在卵巢癌中表达的新抗原及其用途的制作方法

在卵巢癌中表达的新抗原及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年2月14日提交的标题“neoantigens expressed in ovarian cancer and their uses”的美国临时申请号62/976,384的优先权，该临时申请全文以引用方式并入。
3.序列表
4.本技术包含已经以ascii格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。该ascii副本创建于2021年1月22日，命名为jbi6238wopct1_sl.txt，大小为165,739字节。
技术领域
5.本公开涉及卵巢癌新抗原、编码所述卵巢癌新抗原的多核苷酸、载体、宿主细胞、包含所述新抗原的疫苗、结合所述卵巢癌新抗原的蛋白质类分子及制备和使用它们的方法。

背景技术：

6.卵巢癌是女性癌症相关死亡的第五大原因。女性在寿命期间得卵巢癌的风险为约1/78。美国癌症协会估计在2020年，在美国将存在约21,750例卵巢癌新病例和13,940例卵巢癌死亡。
7.卵巢癌由卵巢内部、附近或外层上的异常细胞的生长不受控制引起。去除癌性生长的手术是卵巢癌最常见的方法。手术程序可以包括经腹全子宫切除术、双侧输卵管-卵巢切除术、网膜切除术、所有腹膜表面的可视化和随机腹膜活检加腹膜清洗。在手术之后，辅助化学疗法在次优减灭术(残留疾病为1cm或更多)、晚期阶段或具有高复发风险的早期阶段的情况下是强制性的。从21世纪早期开始，铂-紫杉醇化学疗法的组合已经是辅助和一线环境中的护理标准。
8.尽管用组合铂-紫杉醇化学疗法的一线已经证实在患有晚期卵巢癌的患者中具有超过80％的应答率，但大多数患者最终会复发，其中中位无进展生存期为18个月。对基于铂的化学疗法的耐药性是与卵巢癌相关的总生存期差的主要原因。对二线药剂(诸如脂质体多柔比星、吉西他滨或拓扑替康)的应答率随着由于化疗耐药引起的每次后续复发而降低，导致五年总体存活率为30％-40％。
9.因此，仍然需要针对卵巢癌的疗法，所述卵巢癌包括复发性卵巢癌、难治性卵巢癌和/或铂类耐药卵巢癌。

技术实现要素：

10.本公开提供了一种分离的多肽，该分离的多肽包含以下的氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、
141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段。
11.本公开还提供了一种分离的异源多肽，该分离的异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405以及它们的片段。
12.本公开还提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包含以下的序列：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406，或它们的片段。
13.本公开还提供了包含编码本文所公开的多肽的多核苷酸的载体。
14.本公开还提供了包含本公开的载体的病毒或重组病毒。
15.本公开还提供了一种包含本公开的载体的自复制rna分子。
16.本公开还提供了包含本公开的载体或本公开的重组病毒或者用本公开的载体或本公开的重组病毒转导的细胞。
17.本公开还提供了一种包含本公开的多核苷酸的疫苗。
18.本公开还提供了一种包含本公开的多肽的疫苗。
19.本公开还提供了一种包含本公开的载体的疫苗。
20.本公开还提供了一种包含本公开的重组病毒的疫苗。
21.本公开还提供了一种包含本公开的自复制rna分子的疫苗。
22.本公开还提供了预防或受试者的卵巢癌的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本公开的一种或多种疫苗、本公开的一种或多种病毒或重组病毒或者本公开的一种或多种药物组合物。
23.本公开还提供了在受试者中诱导对seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405的一个或多个氨基酸序列的免疫应答的方法，该方法包括向受试者施用包含本公开的多核苷酸的本公开的一种或多种重组病毒，其中该重组病毒是ad26、gad20、mva，和/或施用编码本公开的多肽的自复制rna分子。
24.本公开还提供了一种或预防受试者的卵巢癌的方法，该方法包括
25.向受试者施用有效量的包含重组病毒的组合物和/或包含编码异源多肽的自复制rna分子的组合物，该异源多肽包括选自由以下项组成的组的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个、110个、111个、112个、113个、114个、115个、116个、117个、118个、119个、120个、121个、122个、123个、124个、125个、126个、127个、128个、129个、130个、131个、132个、133个、134个、135个、136个、137个、138个、139个、140个、141个、142个、143个、144个、145个、146个、147个、148个、149个、150个、151个、152个、153个、154个、155个、156个、157个、158个、159个、160个、161个、162个、163个、164个、165个、166个、167个、168个、169个、170个、171个、172个、173个、174个、175个、176个、177个、178个、179个、180个、181个、182个、183个、184个、185个、186个、187个、188个、189个、190个、191个、192个、193个、194个、195个、196个、197个、198个、199个、200个、201个、202个或203个多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、
113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405，以及它们的片段。在一些实施方案中，重组病毒是ad26、gad20或mva病毒。在一些实施方案中，施用包括一次或多次施用。
26.本公开还提供了一种或预防受试者的卵巢癌的方法，该方法包括向受试者施用：
27.包含编码第一异源多肽的第一异源多核苷酸的第一组合物，其中第一异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405，以及它们的片段；以及
28.包含编码第二异源多肽的第二异源多核苷酸的第二组合物，其中第二异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405，以及它们的片段；其中第一异源多肽和第二异源多肽具有不同的氨基酸序列。
29.本公开还提供了一种或预防受试者的卵巢癌的方法，该方法包括向受试者施用有效量的包含重组病毒的组合物和/或包含自复制rna分子的组合物，该自复制rna
分子编码选自由以下项组成的组的异源多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，以及它们的片段。
30.本公开还提供了将抗ctla-4抗体、抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体与包含本文所公开的多核苷酸、多肽、载体或病毒的任何组合物结合施用。
31.应当理解，除了具体列举的多肽及其片段之外，本发明的上述实施方案还涵盖还包含另外的多肽序列的多肽，包括不同于具体列举的那些多肽的一种或多种多肽。类似地，除了具体列举的多核苷酸及其片段之外，本发明的上述实施方案还涵盖还包含另外的多核苷酸序列的多核苷酸，包括不同于具体列举的那些多核苷酸的一种或多种多核苷酸。
附图说明
32.图1示出了由嵌合通读融合产生的基因融合体的草图。新抗原肽序列出现在断点接点处。
33.图2示出了由染体改变诸如dna易位产生的基因融合体的草图。
34.图3示出了具有可变5’或3’剪接位点、保留的内含子、排除的外显子或可变终止或插入的剪接变体的草图。
35.图4示出了用于鉴定剪接变体的方法的草图。
36.图5a、图5b、图5c和图5d示出了表示卵巢癌新抗原候选物的肿瘤限制表达的热图。这些抗原在源自健康供体的健康组织或免疫细胞中没有可检测到的表达。免疫细胞类型(前15行)源自三个健康供体(供体id：d001003103、d001000682和d001004622)。卵巢癌样品标记有“ov_ca”前缀。针对内源性对照基因rpl19的表达对原始ct值进行归一化。黑细胞在每个样品中表现出高表达(δct低于15)。
37.图6a、图6b、图6c和图6d示出了表示在对照样品(源自健康供体的组织和免疫细胞)和肿瘤样品两者中具有表达的卵巢癌新抗原候选物的热图。免疫细胞类型(前15行)源自三个健康供体(供体id：d001003103、d001000682和d001004622)。卵巢癌样品标记有“ov_ca”前缀。针对内源性对照基因rpl19的表达对原始ct值进行归一化。黑细胞在每个样品中表现出高表达(δct低于15)。
38.图7a和图7b示出了代表性点图，描绘了通过使用外源自体健康供体再刺激测定对新抗原的阳性免疫原性应答。通过估计cd4+和/或cd8+ t细胞体中的ifnγtnfα双阳性细胞来测量免疫原性应答。如果ifnγtnfα双阳性级分大于或等于最小频率》＝0.01％的未刺激细胞(dmso阴性对照)的三倍，则认为应答是阳性的。
39.图8示出了对基因融合相关新抗原具有阳性免疫原性应答(cd8+和/或cd4+ t细胞)的供体的数目。
40.图9a和图9b示出了对替代性剪接相关新抗原具有阳性免疫原性应答(cd8+和/或cd4+ t细胞)的供体的数目。
具体实施方式
41.定义
42.本说明书中所引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请均以引用方式并入本文，如同在本文中完整给出。
43.应当理解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案，并非旨在进行限制。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
44.虽然本文描述了示例性材料和方法，但与本文所述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于测试本公开的实践中。在描述和要求保护本公开时，将使用以下术语。
45.如本说明书和所附权利要求中所用，除非内容另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代。因此，例如，对“一个细胞”的提及包括两个或更多个细胞的组合等等。
46.过渡术语“包括”、“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”旨在暗示它们在专利用语中的公认含义；即，(i)“包括”与“包含”、“含有”或“其特征在于”同义，并且是包括端值在内或末端开放的，并且不排除附加的、未列出的要素或方法步骤；(ii)“由
……
组成”排除权利要求书未指定的任何要素、步骤或成分；以及(iii)“基本上由
……
组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤“以及本质上不影响受权利要求书保护的公开的基本及新颖特征的材料或步骤”。还提供了以短语“包括”(或其等同形式)描述的实施方案，如以“由
……
组成”和“基本上由
……
组成”独立描述的那些实施方案。
47.如本说明书和所附权利要求书中所用，短语“以及它们的片段”在附加到列表时包括相关列表的所有成员。列表可包括马库什组，使得例如短语“由肽a、b和c以及它们的片段组成的组”指定或列举包括a、b、c、a的片段、b的片段和c的片段的马库什组。
[0048]“分离的”是指已从产生分子的系统(诸如重组细胞)的其他组分中基本上分离和/或纯化出来的分子(诸如合成多核苷酸或多肽)的同质体，以及已经受至少一个纯化或分离步骤的蛋白质。“分离的”是指基本上不含其他细胞材料和/或化学物质的分子，并且涵盖分离至更高纯度(诸如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％纯度)的分子。
[0049]“多核苷酸”是指包含磷酸糖类主链共价连接的核苷酸链或其它等同共价化学物的合成分子。cdna是多核苷酸的典型示例。
[0050]“多肽”或“蛋白质”是指包含由肽键连接以形成多肽的至少两个氨基酸残基的分子。
[0051]“免疫原性片段”是指当该片段与mhc i类或mhc ii类分子复合时被细胞毒性t淋巴细胞、辅助性t淋巴细胞或b细胞识别的多肽。
[0052]“框内”是指第一多核苷酸中密码子的阅读框与第二多核苷酸中密码子的阅读框相同，这些阅读框连接在一起形成异源多核苷酸。框内异源多核苷酸编码由第一多核苷酸和第二多核苷酸两者编码的异源多肽。
[0053]“免疫原性”是指包含一种或多种免疫原性片段的多肽。
[0054]“异源”是指在自然界中彼此没有相同关系的两种或更多种多核苷酸或者两种或
更多种多肽。
[0055]“异源多核苷酸”是指编码如本文所述的两种或更多种新抗原的非天然存在的多核苷酸。
[0056]“异源多肽”是指包含如本文所述的两种或更多种新抗原多肽的非天然存在的多肽。
[0057]“非天然存在的”是指自然界中不存在的分子。
[0058]“载体”是指能够在生物系统内复制或可在这类系统之间移动的多核苷酸。载体多核苷酸通常含有诸如复制起点、聚腺苷酸化信号或选择标记的元件，其功能是促进这些多核苷酸在生物系统中的复制或保持。此类生物系统的示例可包括细胞、病毒、动物、植物和用能够复制载体的生物组分再造的生物系统。包含载体的多核苷酸可为dna或rna分子或这些分子的杂合分子。
[0059]“表达载体”是指可用于在生物系统或再造生物系统中以指导由存在于表达载体中的多核苷酸序列所编码的多肽进行翻译的载体。
[0060]“病毒载体”是指包含病毒来源的至少一种多核苷酸元件并且具有被包装到病毒载体颗粒中的能力的载体构建体。
[0061]“新抗原”是指存在于卵巢肿瘤组织中的多肽，其具有至少一个使其与存在于非恶性组织中的对应野生型多肽不同的改变，例如经由肿瘤细胞中的突变或肿瘤细胞特异性的翻译后修饰。突变可包括移码或非移码插入或缺失、错义或无义置换、剪接位点改变、异常剪接变体、基因组重排或基因融合或者产生新抗原的任何基因组或表达改变。
[0062]“患病率”是指所研究的携带卵巢新抗原的体的百分比。
[0063]“重组”是指通过重组手段制备、表达、创建或分离的多核苷酸、多肽、载体、病毒和其他大分子。
[0064]“疫苗”是指有意被施用以在受体(例如，受试者)中诱导所获得性免疫的包含一种或多种免疫原性多肽、免疫原性多核苷酸或片段或其任何组合的组合物。
[0065]
疾病或病症(诸如癌症)的“”是指实现以下结果中的一种或多种：降低病症的严重程度和/或缩短病症的持续时间、抑制所病症的特征性症状的恶化、限制或防止先前患有病症的受试者中该病症的复发，或者限制或防止先前有病症的症状的受试者中症状的复发。
[0066]“预防”疾病或病症意指预防受试者中出现病症。
[0067]“有效量”是指在所需剂量和时间段有效实现期望的结果的量。有效量可根据以下因素变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及剂或剂组合在个体中引发期望的应答的能力。有效的剂或剂的组合的示例性指标包括例如改善患者的健康。
[0068]“复发”是指在先前用剂之后改善一段时间之后疾病或疾病的迹象和症状的再现。
[0069]“难治性”是指对无应答的疾病。难治性疾病可在之前或开始时对具有抗性，或者难治性疾病可在期间变得具有抗性。
[0070]“复制子”是指能够指导其自身的拷贝生成的病毒核酸，包括rna以及dna。例如，动脉炎病毒基因组的双链dna型式可用于生成构成动脉炎病毒复制子的单链rna转录物。一般
来讲，病毒复制子包含病毒的完整基因组。“亚基因组复制子”是指包含少于该病毒基因组的基因的全长互补序列和其他特征的东西但仍然能够指导其自身的拷贝生成的病毒核酸。例如，动脉炎病毒的亚基因组复制子可包含该病毒的非结构蛋白的大部分基因，但缺失编码结构蛋白的大部分基因。亚基因组复制子能够指导病毒亚基因组的复制(亚基因组复制子的复制)所需的所有病毒基因的表达，而不产生病毒颗粒。
[0071]“rna复制子”(或“自复制rna分子”)是指包含指导其在允许细胞内进行自身扩增或自复制所需的所有遗传信息的rna。为了指导其自身复制，rna分子1)编码可与病毒或宿主细胞来源的蛋白质、核酸或核糖核蛋白相互作用以催化rna扩增过程的聚合酶、复制酶或其他蛋白质；并且2)包含复制子编码的rna的复制和转录所需的顺式作用rna序列。自复制rna通常来源于正链rna病毒的基因组，并且可用作通过替换编码结构基因或非结构基因的病毒序列或者在编码结构基因或非结构基因的序列的5’或3’插入外来序列而将外来序列引入宿主细胞的基础。也可将外来序列引入甲病毒的亚基因组区域中。可将自复制rna包装到重组病毒颗粒诸如重组甲病毒颗粒中，或使用脂质纳米颗粒(lnp)将其递送给宿主。自复制rna的大小可为至少1kb或至少2kb或至少3kb或至少4kb或至少5kb或至少6kb或至少7kb或至少8kb或至少10kb或至少12kb或至少15kb或至少17kb或至少19kb或至少20kb，或者其大小可为100bp-8kb或500bp-8kb或500bp-7kb或1-7kb或1-8kb或2-15kb或2-20kb或5-15kb或5-20kb或7-15kb或7-18kb或7-20kb。自复制rna描述于例如wo2017/180770、wo2018/075235、wo2019143949a2中。
[0072]“受试者”包括任何人或非人动物。“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。术语“受试者”和“患者”在本文中可以互换使用。
[0073]“与
……
组合”意指将两种或更多种剂以混合物一起、作为单一药剂同时或作为单一药剂以任何顺序依次施用于受试者。
[0074]
当提及免疫应答时，“增强”或“诱导”是指增加免疫应答的规模和/或效率，或者延长免疫应答的持续时间。这些术语与“增加”可互换使用。
[0075]“免疫应答”是指脊椎动物受试者的免疫系统对免疫原性多肽或多核苷酸或片段的任何应答。示例性免疫应答包括局部和全身细胞免疫以及体液免疫，诸如细胞毒性t淋巴细胞(ctl)应答(包括cd8
+
ctl的抗原特异性诱导)、辅助性t细胞应答(包括t细胞增殖应答和细胞因子释放)和b细胞应答(包括抗体应答)。
[0076]“特异性结合”或“结合”是指蛋白质类分子与某种抗原或该抗原内的表位(例如与卵巢新抗原)以比对其他抗原更大的亲和力结合。通常，蛋白质分子与抗原或抗原内的表位结合，平衡解离常数(kd)为约1
×
10-7
m或更低，例如约5
×
10-8
m或更低、约1
×
10-8
m或更低、约1
×
10-9
m或更低、约1
×
10-10
m或更低、约1
×
10-11
m或更低或约1
×
10-12
m或更低，通常kd比它与非特异性抗原(例如bsa、酪蛋白)结合的kd低至少一百倍。在本文所述的卵巢新抗原的上下文中，“特异性结合”是指蛋白质类分子与卵巢新抗原的结合，而没有与新抗原为其变体的野生型蛋白质的可检测结合。
[0077]“变体”、“突变体”或“改变的”是指由于一处或多处修饰(例如，一个或多个取代、插入或缺失)而不同于参考多肽或参考多核苷酸的多肽或多核苷酸。
[0078]“抗体”是指免疫球蛋白分子，具体包括单克隆抗体(包括鼠单克隆抗体、人单克隆
抗体、人源化单克隆抗体和嵌合单克隆抗体)、抗原结合片段、双特异性或多特异性抗体，二聚抗体、四聚抗体或多聚抗体，单链抗体、结构域抗体，以及包含具有所需特异性的抗原结合位点的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型。
[0079]“替代支架”是指包含与高构象耐受性可变结构域相关联的结构化核心的单链蛋白质框架。可变结构域耐受待引入的变化而会不损害支架完整性，因此可工程化和选择可变结构域以与特异性抗原结合。
[0080]“嵌合抗原受体”或“car”是指将配体或抗原特异性移植到t细胞(例如初始t细胞、中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞或它们的组合)上的工程化t细胞受体。car也被称为人造t细胞受体、嵌合t细胞受体或嵌合免疫受体。car包含能够结合到抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域。car胞内结构域包含已知用作传输信号以引起细胞中生物过程的活化或抑制的结构域的多肽。跨膜结构域包含已知跨越细胞膜并且可起到连接胞外结构域和信号传导结构域的作用的任何肽或多肽。嵌合抗原受体可任选地包含铰链结构域，该铰链结构域充当胞外结构域与跨膜结构域之间的接头。
[0081]“t细胞受体”或“tcr”是指当被mhc分子递呈时能够识别肽的分子。天然存在的tcr异二聚体在大约95％的t细胞中由alpha(α)和beta(β)链组成，而大约5％的t细胞具有由gamma(γ)和delta(δ)链组成的tcr。天然tcr的每条链都是免疫球蛋白超家族的成员，并且具有一个n-末端免疫球蛋白(ig)-可变(v)结构域、一个ig-恒定(c)结构域、跨膜/跨细胞膜区以及c-末端处的短细胞质尾。tcrα链和β链的可变结构域具有三个高变区或互补决定区(cdr)cdr1、cdr2和cdr3，它们负责识别在mhc上递呈的经加工抗原。
[0082]
tcr可以是全长α/β或γ/δ异二聚体或包含tcr的胞外结构域的保持结合肽/mhc复合体的一部分的可溶性分子。可将tcr工程化成单链tcr。
[0083]“t细胞受体复合物”或“tcr复合物”是指已知的由tcrα和tcrβ链、cd3ε、cd3γ、cd3δ和cd3ζ分子组成的tcr复合物。在一些情况下，tcrα和tcrβ链被tcrγ和tcrδ链取代。形成tcr复合物的各种蛋白质的氨基酸序列是熟知的。
[0084]“t细胞”和“t淋巴细胞”是可互换的，并且在本文中同义使用。t细胞包括胸腺细胞、初始t淋巴细胞、记忆t细胞、未成熟t淋巴细胞、成熟t淋巴细胞、静息t淋巴细胞或活化t淋巴细胞。t细胞可以是t辅助性(th)细胞，例如t辅助性1(th1)或t辅助性2(th2)细胞。t细胞可以是辅助性t细胞(htl；cd4
+ t细胞)、cd4
+ t细胞、细胞毒性t细胞(ctl；cd8
+ t细胞)、肿瘤浸润性细胞毒性t细胞(til；cd8
+ t细胞)、cd4
+
cd8
+ t细胞或t细胞的任何其他亚。还包括“nkt细胞”，是指表达半不变αβt细胞受体但也表达通常与nk细胞相关联的多种分子标志物(诸如nk1.1)的特化t细胞。nkt细胞包括nk1.1
+
细胞和nk1.1-细胞，以及cd4
+
细胞、cd4-细胞、cd8
+
细胞和cd8-细胞。nkt细胞上的tcr的独特之处在于它识别由mhc i样分子cd id递呈的糖脂抗原。由于nkt细胞能够产生促进炎症或免疫耐受的细胞因子，因此它们可具有保护作用或有害作用。还包括“γ-δt细胞(γδt细胞)”，是指特化的体，即在其表面上具有独特tcr的t细胞的小子集，并且与其中tcr由被命名为α-tcr链和β-tcr链的两种糖蛋白链组成的大多数t细胞不同，γδt细胞中的tcr由γ-链和δ-链组成。γδt细胞可以在免疫监视和免疫调节中起作用，并且被发现是il-17的重要来源且诱导强烈的cd8
+
细胞毒性t细胞应答。还包括“调节性t细胞”或“treg”，其是指抑制异常或过度免疫应答并在免疫耐受中起作用的t细胞。treg通常是转录因子foxp3-阳性cd4
+
t细胞，并且还可包括转录因子
foxp3-阴性调节性t细胞，它们是产生il-10的cd4
+
t细胞。
[0085]“自然杀伤细胞”或“nk细胞”是指具有cd 16+cd56+和/或cd57+tcr-表型的分化淋巴细胞。nk的特征在于其能够给通过活化特异性溶细胞酶来结合并杀死不能表达“自身”mhc/hla抗原的细胞，能够杀死表达nk活化受体的配体的肿瘤细胞或其他患病细胞，并且能够释放称为刺激或抑制免疫应答的细胞因子的蛋白质分子。
[0086]“约”是指处于如本领域的普通技术人员所确定的特定值的可接受误差范围之内，其将部分取决于所述值是如何测量或测定的，即所述测量系统的限制。在特定测定、结果或实施方案的上下文中，除非实施例或说明书其他地方内另有明确说明，否则“约”意指在根据本领域惯例的一个标准偏差之内或多至5％的范围(取较大者)。
[0087]“抗原递呈细胞”(apc)是指在其表面上递呈与主要组织相容性复合体分子(mhc i类或mhc ii类分子或这两者)相关的抗原的任何细胞。
[0088]“初免-加强”或“初免-加强方案”是指一种受试者的方法，其涉及用第一疫苗引发t细胞应答，之后用第二疫苗加强免疫应答。第一疫苗和第二疫苗通常是不同的。这些引发物-加强物免疫引发比用相同疫苗引发和加强可实现的免疫应答更高高度和宽度的免疫应答。引发步骤启动记忆细胞，并且加强步骤扩展记忆响应。加强可发生一次或多次。
[0089]“促进子元件”是指可操作地连接到多核苷酸或多肽的任何多核苷酸或多肽元件，包括启动子、增强子、聚腺苷酸化信号、终止密码子、蛋白质标签(诸如组氨酸标签)等。本文的促进子元件包括调控元件。
[0090]
在多肽或多核苷酸序列的上下文中，“不同”指不相同的多肽或多核苷酸序列。
[0091]
物质的组成
[0092]
本公开涉及卵巢癌新抗原、编码所述卵巢癌新抗原的多核苷酸、载体、宿主细胞、包含所述新抗原或编码所述新抗原的多核苷酸的疫苗、结合所述卵巢癌新抗原的蛋白质类分子以及制备和使用所述它们的方法。本公开还提供包含在卵巢癌患者体中普遍存在的本公开的卵巢癌新抗原的疫苗，从而提供可用于已被诊断患有各种阶段的卵巢癌癌诸如局限性或转移性卵巢癌癌的广泛患者体的pan疫苗。
[0093]
癌细胞产生由基因组改变和异常转录程序引起的新抗原。已经将患者的新抗原负担与对免疫疗法的应答相关联(snyder等人，n engl j med.2014年12月4日；371(23):2189-2199；le等人，n engl j med.2015年6月25日；372(26):2509-20；rizvi等人，science.2015年4月3日；348(6230):124-8；van allen等人，science.2015年10月9日；350(6257):207-211。本公开至少部分地基于对卵巢癌患者中常见的卵巢癌新抗原的鉴定，因此可用于开发适合一系列卵巢癌患者的疗法。本公开的一种或多种新抗原或编码新抗原的多核苷酸也可用于诊断或预后目的。
[0094]
多肽
[0095]
本文公开了包含可以在受试者中引发免疫应答的卵巢癌新抗原序列的多肽。
[0096]
在一些实施方案中，本公开提供了一种分离的多肽，该分离的多肽包含以下的氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、
171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段。在一些实施方案中，该分离的多肽可包含至少两个或更多个卵巢癌新抗原序列。
[0097]
在一些实施方案中，本公开提供了一种分离的异源多肽，该分离的异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段。在一些实施方案中，本文公开的两种或更多种多肽可以按任何顺序以串联重复序列存在。
[0098]
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[0235]
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[0236]
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[0241]
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[0242]
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[0243]
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[0244]
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[0245]
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[0248]
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[0249]
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[0250]
本公开还提供了一种包含seq id no:305的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0251]
本公开还提供了一种包含seq id no:307的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0252]
本公开还提供了一种包含seq id no:309的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0253]
本公开还提供了一种包含seq id no:311的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0254]
本公开还提供了一种包含seq id no:313的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0255]
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[0259]
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[0260]
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[0270]
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[0271]
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[0272]
本公开还提供了一种包含seq id no:349的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0273]
本公开还提供了一种包含seq id no:351的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0274]
本公开还提供了一种包含seq id no:353的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0275]
本公开还提供了一种包含seq id no:355的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0276]
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[0277]
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[0278]
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[0279]
本公开还提供了一种包含seq id no:363的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0280]
本公开还提供了一种包含seq id no:365的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0281]
本公开还提供了一种包含seq id no:367的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0282]
本公开还提供了一种包含seq id no:369的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0283]
本公开还提供了一种包含seq id no:371的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0284]
本公开还提供了一种包含seq id no:373的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0285]
本公开还提供了一种包含seq id no:375的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0286]
本公开还提供了一种包含seq id no:377的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0287]
本公开还提供了一种包含seq id no:379的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0288]
本公开还提供了一种包含seq id no:381的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0289]
本公开还提供了一种包含seq id no:383的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0290]
本公开还提供了一种包含seq id no:385的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0291]
本公开还提供了一种包含seq id no:387的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0292]
本公开还提供了一种包含seq id no:389的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0293]
本公开还提供了一种包含seq id no:391的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0294]
本公开还提供了一种包含seq id no:393的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0295]
本公开还提供了一种包含seq id no:395的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0296]
本公开还提供了一种包含seq id no:397的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0297]
本公开还提供了一种包含seq id no:399的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0298]
本公开还提供了一种包含seq id no:401的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0299]
本公开还提供了一种包含seq id no:403的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0300]
本公开还提供了一种包含seq id no:405的氨基酸序列或其片段的分离的多肽。
[0301]
在一些实施方案中，片段在长度上包含约6-24个氨基酸。
[0302]
在一些实施方案中，片段包含至少6个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少7个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少8个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少9个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少10个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少11个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少12个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少13个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少14个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少15个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少16个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少17个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少18个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少19个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少20个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少21个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少22个氨基酸。在
一些实施方案中，片段包含至少23个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少24个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含至少25个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约6个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约7个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约10个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约11个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约12个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约13个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约14个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约15个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约16个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约17个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约18个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约19个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约20个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约21个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约22个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约23个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约24个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约25个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约6-25个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约7-25个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-25个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-24个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-23个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-22个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-21个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-20个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-19个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-18个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-17个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-16个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-15个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约8-14个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9-14个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9-13个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9-12个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9-11个氨基酸。在一些实施方案中，片段包含约9-10个氨基酸。
[0303]
在一些实施方案中，片段是免疫原性片段。
[0304]
免疫原性片段一般是活化t细胞的肽，例如当在mhc上递呈时诱导细胞毒性t细胞的那些肽。用于评估t细胞的活化和/或细胞毒性t淋巴细胞的诱导的方法是熟知的。在示例性测定中，在存在测试新抗原或其片段以及il-25的情况下，体外培养从卵巢癌患者分离的pbmc。可用il-15和il-2定期补充培养物并再培养12天。在第12天，用测试新抗原或其片段再刺激培养物，第二天，可通过在与对照培养物进行比较时测量ifnγ
+
tnaα
+
cd8
+
细胞的百分比来评估t细胞活化。
[0305]
本公开的多肽和异源多肽可用于产生本公开的重组病毒、细胞和疫苗以及特异性结合本公开的一种或多种卵巢新抗原的蛋白质类分子，或者可通过使用各种技术将它们递送给患有卵巢癌的受试者而直接用作剂。可使用标准克隆方法以任何顺序将两种或更多种新抗原(例如多肽)掺入疫苗中。
[0306]
通过验证过程，seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375的95种新抗原多肽基于它们的表达谱、普遍性和体外免疫原性被鉴定为特别可用于包括在
卵巢癌疫苗中。预期95种新抗原中的两种或更多种的任何组合可用于产生卵巢癌疫苗，可利用任何可用的递送载体和任何可用的形式(诸如肽、dna、rna、复制子或使用病毒递送)将这些卵巢癌疫苗递送给受试者。可使用标准克隆方法以任何顺序将两种或更多种新抗原(例如多肽)掺入疫苗中。
[0307]
可以任何顺序将95种多肽中的两种或更多种组装成编码异源多肽的异源多核苷酸，并且多肽顺序可在各种递送选项之间有所不同。一般来讲，将多肽组装成特定顺序可基于利用已知算法生成最少数量的接合表位进行。
[0308]
在一些实施方案中，本公开提供了一种多肽，该多肽包含选自由以下项组成的组的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[0309]
本公开还提供了一种包含以下的两个或更多个串联重复序列的多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。在一些实施方案中，该多肽包含本公开的多肽的2个、3个、4个、5个或超过5个重复序列。
[0310]
在一些实施方案中，多肽头尾连接。
[0311]
在一些实施方案中，多肽可以被接头分开。
[0312]
示例性接头序列包括aay、rr、dpp、hhaa、hha、hhl、rksyl、rksy、ssl或rekr。在一些实施方案中，本文所公开的接头可以包含蛋白酶切割位点，使得异源多肽可以在受试者体内被切割成包含新抗原序列的肽片段，从而引起免疫应答改善。
[0313]
在一些实施方案中，多肽在没有接头的情况下直接彼此连接。
[0314]
在一些实施方案中，本公开的多肽还可以在n末端处包含前导序列或t细胞增强子序列(tce)。前导序列可以增加表达和/或增加免疫应答。示例性前导序列包括t2淋巴细胞的tcr受体的α链(havt20)(macpgflwalvistc lefsma；seq id no:419)、泛素信号序列(ubiq)(mqifvktltgktitlevepsdtienvkakiqdkegippdqqrlifagkqledgrtlsdyniqkestlhlvlrlrgvr；seq id no:420)或t细胞增强子(tce)序列，诸如来自鳜鱼不变链的长度为28aa的肽片段(mgqkeqihtlqknsermskqltrssqav；seq id no:421)。据信，前导序列可以有助于增加对本文所公开的表位的免疫应答。
[0315]
多核苷酸
[0316]
本公开还提供了编码本文所公开的任何多肽的多核苷酸。
[0317]
在一些实施方案中，本公开提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码以下的多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、
91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405或它们的片段。
[0318]
本公开还提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码与以下的多肽有至少90％同一性的多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405或它们的片段；
[0319]
本公开还提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包含以下的多核苷酸序列：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406或它们的片段。
[0320]
本公开还提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包含与以下的多核苷酸序列有至少90％同一性的多核苷酸序列：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、
196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406或它们的片段。
[0321]
本公开还提供了一种分离的异源多核苷酸，该分离的异源多核苷酸包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多核苷酸：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404和406及它们的片段。
[0322]
本公开还提供了一种分离的异源多核苷酸，该分离的异源多核苷酸编码包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽的异源多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段。
[0323]
在一些实施方案中，片段包含至少18个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少21个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少24个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少27个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少30个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少33个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少36个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少39个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少42个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少45个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少48个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少51个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少54个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少57个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少60个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少63个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少66个核苷
酸。在一些实施方案中，片段包含至少69个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少72个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含至少75个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约18个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约21个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约30个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约33个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约36个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约39个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约42个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约45个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约48个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约51个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约54个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约57个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约60个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约63个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约66个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约69个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约72个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约75个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约18-75个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约21-75个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-75个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-72个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-69个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-66个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-63个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-60个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-57个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-54个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-51个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-48个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-45个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约24-42个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27-42个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27-39个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27-36个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27-33个核苷酸。在一些实施方案中，片段包含约27-30个核苷酸。
