6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮在诱捕南方根结线虫中的应用

1.本发明涉及南方根结线虫的防治领域，特别涉及6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮在诱捕南方根结线虫中的应用。

背景技术：

2.植物寄生线虫对世界范围内的多种作物造成严重损害，目前已经在农业生产中上升为第二大病害，仅次于真菌病害。其中，根结线虫(meloidogyne spp.)分布于世界各地的热带、亚热带和温带地区，是造成作物减产最严重的植物寄生线虫。据估计，植物寄生线虫造成的经济损失每年超过1000亿美元，其中一半以上是由根结线虫引起的。在根结线虫属中，南方根结线虫(meloidogyne incognita)是最具破坏性的线虫，它的寄主范围广泛，包括大多数农作物和开花植物，而且它的世代时间短、繁殖率高，并且能够与其他土壤传播的病原体形成复合病害。南方根结线虫可以感染3000多种植物的根部，并以蠕虫状的二龄期幼虫(j2)穿透根尖。随后，根结线虫静止不动并在植物根部形成多核巨细胞，从中吸收水分和养分，进而影响农作物生长发育。
3.一直以来，化学杀线虫剂仍然是最为常用的防治手段。尽管化学防治能减少南方根结线虫的侵染和发生，但是对环境有很大的副作用，化学农药的残留也严重影响到农产品品质和人体健康，因此，采用环境友好型的控制方法十分必要。
4.玉米在生长发育过程中会向环境释放多种根系分泌物，包括分泌到根际的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮(即，6-甲氧基-2-苯恶唑啉酮，cas no.：532-91-2)，植物的根系分泌物会对土壤中的生物产生直接或间接的影响。
5.已有研究证实，6-甲氧基-2-苯恶唑啉酮是引起玉米胚芽鞘向光性运动的主要物质。

