朱林强;陈晞明;周永焯;谢晓明;赖洪珍;吕敏仪;张银霞;陈盛强;许卫;伍金雷
【摘 要】目的：采用腹主动脉部分缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭模型，评价慢性心力衰竭建模效果。方法将大鼠随机分为A、B两组，各24只。 A组行腹主动脉部分缩窄术，B组仅分离腹主动脉而不缩窄，术后每日观察大鼠的精神状态及体重等一般情况的变化。分别于术后第4周、第8周末行超声心动图检查，以评价大鼠的心功能改变，并于第8周末取心脏组织进行HE染、马松染观察心肌组织结构改变及心肌纤维化改变。结果术后1周A组大鼠存活18只，死亡6只，存活率为75％，B组全部存活；建模四周后A组大鼠出现毛发稀疏、蓬松、干燥无光泽，活动力降低，呼吸频率加快，体重增长缓慢等变化，而且这些变化随建模时间增长而愈加明显，到8周时出现明显心力衰竭体征；建模4周后心动图检查结果：A组大鼠心脏收缩末期左室后壁厚度（LVPWs）、舒张末期左室后壁厚度（LVPWd）、收缩期室间隔厚度（IVSs）、舒张末期室间隔厚度（IVSd）均增加，其差异有统计学意义（p＜0.05），左心射血分数（LVEF）有下降趋势但无统计学意义（p＞0.05）；建模8周后A组大鼠LVPWs（0.297±0.020 vs 0.374±0.023）、p＜0.05，LVPWd（0.192±0.009 vs 0.290±0.028）mm、p＜0.05，IVSs （0.311±0.008 vs 0.364±0.012）mm、p＜0.05，IVSd（0.187±0.008 vs 0.225±0.023）mm、p＜0.05，LVEF（86.586±1.452 vs 60.630±2.716）mm、p＜0.05，均差异明显（p＜0.05）；HE染结果和马松染结果显示A组大鼠心肌细胞体积增大、数量减少、细胞排列紊乱、间隙增宽、细胞核浓染增大、染不均、心肌肌节增多、肌纤维间质胶原纤维增生。结论腹主动脉部分缩窄术可在8周时间成功建立大鼠慢性心力衰竭模型，且稳定性高，重复性好，是研究慢性心力衰竭的理想建模方法。
【期刊名称】《现代医院》
【年(卷),期】2015(000)010
【总页数】4页(P21-24)
【关键词】腹主动脉缩窄术;SD大鼠;慢性心力衰竭
【作 者】朱林强;陈晞明;周永焯;谢晓明;赖洪珍;吕敏仪;张银霞;陈盛强;许卫;伍金雷
【作者单位】广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学附属第三医院 广
东广州510000;广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学金域检验学院 广东广州 510000;广州医科大学附属第二医院 广东广州 510000;广州医科大学附属第三医院 广东广州510000;广州医科大学附属第三医院 广东广州510000
【正文语种】中 文
慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是多种心血管疾病的最终归宿，严重影响着患者的生活质量和健康水平，它给家庭和社会带来了沉重的经济负担和精神痛苦，CHF 现已成为全世界严重的公共卫生问题［1］。因CHF 相关实验研究不能直接在病人身上进行，故CHF 动物模型越来越广泛的被应用于实验研究中。所以建立一种稳定、可靠的动物心衰模型对进一步研究该类疾病有重要意义。现今众多CHF 模型建立方法中，腹主动脉缩窄术因经济、实用、操作简单而成为CHF 实验研究的常用模型。本组参照Anned 等［2］腹主动脉缩窄术制备大鼠压力超负荷性慢性心力衰竭模型［3］，从建模步骤、超声心动图结果、心脏病理结构等方面评价此方法的可行性，并就如何建立稳定可靠的大鼠心力衰竭模型步骤展开讨论。
1 材料和方法
1.1 实验动物
八周龄健康雄性SD 大鼠共48 只，购于广东省医学实验动物中心(SPF 级，动物编号:SCXK(粤)2013 -0002)，于广州医科大学医学实验动物中心适应性饲养两天(清洁级)，体重220 ～270 g。随机分为A、B 两组(A 组24 只，为模型组;B组24 只，为对照组)。所有实验动物以标准大鼠饲料饲养，自由摄食饮水，温度23 ～25 ℃，湿度55% ～70%。
1.2 实验步骤
1.2.1 术前准备
1.2.1.1 术前8 小时禁食，自由饮水。
1.2.1.2 保持实验室室温为25 ～30 ℃，术中使用落地手术灯为手术提供光源，同时利于维持大鼠正常体温。
1.2.2 详细操作