[0324]
本公开的多核苷酸和异源多核苷酸编码卵巢新抗原和包含本文所述的两种或更多种卵巢新抗原的异源多肽。本公开的多核苷酸和异源多核苷酸可用于产生本公开的多肽、异源多肽、载体、重组病毒、细胞和疫苗。本公开的多核苷酸和异源多核苷酸可通过使用各种技术(包括如本文所述的病毒载体或同样如本文所述的其他递送技术)将它们递送给患有卵巢癌的受试者而用作剂。
[0325]
本公开还提供了一种编码seq id no:1的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:1的多肽或其片段由seq id no:2的多核苷酸或其片段编码。
[0326]
本公开还提供了一种编码seq id no:3的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:3的多肽或其片段由seq id no:4的多核苷酸或其片段编码。
[0327]
本公开还提供了一种编码seq id no:5的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:5的多肽或其片段由seq id no:6的多核苷酸或其片段编码。
[0328]
本公开还提供了一种编码seq id no:7的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:7的多肽或其片段由seq id no:8的多核苷酸或其片段编码。
[0329]
本公开还提供了一种编码seq id no:9的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:9的多肽或其片段由seq id no:10的多核苷酸或其片段编码。
[0330]
本公开还提供了一种编码seq id no:11的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:11的多肽或其片段由seq id no:12的多核苷酸或其片段编码。
[0331]
本公开还提供了一种编码seq id no:13的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:13的多肽或其片段由seq id no:14的多核苷酸或其片段编码。
[0332]
本公开还提供了一种编码seq id no:15的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:15的多肽或其片段由seq id no:16的多核苷酸或其片段编码。
[0333]
本公开还提供了一种编码seq id no:17的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:17的多肽或其片段由seq id no:18的多核苷酸或其片段编码。
[0334]
本公开还提供了一种编码seq id no:19的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:19的多肽或其片段由seq id no:20的多核苷酸或其片段编码。
[0335]
本公开还提供了一种编码seq id no:21的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:21的多肽或其片段由seq id no:22的多核苷酸或其片段编码。
[0336]
本公开还提供了一种编码seq id no:23的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:23的多肽或其片段由seq id no:24的多核苷酸或其片段编码。
[0337]
本公开还提供了一种编码seq id no:25的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:25的多肽或其片段由seq id no:26的多核苷酸或其片段编码。
[0338]
本公开还提供了一种编码seq id no:27的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:27的多肽或其片段由seq id no:28的多核苷酸或其片段编码。
[0339]
本公开还提供了一种编码seq id no:29的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:29的多肽或其片段由seq id no:30的多核苷酸或其片段编码。
[0340]
本公开还提供了一种编码seq id no:31的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:31的多肽或其片段由seq id no:32的多核苷酸或其片段编码。
[0341]
本公开还提供了一种编码seq id no:33的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:33的多肽或其片段由seq id no:34的多核苷酸或其片段编码。
[0342]
本公开还提供了一种编码seq id no:35的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:35的多肽或其片段由seq id no:36的多核苷酸或其片段编码。
[0343]
本公开还提供了一种编码seq id no:37的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:37的多肽或其片段由seq id no:38的多核苷酸或其片段编码。
[0344]
本公开还提供了一种编码seq id no:39的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:39的多肽或其片段由seq id no:40的多核苷酸或其片段编码。
[0345]
本公开还提供了一种编码seq id no:41的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:41的多肽或其片段由seq id no:42的多核苷酸或其片段编码。
[0346]
本公开还提供了一种编码seq id no:43的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:43的多肽或其片段由seq id no:44的多核苷酸或其片段编码。
[0347]
本公开还提供了一种编码seq id no:45的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:45的多肽或其片段由seq id no:46的多核苷酸或其片段编码。
[0348]
本公开还提供了一种编码seq id no:47的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:47的多肽或其片段由seq id no:48的多核苷酸或其片段编码。
[0349]
本公开还提供了一种编码seq id no:49的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:49的多肽或其片段由seq id no:50的多核苷酸或其片段编码。
[0350]
本公开还提供了一种编码seq id no:51的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一
些实施方案中，seq id no:51的多肽或其片段由seq id no:52的多核苷酸或其片段编码。
[0351]
本公开还提供了一种编码seq id no:53的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:53的多肽或其片段由seq id no:54的多核苷酸或其片段编码。
[0352]
本公开还提供了一种编码seq id no:55的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:55的多肽或其片段由seq id no:56的多核苷酸或其片段编码。
[0353]
本公开还提供了一种编码seq id no:57的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:57的多肽或其片段由seq id no:58的多核苷酸或其片段编码。
[0354]
本公开还提供了一种编码seq id no:59的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:59的多肽或其片段由seq id no:60的多核苷酸或其片段编码。
[0355]
本公开还提供了一种编码seq id no:61的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:61的多肽或其片段由seq id no:62的多核苷酸或其片段编码。
[0356]
本公开还提供了一种编码seq id no:63的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:63的多肽或其片段由seq id no:64的多核苷酸或其片段编码。
[0357]
本公开还提供了一种编码seq id no:65的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:65的多肽或其片段由seq id no:66的多核苷酸或其片段编码。
[0358]
本公开还提供了一种编码seq id no:67的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:67的多肽或其片段由seq id no:68的多核苷酸或其片段编码。
[0359]
本公开还提供了一种编码seq id no:69的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:69的多肽或其片段由seq id no:70的多核苷酸或其片段编码。
[0360]
本公开还提供了一种编码seq id no:71的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:71的多肽或其片段由seq id no:72的多核苷酸或其片段编码。
[0361]
本公开还提供了一种编码seq id no:73的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:73的多肽或其片段由seq id no:74的多核苷酸或其片段编码。
[0362]
本公开还提供了一种编码seq id no:75的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:75的多肽或其片段由seq id no:76的多核苷酸或其片段编码。
[0363]
本公开还提供了一种编码seq id no:77的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:77的多肽或其片段由seq id no:78的多核苷酸或其片段编码。
[0364]
本公开还提供了一种编码seq id no:79的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:79的多肽或其片段由seq id no:80的多核苷酸或其片段编码。
[0365]
本公开还提供了一种编码seq id no:81的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:81的多肽或其片段由seq id no:82的多核苷酸或其片段编码。
[0366]
本公开还提供了一种编码seq id no:83的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:83的多肽或其片段由seq id no:84的多核苷酸或其片段编码。
[0367]
本公开还提供了一种编码seq id no:85的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:85的多肽或其片段由seq id no:86的多核苷酸或其片段编码。
[0368]
本公开还提供了一种编码seq id no:87的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:87的多肽或其片段由seq id no:88的多核苷酸或其片段编码。
[0369]
本公开还提供了一种编码seq id no:89的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:89的多肽或其片段由seq id no:90的多核苷酸或其片段编码。
[0370]
本公开还提供了一种编码seq id no:91的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:91的多肽或其片段由seq id no:92的多核苷酸或其片段编码。
[0371]
本公开还提供了一种编码seq id no:93的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:93的多肽或其片段由seq id no:94的多核苷酸或其片段编码。
[0372]
本公开还提供了一种编码seq id no:95的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:95的多肽或其片段由seq id no:96的多核苷酸或其片段编码。
[0373]
本公开还提供了一种编码seq id no:97的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:97的多肽或其片段由seq id no:98的多核苷酸或其片段编码。
[0374]
本公开还提供了一种编码seq id no:99的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:99的多肽或其片段由seq id no:100的多核苷酸或其片段编码。
[0375]
本公开还提供了一种编码seq id no:101的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:101的多肽或其片段由seq id no:102的多核苷酸或其片段编码。
[0376]
本公开还提供了一种编码seq id no:103的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:103的多肽或其片段由seq id no:104的多核苷酸或其片段编码。
[0377]
本公开还提供了一种编码seq id no:105的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:105的多肽或其片段由seq id no:106的多核苷酸或其片段编码。
[0378]
本公开还提供了一种编码seq id no:107的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:107的多肽或其片段由seq id no:108的多核苷酸或其片段编码。
[0379]
本公开还提供了一种编码seq id no:109的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:109的多肽或其片段由seq id no:110的多核苷酸或其片段编码。
[0380]
本公开还提供了一种编码seq id no:111的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:111的多肽或其片段由seq id no:112的多核苷酸或其片段编码。
[0381]
本公开还提供了一种编码seq id no:113的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:113的多肽或其片段由seq id no:114的多核苷酸或其片段编码。
[0382]
本公开还提供了一种编码seq id no:115的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:115的多肽或其片段由seq id no:116的多核苷酸或其片段编码。
[0383]
本公开还提供了一种编码seq id no:117的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:117的多肽或其片段由seq id no:118的多核苷酸或其片段编码。
[0384]
本公开还提供了一种编码seq id no:119的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:119的多肽或其片段由seq id no:120的多核苷酸或其片段编
码。
[0385]
本公开还提供了一种编码seq id no:121的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:121的多肽或其片段由seq id no:122的多核苷酸或其片段编码。
[0386]
本公开还提供了一种编码seq id no:123的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:123的多肽或其片段由seq id no:124的多核苷酸或其片段编码。
[0387]
本公开还提供了一种编码seq id no:125的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:125的多肽或其片段由seq id no:126的多核苷酸或其片段编码。
[0388]
本公开还提供了一种编码seq id no:127的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:127的多肽或其片段由seq id no:128的多核苷酸或其片段编码。
[0389]
本公开还提供了一种编码seq id no:129的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:129的多肽或其片段由seq id no:130的多核苷酸或其片段编码。
[0390]
本公开还提供了一种编码seq id no:131的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:131的多肽或其片段由seq id no:132的多核苷酸或其片段编码。
[0391]
本公开还提供了一种编码seq id no:133的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:133的多肽或其片段由seq id no:134的多核苷酸或其片段编码。
[0392]
本公开还提供了一种编码seq id no:135的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:135的多肽或其片段由seq id no:136的多核苷酸或其片段编码。
[0393]
本公开还提供了一种编码seq id no:137的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:137的多肽或其片段由seq id no:138的多核苷酸或其片段编码。
[0394]
本公开还提供了一种编码seq id no:139的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:139的多肽或其片段由seq id no:140的多核苷酸或其片段编码。
[0395]
本公开还提供了一种编码seq id no:141的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:141的多肽或其片段由seq id no:142的多核苷酸或其片段编码。
[0396]
本公开还提供了一种编码seq id no:143的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:143的多肽或其片段由seq id no:144的多核苷酸或其片段编码。
[0397]
本公开还提供了一种编码seq id no:145的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:145的多肽或其片段由seq id no:146的多核苷酸或其片段编
码。
[0398]
本公开还提供了一种编码seq id no:147的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:147的多肽或其片段由seq id no:148的多核苷酸或其片段编码。
[0399]
本公开还提供了一种编码seq id no:149的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:149的多肽或其片段由seq id no:150的多核苷酸或其片段编码。
[0400]
本公开还提供了一种编码seq id no:151的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:151的多肽或其片段由seq id no:152的多核苷酸或其片段编码。
[0401]
本公开还提供了一种编码seq id no:153的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:153的多肽或其片段由seq id no:154的多核苷酸或其片段编码。
[0402]
本公开还提供了一种编码seq id no:155的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:155的多肽或其片段由seq id no:156的多核苷酸或其片段编码。
[0403]
本公开还提供了一种编码seq id no:157的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:157的多肽或其片段由seq id no:158的多核苷酸或其片段编码。
[0404]
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码。
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本公开还提供了一种编码seq id no:327的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:327的多肽或其片段由seq id no:328的多核苷酸或其片段编
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本公开还提供了一种编码seq id no:329的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:329的多肽或其片段由seq id no:330的多核苷酸或其片段编码。
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本公开还提供了一种编码seq id no:331的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:331的多肽或其片段由seq id no:332的多核苷酸或其片段编码。
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本公开还提供了一种编码seq id no:333的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:333的多肽或其片段由seq id no:334的多核苷酸或其片段编码。
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本公开还提供了一种编码seq id no:335的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:335的多肽或其片段由seq id no:336的多核苷酸或其片段编码。
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[0495]
本公开还提供了一种编码seq id no:341的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:341的多肽或其片段由seq id no:342的多核苷酸或其片段编码。
[0496]
本公开还提供了一种编码seq id no:343的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:343的多肽或其片段由seq id no:344的多核苷酸或其片段编码。
[0497]
本公开还提供了一种编码seq id no:345的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:345的多肽或其片段由seq id no:346的多核苷酸或其片段编码。
[0498]
本公开还提供了一种编码seq id no:347的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:347的多肽或其片段由seq id no:348的多核苷酸或其片段编码。
[0499]
本公开还提供了一种编码seq id no:349的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:349的多肽或其片段由seq id no:350的多核苷酸或其片段编码。
[0500]
本公开还提供了一种编码seq id no:351的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:351的多肽或其片段由seq id no:352的多核苷酸或其片段编码。
[0501]
本公开还提供了一种编码seq id no:353的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:353的多肽或其片段由seq id no:354的多核苷酸或其片段编
码。
[0502]
本公开还提供了一种编码seq id no:355的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:355的多肽或其片段由seq id no:356的多核苷酸或其片段编码。
[0503]
本公开还提供了一种编码seq id no:357的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:357的多肽或其片段由seq id no:358的多核苷酸或其片段编码。
[0504]
本公开还提供了一种编码seq id no:359的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:359的多肽或其片段由seq id no:360的多核苷酸或其片段编码。
[0505]
本公开还提供了一种编码seq id no:361的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:361的多肽或其片段由seq id no:362的多核苷酸或其片段编码。
[0506]
本公开还提供了一种编码seq id no:363的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:363的多肽或其片段由seq id no:364的多核苷酸或其片段编码。
[0507]
本公开还提供了一种编码seq id no:365的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:365的多肽或其片段由seq id no:366的多核苷酸或其片段编码。
[0508]
本公开还提供了一种编码seq id no:367的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:367的多肽或其片段由seq id no:368的多核苷酸或其片段编码。
[0509]
本公开还提供了一种编码seq id no:369的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:369的多肽或其片段由seq id no:370的多核苷酸或其片段编码。
[0510]
本公开还提供了一种编码seq id no:371的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:371的多肽或其片段由seq id no:372的多核苷酸或其片段编码。
[0511]
本公开还提供了一种编码seq id no:373的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:373的多肽或其片段由seq id no:374的多核苷酸或其片段编码。
[0512]
本公开还提供了一种编码seq id no:375的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:375的多肽或其片段由seq id no:376的多核苷酸或其片段编码。
[0513]
本公开还提供了一种编码seq id no:377的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:377的多肽或其片段由seq id no:378的多核苷酸或其片段编码。
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本公开还提供了一种编码seq id no:379的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:379的多肽或其片段由seq id no:380的多核苷酸或其片段编
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[0515]
本公开还提供了一种编码seq id no:381的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:381的多肽或其片段由seq id no:382的多核苷酸或其片段编码。
[0516]
本公开还提供了一种编码seq id no:383的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:383的多肽或其片段由seq id no:384的多核苷酸或其片段编码。
[0517]
本公开还提供了一种编码seq id no:385的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:385的多肽或其片段由seq id no:386的多核苷酸或其片段编码。
[0518]
本公开还提供了一种编码seq id no:387的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:387的多肽或其片段由seq id no:388的多核苷酸或其片段编码。
[0519]
本公开还提供了一种编码seq id no:389的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:389的多肽或其片段由seq id no:390的多核苷酸或其片段编码。
[0520]
本公开还提供了一种编码seq id no:391的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:391的多肽或其片段由seq id no:392的多核苷酸或其片段编码。
[0521]
本公开还提供了一种编码seq id no:393的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:393的多肽或其片段由seq id no:394的多核苷酸或其片段编码。
[0522]
本公开还提供了一种编码seq id no:395的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:395的多肽或其片段由seq id no:396的多核苷酸或其片段编码。
[0523]
本公开还提供了一种编码seq id no:397的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:397的多肽或其片段由seq id no:398的多核苷酸或其片段编码。
[0524]
本公开还提供了一种编码seq id no:399的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:399的多肽或其片段由seq id no:400的多核苷酸或其片段编码。
[0525]
本公开还提供了一种编码seq id no:401的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:401的多肽或其片段由seq id no:402的多核苷酸或其片段编码。
[0526]
本公开还提供了一种编码seq id no:403的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:403的多肽或其片段由seq id no:404的多核苷酸或其片段编码。
[0527]
本公开还提供了一种编码seq id no:405的多肽或其片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，seq id no:405的多肽或其片段由seq id no:406的多核苷酸或其片段编
码。
[0528]
在一些实施方案中，异源多核苷酸是框内异源多核苷酸。
[0529]
为了在多种宿主中表达，可利用已知的方法对多核苷酸进行密码子优化。
[0530]
在一些实施方案中，分离的异源多核苷酸是框内异源多核苷酸。
[0531]
在一些实施方案中，该多核苷酸包括dna或rna。
[0532]
在一些实施方案中，该多核苷酸包括rna。
[0533]
在一些实施方案中，rna为mrna。
[0534]
本公开的工程化多核苷酸、多肽、异源多核苷酸和异源多肽的变体
[0535]
多核苷酸、多肽、异源多核苷酸和异源多肽或其片段的变体在本公开的范围内。例如，变体可包含一个或多个置换、缺失或插入，只要变体与亲本相比保持或具有改进的特性(诸如免疫原性或稳定性)即可。在一些实施方案中，序列同一性在亲本与变体之间可为约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，变体通过保守性取代产生。
[0536]
在一些实施方案中，同一性为约80％。在一些实施方案中，同一性为约85％。在一些实施方案中，同一性为约90％。在一些实施方案中，同一性为约91％。在一些实施方案中，同一性为约91％。在一些实施方案中，同一性为约92％。在一些实施方案中，同一性为约93％。在一些实施方案中，同一性为约94％。在一些实施方案中，同一性为94％。在一些实施方案中，同一性为约95％。在一些实施方案中，同一性为约96％。在一些实施方案中，同一性为约97％。在一些实施方案中，同一性为约98％。在一些实施方案中，同一性为约99％。
[0537]
两个序列之间的百分比同一性是序列所共有的相同位置数目的函数(即，同一性％＝相同位置的数目/位置总数
×
100)，考虑到空位的数目和每个空位的长度，需要引入这些参数用于两个序列的最佳比对。两个氨基酸序列之间的百分比同一性可以采用e.meyers和w.miller(comput appl biosci 4:11-17(1988))的算法(该算法已经并入align程序(版本2.0)中)，使用pam120加权残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定。另外，两个氨基酸序列之间的百分比同一性可以使用needleman和wunsch(j mol biol 48:444-453(1970))算法(该算法已并入gcg软件包(可在http_//_www_gcg_com获得)的gap程序中)、使用blossum 62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6、或4的空位权重和1、2、3、4、5、或6的长度权重来确定。
[0538]
包含一个氨基酸改变的多肽或异源多肽或其片段的变体通常相对于亲本保留类似的三级结构和抗原性。在一些情况下，变体还可包含至少一个氨基酸改变，该改变使变体具有增加的抗原性、增加的与tcr或与抗体的结合亲和力或两者。多肽或异源多肽的变体也可具有改善的与hla分子结合的能力。
[0539]
可工程化本公开的变体以使其包含保守置换。保守置换在本文中被定义为以下五组中的一组内的交换：第1组—较小脂族非极性或轻微极性残基(ala、ser、thr、pro、gly)；第2组—极性带负电残基及其酰胺(asp、asn、glu、gin)；第3组—极性带正电残基(his、arg、lys)；第4组—较大脂族非极性残基(met、leu、lie、val、cys)；以及第5组—较大芳族残基(phe、tyr、trp)。
[0540]
可工程化本公开的变体以使其包含低保守性置换，诸如一个氨基酸被具有相似特性但大小略有不同的另一个氨基酸替代，诸如丙氨酸被异亮氨酸残基替代。还可工程化本
公开的变体以使其包含高度非保守性置换，其可涉及用酸性氨基酸置换极性氨基酸，或甚至置换碱性氨基酸。
[0541]
可进行以产生本公开的变体的另外的置换包括可涉及除常见l-氨基酸之外的结构的置换。因此，d-氨基和非标准氨基酸(即，除常见的天然存在的蛋白氨基酸之外)也可用于置换目的，以产生与亲本相比具有增强免疫原性的变体。
[0542]
如果发现多于一个位置处的置换产生具有基本上相等或更大免疫原性的多肽或异源多肽，则可测试这些置换的组合以确定组合置换是否对变体的免疫原性产生加和或协同效应。
[0543]
可通过用其掺入基本上不会影响t细胞反应性并且不会消除与相关mhc的结合的其他氨基酸替代来修饰基本上不会有助于与tcr相互作用的氨基酸残基。也可缺失掉基本上不会有助于与tcr相互作用的氨基酸残基，只要该缺失基本上不会影响t细胞反应性并且不会消除与相关mhc的结合。
[0544]
另外，可进一步修饰多肽或异源多肽或其片段或变体以改善稳定性和/或与mhc分子的结合，以便引发更强的免疫应答。用于肽序列的这种优化的方法是本领域熟知的，包括例如引入反向肽键或非肽键。在反向肽键中，氨基酸残基不通过肽(—co—nh—)键连接，但肽键是反向的。此类逆反模拟肽可以使用本领域已知的方法制备，例如，如meziere等人(1997)(meziere等人，1997)中描述的那些。该方法涉及制备包含涉及主链而不是侧链取向的变化的伪肽。meziere等人(meziere等人,1997)证实对于mhc结合和t辅助细胞应答，这些伪肽是有用的。含有nh—co键而不是co—nh肽键的逆反肽对蛋白水解具有更强的抵抗力。可以使用的另外的非肽键是例如—ch2—nh、—ch2s—、—ch2ch2—、—ch
═
ch—、—coch2—、—ch(oh)ch2—和—ch2so—。
[0545]
本公开的多肽或异源多肽或其片段或变体可用在其氨基和/或羧基末端存在的另外的化学基团合成，以增强肽的稳定性、生物利用率和/或亲和力。例如，可将疏水基团诸如羧基苯甲酰基、丹酰基或叔丁氧羰基基团添加到氨基末端。同样，可将乙酰基基团或9-芴基甲氧基-羰基基团设置在氨基末端。另外，可将疏水基团、叔丁氧羰基或酰氨基基团添加到羧基末端。
[0546]
此外，可合成本公开的多肽或异源多肽或其片段或变体以改变它们的空间构型。例如，可使用肽的一个或多个氨基酸残基的d-异构体，而不是通常的l-异构体。
[0547]
类似地，可通过在合成本公开的多肽或异源多肽或其片段或变体之前或之后使特定氨基酸反应来化学修饰本公开的多肽或异源多肽或其片段或变体。此类修饰的示例是本领域熟知的，在例如以引用方式并入本文的r.lundblad,chemical reagents for protein modification，第3版.crc press,2004(lundblad,2004)中概述。氨基酸的化学修饰包括但不限于通过酰化、脒化、赖氨酸的吡哆化、还原烷基化、氨基基团与2,4,6-三硝基苯磺酸(tnbs)的三硝基苄化、羧基基团的酰胺修饰和通过将半胱氨酸过甲酸氧化成磺基丙氨酸的巯基修饰、汞衍生物的形成、混合二硫化物与其他硫醇化合物的形成、与马来酰亚胺的反应、与碘乙酸或碘乙酰胺的羧甲基化以及在碱性ph下与氰酸酯的甲氨酰化，但不限于这些化学修饰。就这一点而言，技术人员可参考current protocols in protein science的第15章(coligan等人，john wiley and sons ny 1995-2000)(coligan等人，1995)，了解与蛋白质的化学修饰相关的更广泛方法。
[0548]
简而言之，蛋白质中例如精氨酰残基的修饰通常基于邻位二羰基化合物(诸如苯基乙二醛、2,3-丁二酮和1,2-环己二酮)的反应形成加合物。另一个示例是甲基乙二醛与精氨酸残基的反应。半胱氨酸可在无需同时修饰其他亲核位点(诸如赖氨酸和组氨酸)的情况下修饰。因此，大量试剂可用于半胱氨酸的修饰。公司诸如sigma-aldrich的网站(http://www.sigma-aldrich)提供了关于特定试剂的信息。蛋白质中二硫键的选择性还原也是常见的。二硫键可在生物药物的热处理期间形成和氧化。woodward试剂k可用于修饰特定谷氨酸残基。n-(3-(二甲基氨基)丙基)-n'-乙基碳化二亚胺可用于在赖氨酸残基与谷氨酸残基之间形成分子内交联。例如，焦碳酸二乙酯是用于修饰蛋白质中的组氨酰基残基的试剂。组氨酸也可使用4-羟基-2-壬烯醛修饰。赖氨酸残基和其他α-氨基基团的反应例如可用于肽与表面的结合或蛋白质/肽的交联。赖氨酸是聚(乙烯)乙二醇的附接位点和蛋白质糖基化中的主要修饰位点。蛋白质中的甲硫氨酸残基可用例如碘乙酰胺、溴乙胺和氯胺t修饰。四硝基甲烷和n-乙酰基咪唑可用于酪氨酰基残基的修饰。经由形成二酪氨酸进行交联可用过氧化氢/铜离子来实现。最近对氨酸修饰的研究使用了n-溴代琥珀酰亚胺、2-羟基-5-硝基苄基溴或3-溴-3-甲基-2-(2-硝基苯基巯基)-3h-吲哚(bpns-粪臭素)。用peg成功修饰性蛋白质和肽通常与延长循环半衰期有关，而蛋白质与戊二醛、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲醛的交联用于制备水凝胶。用于免疫疗法的过敏原的化学修饰通常是通过用氰酸钾进行氨甲酰化来实现的。
[0549]
本公开提供了一种分离的多肽，该分离的多肽与以下的多肽有约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405。
[0550]
本公开还提供了一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸与以下的多核苷酸有约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、
272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406。
[0551]
本公开还提供了一种分离的多肽，该分离的多肽包含以下的氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405及它们的片段，其中该多肽包含一个或多个反向肽键。
[0552]
在一些实施方案中，反向肽键包括nh—co键。
[0553]
在一些实施方案中，反向肽键包括ch2—nh、—ch2s—、—ch2ch2—、—ch
═
ch—、—coch2—、—ch(oh)ch2—或—ch2so—键。
[0554]
本公开还提供了一种分离的多肽，该分离的多肽包含以下的氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，其中该多肽包含一个或多个化学修饰。
[0555]
在一些实施方案中，一种或多种化学修饰包括用羧基苯甲酰基、丹酰基、叔丁氧羰基、9-芴基甲氧基-羰基或氨基酸的d-异构体修饰。
[0556]
制备本公开的多核苷酸和多肽的方法
[0557]
本公开的多核苷酸或变体可以是通过克隆获得或合成产生的rna的形式或dna的形式。dna可以是双链的或单链的。
[0558]
产生本公开的多核苷酸和异源性多核苷酸或变体的方法是本领域已知的，包括化学合成、酶促合成(例如体外转录)、酶促或化学裂解较长前体、化学合成多核苷酸的较小片段随后连接这些片段或者已知的pcr方法。可针对所需氨基酸序列将待合成的多核苷酸序
列设计成具有适当的密码子。一般来讲，可针对序列在其中将用于表达的预期宿主选择优选的密码子。
[0559]
制备本公开的多肽和异源多肽的方法是本领域已知的，包括用于多肽的克隆和表达以及多肽的化学合成的标准分子生物学技术。
[0560]
肽可通过固相肽合成的fmoc-聚酰胺模式合成，如lukas等人(lukas等人，1981)以及其中引用的参考文献所公开。临时n-氨基基团由9-芴基甲氧基羰基(fmoc)基团提供。该高度碱不稳定保护基团的重复裂解使用20％的n,n-二甲基甲酰胺溶液进行。侧链官能团可作为它们的丁基醚(在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的情况下)、丁基酯(在谷氨酸和天冬氨酸的情况下)、丁氧羰基衍生物(在赖氨酸和组氨酸的情况下)、三苯甲基衍生物(在半胱氨酸的情况下)和4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰衍生物(在精氨酸的情况下)进行保护。在谷氨酰胺或天冬酰胺为c末端残基的情况下，使用4,4'-二甲氧基二苯甲基基团来保护侧链酰氨基官能团。固相载体是基于由三种单体即二甲基丙烯酰胺(主链单体)、双丙烯酰乙二胺(交联剂)和丙烯酰肌胺酸甲酯(官能化剂)构成的聚二甲基-丙烯酰胺聚合物。所用的肽-树脂可裂解连接剂是酸不稳定的4-羟甲基-苯氧基乙酸衍生物。除了天冬酰胺和谷氨酰胺之外，所有氨基酸衍生物作为它们预先形成的对称酸酐衍生物添加，天冬酰胺和谷氨酰胺使用反向n,n-二环己基-碳化二亚胺/1-羟基苯并三唑介导的偶联程序添加。使用茚三酮、三硝基苯磺酸或异素测试程序监测所有偶联反应和脱保护反应。合成完成后，通过用包含50％清除剂混合物的95％三氟乙酸处理，将肽从树脂载体上裂解，同时移除侧链保护基团。常用的清除剂包括乙二硫醇、苯酚、苯甲醚和水，确切的选择取决于所合成的肽的组成氨基酸。用于合成肽的固相与溶液相方法的组合也是可能的(参见例如bruckdorfer等人，2004以及其中引用的参考文献)。
[0561]
美国专利4,897,445提供了多肽链中非肽键(—ch2—nh)的固相合成的方法，该方法涉及由标准工序合成的多肽，以及在存在nacnbh3的情况下通过使氨基醛和氨基酸反应合成的非肽键。
[0562]
本公开的载体和重组病毒
[0563]
本公开还提供了一种载体，该载体包含本公开的多核苷酸或异源多核苷酸。本公开还提供了包含编码本文所公开的多肽中的一种或多种多肽的多核苷酸的载体。
[0564]
本公开还提供了一种载体，该载体包含编码以下的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段。
[0565]
本公开还提供了一种载体，该载体包含以下的一种或多种多核苷酸：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406或它们的片段。
[0566]
本公开还提供了一种包含异源多核苷酸的载体，该异源多核苷酸编码包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽的异源多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段。
[0567]
本公开还提供了一种包含异源多核苷酸的载体，该异源多核苷酸包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多核苷酸：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404和406及它们的片段。
[0568]
本公开还提供了一种包含异源多核苷酸的载体，该异源多核苷酸编码包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、
57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202或203个选自由以下项组成的组的多肽的异源多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405，及它们的片段。
[0569]
本公开还提供了一种包含异源多核苷酸的载体，该异源多核苷酸包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202或203个选自由以下项组成的组的多核苷酸：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、
380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404和406，及它们的片段。
[0570]
在一些实施方案中，载体是表达载体。在一些实施方案中，载体是病毒载体。
[0571]
在一些实施方案中，载体是表达载体。载体可以是旨在用于在任何宿主(诸如细菌、酵母或哺乳动物)中表达本公开的多核苷酸或异源多核苷酸的载体。合适的表达载体通常可在宿主生物体中作为游离基因或作为宿主染体dna的整体部分进行复制。通常，表达载体包含选择标记，诸如氨苄青霉素抗性、潮霉素抗性、四环素抗性、卡那霉素抗性或新霉素抗性，以允许检测用所需dna序列转化或转导的那些细胞。示例性载体是质粒、粘粒、噬菌体、病毒载体、转座子或人工染体。
[0572]
合适的载体是已知的；许多可商购获得以生成重组构建体。以下载体以举例的方式提供。细菌载体：pbs、phagescript、psix174、pbluescript sk、pbs ks、pnh8a、pnh16a、pnh18a、pnh46a(stratagene,la jolla,calif.,usa)；ptrc99a、pkk223-3、pkk233-3、pdr540和prit5(pharmacia,uppsala,sweden)。真核载体：pwlneo、psv2cat、pog44、pxr1、psg(stratagene)、psvk3、pbpv、pmsg和psvl(pharmacia)。转座子载体：睡美人转座子和piggybac转座子。
[0573]
在一些实施方案中，载体是病毒载体。本公开的载体可用于产生包含本公开的载体的重组病毒或用于表达本公开的多肽。病毒载体来源于天然存在的病毒基因组，通常被修饰为不能复制，例如非复制性。非复制性病毒需要提供反式蛋白质进行复制。通常，这些蛋白质在病毒产生细胞系中稳定或瞬时表达，从而允许病毒复制。因此，病毒载体通常具有感染性和非复制性。病毒载体可以是腺病毒载体、腺相关病毒(aav)载体(例如aav 5型和2型)、甲病毒(例如委内瑞拉马脑炎病毒(vee)、辛德毕斯病毒(sin)、塞姆利基森林病毒(sfv)和vee-sin嵌合体)、疱疹病毒载体(例如来源于巨细胞病毒如恒河猴巨细胞病毒(rhcmv)的载体)、沙粒病毒载体(例如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)载体)、麻疹病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒、修饰的痘苗病毒安卡拉(mva)、nyvac(来源于痘苗哥本哈根毒株)和禽痘载体：金丝雀痘(alvac)和鸡痘(fpv)载体)、水疱性口炎病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、病毒样颗粒、杆状病毒载体和细菌孢子。
[0574]
本公开的载体可使用已知的技术产生。本公开还提供了一种包含本公开的载体的重组病毒。
[0575]
腺病毒载体
[0576]
在一些实施方案中，病毒载体来源于腺病毒。在一些实施方案中，包含载体的重组病毒来源于腺病毒。
[0577]
腺病毒载体可以来源于人腺病毒(ad)，但也可以来源于感染其他物种的腺病毒，诸如牛腺病毒(例如牛腺病毒3，即badv3)、犬腺病毒(例如cadv2)、猪腺病毒(例如，padv3或5)或类人猿诸如黑猩猩(pan)、大猩猩(gorilla)、红毛猩猩(pongo)、倭黑猩猩(pan paniscus)和普通黑猩猩(pan troglodytes)。通常，从相应类人猿的粪便样品中分离天然存在的类人猿腺病毒。
[0578]
人腺病毒载体可来源于各种腺病毒血清型，例如来源于人腺病毒血清型had5、had7、had11、had26、had34、had35、had48、had49或had50(这些血清型也被称为ad5、ad7、ad11、ad26、ad34、ad35、ad48、ad49或ad50)。