技术实现要素：

6.本发明要解决的技术问题是提供一种6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮(即，6-甲氧基-2-苯恶唑啉酮，cas no.：532-91-2)的用途
‑‑‑‑
用于诱捕南方根结线虫。
7.为解决上述技术问题，本发明提供一种6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮在诱捕南方根结线虫上的应用。
8.作为本发明应用的改进：6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮先溶于甲醇配制成母液，再用无菌水稀释成工作液，所述工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为1000
±
100μg/l；所述工作液为南方根结线虫的引诱剂。
9.具体为：将20mg 6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的标准品溶于1ml甲醇配成母液，然后用无菌水稀释成1000
±
100μg/l的工作液。
10.作为本发明应用的进一步改进：工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为1000μg/l。
11.作为本发明应用的进一步改进：当工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为
1000μg/l时，根系浸泡于工作液或根际回补工作液后植物对南方根结线虫表现出更强的吸引作用，而且入侵植物根部的线虫数量更多，可以作为南方根结线虫引诱剂。
12.本发明具体为：用1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浸泡玉米根系后，根系对南方根结线虫具有显著吸引作用；将1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮施加于玉米根际后，南方根结线虫对植株表现出强烈的趋向作用，并显著提高南方根结线虫对植物的入侵。
13.6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮作为玉米的一种根系分泌物，在土壤中稳定存在，是一种有效的信号物质，本发明利用它来诱捕根结线虫。总的来说，通过植物根系分泌物进行南方根结线虫无公害防治具有较好的应用价值和广阔的前景。
14.本发明中使用的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮属于植物根系分泌物的组成成分，对人畜及环境无害，在诱捕南方根结线虫方面表现出优异的潜能，在线虫引诱剂的开发方面具有广阔的前景。
15.本发明中，发现6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮作为一种信号物质可以调控南方根结线虫的趋向性行为，该物质安全稳定，对人畜及环境无害，这为南方根结线虫无公害防治提供了新思路。
附图说明
16.下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
17.图1在培养皿中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮处理对南方根结线虫趋化行为的影响；
18.图1中，(a)为所用装置，(b)为统计结果。
19.图2在盆栽中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮处理对南方根结线虫趋化行为的影响；
20.图2中，(a)为所用装置，(b)为统计结果。
21.图3为6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮回补玉米根际后对南方根结线虫入侵的影响；
22.图3中，(a)为所用装置，(b)为统计结果。
具体实施方式
23.下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
24.实施例1：试验材料的准备
25.1.制备6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮母液及工作液
26.本发明中所用的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮(cas:532-91-2)购买自北京索莱宝科技有限公司，谱级甲醇(cas:67-56-1)购买自sigma-aldrich公司。将20mg 6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的标准品溶于1ml甲醇配成母液，然后用无菌水稀释成1000μg/l的工作液。
27.2.玉米及南方根结线虫材料
28.试验所用玉米为6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮分泌缺陷型玉米(bx1)，其根系分泌物中几乎不含6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮。
29.南方根结线虫采自浙江大学西区温室。将根结线虫发病玉米的根系取出，用水冲
洗并在1％的次氯酸钠中消毒1min，再用无菌水冲洗3次，放在含有少量无菌水的培养皿中，在25℃恒温箱中培养，3天后收集孵化的根结线虫二龄幼虫，无菌水悬浮后用于试验研究。
30.实施例2：6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的诱捕南方根结线虫效果
31.1.试验方法
32.(1)趋化性实验：
33.(1.1)、培养皿试验：
34.如图1a所示，准备1％的灭菌琼脂糖培养皿，距9cm平板边缘2cm处分别做标记；将截取下来的bx1玉米根系0.5g分别浸泡在1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮10ml或无菌水10ml中，浸泡时间均为10分钟；浸泡后的玉米根系分别放在培养皿的标记点上，在两个标记点中间加入大约80只南方根结线虫，放入25℃黑暗恒温培养箱，3小时后统计两侧玉米根系周围相同范围内(大约0.5cm)南方根结线虫的数量，用来判断6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浸泡根部后对南方根结线虫趋化行为的影响，每个处理10个重复。
35.(1.2)、盆栽试验：
36.如图2a所示，准备两个大小一致的黑塑料花盆并装入灭菌沙子(每个花盆装400g的灭菌沙子)，用一根黑吸管连接两侧花盆，两个盆中分别种植一株bx1玉米。10天后，在左侧玉米根际周围添加2ml 1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮，右侧添加等量无菌水，随后在吸管中间接种1000只二龄期南方根结线虫悬浮液，24小时后收集两侧花盆中的沙子，通过贝曼漏斗收集南方根结线虫并在显微镜下计数，用来判断6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮回补根际后对南方根结线虫趋化行为的影响，每个处理10个重复。
37.(2)入侵效率实验：准备两个大小一致的黑塑料花盆并装入灭菌沙子(每个花盆装400g的灭菌沙子)，两个盆中分别种植一株bx1玉米。10天后，在一盆玉米根际周围添加2ml1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮，另一盆添加等量无菌水，随后两个盆中的玉米分别通过移液接种1500只二龄期南方根结线虫悬浮液，装置如图3a。3天后收获玉米植株，通过反复冻融法收集入侵玉米根部的南方根结线虫并在显微镜下计数，用来判断在盆栽中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮回补对南方根结线虫入侵的影响，每个处理10个重复。
38.2.试验结果
39.在培养皿及盆栽中分别测定6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浸泡根系或回补根际后植物对南方根结线虫的吸引作用(线虫做出趋化选择的数量)，在盆栽中测定6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮添加到玉米根际后对南方根结线虫入侵效率的影响。
40.说明：培养皿试验中，部分南方根结线虫未体现趋化行为，即，仍然处于培养皿中心位置，因为此部分南方根结线虫对应的数据未在图1b中体现；
41.同理，盆栽试验中，部分南方根结线虫未体现趋化行为，即，仍然处于黑吸管中，因为此部分南方根结线虫对应的数据未在图2b中体现；
42.同理，入侵效率试验中，部分南方根结线虫未体现入侵行为，即，仍然处于盆中，因为此部分南方根结线虫对应的数据未在图3b中体现；
43.图1b以及图2b可说明，6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮处理后植物对南方根结线虫具有较好的吸引作用。
44.在培养皿试验中，两侧玉米根系附近线虫的数量存在差别，根结线虫更多的趋向于浸泡过6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的bx1根，相较于对照侧数量提高了16％(图1b)。在盆
栽试验中，移动到两侧沙子的线虫数量存在显著差异，根结线虫更多的趋向于补充了6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的bx1盆栽侧，相较于对照侧数量增加了91％(图2b)。表明6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮处理后植物对南方根结线虫具有较好的吸引作用，可以作为线虫诱捕剂。
45.图3b可说明，6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮添加到玉米根际后南方根结线虫入侵效率更高。
46.在入侵效率试验中，bx1玉米根际添加了1000μg/l的6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮后，南方根结线虫在接种3天后入侵玉米根部的数量显著上升，相较于对照侧数量增加了18％。表明6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮的补充增强了南方根结线虫对植物的侵染。
47.根据上述特性能在农业生产中诱捕南方根结线虫。
48.最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

技术特征：

1.6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮在诱捕南方根结线虫上的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮先溶于甲醇配制成母液，再用无菌水稀释成工作液，所述工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为1000
±
100μg/l；所述工作液为南方根结线虫的引诱剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为1000μg/l。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：当工作液中6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮浓度为1000μg/l时，根系浸泡于工作液或根际回补工作液后植物对南方根结线虫表现出更强的吸引作用，而且入侵植物根部的线虫数量更多，可以作为南方根结线虫引诱剂。

技术总结

本发明涉及南方根结线虫的防治领域，特别涉及6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮在诱捕南方根结线虫中的应用。本发明中发现6-甲氧基-苯并恶唑啉-2-酮作为一种信号物质可以调控南方根结线虫的趋向性行为，该物质安全稳定，对人畜及环境无害，这为南方根结线虫无公害防治提供了新思路。了新思路。了新思路。

技术研发人员：

胡凌飞 吴圳玮 张凯迪 郑晓璇 徐建明

受保护的技术使用者：

浙江大学

技术研发日：

2022.11.02

技术公布日：

2023/1/31