胰蛋白酶消化离心，重悬后将细胞接种于12孔板，每孔10000个细胞，并放置于37℃，含5％co2的细胞培养箱中培养过夜。药物分为四组：空白组、eif4e抑制剂(i)组、奥拉帕利组、eif4e抑制剂(i)组+奥拉帕利组。作用结束后细胞用不含edta的胰酶消化，pbs洗涤三次，收集1～5
×
105细胞，加入500μl的binding buffer悬浮细胞成细胞悬液后加入5μl annexin v-fitc和5μl propidium iodide，混匀后室温避光反应15min，于流式细胞仪进行检测。
[0046]
4、实验结果
[0047]
结果如图2所示，与空白组相比，单独eif4e抑制剂(i)或奥拉帕利可诱导a549细胞发生凋亡，但抑制率分别为17.25％和19.19％。eif4e抑制剂(i)+奥拉帕利联合用药可显著诱导a549发生凋亡，凋亡率达到69.98％。
[0048]
实施例4：eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合用药对人肺癌a549荷瘤裸小鼠皮下移植瘤的药效作用研究
[0049]
1、受试药物如实施例1
[0050]
2、药物配制：配制方法：eif4e抑制剂(i)和奥拉帕利均用0.5％羧甲基纤维素(cmc)+1％吐温80溶液配制。
[0051]
3、实验动物：balb/c裸小鼠，6-8周龄，雌性。
[0052]
4、实验步骤：取对数生长期的a549细胞，0.25％胰蛋白酶消化离心后用无血清dmem高糖培养基重悬，细胞浓度调整为1
×
107/ml。细胞悬液接种于裸鼠右前肢腋下(200μ
l/只)，待肿瘤大小平均接近100-150mm3后开始分组给药，每3天测量小鼠肿瘤长度(a)和宽度(b)。给药方法按照表1的实验方案进行，共计给药21天。给药结束后，小鼠安乐死，称体重并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率(结果见表3)。
[0053]
肿瘤体积(v)计算公式为：
[0054]
v＝1/2
×a×
b2，其中a代表肿瘤长度，b代表肿瘤宽度。
[0055]
计算抑瘤率：抑瘤率(％)＝(1-(组瘤体积/对照组瘤体积))
×
100。
[0056]
体重：每3天记录小鼠体重，计算小鼠体重变化(w
21-w0)，w
21
代表处死前体重，w0代表第一次给药前体重。
[0057]
表3体内实验方案组别小鼠数量方案剂量给药方式180.5％cmc+1％吐温802ml/kg/次p.o.28parp抑制剂(i)50mg/kgp.o.38parp抑制剂(i)100mg/kgp.o.48parp抑制剂(i)200mg/kgp.o.58奥拉帕利25mg/kgp.o.68parp抑制剂(i)+奥拉帕利2组+5组方案p.o.78parp抑制剂(i)+奥拉帕利3组+5组方案p.o.88parp抑制剂(i)+奥拉帕利4组+5组方案p.o.
[0058]
备注：p.o.为口服给药
[0059]
两药合并指数q＝e(a+b)/(ea+eb-ea
×
eb)，其中e(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，ea和eb为两药单用时的抑制率，分母(ea+eb-ea
×
eb)为期望合并效应，q为两者比值。q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，q值在1.15～20时为协同(++)，q值＞20为明显协同(+++)，q值在0.05～0.85时为拮抗，q值＜0.05为明显拮抗。
[0060]
实验结果见表4。包括平均值和平均值的标准误差(sem)，组间肿瘤体积的差异统计分析和在最后一次给药(分组后的第42天)后在最佳时间点进行的药物相互作用所获得的数据分析
[0061]
表4本发明中药物/药物组合对肺癌a549移植瘤生长抑制作用中药物/药物组合对肺癌a549移植瘤生长抑制作用
[0062]
注：*p《0.05,**p《0.01与组1相比
[0063]
结果显示，本发明所公布的药物组合对于肺癌a549小鼠移植瘤具有显著的作用，给药21天后，二者联合肿瘤抑制率达到86.5％。本发明中eif4e抑制剂(i)最高剂量对a549移植瘤的抑制率为44.31％，奥拉帕利的抑瘤率仅为20.55％。eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利联合q值均大于1.5，表明联合用药具有协同增效的效果，尤其是当eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为4:1是协同效果最佳。小鼠体重的变化显示，联合给药组小鼠体重未见减轻，提示联合用药的安全性。
[0064]
综上实验证实，本发明所公开的eif4e抑制剂(i)与parp抑制剂类药物如奥拉帕利联合可有效抑制小鼠肺癌移植瘤的生长，且具有显著协同增效作用。以上实验均证实本发明的药物组合具有抗肿瘤活性高、安全性高的优点。

技术特征：

1.eif4e抑制剂与parp抑制剂类药物联合在制备预防或肺癌的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的eif4e抑制剂选自eif4e-in-3、eif4e-in-2、eif4e-in-1、4e2rcat、tomivosertib和式(i)所示化合物或其可药用盐中的一种或多种，优选式(i)所示化合物或其可药用盐，3.根据权利要求1所述的用途，其中所述肺癌选自非小细胞肺癌和小细胞肺癌，优选非小细胞肺癌。4.根据权利要求1所述的用途，还包括eif4e抑制剂与parp抑制剂药物或其可药用盐联合在制备预防或肺癌的药物中的用途，parp抑制剂类药物有奥拉帕利(olaparib)、尼拉帕利(niraparib)、他拉唑帕尼(talzenna/talazoparib)、氟唑帕利(fluzoparib)、帕米帕利(pamiparib)和pj34，优选所述奥拉帕利。5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，eif4e抑制剂(i)与parp抑制剂重量比为1:0.05～1。优选的，eif4e抑制剂与parp抑制剂重量比为1:0.1～1:0.5；更优选的，eif4e抑制剂与parp抑制剂重量比为1:0.25。6.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.05～1，优选的，eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.1～1:0.5；更优选的，eif4e抑制剂(i)与奥拉帕利重量比为1:0.25。7.药物组合物，其包eif4e抑制剂与parp抑制剂类药物，以及一种或多种药用载体、赋形剂、稀释剂。8.根据权利要求7的药物组合物制剂，所述药物制剂为口服制剂。

技术总结

本发明涉及一种药物组合在制备肿瘤药物中的用途。具体而言，eIF4E抑制剂选自式(I)所示化合物或其可药用盐。与单药相比，eIF4E抑制剂与PARP抑制剂联合进一步增强了抗肿瘤效果，可用于有效杀伤肺癌等肿瘤细胞。本发明发现eIF4E抑制剂与PARP抑制剂联用可诱导细胞DNA损伤，诱发细胞凋亡。本发明首次证实了eIF4E抑制剂联合PARP抑制剂在制备抗肿瘤药物中的增敏作用，证实了其作为增敏剂在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、胶质瘤等癌症中的增效作用，并具有副作用小的优点。本发明为有效肺癌提供新的途径和手段，具有良好的应用前景。的应用前景。的应用前景。