[0579]
类人猿腺病毒载体可来源于各种腺病毒血清型，例如来源于类人猿腺病毒血清型
gad20、gad19、gad21、gad25、gad26、gad27、gad28、gad29、gad30、gad31、chad3、chad4、chad5、chad6、chad7、chad8、chad9、chad10、chad11、chad16、chadi7、chad19、chad20、chad22、chad24、chad26、chad30、chad31、chad37、chad38、chad44、chad55、chad63、chad73、chad82、chad83、chad146、chad147、panad1、panad2或panad3。
[0580]
腺病毒载体是本领域已知的。大多数人腺病毒和非人腺病毒的序列是已知的，其他的可以使用常规程序获得。ad26的示例性基因组序列存在于genbank登录号ef153474中，以及国际专利公布号wo2007/104792的seq id no:1中。ad35的示例性基因组序列存在于国际专利公布号wo2000/70071的图6中。基于ad26的载体描述于例如国际专利公布号wo2007/104792中。基于ad35的载体描述于例如美国专利号7,270,811和国际专利公布号wo2000/70071中。基于chad3、chad4、chad5、chad6、chad7、chad8、chad9、chad10、chad11、chad16、chad17、chad19、chad20、chad22、chad24、chad26、chad30、chad31、chad37、chad38、chad44、chad63和chad82的载体描述于wo2005/071093中。基于panad1、panad2、panad3、chad55、chad73、chad83、chad146和chad147的载体描述于国际专利公布号wo2010/086189中。
[0581]
工程化腺病毒载体以使其包含病毒复制必需的基因产物(诸如腺病毒区域e1、e2和e4中的一个或多个)的至少一种功能缺失或完全移除，因此使得腺病毒不能复制。el区域的缺失可包括eia、eib 55k或eib 21k或它们的任何组合的缺失。复制缺陷型腺病毒是通过生产细胞利用辅助质粒反式提供由缺失区域编码的蛋白质或者工程化生产细胞以使其表达所需蛋白质来繁殖的。腺病毒载体也可在e3区域中具有缺失，这种缺失对于复制来说是可有可无的，因此这种缺失不必补充。本公开的腺病毒载体可包含e1区域和e3区域的至少一部分的功能缺失或完全移除。本公开的腺病毒载体可进一步包含e4区域和/或e2区域的功能缺失或完全移除。可利用的合适的生产细胞是由el永生化的人视网膜细胞，例如911或per.c6细胞(参见例如美国专利5,994,128)、el转化的羊水细胞(参见例如ep1230354)、e 1转化的a549细胞(参见例如国际专利公布wo1998/39411、美国专利5,891,690)。可使用的示例性载体是ad26，其包含足以进行病毒复制的功能e1编码区、e3编码区中的缺失和e4编码区中的缺失，前提条件是e4开放阅读框6/7不缺失(参见例如美国专利9,750,801)。
[0582]
在一些实施方案中，腺病毒载体是人腺病毒(ad)载体。在一些实施方案中，ad载体来源于ad5。在一些实施方案中，ad载体来源于ad11。在一些实施方案中，ad载体来源于ad26。在一些实施方案中，ad载体来源于ad34。在一些实施方案中，ad载体来源于ad35。在一些实施方案中，ad载体来源于ad48。在一些实施方案中，ad载体来源于ad49。在一些实施方案中，ad载体来源于ad50。
[0583]
在一些实施方案中，腺病毒载体是类人猿腺病毒(gad)载体。在一些实施方案中，gad载体来源于gad20。在一些实施方案中，gad载体来源于gad19。在一些实施方案中，gad载体来源于gad21。在一些实施方案中，gad载体来源于gad25。在一些实施方案中，gad载体来源于gad26。在一些实施方案中，gad载体来源于gad27。在一些实施方案中，gad载体来源于gad28。在一些实施方案中，gad载体来源于gad29。在一些实施方案中，gad载体来源于gad30。在一些实施方案中，gad载体来源于gad31。在一些实施方案中，gad载体来源于chad4。在一些实施方案中，gad载体来源于chad5。在一些实施方案中，gad载体来源于chad6。在一些实施方案中，gad载体来源于chad7。在一些实施方案中，gad载体来源于chad8。在一些实施方案中，gad载体来源于chad9。在一些实施方案中，gad载体来源于
chad20。在一些实施方案中，gad载体来源于chad22。在一些实施方案中，gad载体来源于chad24。在一些实施方案中，gad载体来源于chad26。在一些实施方案中，gad载体来源于chad30。在一些实施方案中，gad载体来源于chad31。在一些实施方案中，gad载体来源于chad32。在一些实施方案中，gad载体来源于chad33。在一些实施方案中，gad载体来源于chad37。在一些实施方案中，gad载体来源于chad38。在一些实施方案中，gad载体来源于chad44。在一些实施方案中，gad载体来源于chad55。在一些实施方案中，gad载体来源于chad63。在一些实施方案中，gad载体来源于chad68。在一些实施方案中，gad载体来源于chad73。在一些实施方案中，gad载体来源于chad82。在一些实施方案中，gad载体来源于chad83。
[0584]
可将本公开的多肽或异源多肽插入载体中不影响所得重组病毒的病毒生存能力的位点或区域(插入区)中。可将本公开的多肽或异源多肽以平行(以5'至3'转录)或反平行(相对于载体主链以3'至5'方向转录)取向插入缺失的e1区中。另外，能够指导本公开的多肽或异源多肽在制备要用的载体的哺乳动物宿主细胞中表达的适当转录调控元件可操作性连接到本公开的多肽或异源多肽。“可操作地连接的”序列包括与它们调控的核酸序列邻接的表达控制序列，以及以反式或以一定距离作用以控制受调控的核酸序列的调控序列。
[0585]
重组腺病毒颗粒可以根据本领域中的任何常规技术(例如，国际专利公布号wo1996/17070)，使用反式提供病毒复制所必需的缺失病毒基因的互补细胞系或辅助性病毒来制备和繁殖。细胞系293(graham等人，1977,j.gen.virol.36:59-72)、per.c6(参见例如美国专利5,994,128)、e1a549和911通常用于补充el缺失。其他细胞系已经被工程化以补充缺陷载体(yeh等人，1996,j.virol.70:559-565；kroughak和graham，1995,human gene ther.6:1575-1586；wang等人，1995,gene ther.2:775-783；lusky等人，1998,j.virol.72:2022-203；ep 919627和国际专利公布号wo1997/04119)。腺病毒颗粒可以从培养上清液回收，但也可以从裂解后的细胞回收，并且任选地根据标准技术(例如，谱法、超速离心法，如国际专利公布号wo1996/27677、国际专利公布号wo1998/00524、国际专利公布号wo1998/26048和国际专利公布号wo2000/50573)。用于繁殖腺病毒载体的构建和方法还描述于例如美国专利5,559,099、5,837,511、5,846,782、5,851,806、5,994,106、5,994,128、5,965,541、5,981,225、6,040,174、6,020,191和6,113,913中。
[0586]
本公开提供了一种包含本公开的载体的重组腺病毒。本公开还提供了一种包含本公开的载体的重组人腺病毒(rad)。本公开还提供了一种包含本公开的载体的来源于血清型26的重组人腺病毒(rad26)。
[0587]
本文提供了包含本公开的任何多核苷酸的病毒载体，其中该载体来源于had26(也称为具有ad26)。
[0588]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:1，或者与seq id no:1具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0589]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:3，或者与seq id no:3具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0590]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:5，或者与seq id no:5具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0591]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:7，或者与seq id no:7具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0592]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:9，或者与seq id no:9具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0593]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:11，或者与seq id no:11具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0594]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:13，或者与seq id no:13具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0595]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:15，或者与seq id no:15具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0596]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:17，或者与seq id no:17具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0597]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下多肽的多核苷酸：多肽seq id no:19，或者与seq id no:19具有至少90％序列同一性、或与seq id no:19具有至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的多肽。
[0598]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下多肽的多核苷酸：多肽seq id no:21，或者与seq id no:21具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的多肽。
[0599]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下多肽的多核苷酸：多肽seq id no:23，或者与seq id no:23具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的多肽。
[0600]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码多肽的多核苷酸，该多肽编码以下氨基酸序列：氨基酸序列seq id no:25，或者与seq id no:25具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0601]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码多肽的多核苷酸，该多肽编码以下氨基酸序列：氨基酸序列seq id no:27，或者与seq id no:27具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0602]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码多肽的多核苷酸，该多肽编码以下氨基酸序列：氨基酸序列seq id no:29，或者与seq id no:29具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0603]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码多肽的多核苷酸，该多肽编码以下氨基酸
序列：氨基酸序列seq id no:31，或者与seq id no:31具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0604]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:33，或者与seq id no:33具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0605]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:35，或者与seq id no:35具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0606]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:37，或者与seq id no:37具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0607]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:39，或者与seq id no:39具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0608]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:41，或者与seq id no:41具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0609]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:43，或者与seq id no:43具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0610]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:45，或者与seq id no:45具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0611]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:47，或者与seq id no:47具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0612]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:49，或者与seq id no:49具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0613]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:51，或者与seq id no:51具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0614]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:53，或者与seq id no:53具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0615]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:55，或者与seq id no:55具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0616]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:57，或者与seq id no:57具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0617]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:59，或者与seq id no:59具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0618]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:61，或者与seq id no:61具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0619]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:63，或者与seq id no:63具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0620]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:65，或者与seq id no:65具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0621]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:67，或者与seq id no:67具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0622]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:69，或者与seq id no:69具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0623]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:71，或者与seq id no:71具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0624]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:73，或者与seq id no:73具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0625]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:75，或者与seq id no:75具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0626]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:77，或者与seq id no:77具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0627]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:79，或者与seq id no:79具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0628]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:81，或者与seq id no:81具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0629]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:83，或者与seq id no:83具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0630]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:85，或者与seq id no:85具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0631]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:87，或者与seq id no:87具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0632]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:89，或者与seq id no:89具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0633]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:91，或者与seq id no:91具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0634]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:93，或者与seq id no:93具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0635]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:95，或者与seq id no:95具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0636]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:97，或者与seq id no:97具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0637]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:99，或者与seq id no:99具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0638]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:101，或者与seq id no:101具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0639]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:103，或者与seq id no:103具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0640]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:105，或者与seq id no:105具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0641]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:107，或者与seq id no:107具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0642]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:109，或者与seq id no:109具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0643]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:111，或者与seq id no:111具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0644]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:113，或者与seq id no:113具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0645]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:115，或者与seq id no:115具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0646]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:117，或者与seq id no:117具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0647]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:119，或者与seq id no:119具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0648]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:121，或者与seq id no:121具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0649]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:123，或者与seq id no:123具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0650]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:125，或者与seq id no:125具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0651]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:127，或者与seq id no:127具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0652]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:129，或者与seq id no:129具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0653]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:131，或者与seq id no:131具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0654]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:133，或者与seq id no:133具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0655]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:135，或者与seq id no:135具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0656]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:137，或者与seq id no:137具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0657]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:139，或者与seq id no:139具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0658]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:141，或者与seq id no:141具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0659]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:143，或者与seq id no:143具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0660]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:145，或者与seq id no:145具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0661]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:147，或者与seq id no:147具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0662]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:149，或者与seq id no:149具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0663]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:151，或者与seq id no:151具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0664]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:153，或者与seq id no:153具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0665]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:155，或者与seq id no:155具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0666]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:157，或者与seq id no:157具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0667]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:159，或者与seq id no:159具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0668]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:161，或者与seq id no:161具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0669]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:163，或者与seq id no:163具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0670]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:165，或者与seq id no:165具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0671]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:167，或者与seq id no:167具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0672]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:169，或者与seq id no:169具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0673]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:171，或者与seq id no:171具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0674]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:173，或者与seq id no:173具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0675]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:175，或者与seq id no:175具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0676]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:177，或者与seq id no:177具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0677]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:179，或者与seq id no:179具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0678]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:181，或者与seq id no:181具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0679]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:183，或者与seq id no:183具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0680]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:185，或者与seq id no:185具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0681]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:187，或者与seq id no:187具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0682]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:189，或者与seq id no:189具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0683]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:191，或者与seq id no:191具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0684]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:193，或者与seq id no:193具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0685]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:195，或者与seq id no:195具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0686]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:197，或者与seq id no:197具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0687]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:199，或者与seq id no:199具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0688]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:201，或者与seq id no:201具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0689]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:203，或者与seq id no:203具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0690]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:205，或者与seq id no:205具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0691]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:207，或者与seq id no:207具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0692]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:209，或者与seq id no:209具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0693]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:211，或者与seq id no:211具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0694]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:213，或者与seq id no:213具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0695]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:215，或者与seq id no:215具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0696]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:217，或者与seq id no:217具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0697]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:219，或者与seq id no:219具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0698]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:221，或者与seq id no:221具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0699]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:223，或者与seq id no:223具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0700]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:225，或者与seq id no:225具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0701]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:227，或者与seq id no:227具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0702]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:229，或者与seq id no:229具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0703]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:231，或者与seq id no:231具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0704]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:233，或者与seq id no:233具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0705]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:235，或者与seq id no:235具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0706]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:237，或者与seq id no:237具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0707]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:239，或者与seq id no:239具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0708]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:241，或者与seq id no:241具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0709]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:243，或者与seq id no:243具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0710]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:245，或者与seq id no:245具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0711]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:247，或者与seq id no:247具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0712]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:249，或者与seq id no:249具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0713]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:251，或者与seq id no:251具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0714]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:253，或者与seq id no:253具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0715]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:255，或者与seq id no:255具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0716]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:257，或者与seq id no:257具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0717]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:259，或者与seq id no:259具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0718]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:261，或者与seq id no:261具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0719]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:263，或者与seq id no:263具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0720]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:265，或者与seq id no:265具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0721]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:267，或者与seq id no:267具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0722]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:269，或者与seq id no:269具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0723]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:271，或者与seq id no:271具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0724]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:273，或者与seq id no:273具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0725]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:275，或者与seq id no:275具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0726]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:277，或者与seq id no:277具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0727]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:279，或者与seq id no:279具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0728]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:281，或者与seq id no:281具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0729]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:283，或者与seq id no:283具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0730]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:285，或者与seq id no:285具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0731]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:287，或者与seq id no:287具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0732]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:289，或者与seq id no:289具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0733]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:291，或者与seq id no:291具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0734]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:293，或者与seq id no:293具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0735]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:295，或者与seq id no:295具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0736]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:297，或者与seq id no:297具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0737]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:299，或者与seq id no:299具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0738]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:301，或者与seq id no:301具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0739]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:303，或者与seq id no:303具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0740]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:305，或者与seq id