1.2.2.1 大鼠用10%水合氯醛(0.35 ml/100 g)腹腔注射麻醉，仰卧位，固定四肢，腹部手术区备皮，消毒，并铺一次性无菌纱布。
1.2.2.2 于剑突下2 ～3 cm，腹正中切口，沿腹白线逐层切开皮肤及肌肉至剑突，暴露腹腔。
1.2.2.3 用手指在大鼠左侧背部向腹腔轻推，将胃体、脾脏一并挤出，外翻置于生理盐水湿润的纱布之上，固定，随后用脱脂棉球将左侧肝脏向上轻推，充分暴露腹膜以及左侧肾脏。
1.2.2.4 视野可见明显的左肾静脉，于肾静脉水平沿腹主动脉上1.5 ～2 cm 处可用手指触及明显搏动感，用两只弯镊在此轻缓钝性分离，剥离腹主动脉血管鞘，分离腹主动脉，随之在其下穿过长约8 cm 的4 ～0 手术缝线(术前置于生理盐水中湿润)，留置备用。
1.2.2.5 将磨钝的7 号针头与腹主动脉平行紧贴血管放置，用留置的4 ～0 手术缝线将腹主动脉与7 号针头一起结扎，结扎后马上可触及结扎处下方动脉脉搏明显减弱、左肾缺血变白(见图1)，迅速提起两边缝线同时轻柔的抽出针头，剪去过长的缝线。
图1 腹主动脉缩窄前后肾的血供对比蓝箭头所指即为肾脏，图A:结扎前肾红润，图B:结扎后肾苍白
1.2.2.6 检查大鼠腹腔内无残留纱布、棉球后，将胃体、脾等小心放回腹腔复位，逐层缝合肌肉和皮肤，消毒。
1.2.2.7 空白对照组大鼠按手术操作分离腹主动脉并穿线，但不做缩窄处理，缝合，消毒。
1.2.2.8 全部大鼠于术后肌注50 000 U/只青霉素抗感染，连续注射3 天。术后密切观察并记录大鼠生存情况、体重以及精神状态、呼吸，饮水饮食、毛、活动力等临床表现。
1.3 大鼠彩超声心动图检查
大鼠造模后4 周、8 周各行一次，10% 水合氯醛(0.35 ml/100 g)腹腔注射麻醉后取仰卧位固定大鼠，备皮，运用超声诊断仪，胸骨旁左室长轴切面及腹主动脉长轴切面，检测大鼠:LVPWs，LVPWd，IVSs，IVSd，LVEF。
1.4 大鼠灌注固定取心脏组织，制石蜡切片，行HE 染、马松染
大鼠建模8 周后，用10%水合氯醛麻醉，仰卧位固定，开胸腔暴露心脏，灌注针头从心尖进入，固定在升主动脉，剪开右心耳，4 ℃生理盐水灌流3 min，再用4℃多聚甲醛灌注固定40 min，固定完毕取大鼠心脏送病理科做石蜡切片，常规HE 染、马松染。
1.5 统计学处理
所有实验数据以均值±标准差(±s)表示，采用SPSS 19.0 统计软件进行分析，组间计算采用两独立样本T 检验，以p ＜0.05 有统计学意义，p ＜0.01 为统计学有显著差异。
2 结果
2.1 大鼠分组建模成功率及术后观察结果
建模后1 周共存活大鼠42 只，其中模型组大鼠成活18只，死亡6 只，成活率为75%，其中一只下肢活动不便，疑为缩窄动脉后下肢血流灌注不足所致，弃去不用;2 只死于术后，解剖未见明显感染，无腹腔积液;4 只死于术后72 h 围手术期，解剖未见异常，疑为手术应激［4］，对照组全部存活。
与对照组相比，模型组大鼠出现鼠毛蓬松、稀疏、干燥无光泽，活动力降低，呼吸频率加快，体重增长缓慢等表现，且上述表现随建模时间增长而愈加明显;到8 周时可出现呼吸急促、对外界刺激反应迟钝、尾巴紫绀和轻度水肿等心力衰竭体征，表明模型组大鼠心功能下降，全身组织血液灌注减少，有缺血缺氧症状。
2.2 建模4 周与8 周超声心动检查结果
建模4 周后A 组大鼠LVPWs、LVPWd、IVSs、IVSd 均增加(p ＜0.05)，LVEF 虽有下降趋势，但无统计学意义(p ＞0.05)，结果见表1，结果提示在建模4 周后大鼠已经出现心室肌肥厚的改变，但未达到心力衰竭。建模8 周后LVPWs(0.297 ± 0.020 vs 0.374 ± 0.023)mm、p ＜0.05，LVPWd(0.192 ±0.009 vs 0.290 ±0.028)mm、p ＜0.05，IVSs(0.311±0.008 vs 0.364 ±0.012)mm、p ＜0.05，IVSd(0.187 ±0.008 vs 0.225 ±0.023)、p ＜0.05，LVEF(86.586 ±1.452 vs 60.630±2.716)、p ＜0.05，此时差异更加明显，LVEF 出现统计学差异(p ＜0.05)，见表1，结果提示心脏逐渐失去代偿能力，转向心力衰竭;同时通过腹主动脉B 型超声超成像可见模型组大鼠腹主动脉缩窄明显，220 ～270 g 的大鼠使用7 号针头缩窄后腹主动脉缩窄可达60% ～70%;而对照组大鼠心脏结构、射血分数均正常。对照组大鼠未见异常，见图2。
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