no:305具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0741]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:307，或者与seq id no:307具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0742]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:309，或者与seq id no:309具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0743]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:311，或者与seq id no:311具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0744]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:313，或者与seq id no:313具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0745]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:315，或者与seq id no:315具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0746]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:317，或者与seq id no:317具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0747]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:319，或者与seq id no:319具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0748]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:321，或者与seq id no:321具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0749]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:323，或者与seq id no:323具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0750]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:325，或者与seq id no:325具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0751]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:327，或者与seq id no:327具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0752]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:329，或者与seq id no:329具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0753]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:331，或者与seq id no:331具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0754]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:333，或者与seq id no:333具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0755]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:335，或者与seq id no:335具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0756]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:337，或者与seq id no:337具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0757]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:339，或者与seq id no:339具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0758]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:341，或者与seq id no:341具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0759]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:343，或者与seq id no:343具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0760]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:345，或者与seq id no:345具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0761]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:347，或者与seq id no:347具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0762]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:349，或者与seq id no:349具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0763]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:351，或者与seq id no:351具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0764]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:353，或者与seq id no:353具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0765]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:355，或者与seq id no:355具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0766]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:357，或者与seq id no:357具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0767]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:359，或者与seq id no:359具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0768]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:361，或者与seq id no:361具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0769]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:363，或者与seq id no:363具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0770]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:365，或者与seq id no:365具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0771]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:367，或者与seq id no:367具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0772]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:369，或者与seq id no:369具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0773]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:371，或者与seq id no:371具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0774]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:373，或者与seq id no:373具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0775]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:375，或者与seq id no:375具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0776]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:377，或者与seq id no:377具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0777]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:379，或者与seq id no:379具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0778]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:381，或者与seq id no:381具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0779]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:383，或者与seq id no:383具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0780]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:385，或者与seq id no:385具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0781]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:387，或者与seq id no:387具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0782]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:389，或者与seq id no:389具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0783]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:391，或者与seq id no:391具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0784]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:393，或者与seq id no:393具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0785]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:395，或者与seq id no:395具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0786]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:397，或者与seq id no:397具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0787]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:399，或者与seq id no:399具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0788]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:401，或者与seq id no:401具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0789]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:403，或者与seq id no:403具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0790]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:405，或者与seq id no:405具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0791]
在一些实施方案中，ad26载体包含编码选自以下的两种或更多种多肽的氨基酸序列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段。
[0792]
本公开还提供了一种包含本公开的载体的重组类人猿腺病毒(rgad)。在一些实施方案中，rgad来源于gad20。在一些实施方案中，rgad来源于gad19。在一些实施方案中，rgad来源于gad21。在一些实施方案中，rgad来源于gad25。在一些实施方案中，rgad来源于gad26。在一些实施方案中，rgad来源于gad27。在一些实施方案中，rgad来源于gad28。在一些实施方案中，rgad来源于gad29。在一些实施方案中，rgad来源于gad30。在一些实施方案中，rgad来源于gad31。gad19-21和gad25-31描述于国际专利公布wo2019/008111中描述，并且代表在一般人中具有高免疫原性且没有预先存在的免疫性的毒株。gad20基因组的多核苷酸序列公开于wo2019/008111中。
[0793]
本文提供了一种包含本公开的载体的来源于血清型20的重组黑猩猩腺病毒(rchad20)。在一些实施方案中，包含本公开的任何多核苷酸的病毒载体是来源于gad20的载体。
[0794]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:1，或者与seq id no:1具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0795]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:3，或者与seq id no:3具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0796]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:5，或者与seq id no:5具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0797]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:7，或者与seq id no:7具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0798]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:9，或者与seq id no:9具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0799]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:11，或者与seq id no:11具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0800]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:13，或者与seq id no:13具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0801]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:15，或者与seq id no:15具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0802]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:17，或者与seq id no:17具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0803]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:19，或者与seq id no:19具有至少90％序列同一性、或与seq id no:19具有至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0804]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:21，或者与seq id no:21具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0805]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:23，或者与seq id no:23具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0806]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:25，或者与seq id no:25具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0807]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:27，或者与seq id no:27具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0808]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:29，或者与seq id no:29具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0809]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:31，或者与seq id no:31具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0810]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:33，或者与seq id no:33具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0811]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:35，或者与seq id no:35具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0812]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:37，或者与seq id no:37具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0813]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:39，或者与seq id no:39具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0814]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:41，或者与seq id no:41具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0815]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:43，或者与seq id no:43具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0816]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:45，或者与seq id no:45具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0817]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:47，或者与seq id no:47具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0818]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:49，或者与seq id no:49具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0819]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:51，或者与seq id no:51具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0820]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:53，或者与seq id no:53具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0821]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:55，或者与seq id no:55具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0822]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:57，或者与seq id no:57具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0823]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:59，或者与seq id no:59具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0824]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:61，或者与seq id no:61具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0825]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:63，或者与seq id no:63具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0826]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:65，或者与seq id no:65具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0827]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:67，或者与seq id no:67具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0828]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:69，或者与seq id no:69具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0829]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:71，或者与seq id no:71具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0830]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:73，或者与seq id no:73具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0831]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:75，或者与seq id no:75具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0832]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:77，或者与seq id no:77具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0833]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:79，或者与seq id no:79具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0834]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:81，或者与seq id no:81具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0835]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:83，或者与seq id no:83具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0836]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:85，或者与seq id no:85具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0837]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:87，或者与seq id no:87具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0838]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:89，或者与seq id no:89具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0839]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:91，或者与seq id no:91具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0840]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:93，或者与seq id no:93具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0841]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:95，或者与seq id no:95具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0842]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:97，或者与seq id no:97具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0843]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:99，或者与seq id no:99具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0844]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:101，或者与seq id no:101具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0845]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:103，或者与seq id no:103具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0846]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:105，或者与seq id no:105具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0847]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:107，或者与seq id no:107具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0848]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:109，或者与seq id no:109具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0849]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:111，或者与seq id no:111具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0850]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:113，或者与seq id no:113具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0851]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:115，或者与seq id no:115具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0852]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:117，或者与seq id no:117具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0853]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:119，或者与seq id no:119具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0854]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:121，或者与seq id no:121具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0855]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:123，或者与seq id no:123具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0856]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:125，或者与seq id no:125具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0857]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:127，或者与seq id no:127具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0858]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:129，或者与seq id no:129具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0859]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:131，或者与seq id no:131具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0860]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:133，或者与seq id no:133具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0861]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:135，或者与seq id no:135具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0862]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:137，或者与seq id no:137具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0863]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:139，或者与seq id no:139具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0864]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:141，或者与seq id no:141具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0865]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:143，或者与seq id no:143具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0866]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:145，或者与seq id no:145具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0867]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:147，或者与seq id no:147具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0868]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:149，或者与seq id no:149具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0869]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:151，或者与seq id no:151具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0870]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:153，或者与seq id no:153具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0871]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:155，或者与seq id no:155具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0872]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:157，或者与seq id no:157具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0873]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:159，或者与seq id no:159具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0874]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:161，或者与seq id no:161具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0875]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:163，或者与seq id no:163具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0876]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:165，或者与seq id no:165具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0877]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:167，或者与seq id no:167具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0878]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:169，或者与seq id no:169具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0879]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:171，或者与seq id no:171具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0880]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:173，或者与seq id no:173具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0881]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:175，或者与seq id no:175具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0882]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:177，或者与seq id no:177具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0883]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:179，或者与seq id no:179具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0884]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:181，或者与seq id no:181具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0885]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:183，或者与seq id no:183具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0886]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:185，或者与seq id no:185具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0887]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:187，或者与seq id no:187具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0888]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:189，或者与seq id no:189具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0889]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:191，或者与seq id no:191具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0890]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:193，或者与seq id no:193具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0891]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:195，或者与seq id no:195具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0892]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:197，或者与seq id no:197具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0893]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:199，或者与seq id no:199具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0894]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:201，或者与seq id no:201具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0895]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:203，或者与seq id no:203具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0896]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:205，或者与seq id no:205具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0897]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:207，或者与seq id no:207具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0898]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:209，或者与seq id no:209具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0899]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:211，或者与seq id no:211具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0900]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:213，或者与seq id no:213具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0901]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:215，或者与seq id no:215具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0902]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:217，或者与seq id no:217具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0903]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:219，或者与seq id no:219具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0904]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:221，或者与seq id no:221具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0905]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:223，或者与seq id no:223具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0906]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:225，或者与seq id no:225具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0907]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:227，或者与seq id no:227具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0908]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:229，或者与seq id no:229具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0909]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:231，或者与seq id no:231具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0910]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:233，或者与seq id no:233具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0911]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:235，或者与seq id no:235具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0912]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:237，或者与seq id no:237具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0913]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:239，或者与seq id no:239具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0914]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:241，或者与seq id no:241具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0915]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:243，或者与seq id no:243具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0916]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:245，或者与seq id no:245具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0917]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:247，或者与seq id no:247具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0918]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:249，或者与seq id no:249具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0919]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:251，或者与seq id no:251具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0920]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:253，或者与seq id no:253具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0921]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:255，或者与seq id no:255具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0922]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:257，或者与seq id no:257具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0923]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:259，或者与seq id no:259具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0924]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:261，或者与seq id no:261具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0925]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:263，或者与seq id no:263具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0926]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:265，或者与seq id no:265具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0927]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:267，或者与seq id no:267具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0928]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:269，或者与seq id no:269具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0929]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:271，或者与seq id no:271具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0930]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:273，或者与seq id no:273具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0931]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:275，或者与seq id no:275具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0932]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:277，或者与seq id no:277具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0933]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:279，或者与seq id no:279具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0934]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:281，或者与seq id no:281具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0935]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:283，或者与seq id no:283具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0936]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:285，或者与seq id no:285具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0937]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:287，或者与seq id no:287具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0938]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:289，或者与seq id no:289具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0939]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:291，或者与seq id no:291具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0940]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:293，或者与seq id no:293具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0941]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:295，或者与seq id no:295具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0942]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:297，或者与seq id no:297具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0943]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:299，或者与seq id no:299具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0944]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:301，或者与seq id no:301具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0945]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:303，或者与seq id no:303具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0946]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:305，或者与seq id no:305具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0947]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:307，或者与seq id no:307具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0948]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:309，或者与seq id no:309具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0949]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:311，或者与seq id no:311具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0950]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:313，或者与seq id no:313具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0951]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:315，或者与seq id no:315具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0952]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:317，或者与seq id no:317具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0953]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:319，或者与seq id no:319具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0954]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:321，或者与seq id no:321具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0955]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:323，或者与seq id no:323具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0956]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:325，或者与seq id no:325具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0957]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:327，或者与seq id no:327具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0958]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:329，或者与seq id no:329具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0959]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:331，或者与seq id no:331具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0960]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:333，或者与seq id no:333具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0961]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:335，或者与seq id no:335具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0962]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:337，或者与seq id no:337具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0963]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:339，或者与seq id no:339具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0964]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:341，或者与seq id no:341具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0965]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:343，或者与seq id no:343具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0966]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:345，或者与seq id no:345具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0967]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:347，或者与seq id no:347具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0968]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:349，或者与seq id no:349具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0969]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:351，或者与seq id no:351具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0970]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:353，或者与seq id no:353具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0971]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:355，或者与seq id no:355具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0972]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:357，或者与seq id no:357具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0973]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:359，或者与seq id no:359具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0974]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:361，或者与seq id no:361具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0975]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:363，或者与seq id no:363具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0976]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:365，或者与seq id no:365具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0977]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:367，或者与seq id no:367具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0978]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:369，或者与seq id no:369具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0979]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:371，或者与seq id no:371具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0980]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:373，或者与seq id no:373具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0981]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:375，或者与seq id no:375具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0982]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:377，或者与seq id no:377具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0983]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:379，或者与seq id no:379具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0984]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:381，或者与seq id no:381具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0985]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:383，或者与seq id no:383具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0986]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:385，或者与seq id no:385具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0987]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:387，或者与seq id no:387具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0988]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:389，或者与seq id no:389具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0989]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:391，或者与seq id no:391具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0990]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:393，或者与seq id no:393具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0991]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:395，或者与seq id no:395具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0992]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:397，或者与seq id no:397具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0993]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:399，或者与seq id no:399具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0994]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:401，或者与seq id no:401具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0995]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:403，或者与seq id no:403具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0996]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:405，或者与seq id no:405具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0997]
在一些实施方案中，gad20载体包含编码选自以下的两种或更多种多肽的氨基酸序列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段。
[0998]
痘病毒载体
[0999]
在一些实施方案中，病毒载体来源于痘病毒。在一些实施方案中，构成载体的重组病毒来源于痘病毒。
[1000]
痘病毒(poxviridae)载体可以来源于天花病毒(天花)、痘苗病毒、牛痘病毒或猴痘病毒。示例性痘苗病毒是哥本哈根痘苗病毒(w)、纽约减毒痘苗病毒(nyvac)、alvac、trovac和修饰的痘苗安卡拉(mva)。
[1001]
mva源自真皮痘苗毒株安卡拉(绒毛膜尿囊痘苗安卡拉(cva)病毒)，该毒株在土耳其安卡拉疫苗接种研究(vaccination institute,ankara,turkey)所保存多年，用作人类疫苗接种的基础。然而，由于与痘苗病毒(vacv)相关的疫苗接种后并发症通常很严重，因此曾多次尝试生产更减毒、更安全的天花疫苗。
[1002]
mva已经通过cva病毒在鸡胚成纤维细胞上连续传代516次而生成(参见meyer等人，j.gen.virol.,72:1031-1038(1991)和美国专利号10,035,832)。作为这些长期传代的
enzymology 153:545-563；美国专利号4,769,330；美国专利号4,772,848；美国专利号4,603,112；美国专利号5,100,587和美国专利号5,179,993)。在示例性方法中，可将待插入病毒中的dna序列置于大肠杆菌(e.coli)质粒构建体中，已将与mva的dna区段同源的dna插入该构建体中。可将待插入的dna序列单独地连接到启动子。可将启动子-基因连接序列定位在质粒构建体中，使得启动子-基因连接序列的两端均侧接有与位于含有非必需基因座的mva dna区域两侧的dna序列同源的dna。可通过在大肠杆菌内繁殖来扩增所得质粒构建体并将其分离。可将含有待插入的dna基因序列的分离质粒转染到例如鸡胚成纤维细胞(cef)的细胞培养物中，同时用mva感染培养物。质粒中的同源mva dna与病毒基因组之间的重组分别可产生通过存在外源dna序列而修饰的mva。可在裂解步骤(例如，化学裂解、冷冻/解冻、渗透压休克、超声处理等)后从培养上清液或从培养细胞中回收rmva颗粒。可使用连续几轮噬斑纯化来去除污染的野生型病毒。然后可使用本领域已知的技术(例如，谱方法或在氯化铯或蔗糖梯度上超速离心)来纯化病毒颗粒。
[1008]
本文提供了包含本公开的任何多核苷酸的病毒载体，其中该载体来源于mva。本公开还提供了一种包含本公开的载体的重组修饰的痘苗安卡拉(rmva)。
[1009]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:1，或者与seq id no:1具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1010]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:3，或者与seq id no:3具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1011]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:5，或者与seq id no:5具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1012]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:7，或者与seq id no:7具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1013]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:9，或者与seq id no:9具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1014]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:11，或者与seq id no:11具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1015]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:13，或者与seq id no:13具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1016]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:15，或者与seq id no:15具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1017]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:17，或者与seq id no:17具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1018]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:19，或者与seq id no:19具有至少90％序列同一性、或与seq id no:19具有至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1019]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:21，或者与seq id no:21具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1020]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:23，或者与seq id no:23具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1021]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:25，或者与seq id no:25具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1022]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:27，或者与seq id no:27具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1023]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:29，或者与seq id no:29具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1024]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:31，或者与seq id no:31具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1025]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:33，或者与seq id no:33具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1026]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:35，或者与seq id no:35具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1027]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:37，或者与seq id no:37具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1028]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:39，或者与seq id no:39具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1029]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:41，或者与seq id no:41具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1030]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:43，或者与seq id no:43具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1031]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:45，或者与seq id no:45具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1032]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:47，或者与seq id no:47具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1033]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:49，或者与seq id no:49具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1034]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:51，或者与seq id no:51具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1035]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:53，或者与seq id no:53具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1036]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:55，或者与seq id no:55具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1037]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:57，或者与seq id no:57具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1038]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:59，或者与seq id no:59具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1039]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:61，或者与seq id no:61具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1040]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:63，或者与seq id no:63具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1041]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:65，或者与seq id no:65具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1042]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:67，或者与seq id no:67具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1043]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:69，或者与seq id no:69具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1044]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:71，或者与seq id no:71具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1045]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:73，或者与seq id no:73具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1046]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:75，或者与seq id no:75具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1047]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:77，或者与seq id no:77具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1048]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:79，或者与seq id no:79具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1049]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:81，或者与seq id no:81具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1050]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:83，或者与seq id no:83具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1051]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:85，或者与seq id no:85具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1052]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:87，或者与seq id no:87具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1053]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:89，或者与seq id no:89具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1054]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:91，或者与seq id no:91具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1055]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:93，或者与seq id no:93具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1056]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:95，或者与seq id no:95具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1057]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:97，或者与seq id no:97具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1058]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:99，或者与seq id no:99具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1059]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:101，或者与seq id no:101具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1060]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:103，或者与seq id no:103具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1061]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:105，或者与seq id no:105具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1062]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:107，或者与seq id no:107具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1063]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:109，或者与seq id no:109具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1064]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:111，或者与seq id no:111具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1065]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:113，或者与seq id no:113具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1066]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:115，或者与seq id no:115具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1067]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:117，或者与seq id no:117具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1068]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:119，或者与seq id no:119具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1069]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:121，或者与seq id no:121具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1070]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:123，或者与seq id no:123具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1071]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:125，或者与seq id no:125具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1072]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:127，或者与seq id no:127具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1073]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:129，或者与seq id no:129具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1074]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:131，或者与seq id no:131具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1075]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:133，或者与seq id no:133具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1076]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:135，或者与seq id no:135具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1077]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:137，或者与seq id no:137具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1078]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:139，或者与seq id no:139具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1079]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:141，或者与seq id no:141具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1080]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:143，或者与seq id no:143具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1081]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:145，或者与seq id no:145具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1082]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:147，或者与seq id no:147具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1083]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:149，或者与seq id no:149具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1084]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:151，或者与seq id no:151具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1085]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:153，或者与seq id no:153具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1086]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:155，或者与seq id no:155具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1087]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:157，或者与seq id no:157具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1088]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:159，或者与seq id no:159具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1089]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:161，或者与seq id no:161具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1090]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:163，或者与seq id no:163具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1091]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:165，或者与seq id no:165具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1092]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:167，或者与seq id no:167具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1093]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:169，或者与seq id no:169具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1094]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:171，或者与seq id no:171具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1095]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:173，或者与seq id no:173具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1096]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:175，或者与seq id no:175具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1097]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:177，或者与seq id no:177具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1098]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:179，或者与seq id no:179具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1099]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:181，或者与seq id no:181具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1100]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:183，或者与seq id no:183具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1101]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:185，或者与seq id no:185具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1102]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:187，或者与seq id no:187具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1103]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:189，或者与seq id no:189具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1104]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:191，或者与seq id no:191具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1105]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:193，或者与seq id no:193具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1106]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:195，或者与seq id no:195具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1107]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:197，或者与seq id no:197具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1108]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:199，或者与seq id no:199具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1109]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:201，或者与seq id no:201具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1110]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:203，或者与seq id no:203具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1111]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:205，或者与seq id no:205具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1112]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:207，或者与seq id no:207具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1113]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:209，或者与seq id no:209具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1114]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:211，或者与seq id no:211具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1115]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:213，或者与seq id no:213具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1116]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:215，或者与seq id no:215具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1117]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:217，或者与seq id no:217具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1118]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:219，或者与seq id no:219具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1119]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:221，或者与seq id no:221具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1120]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:223，或者与seq id no:223具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1121]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:225，或者与seq id no:225具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1122]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:227，或者与seq id no:227具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1123]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:229，或者与seq id no:229具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1124]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:231，或者与seq id no:231具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1125]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:233，或者与seq id no:233具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1126]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:235，或者与seq id no:235具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1127]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:237，或者与seq id no:237具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1128]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:239，或者与seq id no:239具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1129]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:241，或者与seq id no:241具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1130]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:243，或者与seq id no:243具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1131]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:245，或者与seq id no:245具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1132]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:247，或者与seq id no:247具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1133]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:249，或者与seq id no:249具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1134]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:251，或者与seq id no:251具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1135]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:253，或者与seq id no:253具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1136]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:255，或者与seq id no:255具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1137]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:257，或者与seq id no:257具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1138]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:259，或者与seq id no:259具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1139]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:261，或者与seq id no:261具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1140]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:263，或者与seq id no:263具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1141]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:265，或者与seq id no:265具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1142]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:267，或者与seq id no:267具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1143]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:269，或者与seq id no:269具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1144]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:271，或者与seq id no:271具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1145]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:273，或者与seq id no:273具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1146]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:275，或者与seq id no:275具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1147]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:277，或者与seq id no:277具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1148]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:279，或者与seq id no:279具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1149]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:281，或者与seq id no:281具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1150]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:283，或者与seq id no:283具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1151]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:285，或者与seq id no:285具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1152]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:287，或者与seq id no:287具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1153]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:289，或者与seq id no:289具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1154]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:291，或者与seq id no:291具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1155]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:293，或者与seq id no:293具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1156]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:295，或者与seq id no:295具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1157]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:297，或者与seq id no:297具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1158]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:299，或者与seq id no:299具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1159]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:301，或者与seq id no:301具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1160]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:303，或者与seq id no:303具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1161]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:305，或者与seq id no:305具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1162]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:307，或者与seq id no:307具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1163]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:309，或者与seq id no:309具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1164]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:311，或者与seq id no:311具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1165]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:313，或者与seq id no:313具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1166]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:315，或者与seq id no:315具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1167]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:317，或者与seq id no:317具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1168]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:319，或者与seq id no:319具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1169]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:321，或者与seq id no:321具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1170]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:323，或者与seq id no:323具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1171]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:325，或者与seq id no:325具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1172]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:327，或者与seq id no:327具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1173]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:329，或者与seq id no:329具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1174]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:331，或者与seq id no:331具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1175]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:333，或者与seq id no:333具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1176]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:335，或者与seq id no:335具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1177]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:337，或者与seq id no:337具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1178]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:339，或者与seq id no:339具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1179]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:341，或者与seq id no:341具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1180]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:343，或者与seq id no:343具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1181]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:345，或者与seq id no:345具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1182]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:347，或者与seq id no:347具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1183]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:349，或者与seq id no:349具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1184]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:351，或者与seq id no:351具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1185]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:353，或者与seq id no:353具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1186]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:355，或者与seq id no:355具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1187]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:357，或者与seq id no:357具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1188]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:359，或者与seq id no:359具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1189]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:361，或者与seq id no:361具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1190]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:363，或者与seq id no:363具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1191]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:365，或者与seq id no:365具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1192]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:367，或者与seq id no:367具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1193]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:369，或者与seq id no:369具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1194]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:371，或者与seq id no:371具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1195]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:373，或者与seq id no:373具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1196]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:375，或者与seq id no:375具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1197]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:377，或者与seq id no:377具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1198]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:379，或者与seq id no:379具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1199]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列
seq id no:381，或者与seq id no:381具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1200]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:383，或者与seq id no:383具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1201]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:385，或者与seq id no:385具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1202]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:387，或者与seq id no:387具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1203]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:389，或者与seq id no:389具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1204]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:391，或者与seq id no:391具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1205]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:393，或者与seq id no:393具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1206]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:395，或者与seq id no:395具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1207]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:397，或者与seq id no:397具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1208]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:399，或者与seq id no:399具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1209]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:401，或者与seq id no:401具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1210]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:403，或者与seq id no:403具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1211]
在一些实施方案中，mva载体包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:405，或者与seq id no:405具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1212]
在一些实施方案中，mva载体包含编码选自以下的两种或更多种多肽的氨基酸序
列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段。
[1213]
自复制rna分子
[1214]
在一些实施方案中，病毒载体是来源于甲病毒的自复制rma分子。
[1215]
自复制rna分子可以来源于甲病毒。甲病毒可以属于veev/eeev组，或sf组，或sin组。sf组甲病毒的非限制性示例包括塞姆利基森林病毒、o'nyong-nyong病毒、罗斯河病毒、米德尔堡病毒、基孔肯亚病毒、巴尔马森林病毒、盖塔病毒、马雅罗病毒、鹭山病毒、贝巴鲁病毒和乌纳病毒。sin组甲病毒的非限制性示例包括辛德毕斯病毒、girdwood s.a.病毒、南非86号虫媒病毒、奥克尔布病毒(ockelbo virus)、奥拉病毒、巴班肯病毒(babanki virus)、沃达罗河病毒和库孜拉加奇病毒(kyzylagach virus)。veev/eeev组甲病毒的非限制性示例包括东方马脑炎病毒(eeev)、委内瑞拉马脑炎病毒(veev)、大沼泽地病毒(evev)、穆坎布病毒(mucv)、皮春纳病毒(pixv)、米德尔堡病毒(midv)、基孔肯亚病毒(chikv)、o'nyong-nyong病毒(onnv)、罗斯河病毒(rrv)、巴尔马森林病毒(bf)、盖塔病毒(get)、鹭山病毒(sagv)、贝巴鲁病毒(bebv)、马雅罗病毒(mayv)和乌纳病毒(unav)。
[1216]
自复制rna分子可以来源于甲病毒基因组，这意味着它们具有甲病毒基因组的一些结构特征，或者与甲病毒基因组类似。自复制rna分子可以来源于经修饰的甲病毒基因组。
[1217]
自复制rna分子可以来源于东方马脑炎病毒(eeev)、委内瑞拉马脑炎病毒(veev)、大沼泽地病毒(evev)、穆坎布病毒(mucv)、塞姆利基森林病毒(sfv)、皮春纳病毒(pixv)、米德尔堡病毒(midv)、基孔肯亚病毒(chikv)、o'nyong-nyong病毒(onnv)、罗斯河病毒(rrv)、巴尔马森林病毒(bf)、盖塔病毒(get)、鹭山病毒(sagv)、贝巴鲁病毒(bebv)、马雅罗病毒(mayv)、乌纳病毒(unav)、辛德毕斯病毒(sinv)、奥拉病毒(aurav)、沃达罗河病毒(whav)、巴班肯病毒(babv)、库孜拉加奇病毒(kyzv)、西方马脑炎病毒(weev)、高地j病毒(hjv)、摩根堡病毒(fmv)、恩杜姆病毒(nduv)和博吉河病毒。强毒性和无毒性的甲病毒毒株都是合适的。在一些实施方案中，甲病毒rna复制子是以下病毒的rna复制子：辛德毕斯病毒(sin)、塞姆利基森林病毒(sfv)、罗斯河病毒(rrv)、委内瑞拉马脑炎病毒(veev)或东方马脑炎病毒(eeev)。
[1218]
在一些实施方案中，来源于甲病毒的自复制rna分子是委内瑞拉马脑炎病毒(veev)。
[1219]
自复制rna分子可以含有来自野生型新世界或旧世界甲病毒基因组的rna序列(或由野生型新世界或旧世界甲病毒基因组编码的氨基酸序列)。本文所公开的任何自复制rna分子均可以含有“来源于”或“基于”野生型甲病毒基因组序列的rna序列，这意味着该自复制rna分子与来自野生型rna甲病毒基因组(其可以是新世界或旧世界甲病毒基因组)的rna序列(其可以是对应的rna序列)具有至少60％、或至少65％、或至少68％、或至少70％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或
100％、或80％至99％、或90％至100％、或95％至99％、或95％至100％、或97％至99％、或98％至99％的序列同一性。
[1220]
自复制rna分子含有指导其在允许细胞内进行自身扩增或自复制所需的所有遗传信息。为了指导其自身复制，自复制rna分子编码可以与病毒或宿主细胞来源的蛋白质、核酸或核糖核蛋白相互作用以催化rna扩增过程的聚合酶、复制酶或其他蛋白质；并且包含复制子编码的rna的复制和转录所需的顺式作用rna序列。因此，rna复制导致产生多个子rna。这些子rna以及共线的亚基因组转录物可以被翻译以提供感兴趣基因的原位表达，或者可以被转录以提供与被翻译以提供感兴趣基因的原位表达的所递送的rna具有相同意义的另外的转录物。这种转录序列的总体结果是引入的复制子rna数量的巨大扩增，因此感兴趣的编码基因成为细胞的主要多肽产物。
[1221]
甲病毒基因组中有两个开放阅读框(orf)、非结构性(ns)基因和结构性基因。非结构性orf编码病毒rna的转录和复制所必需的蛋白质(nsp1至nsp4)，这些蛋白质作为多蛋白产生，是病毒复制机构。结构性orf编码三种结构性蛋白：核心核衣壳蛋白c，以及作为异源二聚体缔合的包膜蛋白p62和e1。病毒膜锚定的表面糖蛋白负责受体识别以及通过膜融合进入目标细胞。四种非结构性蛋白基因由该基因组5
′
三分之二的基因编码，而三种结构性蛋白则由与该基因组3
′
三分之一的基因共线的亚基因组mrna翻译而成。
[1222]
自复制rna分子可以用作通过替换编码结构性基因的病毒序列或者在编码结构性基因的序列的5’或3’插入外来序列而将外来序列引入宿主细胞的基础。它们可以被工程化，以由感兴趣基因(goi)(例如编码本公开的任何多肽的任何多核苷酸)替代复制酶下游的处于亚基因组启动子控制下的病毒结构性基因。转染后，立即翻译的复制酶与基因组rna的5
′
末端和3
′
末端相互作用，并且合成互补的基因组rna拷贝。这些拷贝用作合成新的正链加帽和聚腺苷酸化基因组拷贝和亚基因组转录物的模板。扩增最终导致每个细胞高达2
×
105个拷贝的极高rna拷贝数。结果是goi(例如，编码本公开的多肽中的一种或多种多肽的多核苷酸)的均匀和/或增强的表达，这可以影响疫苗功效或的影响。由于与常规病毒载体相比生成了极高的rna拷贝数，因此基于自复制rna分子的疫苗能够以极低的水平给药。
[1223]
包含编码本公开的一种或多种卵巢癌新抗原多肽的rna的本公开的自复制rna分子可以通过使用各种技术将其递送给患有卵巢癌或处于卵巢癌风险中的受试者而用作剂，所述各种技术包括如本文所述的病毒载体或者也如本文所述的其他递送技术。
[1224]
本公开的卵巢癌新抗原多核苷酸可以在亚基因组启动子的控制下表达。在某些实施方案中，代替天然的亚基因组启动子，可以将亚基因组rna置于来源于脑心肌炎病毒(emcv)、牛病毒性腹泻病毒(bvdv)、脊髓灰质炎病毒、口蹄疫病毒(fmd)、肠道病毒71或丙型肝炎病毒的内部核糖体进入位点(ires)的控制下。亚基因组启动子在从24个核苷酸(辛德毕斯病毒)到超过100个核苷酸(甜菜坏死黄脉病毒)的范围内，并且通常在转录起始位点的上游发现。
[1225]
本公开提供了一种含有指导其在允许细胞内进行自身扩增或自复制所需的所有遗传信息的自复制rna分子。
[1226]
本公开还提供了一种可以用作通过替换编码结构性基因的病毒序列而将外来序列引入宿主细胞(例如，本公开的卵巢新抗原多肽)的基础的自复制rna分子。
[1227]
本文提供了包含本公开的任何多核苷酸的病毒载体，其中该载体为自复制rna分子。
[1228]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的rna序列：氨基酸序列seq id no:1，或者与seq id no:1具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1229]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:3，或者与seq id no:3具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1230]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:5，或者与seq id no:5具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1231]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:7，或者与seq id no:7具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1232]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:9，或者与seq id no:9具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1233]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:11，或者与seq id no:11具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1234]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:13，或者与seq id no:13具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1235]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:15，或者与seq id no:15具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1236]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:17，或者与seq id no:17具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1237]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:19，或者与seq id no:19具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1238]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:21，或者与seq id no:21具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1239]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:23，或者与seq id no:23具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1240]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:25，或者与seq id no:25具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1241]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:27，或者与seq id no:27具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1242]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:29，或者与seq id no:29具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1243]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:31，或者与seq id no:31具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1244]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:33，或者与seq id no:33具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1245]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:35，或者与seq id no:35具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1246]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:37，或者与seq id no:37具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1247]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:39，或者与seq id no:39具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1248]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:41，或者与seq id no:41具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1249]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:43，或者与seq id no:43具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1250]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:45，或者与seq id no:45具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1251]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:47，或者与seq id no:47具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1252]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:49，或者与seq id no:49具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1253]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:51，或者与seq id no:51具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1254]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:53，或者与seq id no:53具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1255]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:55，或者与seq id no:55具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1256]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:57，或者与seq id no:57具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1257]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:59，或者与seq id no:59具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1258]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:61，或者与seq id no:61具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1259]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:63，或者与seq id no:63具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1260]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:65，或者与seq id no:65具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1261]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:67，或者与seq id no:67具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1262]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:69，或者与seq id no:69具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1263]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:71，或者与seq id no:71具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1264]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:73，或者与seq id no:73具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1265]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:75，或者与seq id no:75具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1266]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:77，或者与seq id no:77具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1267]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:79，或者与seq id no:79具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1268]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:81，或者与seq id no:81具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1269]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:83，或者与seq id no:83具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1270]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:85，或者与seq id no:85具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1271]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:87，或者与seq id no:87具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1272]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:89，或者与seq id no:89具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1273]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:91，或者与seq id no:91具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1274]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:93，或者与seq id no:93具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1275]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:95，或者与seq id no:95具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1276]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:97，或者与seq id no:97具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1277]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:99，或者与seq id no:99具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1278]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:101，或者与seq id no:101具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1279]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:103，或者与seq id no:103具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1280]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:105，或者与seq id no:105具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1281]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:107，或者与seq id no:107具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1282]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:109，或者与seq id no:109具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1283]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:111，或者与seq id no:111具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1284]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:113，或者与seq id no:113具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1285]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:115，或者与seq id no:115具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1286]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:117，或者与seq id no:117具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1287]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:119，或者与seq id no:119具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1288]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:121，或者与seq id no:121具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1289]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:123，或者与seq id no:123具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1290]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:125，或者与seq id no:125具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1291]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:127，或者与seq id no:127具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1292]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:129，或者与seq id no:129具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1293]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:131，或者与seq id no:131具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1294]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:133，或者与seq id no:133具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1295]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:135，或者与seq id no:135具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1296]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:137，或者与seq id no:137具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1297]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:139，或者与seq id no:139具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1298]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:141，或者与seq id no:141具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1299]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:143，或者与seq id no:143具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1300]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:145，或者与seq id no:145具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1301]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:147，或者与seq id no:147具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1302]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:149，或者与seq id no:149具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1303]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:151，或者与seq id no:151具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1304]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:153，或者与seq id no:153具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1305]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:155，或者与seq id no:155具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1306]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:157，或者与seq id no:157具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1307]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:159，或者与seq id no:159具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1308]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:161，或者与seq id no:161具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1309]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:163，或者与seq id no:163具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1310]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:165，或者与seq id no:165具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1311]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:167，或者与seq id no:167具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1312]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:169，或者与seq id no:169具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1313]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:171，或者与seq id no:171具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1314]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:173，或者与seq id no:173具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1315]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:175，或者与seq id no:175具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1316]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:177，或者与seq id no:177具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1317]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:179，或者与seq id no:179具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1318]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:181，或者与seq id no:181具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1319]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:183，或者与seq id no:183具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1320]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:185，或者与seq id no:185具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1321]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:187，或者与seq id no:187具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1322]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:189，或者与seq id no:189具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1323]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:191，或者与seq id no:191具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1324]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:193，或者与seq id no:193具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1325]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:195，或者与seq id no:195具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1326]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:197，或者与seq id no:197具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1327]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:199，或者与seq id no:199具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1328]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:201，或者与seq id no:201具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1329]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:203，或者与seq id no:203具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1330]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:205，或者与seq id no:205具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1331]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:207，或者与seq id no:207具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1332]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:209，或者与seq id no:209具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1333]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:211，或者与seq id no:211具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1334]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:213，或者与seq id no:213具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1335]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:215，或者与seq id no:215具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1336]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:217，或者与seq id no:217具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1337]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:219，或者与seq id no:219具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1338]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:221，或者与seq id no:221具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1339]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:223，或者与seq id no:223具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1340]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:225，或者与seq id no:225具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1341]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:227，或者与seq id no:227具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1342]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:229，或者与seq id no:229具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1343]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:231，或者与seq id no:231具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1344]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:233，或者与seq id no:233具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1345]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:235，或者与seq id no:235具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1346]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:237，或者与seq id no:237具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1347]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:239，或者与seq id no:239具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1348]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:241，或者与seq id no:241具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1349]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:243，或者与seq id no:243具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1350]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:245，或者与seq id no:245具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1351]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:247，或者与seq id no:247具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1352]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:249，或者与seq id no:249具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1353]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:251，或者与seq id no:251具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1354]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:253，或者与seq id no:253具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1355]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:255，或者与seq id no:255具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1356]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:257，或者与seq id no:257具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1357]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:259，或者与seq id no:259具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1358]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:261，或者与seq id no:261具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1359]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:263，或者与seq id no:263具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1360]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:265，或者与seq id no:265具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1361]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:267，或者与seq id no:267具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1362]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:269，或者与seq id no:269具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1363]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:271，或者与seq id no:271具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1364]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:273，或者与seq id no:273具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1365]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:275，或者与seq id no:275具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1366]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:277，或者与seq id no:277具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1367]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:279，或者与seq id no:279具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1368]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:281，或者与seq id no:281具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1369]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:283，或者与seq id no:283具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1370]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:285，或者与seq id no:285具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1371]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:287，或者与seq id no:287具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1372]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:289，或者与seq id no:289具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1373]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:291，或者与seq id no:291具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1374]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:293，或者与seq id no:293具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1375]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:295，或者与seq id no:295具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1376]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:297，或者与seq id no:297具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1377]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:299，或者与seq id no:299具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1378]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:301，或者与seq id no:301具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1379]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:303，或者与seq id no:303具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1380]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:305，或者与seq id no:305具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1381]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:307，或者与seq id no:307具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1382]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:309，或者与seq id no:309具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1383]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:311，或者与seq id no:311具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1384]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:313，或者与seq id no:313具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1385]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:315，或者与seq id no:315具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1386]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:317，或者与seq id no:317具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1387]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:319，或者与seq id no:319具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1388]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:321，或者与seq id no:321具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1389]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:323，或者与seq id no:323具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1390]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:325，或者与seq id no:325具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1391]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:327，或者与seq id no:327具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1392]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:329，或者与seq id no:329具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1393]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:331，或者与seq id no:331具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1394]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:333，或者与seq id no:333具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1395]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:335，或者与seq id no:335具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1396]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:337，或者与seq id no:337具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1397]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:339，或者与seq id no:339具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1398]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:341，或者与seq id no:341具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1399]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:343，或者与seq id no:343具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1400]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:345，或者与seq id no:345具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1401]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:347，或者与seq id no:347具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1402]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:349，或者与seq id no:349具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1403]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:351，或者与seq id no:351具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1404]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:353，或者与seq id no:353具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1405]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:355，或者与seq id no:355具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1406]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:357，或者与seq id no:357具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1407]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:359，或者与seq id no:359具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1408]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:361，或者与seq id no:361具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1409]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:363，或者与seq id no:363具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1410]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:365，或者与seq id no:365具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1411]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:367，或者与seq id no:367具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1412]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:369，或者与seq id no:369具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1413]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:371，或者与seq id no:371具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1414]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:373，或者与seq id no:373具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1415]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:375，或者与seq id no:375具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1416]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:377，或者与seq id no:377具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1417]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:379，或者与seq id no:379具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1418]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:381，或者与seq id no:381具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1419]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:383，或者与seq id no:383具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1420]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:385，或者与seq id no:385具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1421]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:387，或者与seq id no:387具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1422]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基
酸序列seq id no:389，或者与seq id no:389具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1423]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:391，或者与seq id no:391具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1424]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:393，或者与seq id no:393具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1425]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:395，或者与seq id no:395具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1426]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:397，或者与seq id no:397具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1427]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:399，或者与seq id no:399具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1428]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:401，或者与seq id no:401具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1429]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:403，或者与seq id no:403具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1430]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含编码以下氨基酸序列的多核苷酸：氨基酸序列seq id no:405，或者与seq id no:405具有至少90％序列同一性、或至少95％序列同一性、或至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[1431]
在一些实施方案中，自复制rna分子包含编码选自以下的两种或更多种多肽的氨基酸序列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段。
[1432]
上述自复制rna分子中的任一种可以还包含以下项中的一者或多者：
[1433]
·
一个或多个非结构基因nsp1、nsp2、nsp3和nsp4；
[1434]
·
dlp基序、5’utr、3’utr和poly a中的至少一者；以及
[1435]
·
亚基因组启动子。
[1436]
在一些实施方案中，例如，该自复制rna分子可以包含以下项中的一者或多者：
[1437]
·
一个或多个非结构基因nsp1、nsp2、nsp3和nsp4；
[1438]
·
dlp基序、5’utr、3’utr和poly a中的至少一者；以及
[1439]
·
亚基因组启动子；以及
[1440]
·
编码本公开的任何多肽并且可操作地连接到亚基因组启动子的rna。
[1441]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含：编码蛋白质或肽的rna序列；5’和3’甲病毒非翻译区；编码来源于新世界甲病毒veev非结构性蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4的氨基酸序列的rna序列；亚基因组启动子，其可操作地连接到编码所述蛋白质的rna序列并且调控该rna序列的翻译；5’帽和3’聚a尾；正向单链rna；位于非结构性蛋白1(nsp1)上游的来自辛德毕斯病毒的dlp；2a核糖体跳跃元件；以及位于5
’‑
utr下游和dlp上游的nsp1核苷酸重复序列。
[1442]
在一些实施方案中，自复制rna分子的大小可以为至少1kb、或至少2kb、或至少3kb、或至少4kb、或至少5kb、或至少6kb、或至少7kb、或至少8kb、或至少10kb、或至少12kb、或至少15kb、或至少17kb、或至少19kb、或至少20kb，或者其大小可以为100bp至8kb、或500bp至8kb、或500bp至7kb、或1kb至7kb、或1kb至8kb、或2kb至15kb、或2kb至20kb、或5kb至15kb、或5kb至20kb、或7kb至15kb、或7kb至18kb，或7kb至20kb。
[1443]
任何上文所公开的自复制rna分子均可以还包括自我蛋白酶肽(例如，自我催化自切割肽)的编码序列，其中自我蛋白酶的编码序列任选地可操作地连接于第二核酸序列的上游。
[1444]
一般来讲，本领域中已知的任何蛋白水解切割位点均可以掺入到本公开的核酸分子中，并且可以是例如由蛋白酶进行产生后切割的蛋白水解切割序列。另外的合适蛋白水解切割位点还包括在添加外部蛋白酶后可以被切割的蛋白水解切割序列。如本文所用，术语“自我蛋白酶”是指具有自我蛋白水解活性并且能够从较大的多肽部分切割自身的“自切割”肽。首先在口蹄疫病毒(fmdv)(小核糖核酸病毒组的成员)中识别出几种自我蛋白酶，随后对其进行了鉴定，诸如来自马鼻炎a型病毒(e2a)、猪捷申病毒-1(p2a)和明脉扁刺蛾病毒(t2a)的“2a样”肽，并且已经在各种离体和体内真核系统中示出了它们在蛋白水解切割中的活性。因此，由于许多天然存在的自我蛋白酶系统已经被鉴定，所以自我蛋白酶的概念是可供本领域技术人员使用的。得到充分研究的自我蛋白酶系统为例如病毒蛋白酶、发育蛋白(例如，hetr、刺猬蛋白)、ruma自我蛋白酶结构域、umud等。适用于本公开的组合物和方法的自我蛋白酶肽的非限制性示例包括来自以下项的肽序列：猪捷申病毒-1 2a(p2a)、口蹄疫病毒(fmdv)2a(f2a)、马鼻炎a型病毒(erav)2a(e2a)、明脉扁刺蛾病毒2a(t2a)、细胞质多角体病毒2a(bmcpv2a)、软化病病毒2a(bmifv2a)，或它们的组合。
[1445]
在一些实施方案中，自我蛋白酶肽的编码序列可操作地连接于dlp基序的下游以及第一多核苷酸和第二多核苷酸的上游。
[1446]
在一些实施方案中，自我蛋白酶肽包含选自由以下项组成的组的肽序列，或者由选自由以下项组成的组的肽序列组成：猪捷申病毒-1 2a(p2a)、口蹄疫病毒(fmdv)2a(f2a)、马鼻炎a型病毒(erav)2a(e2a)、明脉扁刺蛾病毒2a(t2a)、细胞质多角体病毒2a(bmcpv2a)、软化病病毒2a(bmifv2a)，以及它们的组合。在一些实施方案中，自我蛋白酶肽包括猪捷申病毒-1 2a(p2a)的肽序列。
[1447]
在一些实施方案中，自我蛋白酶肽为猪捷申病毒-1 2a(p2a)。
[1448]
将p2a肽掺入本公开的经修饰的病毒rna复制子中允许由goi编码的蛋白质(例如
本公开的卵巢新抗原多肽)从衣壳-goi融合体释放。
[1449]
在本文所公开的一些实施方案中，猪捷申病毒-1 2a(p2a)肽序列在紧邻dlp序列之后的框内和紧邻所有goi上游的框内进行工程化。
[1450]
任何上文所公开的自复制rna分子均可以还包含编码序列下游环(dlp)基序。
[1451]
一些病毒具有能够形成调控(例如增加)衣壳基因表达的一个或多个茎环结构的序列。如本文所用的病毒衣壳增强子是指包含能够形成此类茎环结构的序列的调控元件。在一些示例中，所述茎环结构由衣壳蛋白编码序列内的序列形成，称为下游环(dlp)序列。如本文所公开的，这些茎环结构或其变体可以用于调控(例如增加)感兴趣基因的表达水平。例如，这些茎环结构或其变体可以用于重组载体中(例如，异源病毒基因组中)，以便增强可操作地连接于其下游的编码序列的转录和/或翻译。
[1452]
已知甲病毒在宿主细胞中的复制诱导双链rna依赖性蛋白激酶(pkr)。pkr将真核翻译起始因子2α(eif2α)磷酸化。eif2α的磷酸化阻断mrna的翻译起始，这样做阻止病毒完成生产性复制周期。甲病毒属的成员可以借助病毒26s转录物中存在的下游环(dlp)抵抗抗病毒rna激活蛋白激酶(pkr)的激活，这允许这些mrna的eif2非依赖性翻译起始。dlp结构能够使核糖体停止在野生型aug上，这支持亚基因组mrna的翻译，而不需要功能性eif2α。dlp结构首先在辛德毕斯病毒(sinv)26s mrna中表征，并且也在塞姆利基森林病毒(sfv)中检测到。据报道，类似的dlp结构存在于甲病毒属的至少14个其他成员中，包括新世界成员(例如mayv、unav、eeev(na)、eeev(sa)、aurav)和旧世界成员(sv、sfv、bebv、rrv、sag、getv、midv、chikv和onnv)。dlp在sinv 26s mrna和甲病毒属的其他成员中位于aug的下游。
[1453]
在一些实施方案中，本公开的核酸分子可以包括可操作地连接到dlp基序和/或dlp基序的编码序列的感兴趣基因(goi)的编码序列。
[1454]
在一些实施方案中，自复制rna分子的dlp来源于辛德毕斯病毒。
[1455]
在一些实施方案中，下游环(dlp)包括至少一个rna茎环。
[1456]
在一些情况下，dlp活性取决于dlp基序与起始密码子aug(augi)之间的距离。以允许将augi置于由dlp停止的40s亚基的p位点的方式，将甲病毒26s mrna中的aug-dlp间隔调整为核糖体18s rrna的es6s区的拓扑结构，从而允许在无eif2参与的情况下掺入met-trna。就辛德毕斯病毒而言，dlp基序存在于辛德毕斯亚基因组rna的最前面的约150个核苷酸中。发夹位于辛德毕斯衣壳aug起始密码子(在辛德毕斯亚基因组rna的nt 50处的aug)的下游，并且导致核糖体停止，使得正确的衣壳基因aug用于启动翻译。
[1457]
不受任何特定理论的约束，据信将dlp基序置于任何goi的编码序列的上游通常产生n末端衣壳氨基酸的融合蛋白，这些n末端衣壳氨基酸在发夹区中编码为goi编码蛋白，因为起始发生在衣壳aug上而不是goi aug上。
[1458]
在一些实施方案中，自复制rna分子包含被置于非结构性蛋白1(nsp1)上游的下游环。
[1459]
在一些实施方案中，下游环被置于非结构性蛋白1(nsp1)的上游，并且通过猪捷申病毒-1 2a(p2a)核糖体跳跃元件连接到nsp1。
[1460]
本公开的含有dlp的自复制rna也可以用于赋予受试者对先天免疫系统的抗性。未经修饰的rna复制子对它们引入其中的细胞的初始先天免疫系统状态敏感。如果细胞/个体处于高活性先天免疫系统状态，则rna复制子性能(例如，goi的复制和表达)可能受到负面
影响。通过工程化dlp以控制蛋白翻译(特别是非结构性蛋白翻译)的起始，消除或减轻了先天免疫系统的预先存在的激活状态对有效rna复制子复制的影响。结果是goi的表达更均匀和/或增强，这可以影响疫苗功效或的影响。
[1461]
本公开的自复制rna的dlp基序可以在细胞mrna翻译被抑制的细胞环境中赋予有效的mrna翻译。当dlp与复制子载体的非结构性蛋白基因的翻译关联时，复制酶蛋白和转录酶蛋白能够在pkr激活的细胞环境中启动功能性复制。当dlp与亚基因组mrna的翻译关联时，即使在细胞mrna由于先天免疫激活而受到限制时，也可能实现强goi表达。因此，将自复制rna工程化为含有dlp结构以帮助驱动非结构性蛋白基因和亚基因组mrna两者的翻译，提供了克服先天免疫激活的有力方式。
[1462]
包含dlp基序的自复制rna载体的示例描述于美国专利申请公布us2018/0171340和国际专利申请公布wo2018106615中，这两份专利申请公布的内容均全文以引用方式并入本文。
[1463]
任何上文所公开的自复制rna分子均可以还包含非结构性基因nsp1、nsp2、nsp3和/或nsp4。
[1464]
甲病毒基因组编码非结构性蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4，这些非结构性蛋白作为单一多蛋白前体(有时被称为p1234(或nsp1-4或nsp1234))产生并且通过蛋白水解被切割为成熟蛋白。nsp1可以为约60kda，并且可以具有甲基转移酶活性并参与病毒加帽反应。nsp2为约90kda，并且可以具有解旋酶和蛋白酶活性，而nsp3为约60kda，并且含有三个结构域：宏结构域、中央(或甲病毒独有的)结构域和高变结构域(hvd)。nsp4为约70kda，并且含有核心rna依赖性rna聚合酶(rdrp)催化结构域。感染后，甲病毒基因组rna被翻译产生p1234多蛋白，其被切割为单独的蛋白质。
[1465]
甲病毒基因组还编码三种结构性蛋白：核心核衣壳蛋白c，以及作为异源二聚体缔合的包膜蛋白p62和e1。结构性蛋白处于亚基因组启动子的控制下并且可以被感兴趣基因(gio)替代。
[1466]
在一些实施方案中，自复制rna分子不编码功能性病毒结构性蛋白。
[1467]
在本公开的一些实施方案中，自复制rna可以缺少(或不含)至少一种(或全部)结构性病毒蛋白(例如核衣壳蛋白c，以及包膜蛋白p62、6k和e1)的序列。在这些实施方案中，编码一种或多种结构性基因的序列可以被一种或多种序列取代，所述序列诸如至少一种蛋白质或肽(或其他感兴趣基因(goi))的编码序列，例如本公开的卵巢癌新抗原多肽。
[1468]
在一些实施方案中，自复制rna缺少编码甲病毒结构性蛋白的序列；或者不编码甲病毒(或任选地任何其他)结构性蛋白。在一些实施方案中，自复制rna分子还缺乏一种或多种病毒结构性蛋白的部分或整个编码区。例如，甲病毒表达系统可以缺乏病毒衣壳蛋白c、e1糖蛋白、e2糖蛋白、e3蛋白和6k蛋白中的一者或多者的部分或整个编码序列。
[1469]
在一些实施方案中，自复制rna分子不含至少一种病毒结构性蛋白的编码序列。在这些情况下，编码结构性基因的序列可以被一种或多种序列取代，所述序列诸如本公开的卵巢新抗原多核苷酸的编码序列。
[1470]
本公开还提供了一种包含非结构性基因nsp1、nsp2、nsp3和nsp4的自复制rna分子，并且其中该自复制rna分子不编码功能性病毒结构性蛋白。
[1471]
在一些实施方案中，该自复制rna分子可以包含一种或多种非结构性病毒蛋白。在
某些实施方案中，一种或多种非结构性病毒蛋白来源于相同的病毒。在其他实施方案中，一种或多种非结构性蛋白来源于不同的病毒。
[1472]
在一些实施方案中，本公开提供了一种包含至少一种、至少两种、至少三种或至少四种非结构性病毒蛋白(例如nsp1、nsp2、nsp3、nsp4)的编码序列的自复制rna分子。由复制子编码的nsp1、nsp2、nsp3和nsp4蛋白是功能性蛋白或生物活性蛋白。
[1473]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含至少一种非结构性病毒蛋白的一部分的编码序列。例如，该自复制rna分子可以包含至少一种非结构性病毒蛋白的编码序列的约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％，或者这些值中的任何两个值之间的范围。在一些实施方案中，该自复制rna分子可以包含至少一种非结构性病毒蛋白的相当大部分的编码序列。如本文所用，编码非结构性病毒蛋白的核酸序列的“相当大部分”包含编码该非结构性病毒蛋白的核酸序列的足够多的部分，以通过本领域技术人员对该序列的人工评价，或者通过使用算法(诸如blast)的计算机自动化序列比较和鉴定，来提供对该蛋白的推定鉴定(其中blast参见例如“basic local alignment search tool”；altschul s f等人，j.mol.biol.215:403-410,1993)。
[1474]
在一些实施方案中，该自复制rna分子可以包含至少一种非结构性蛋白的完整编码序列。在一些实施方案中，该自复制rna分子包含天然病毒非结构性蛋白的绝大部分编码序列。
[1475]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含来源于委内瑞拉马脑炎病毒(veev)的nsp1、nsp2、nsp3和nsp4序列，以及来源于辛德毕斯病毒(sin)的dlp基序。
[1476]
在一些实施方案中，该自复制rna分子还具有编码来源于甲病毒nsp3宏结构域的氨基酸序列的rna子序列，以及编码来源于甲病毒nsp3中央结构域的氨基酸序列的rna子序列。在各种实施方案中，所述宏结构域和中央结构域都可以来源于新世界野生型甲病毒nsp3，或者都可以来源于旧世界野生型甲病毒nsp3蛋白。在其他实施方案中，所述宏结构域可以来源于新世界野生型甲病毒宏结构域，并且所述中央结构域可以来源于旧世界野生型甲病毒中央结构域，或者反过来。各种结构域可以是本文所述的任何序列。该自复制rna分子还可以具有编码完全来源于旧世界甲病毒nsp3高变结构域的氨基酸序列的rna子序列；或可以具有这样的氨基酸序列：该氨基酸序列具有来源于新世界甲病毒nsp3高变结构域的部分和来源于旧世界甲病毒nsp3高变结构域的部分，也就是说，该高变结构域(hvd)可以是杂合或嵌合的新世界/旧世界序列。
[1477]
在一些实施方案中，该自复制rna分子可以具有编码来源于野生型新世界甲病毒nsp1、nsp2、nsp3和nsp4蛋白序列的氨基酸序列的rna序列。
[1478]
在一些实施方案中，该自复制rna分子含有非veev非结构性蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4。
[1479]
积累的实验证据已经证明，veev和其他甲病毒基因组以及它们的缺陷干扰(di)rna的复制/扩增是由以下三个启动子元件决定的：(i)保守的3
’‑
末端序列元件(3’cse)和随后的聚(a)尾；(ii)5’utr，其用作负链rna合成和正链rna合成两者的关键启动子元件；和(iii)51-nt保守序列元件(51-nt cse)，其位于nsp1编码序列中并且用作甲病毒基因组复制的增强子(kim等人，pnas,2014,111:10708
–
10713)。
[1480]5’
和3’非翻译区能够可操作地连接到由复制子编码的任何其他序列。通过提供识
别和转录其他编码序列所必需的序列和间隔，utr能够可操作地连接到启动子和/或编码蛋白质或肽的序列。
[1481]
任何上文所公开的自复制rna分子均可以还包含未经修饰的5’非翻译区(5’utr)。
[1482]
在一些实施方案中，自复制rna分子包含经修饰的5’非翻译区(5
′‑
utr)。例如，经修饰的5
′‑
utr可以在位置1、2、4或它们的组合处包含一个或多个核苷酸取代。优选地，经修饰的5
′‑
utr在位置2处包含核苷酸取代，更优选地，经修饰的5
′‑
utr在位置2处具有u-》g取代。此类自复制rna分子的示例描述于美国专利申请公布us2018/0104359和国际专利申请公布wo2018075235中，这两份专利申请公布的内容均全文以引用方式并入本文。
[1483]
在一些实施方案中，所述utr可以是野生型新世界或旧世界甲病毒utr序列，或来源于它们中任何一者的序列。5’utr可以具有任何合适的长度，诸如约60nt，或者50nt至70nt，或者40nt至80nt。在一些实施方案中，5’utr还可以具有保守的一级或二级结构(例如一个或多个茎环)，并且可以参与甲病毒或复制子rna的复制。3’utr可以具有多达几百个核苷酸，例如其可以具有50nt至900nt，或者100nt至900nt，或者50nt至800nt，或者100nt至700nt，或者200nt至700nt。3’utr也可以具有二级结构，例如阶梯环，并且后面可以是聚腺苷酸束或聚a尾。
[1484]
在一些实施方案中，自复制rna分子可以具有3'聚a尾。它还可以在其3'末端附近包括聚a聚合酶识别序列(例如，aauaaa)。
[1485]
在那些将自复制rna分子包装到重组甲病毒颗粒中的情况下，它可以含有一个或多个序列(所谓的包装信号)，其用于启动与甲病毒结构性蛋白的相互作用，从而引起颗粒形成。在一些实施方案中，所述甲病毒颗粒包含来源于一种或多种甲病毒的rna；和结构性蛋白，其中所述结构性蛋白中的至少一种来源于两种或更多种甲病毒。
[1486]
在一些实施方案中，该自复制rna分子包含veev来源的载体，其中结构性病毒蛋白(例如核衣壳蛋白c，以及包膜蛋白p62、6k和e1)被去除并且被本公开的卵巢新抗原多核苷酸的编码序列替代。
[1487]
先前的研究已经证明，在veev和辛德毕斯病毒感染期间，仅一小部分病毒非结构性蛋白(nsp)与dsrna复制中间体共定位。因此，似乎大部分nsp未参与rna复制(gorchakov r等人，(2008)a new role for ns polyprotein cleavage in sindbis virus replication.j virol 82(13):6218
–
6231)。这提供了利用正在使用的非结构性蛋白来扩增编码感兴趣蛋白的亚基因组rna的机会，所述感兴趣蛋白通常由亚基因组启动子转录并且不进一步扩增。
[1488]
在一些实施方案中，本公开的自复制rna分子的nsp1的片段在5
’‑
utr的下游和dlp的上游重复。在一些实施方案中，nsp1的前193个核苷酸在5’utr的下游和dlp的上游重复。
[1489]
其他病毒载体和重组病毒
[1490]
包含本公开的多核苷酸的病毒载体可以来源于其他病毒载体，包括来源于人腺相关病毒诸如aav-2(2型腺相关病毒)的载体。aav载体的有吸引力的特征在于它们不表达任何病毒基因。aav载体中包括的唯一病毒dna序列是145bp反向末端重复序列(itr)。因此，如在用裸dna免疫的过程中，所表达的唯一基因是抗原或抗原嵌合体的基因。另外，已知aav载体可通过持续的转基因表达以及可能通过口服和鼻内递送以产生粘膜免疫来转导分裂和非分裂细胞，诸如人外周血单核细胞来源的树突状细胞。此外，与50μg或约10
15
个拷贝的裸
dna剂量相比，所需dna的量似乎少几个数量级，在10
10
个至10
11
个dna颗粒或拷贝的剂量下具有最大应答。通过用包含在aav itr嵌合蛋白编码构建体中的dna和包含aav编码区(aav rep和cap基因)而没有itr的aav辅助质粒acg2共转染合适的细胞系(例如，人293细胞)来包装aav载体。随后用腺病毒ad5感染细胞。可使用本领域已知的方法(例如，氯化铯密度梯度超速离心)从细胞裂解物中纯化载体，并进行验证以确保它们不含可检测的具有复制能力的aav或腺病毒(例如，通过细胞病变效应生物测定)。
[1491]
也可使用逆转录病毒载体。逆转录病毒是一类整合病毒，其使用病毒编码的逆转录酶进行复制，以将病毒rna基因组复制到被整合到被感染细胞(例如，靶细胞)的染体dna中的双链dna中。此类载体包括来源于鼠白血病病毒尤其是moloney(gilboa等人，1988,adv.exp.med.biol.241:29)或friend fb29毒株(国际专利公布号wo1995/01447)。一般来讲，逆转录病毒载体缺失病毒基因gag、pol和env的全部或部分，并且保留5'和3'ltr以及衣壳化序列。可修饰这些元件以增加逆转录病毒载体的表达水平或稳定性。此类修饰包括用逆转录转座子中的一者诸如vl30(参见例如美国专利5,747,323)替代逆转录病毒衣壳化序列。
[1492]
可将本公开的多核苷酸插入衣壳化序列的下游，诸如相对于逆转录病毒基因组在相反方向上。逆转录病毒颗粒在存在辅助病毒的情况下或在适当的互补(包装)细胞系中制备，该细胞系包含整合到其基因组中的逆转录病毒载体缺失的逆转录病毒基因(例如，gag/pol和env)。此类细胞系描述于现有技术中(miller和rosman，1989,biotechniques 7:980；danos和mulligan，1988,proc.natl.acad.sci.usa 85:6460；markowitz等人，1988,virol.167:400)。env基因的产物负责病毒颗粒与靶细胞表面上存在的病毒受体的结合，因此确定逆转录病毒颗粒的宿主范围。因此，可使用包装细胞系(诸如包含双嗜性包膜蛋白的pa317细胞(atcc crl 9078)或293ei6(w097/35996))来感染人类和其他物种的靶细胞。从培养上清液中回收逆转录病毒颗粒，并且可根据标准技术(例如，谱法、超速离心)任选地对其进行进一步纯化。
[1493]
调控元件
[1494]
本公开的多核苷酸或异源多核苷酸可操作地连接到载体中的一个或多个调控元件。调控元件可包括启动子、增强子、多腺苷酸化信号、阻遏子等。如本文所用，术语“可操作地连接”应以其最广泛的合理范围理解，并且是指多核苷酸元件以功能关系连接。当一个多核苷酸被置于与另一个多核苷酸处于功能关系时，该多核苷酸是“可操作地连接的”。例如，如果启动子影响编码序列的转录，则该启动子可操作地连接到编码序列。
[1495]
表达载体和病毒载体中一些常用的增强子和启动子序列是例如人巨细胞病毒(hcmv)、痘苗p7.5早期/晚期启动子、cag、sv40、小鼠cmv(mcmv)、ef-l和hpgk启动子。由于效能高并且尺寸适中(大约0.8kb)，hcmv启动子是这些启动子中最常用的启动子之一。hpgk启动子的特征在于尺寸较小(大约0.4kb)，但其效能不及hcmv启动子。另一方面，由鸡β-肌动蛋白基因的巨细胞病毒早期增强子元件、启动子、第一外显子和内含子以及兔β-球蛋白基因的剪接受体组成的cag启动子可指导与hcmv启动子相当的非常有效的基因表达，但其较大尺寸使得其不太适用于空间限制可能是一个重要问题的病毒载体，例如腺病毒载体(adv)、腺相关病毒载体(aav)或慢病毒载体(lv)。
[1496]
可以使用的附加启动子为国际专利公布号wo2018/146205中所述的夜猴疱疹病毒
1型主要立即早期启动子(aohv-1启动子)。该启动子可操作地偶联到阻遏子操纵基因序列，阻遏子蛋白可结合该序列，以便在存在阻遏子蛋白质的情况下阻遏启动子的表达。在某些实施方案中，阻遏子操纵基因序列是teto序列或cuo序列(参见例如us9790256)。
[1497]
在某些情况下，可能希望从同一载体表达至少两种不同的多肽。在这种情况下，每个多核苷酸可操作地连接到相同或不同的启动子和/或增强子序列，或者可使用例如通过利用来自脑心肌炎病毒的内部核糖体进入位点(ires)的熟知双顺反子表达系统。另选地，可以使用双向合成启动子，诸如hcmv-rhcmv启动子，以及国际专利公布号wo2017/220499中所述的其他启动子。多腺苷酸化信号可来源于sv40或牛生长激素(bgh)。
[1498]
包含编码本公开的多肽的多核苷酸的自复制rna载体可以还包含任何调控元件以建立该载体的常规功能，包括但不限于由该载体的多核苷酸序列编码的本公开的多肽的复制和表达。调控元件包括但不限于启动子、增强子、聚腺苷酸化信号、翻译终止密码子、核糖体结合元件、转录终止子、选择标记、复制起点等。载体可以包含一个或多个表达盒。“表达盒”是载体的指导细胞机制产生rna和蛋白质的一部分。表达盒通常包含三个组分：启动子序列、开放阅读框，以及任选地包含聚腺苷酸化信号的3’非翻译区(utr)。开放阅读框(orf)是含有感兴趣蛋白质(例如，本公开的多肽)的编码序列的从起始密码子到终止密码子的阅读框。表达盒的调控元件能够可操作地连接到编码感兴趣多肽的多核苷酸序列。适合在本文所述的表达盒中使用的任何组分能够以任何组合并且以任何顺序用于制备本技术的载体。
[1499]
载体可以包含启动子序列(优选地在表达盒内)，以控制本公开的多肽的表达。
[1500]
在自复制rna中，载体可以还包含附加的多核苷酸序列，这些多核苷酸序列稳定表达的转录物、增强rna转录物的核输出，并且/或者改善转录-翻译偶联。此类序列的示例包括聚腺苷酸化信号和增强子序列。聚腺苷酸化信号通常在载体的表达盒内位于感兴趣蛋白质(例如，本公开的多肽)的编码序列的下游。增强子序列是当被转录因子结合时增强相关联基因的转录的调控dna序列。增强子序列优选地在载体的表达盒内位于编码本公开的多肽的多核苷酸序列的上游，但位于启动子序列的下游。
[1501]
可以使用本领域技术人员根据本公开已知的任何增强子序列。
[1502]
本公开的自复制rna载体的任何组分或序列可以功能性地或可操作地连接到任何其他组分或序列。
[1503]
当存在适当的酶时，可操作地连接到编码序列的启动子或utr能够影响编码序列的转录和表达。启动子不需要与编码序列邻接，只要能指导其表达即可。因此，编码蛋白质或肽的rna序列与调控序列(例如，启动子或utr)之间的可操作连接是允许表达感兴趣多核苷酸的功能性连接。可操作地连接还可以指诸如编码rdrp(例如nsp4)、nsp1-4、utr、启动子的序列之类的序列与rna复制子中编码的其他序列连接，使得它们能够转录和翻译多肽和/或复制复制子。通过提供其他编码序列的核糖体识别和翻译所必需的序列和间隔，utr能够可操作地连接。
[1504]
如果分子表现出的活性为其天然(或野生型)的对应分子的至少50％，则该分子具有功能性或生物活性，但功能性分子也可以表现出为其天然(或野生型)的对应分子的至少60％、或至少70％、或至少90％、或者至少95％或100％的活性。所述自复制rna分子还可以编码来源于或基于野生型甲病毒氨基酸序列的氨基酸序列，这意味着所述自复制rna分子
与由野生型rna甲病毒基因组(其可以是新世界或旧世界甲病毒基因组)编码的氨基酸序列(其可以是对应的序列)具有至少60％、或至少65％、或至少68％、或至少70％、或至少80％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％、或80％至99％、或90％至100％、或95％至99％、或95％至100％、或97％至99％、或98％至99％的序列同一性。来源于其他序列的序列可以比原始序列长或短至多5％或至多10％或至多20％或至多30％。在任何实施方案中，对于编码g3bp或其上的fxr结合位点的任何核苷酸序列(或者具有g3bp或其上的fxr结合位点的氨基酸序列)，该序列同一性可以为至少95％或至少97％或至少98％或者至少99％或100％。这些序列也可以比原始序列长或短至多5％或至多10％或至多20％或至多30％。
[1505]
本公开的细胞
[1506]
本公开还提供了一种包含本公开的一种或多种载体或本公开的一种或多种重组病毒或者用本公开的一种或多种载体或本公开的一种或多种重组病毒转导的细胞。
[1507]
合适的细胞包括原核细胞和真核细胞，例如哺乳动物细胞、酵母、真菌和细菌(诸如大肠杆菌)，诸如hek 293、cho、per.c6细胞或鸡胚成纤维细胞(cef)。细胞可在体外使用，例如用于研究或用于产生多肽或病毒，或者细胞可在体内使用。在一些实施方案中，细胞是肌细胞。在一些实施方案中，细胞是抗原递呈细胞(apc)。合适的抗原递呈细胞包括树突状细胞、b淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞。
[1508]
通常可通过细胞培养储存库诸如atcc获得用本公开的多核苷酸或载体转染的细胞。可使用白细胞去除术和“ficoll/hypaque”密度梯度离心(通过ficoll和不连续percoll密度梯度逐步离心)从外周血获得apc。可使用已知方法分离、培养和工程化apc。例如，可使用已知方法从外周血单核细胞(pbmc)产生未成熟和成熟的树突状细胞。在示例性方法中，借助免疫磁性技术对分离的pbmc进行预处理以耗尽t细胞和b细胞。然后将淋巴细胞耗尽的pbmc在补充有人血浆(优选自体血浆)和gm-csf/il-4的rpmi培养基9中培养例如约7天，以产生树突状细胞。树突状细胞在与其单核细胞祖细胞相比时是非粘附的。因此，在大约第7天，收获非粘附细胞用于进一步处理。在存在gm-csf和il-4的情况下来源于pbmc的树突状细胞是不成熟的，因为如果从培养物中除去细胞因子刺激，它们可丧失非粘附特性并回到巨噬细胞命运。未成熟状态的树突状细胞可有效处理mhc ii类限制性途径的天然蛋白抗原(romani等人,j.exp.med.169:1169,1989)。培养的树突状细胞的进一步成熟通过在含有必要成熟因子的巨噬细胞条件培养基(cm)中培养3天来实现。成熟树突状细胞不太能够捕获用于递呈的新蛋白质，但在刺激静息t细胞(cd4和cd8两者)生长和分化方面要好得多。成熟树突状细胞可通过以下方面来鉴定：它们的形态变化，诸如形成更具运动性的细胞质过程；它们的非粘附性；存在以下标志物中的至少一种：cd83、cd68、hla-dr或cd86；或丧失fc受体，诸如cd115(综述于steinman,annu.rev.immunol.9:271,1991)。可使用典型的细胞荧光成像和细胞分选技术和装置(诸如facscan和facstar)来收集和分析成熟的树突状细胞。用于流式细胞术的一抗是对成熟树突状细胞的细胞表面抗原具有特异性的那些一抗，并且可商购获得。二抗可以是生物素酰化的igs，然后是fitc或pe缀合的链霉亲和素。可使用本领域已知的方法(包括但不限于转染、电穿孔、融合、显微注射、基于病毒的递送或基于细胞的递送)将本公开的载体和重组病毒引入包括apc在内的细胞中。
[1509]
疫苗和药物组合物
[1510]
本公开还提供了包含本文所公开的任何多核苷酸、任何多肽和任何载体的组合物。在一些实施方案中，所述组合物可以包含载体，该载体包含本文所公开的任何核苷酸，其中该载体选自ad26、gad20、mva或自复制rna分子。在一些实施方案中，组合物可以包含表达本文公开的任何多肽或新抗原的重组病毒或自复制rna分子。在一些实施方案中，重组病毒可以是ad26病毒、gad20病毒或mva病毒。
[1511]
上述组合物中的任一种组合物可以包含或可以被配制成以下药物组合物：该药物组合物包含所述组合物和药学上可接受的赋形剂。
[1512]
可利用适于施用给受试者的任何已知的递送载体将多肽或异源多肽或其片段或者编码它们的多核苷酸递送到受试者体内。预期多肽、异源多肽或其片段在受试者中将具有免疫原性，不管所使用的递送载体如何。多核苷酸可以是dna或rna或它们的衍生物。rna可以是寡核苷酸rna、trna(转移rna)、snrna(小核rna)、rrna(核糖体rna)、mrna(信使rna)、反义rna、sirna(小干扰rna)、自复制rna、核糖酶、嵌合序列或这些组的衍生物的形式。
[1513]
本公开还提供了一种包含本公开的多核苷酸的疫苗。
[1514]
在一些实施方案中，多核苷酸是dna。
[1515]
在一些实施方案中，多核苷酸是rna。
[1516]
在一些实施方案中，rna为mrna。
[1517]
本公开还提供了一种包含本公开的载体的疫苗。
[1518]
本公开还提供了一种包含本公开的rad26的疫苗。
[1519]
本公开还提供了一种包含本公开的rmva的疫苗。
[1520]
本公开还提供了一种包含本公开的rgad的疫苗。
[1521]
本公开还提供了一种包含本公开的rgad20的疫苗。
[1522]
本公开还提供了一种包含本公开的chad20的疫苗。
[1523]
本公开还提供了一种包含本公开的自复制rna分子的疫苗。
[1524]
本公开还提供了一种包含本公开的细胞的疫苗。
[1525]
疫苗组合物的制备是熟知的。疫苗可包含或可被配制成包含疫苗和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[1526]“药学上可接受的”是指在所采用的剂量和浓度下不会对所施用的受试者造成不希望的或有害的影响的赋形剂，包括载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。载体或其他材料的确切性质可取决于施用途径，例如肌内、皮下、口服、静脉、皮肤、粘膜内(例如，肠)、鼻内或腹膜内途径。可包括液体载体，诸如水、石油、动物油或植物油、矿物油或合成油。可包括生理盐水溶液、右旋糖或其他糖类溶液或二醇类(诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇)。示例性病毒制剂是腺病毒世界标准(adenovirus world standard)(hoganson等人，2002)：20mm tris ph8、25mm nacl、2.5％甘油；或20mm tris、2mm mgcl2、25mm nacl、蔗糖10％w/v、聚山梨酸酯-80 0.02％w/v；或10-25mm柠檬酸盐缓冲液ph5.9-6.2、4-6％(w/w)羟丙基-β-环糊精(hbcd)、70-100mm nacl、0.018-0.035％(w/w)聚山梨酸酯-80和任选的0.3-0.45％(w/w)乙醇。可使用许多其他缓冲液，并且用于储存和药物施用纯化药物制剂的合适制剂的示例是已知的。
[1527]
佐剂
[1528]
该药物组合物可以包含一种或多种佐剂。此类佐剂的示例包括但不限于：无机佐
剂(例如无机金属盐，诸如磷酸铝或氢氧化铝)、有机佐剂(例如皂苷或角鲨烯)、油基佐剂(例如，弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂)、脂质体或生物可降解微球、类病毒颗粒、细菌佐剂(例如单磷酰脂质a或胞壁酰肽)、合成佐剂(例如非离子嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物或合成脂质a)或合成多核苷酸佐剂(例如聚精氨酸或聚赖氨酸)。合适的助剂包括qs-21、detox-pc、mpl-se、mogm-csf、titermax-g、crl-1005、gerbu、teramide、psc97b、adjumer、pg-026、gsk-i、gcmaf、b-alethine、mpc-026、adjuvax、cpg odn、betafectin、alum和mf59。可以使用的其他佐剂包括凝集素、生长因子、细胞因子和淋巴因子，诸如α干扰素、γ干扰素、血小板衍化生长因子(pdgf)、粒细胞集落刺激因子(gcsf)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gmcsf)、肿瘤坏死因子(tnf)、表皮生长因子(egf)、il-1、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il-12或tlr激动剂，以及颗粒佐剂(例如免疫刺激复合物(iscoms))。
[1529]“佐剂”和“免疫刺激剂”在本文中可互换使用，被定义为引起免疫系统刺激的一种或多种物质。在该上下文中，助剂用于增强对本文所述的疫苗或病毒载体的免疫应答。
[1530]
在某些实施方案中，根据本公开的药物组合物可以是本公开的疫苗。
[1531]
类似地，可将本公开的多核苷酸、异源多核苷酸、多肽和异源多肽配制成包含多核苷酸、异源多核苷酸、多肽和异源多肽以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[1532]
在一些实施方案中，该药物组合物不含佐剂。
[1533]
纳米颗粒
[1534]
在一些实施方案中，所述组合物可以包含纳米颗粒。本公开的任何多核苷酸均可以附接到纳米颗粒或与纳米颗粒接触，以递送给受试者。使用纳米颗粒递送本公开的任何多核苷酸或多肽可以消除在疫苗组合物中包含病毒或佐剂的需要。纳米颗粒可包含有助于有效诱导对肽的免疫应答的免疫危险信号。纳米颗粒可诱导树突状细胞(dc)活化和成熟，这是强大的免疫应答所需的。纳米颗粒可包含改善细胞诸如抗原递呈细胞对纳米颗粒因此对肽的摄取的非自体组分。
[1535]
纳米颗粒的直径通常为约1nm至约100nm，诸如约20nm至约40nm。平均直径为20至40nm的纳米颗粒可有利于将纳米颗粒摄取到细胞溶胶中(参见例如wo2019/135086)。示例性纳米颗粒是聚合物纳米颗粒、无机纳米颗粒、脂质体、脂质纳米颗粒(lnp)、免疫刺激复合物(iscom)、病毒样颗粒(vlp)或自组装蛋白。
[1536]
纳米颗粒可以是磷酸钙纳米颗粒、硅纳米颗粒或金纳米颗粒。聚合物纳米颗粒可包含一种或多种合成聚合物(诸如聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)(plg)、聚(d,l-乳酸-共-乙醇酸)(plga)、聚(g-谷氨酸)(g-pga)、聚(乙二醇)(peg)或聚苯乙烯)或一种或多种天然聚合物(诸如多糖，例如普鲁兰、藻酸盐、菊粉和脱乙酰壳多糖)。由于可包含在纳米颗粒中的聚合物的特性，使用聚合物纳米颗粒可能是有利的。例如，上述天然和合成聚合物可具有良好的生物相容性和生物降解性、无毒性质和/或被操纵成所需形状和尺寸的能力。聚合物纳米颗粒还可形成水凝胶纳米颗粒、具有有利特性(包括灵活的网孔尺寸、用于多价缀合的较大表面积、高水含量和抗原的高负载容量)的亲水性三维聚合物网络。聚合物(诸如聚(l-乳酸)(pla)、plga、peg和多糖)适于形成水凝胶纳米颗粒。无机纳米颗粒通常具有刚性结构，并且包括其中包封抗原的壳或抗原可共价附接的核。核可包含一个或多个原子，诸如金(au)、银(ag)、铜(cu)原子、au/ag、au/cu、au/ag/cu、au/pt、au/pd或au/ag/cu/pd或磷酸钙(cap)。
[1537]
在一些实施方案中，纳米颗粒可以是脂质体。脂质体通常由可生物降解的无毒磷脂形成，并且包含具有水性核的自组装磷脂双层壳。脂质体可以是包含单个磷脂双层的单层囊泡，或包含若干个被水层隔开的同心磷脂壳的多层囊泡。因此，可将脂质体定制成将亲水性分子掺入水性核中或将疏水性分子掺入磷脂双层内。脂质体可以将本公开的多核苷酸或多肽或者它们的片段包封在核内进行递送。脂质体和脂质体制剂可以根据标准方法制备，并且是本领域众所周知的，参见例如remington's；akimaru,1995,cytokines mol.ther.1:197-210；alving,1995,immunol.rev.145:5-31；szoka,1980,ann.rev.biophys.bioeng.9:467；美国专利号4,235,871；美国专利号4,501,728；以及美国专利号4,837,028。脂质体可包含用于将脂质体复合物靶向特定细胞类型的靶向分子。靶向分子可包括血管或存在于靶组织中的细胞的表面上的生物分子(例如，受体或配体)的结合配偶体(例如，配体或受体)。脂质体电荷是从血液中清除脂质体的重要决定因素，其中带负电的脂质体被网状内皮系统更快地吸收(juliano,1975,biochem.biophys.resmun.63:651)，因此在血流中具有较短的半衰期。掺入磷脂酰乙醇胺衍生物通过防止脂质体聚集来增加循环时间。例如，将n-(ω-羧基)酰氨基磷酸酰乙醇胺掺入l-α-二硬脂酰磷脂酰胆碱的较大单层囊泡中显著增加了脂质体在体内的循环寿命(参见例如ahl,1997,biochim.biophys.acta 1329:370-382)。通常，用约5至15摩尔％的带负电磷脂(诸如磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰肌醇)制备脂质体。添加带负电磷脂(诸如磷脂酰甘油)也起到防止脂质体自发聚集的作用，从而最大限度地降低形成尺寸过小的脂质体聚集体的风险。膜硬化剂(诸如浓度为至少约50摩尔％和5摩尔％至15摩尔％的单唾液酸神经节苷脂的鞘磷脂或饱和中性磷脂)也可有利地赋予脂质体特性，诸如刚度(参见例如美国专利4,837,028)。另外，脂质体悬浮液可包含脂质保护剂，其保护脂质免受储存时的自由基和脂质过氧化损害。优选的是亲脂性自由基淬灭剂，诸如α-生育酚和水溶性铁特异性螯合剂(例如ferrioxianine)。
[1538]
在一些实施方案中，纳米颗粒可以包括大小不同的多层囊泡。例如，可将囊泡形成脂质溶解在合适的有机溶剂或溶剂体系中，并在真空或惰性气体下干燥以形成薄脂质膜。如果需要，可将膜再溶解在合适的溶剂诸如叔丁醇中，然后冻干以形成更均匀的脂质混合物，该脂质混合物为更易于水合的粉末状形式。用多肽或多核苷酸的水性溶液覆盖该膜，然后通常伴随搅拌在15分钟至60分钟的时段内使其水合。
[1539]
可通过在更剧烈的搅拌条件下使脂质水合或通过添加增溶洗涤剂诸如脱氧胆酸盐来使所得多层囊泡的尺寸分布朝更小的尺寸偏移。水合介质可包含最终脂质体悬浮液中脂质体内部体积所需浓度的核酸。可用于形成多层囊泡的合适的脂质包括dotma、dogs或transfectain
tm
、dnerie或dorie、dc-chol、dotap
tm
、lipofectamine
tm
和甘油脂类化合物。
[1540]
在一些实施方案中，纳米颗粒可以是免疫刺激复合物(iscom)。iscom是笼状颗粒，其通常由含胶体皂苷的胶束形成。iscom可包含胆固醇、磷脂(诸如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱)和皂苷(诸如来自tree quillaia saponaria的quil a)。
[1541]
在一些实施方案中，纳米颗粒可以是病毒样颗粒(vlp)。vlp是不含感染性核酸的自组装纳米颗粒，其通过生物相容性衣壳蛋白的自组装形成。vlp的直径通常为约20nm至约l50nm，诸如约20nm至约40nm、约30nm至约l40nm、约40nm至约l30nm、约50nm至约l20nm、约60nm至约110nm、约70nm至约100nm或约80nm至约90nm。vlp有利地利用进化病毒结构的能
力，该结构经天然优化以与免疫系统相互作用。天然优化的纳米颗粒尺寸和重复的结构顺序意味着vlp即使在不存在助剂的情况下也能诱导有效的免疫应答。
[1542]
包封的自复制rna分子
[1543]
还可以使用聚合物、脂质和/或其他生物可降解剂(诸如但不限于磷酸钙、聚合物)的组合将自复制rna分子和/或包含自复制rna分子的组合物配制为纳米颗粒。组分能够以核-壳、杂合物和/或逐层构造的方式组合，以允许对纳米颗粒进行微调，使得可以增强本公开的分子和/或组合物的递送。
[1544]
本发明所公开的自复制rna分子和/或包含编码本公开的任何多肽的自复制rna分子的组合物可以使用一种或多种脂质体、脂质体复合物和/或脂质纳米颗粒包封。脂质体是人工制备的囊泡，其主要由脂质双层构成，并且可以用作递送媒介物来施用多核苷酸和自复制rna分子。脂质体可以具有不同的大小，诸如但不限于：多层囊泡(mlv)，其可以具有数百纳米的直径，并且可以含有一系列由狭窄的水性隔室分开的同心双层；小单层囊泡(suv)，其可以具有小于50nm的直径；以及大单层囊泡(luv)，其可以具有介于50nm与500nm之间的直径。脂质体设计可以包括但不限于调理素或配体，以便改善脂质体与不健康组织的附着，或者激活事件(诸如但不限于胞吞)。脂质体可以具有低或高ph，以便改善本文所公开的多核苷酸和自复制rna分子的递送。
[1545]
脂质体的形成可以取决于物理化学特性，诸如但不限于：被包埋的药物制剂和脂质体成分、脂质囊泡分散于其中的介质的性质、包埋物质的有效浓度及其潜在毒性、在囊泡的施用和/或递送期间涉及的任何附加的过程，用于预期应用的囊泡的优化尺寸、多分散度和储存期限，批次间再现性，以及安全有效的脂质体产品的大规模生产的可能性。
[1546]
在一些实施方案中，该自复制rna分子被包封在脂质体、脂质体复合物、脂质纳米颗粒或它们的组合中，结合到脂质体、脂质体复合物、脂质纳米颗粒或它们的组合，或者吸附在脂质体、脂质体复合物、脂质纳米颗粒或它们的组合上，优选地该自复制rna分子被包封在脂质纳米颗粒中。
[1547]
在一些实施方案中，编码本公开的任何多肽的自复制rna分子可以完全包封在该颗粒的脂质部分内，从而保护rna免于核酸酶降解。“完全包封”意指该rna在暴露于血清或将显著降解游离rna的核酸酶测定之后不显著降解。当完全包封时，在通常将会降解100％游离核酸的处理中，优选地该颗粒中少于25％的核酸被降解，更优选地该颗粒中少于10％且最优选地该颗粒中少于5％的核酸被降解。“完全包封”还意指核酸-脂质颗粒在体内施用时不会迅速分解成它们的组成部分。
[1548]
在一些实施方案中，可以将自复制rna分子和/或包含所述自复制rna分子的本公开的组合物配制在脂质囊泡中，该脂质囊泡可以具有官能化脂质双层之间的交联。在一些实施方案中，可以将本公开的自复制rna分子和/或组合物配制在脂质-聚阳离子复合物中。该脂质-聚阳离子复合物的形成可以通过本领域已知的方法来完成。作为一个非限制性示例，聚阳离子可以包括阳离子肽或多肽，诸如但不限于聚赖氨酸、聚鸟氨酸和/或聚精氨酸和阳离子肽。在一些实施方案中，可以将本文所公开的自复制rna分子和/或组合物配制在脂质-聚阳离子复合物中，该脂质-聚阳离子复合物可以还包含中性脂质，诸如但不限于胆固醇或二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)。脂质纳米颗粒制剂可以受到以下因素(但又不限于以下因素)的影响：阳离子脂质组分的选择、阳离子脂质饱和度、聚乙二醇化的性质、所有组分
的比率和生物物理参数(诸如尺寸)。
[1549]
在一些实施方案中，本文所公开的自复制rna分子被包封在脂质纳米颗粒(lnp)中。脂质纳米颗粒通常包含四种不同的脂质：可电离脂质、中性辅助脂质、胆固醇，以及可扩散的聚乙二醇(peg)脂质。lnp与脂质体相似，但功能和组成略有不同。lnp被设计用于包封多核苷酸，诸如dna、mrna、sirna和srna。传统脂质体包含由一个或多个脂质双层包围的水性核。lnp可以呈现胶束状结构，从而将多核苷酸包封在非水性核中。lnp通常包含阳离子脂质、非阳离子脂质和防止颗粒(例如，peg-脂质缀合物)聚集的脂质。lnp可用于全身应用，因为它们在静脉(i.e.)注射后表现出延长的循环寿命，并且在远侧部位(例如，与施用部位物理分离的部位)积聚。lnp可具有约50nm至约150nm，诸如约60nm至约130nm或约70nm至约110nm或约70nm至约90nm的平均直径，并且基本上无毒。负载多核苷酸的lnp的制备公开于例如美国专利号5,976,567、5,981,501、6,534,484、6,586,410、6,815,432；和pct专利公布号wo96/40964中。包含多核苷酸的lnp描述于例如wo2019/191780中。
[1550]
在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含阳离子脂质(例如，一种或多种本文所述的阳离子脂质或其盐)、磷脂，以及抑制颗粒聚集的缀合脂质(例如，一种或多种peg-脂质缀合物)。脂质颗粒还可以包含胆固醇。脂质颗粒可以包封至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个编码一种或多种多肽的自复制rna分子。
[1551]
在一些实施方案中，包含聚阳离子组合物的lnp制剂可以用于体内和/或离体递送本文所述的自复制rna分子。本公开还提供了包含阳离子脂质的lnp制剂。
[1552]
术语“阳离子脂质”和“氨基脂质”在本文中可互换使用，包括具有一个、两个、三个或更多个脂肪酸或脂肪烷基链和ph可滴定的氨基头部基团(例如，烷基氨基或二烷基氨基头部基团)的那些脂质及其盐。阳离子脂质通常在低于该阳离子脂质的pka的ph下质子化(即，带正电)，并且在高于该pka的ph下基本上是中性的。阳离子脂质也可以称为可滴定的阳离子脂质。在一些实施方案中，阳离子脂质包含：可质子化的叔胺(例如，ph可滴定的)头部基团；c18烷基链，其中每个烷基链独立地具有0个至3个(例如0个、1个、2个或3个)双键；以及介于头部基团与烷基链之间的醚、酯或缩酮键。此类阳离子脂质包括但不限于dsdma、dodma、dlindma、dlendma、γ-dlendma、dlin-k-dma、dlin-k-c2-dma(也称为dlin-c2k-dma、xtc2和c2k)、dlin-k-c3-dma、dlin-k-c4-dma、dlen-c2k-dma、y-dlen-c2k-dma、dlin-m-c2-dma(也称为mc2)、dlin-m-c3-dma(也称为mc3)和dlin-mp-dma(也称为1-b1 1)。
[1553]
本公开还提供了包封的自复制rna分子，其中阳离子脂质包含可质子化的叔胺。在一些实施方案中，阳离子脂质为二((z)-壬-2-烯-1-基)8,8
’‑
((((2-(二甲基氨基)乙基)硫代)羰基)氮烷二基)二辛酸酯。
[1554]
在一些实施方案中，阳离子脂质化合物是相对无细胞毒性的。阳离子脂质化合物可以是生物相容的和生物可降解的。阳离子脂质可以具有在约5.5至约7.5范围内、更优选地介于约6.0与约7.0之间的pka。
[1555]
本文所述的阳离子脂质化合物由于以下几个原因对于药物递送特别有吸引力：它们含有氨基基团，这些氨基基团用于与dna、rna、其他多核苷酸和其他带负电的药剂相互作用、用于缓冲ph、用于引起内渗透、用于保护待递送的自复制rna分子，它们可以由可商购获得的起始物质合成；并且/或者它们是ph响应性的并且可以被工程化为具有期望的pka。
[1556]
脂质纳米颗粒制剂可以通过用生物可降解的阳离子脂质(称为快速消除的脂质纳
米颗粒(relnp))替换阳离子脂质而得到改善。可电离的阳离子脂质(诸如但不限于dlindma、dlin-kc2-dma和dlin-mc3-dma)已经显示出随时间推移在血浆和组织中累积，并且可能是潜在的毒性来源。快速消除的脂质的快速代谢可以在大鼠中以1mg/kg剂量至10mg/kg剂量的数量级改善脂质纳米颗粒的耐受性和指数。包含酶促降解的酯键可以改善阳离子组分的降解和代谢分布，同时仍然保持relnp制剂的活性。酯键可以位于脂质链的内部，或者可以位于脂质链的末端处。内部酯键可以替代脂质链中的任何碳。
[1557]
在一些实施方案中，自复制rna分子可以包装或包封在阳离子分子中，诸如聚酰胺基胺、树突状聚赖氨酸、聚乙烯irinine或聚丙烯h-nine、聚赖氨酸、壳聚糖、dna-明胶凝聚层或deae葡聚糖、树枝状聚合物或聚乙烯亚胺(pei)。
[1558]
在一些实施方案中，脂质颗粒可以包含脂质缀合物。缀合的脂质是有用的，因为其防止颗粒的聚集。合适的缀合脂质包括但不限于peg-脂质缀合物、阳离子-聚合物-脂质缀合物，以及它们的混合物。
[1559]
peg是具有两个末端羟基基团的乙烯peg重复单元的线性水溶性聚合物。peg根据其分子量分类；并且包括以下几类：单甲氧基聚乙二醇(mepeg-oh)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酸酯(mepeg-s)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(mepeg-s-nhs)、单甲氧基聚乙二醇-胺(mepeg-nh2)、单甲氧基聚乙二醇-三氟乙基磺酸酯(mepeg-tres)、单甲氧基聚乙二醇-咪唑基-羰基(mepeg-im)，以及含有末端羟基基团而不是末端甲氧基基团的此类化合物(例如，ho-peg-s、ho-peg-s-nhs、ho-peg-nh2)。
[1560]
本文所述的peg-脂质缀合物的peg部分可以具有在550道尔顿至10,000道尔顿范围内的平均分子量。peg-脂质的示例包括但不限于：与二烷基氧基丙基偶联的peg(peg-daa)、与二酰基甘油偶联的peg(peg-dag)、与磷脂(诸如磷脂酰乙醇胺)偶联的peg(peg-pe)、与神经酰胺缀合的peg、与胆固醇或其衍生物缀合的peg，以及它们的混合物。在一些实施方案中，peg缀合的脂质为dmg-peg-2000。
[1561]
还可以将自复制rna分子配制在包含非阳离子脂质的颗粒中。合适的非阳离子脂质包括例如能够产生稳定复合物的中性不带电脂质、两性离子脂质或阴离子脂质。非阳离子脂质的非限制性示例包括磷脂，诸如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(esm)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、磷酸二鲸蜡醇酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二油酰磷脂酰甘油(dopg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰-磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰-油酰-磷脂酰乙醇胺(pope)、棕榈酰油酰-磷脂酰甘油(popg)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(n-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(dope-mal)、磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰乙醇胺棕榈酰-二肉豆蔻酰-二硬脂酰-单甲基-二甲基-二棕榈酰-硬脂酰油酰-磷脂酰乙醇胺(sope)、溶血磷脂酰胆碱、二亚油酰基磷脂酰胆碱，以及它们的混合物。也可以使用其他的二酰基磷脂酰胆碱和二酰基磷脂酰乙醇胺磷脂。这些脂质中的酰基基团优选地为来源于具有c10-c24碳链的脂肪酸的酰基基团，例如月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基或油酰基。
[1562]
非阳离子脂质的附加示例包括甾醇，诸如胆固醇及其衍生物。胆固醇衍生物的非限制性示例包括极性类似物，诸如5a-胆甾烷醇、5a-粪甾烷醇、胆甾醇基-(2'-羟基)-乙基
醚、胆甾醇基-(4'-羟基)-丁基醚和6-酮胆甾烷醇；非极性类似物，诸如5a-胆甾烷、胆甾烯酮、5a-胆甾烷酮、5a-胆甾烷酮和胆甾醇癸酸酯；以及它们的混合物。在优选的实施方案中，胆固醇衍生物为极性类似物，诸如胆甾醇基-(4'-羟基)-丁基醚。在一些实施方案中，磷脂为dspc。在一些实施方案中，存在于脂质颗粒中的非阳离子脂质包含一种或多种磷脂和胆固醇或其衍生物的混合物，或者由该混合物组成。在脂质颗粒含有磷脂和胆固醇或胆固醇衍生物的混合物的一些实施方案中，该混合物可以包含至多40摩尔％、45摩尔％、50摩尔％、55摩尔％或60摩尔％的存在于颗粒中的总脂质。
[1563]
在一些实施方案中，lnp可以包含30％至70％的阳离子脂质化合物、0至60％的胆固醇、0至30％的磷脂和1％至10％的聚乙二醇(peg)。
[1564]
在一些实施方案中，在脂质纳米颗粒中，阳离子脂质、两性离子脂质、胆固醇和缀合脂质分别以50:7:40:3的摩尔比组合。
[1565]
在一些实施方案中，本文所述的lnp制剂可以另外包含渗透性增强剂分子。
[1566]
在一些实施方案中，纳米颗粒制剂可以是包含碳水化合物载剂和自复制rna分子的碳水化合物纳米颗粒。作为一个非限制性示例，碳水化合物载剂可以包括但不限于：酸酐修饰的植物糖原或糖原型材料、植物糖原辛烯基琥珀酸酯、植物糖原β-糊精，以及酸酐修饰的植物糖原β-糊精。
[1567]
试剂盒
[1568]
本公开还提供了一种试剂盒，其包含本公开的一种或多种组合物、一种或多种多核苷酸、一种或多种多肽，或者一种或多种载体。本公开还提供了一种包含本公开的一种或多种重组病毒的试剂盒。试剂盒可用于促进执行本文所述的方法。在一些实施方案中，试剂盒还包含有利于本公开的疫苗进入细胞的试剂，诸如基于脂质的制剂或病毒包装材料。
[1569]
在一些实施方案中，该试剂盒包含一种或多种含有本公开的任何多核苷酸的ad26载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含一种或多种含有本公开的任何多核苷酸的mva载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含一种或多种含有本公开的任何多核苷酸的gad20载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含一种或多种含有本公开的任何多核苷酸的自复制rna分子。
[1570]
在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的ad26载体和本公开的mva载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的gad20载体和本公开的mva载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的ad26载体和本公开的gad20载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的自复制rna分子和本公开的gad20载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的自复制rna分子和本公开的mva载体。在一些实施方案中，该试剂盒包含本公开的自复制rna分子和本公开的ad26载体。在一些实施方案中，试剂盒包含本公开的一种或多种多核苷酸。在一些实施方案中，试剂盒包含本公开的一种或多种多肽。在一些实施方案中，试剂盒包含本公开的一种或多种细胞。
[1571]
在一些实施方案中，该试剂盒包含：
[1572]
第一疫苗，该第一疫苗包含来源于ad26、gad20或mva的重组病毒，或包含编码异源多肽的异源多核苷酸的自复制rna分子，其中该异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、
89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段；以及
[1573]
第二疫苗，该第二疫苗包含来源于ad26、gad20或mva的重组病毒，或包含编码异源多肽的异源多核苷酸的自复制rna分子，其中该异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段。
[1574]
在一些实施方案中，该试剂盒包含：
[1575]
第一疫苗，该第一疫苗包含来源于ad26、gad20或mva的重组病毒，或包含编码异源多肽的异源多核苷酸的自复制rna分子，其中该异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段；以及
[1576]
第二疫苗，该第二疫苗包含来源于ad26、gad20或mva的重组病毒，或包含编码异源多肽的异源多核苷酸的自复制rna分子，其中该异源多肽包含选自由以下项组成的组的两种或更多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的片段。
[1577]
其他分子
[1578]
卵巢癌新抗原/hla复合物
[1579]
本公开还提供了一种包含卵巢癌新抗原和hla的蛋白质复合物。本公开还提供了一种包含卵巢癌新抗原的片段和hla的蛋白质复合物。本公开还提供了一种包含卵巢癌新抗原的变体和hla的蛋白质复合物。本公开还提供了一种包含卵巢癌新抗原的片段的变体和hla的蛋白质复合物。
[1580]
在一些实施方案中，卵巢癌新抗原包含选自由以下项组成的组的多肽序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403和405及它们的片段。
[1581]
在一些实施方案中，hla是i类hla。在一些实施方案中，hla是ii类hla。在一些实施方案中，hla是hla-a。在一些实施方案中，hla是hla-b。在一些实施方案中，hla是hla-c。在一些实施方案中，hla是hla-dp。在一些实施方案中，hla是hla-dq。在一些实施方案中，hla是hla-dr。在一些实施方案中，hla是hla-a*01:01、a*02:01、a*03:01、a*24:02、b*07:02或b*08:01。在一些实施方案中，该蛋白质复合物与检测剂或细胞毒性剂缀合。
[1582]
卵巢癌新抗原和hla的复合物可用于例如体外或体内分离同源t细胞。还可将卵巢癌新抗原和hla的复合物缀合至可检测标签，并用作检测剂以检测、可视化或分离同源tcr或表达同源tcr的t细胞。还可将卵巢癌新抗原和hla的复合物缀合至细胞毒素剂，并用于耗尽或减少表达同源tcr的细胞的数量。复合物可处于其天然构型，或者另选地可工程化卵巢癌新抗原和/或hla。
[1583]
工程化概念包括肽与hla的共价偶联，例如通过使用可裂解的共价接头。卵巢癌新抗原和hla复合物可以是单体或多聚体。可将卵巢癌新抗原和hla复合物偶联到毒素或检测剂。各种工程化概念包括表达复合物作为共价卵巢癌新抗原-β2-α2-α1-β1链或卵巢癌新抗原-β链，例如，作为可溶性复合物。可在卵巢癌新抗原与hla之间使用长度为至少15个氨基酸的接头。另选地，可将复合物表达为共价偶联的卵巢癌新抗原-单链β1-α1。还可将卵巢癌新抗原/hla复合物表达为卵巢癌新抗原共价偶联到α链的n末端的全长hlaαβ链，或者另选地卵巢癌新抗原经由非共价相互作用与αβ链缔合。各种表达形式公开于us5976551、us5734023、us5820866、us7141656b2、us6270772b1和us7074905b2中。另外，可将hla表达为在α1链处突变或经由α2和β2结构域经由二硫键稳定的单链构建体，如us8377447b2和us8828379b2中所述。可将卵巢癌新抗原或其片段经由光敏或高碘酸盐敏感的可裂解接头偶联到hla，如us9079941b2中所述。可将卵巢癌新抗原/hla复合物工程化为多聚体形式。可
通过将反应性侧链掺入hlaα或β链的c末端以促进两种或更多种卵巢癌新抗原/hla复合物的交联来产生多聚体形式，如us7074904b2中所述。另选地，可将生物素酰化识别序列bira掺入hlaα或β链的c末端，随后对该链进行生物素酰化，并且通过与抗生物素蛋白/链霉亲和素结合来形成多聚体，如us563536中所述。还可利用fc融合体、将卵巢癌新抗原/hla复合物偶联在葡聚糖载体中、寡聚化通路卷曲的卷曲结构域、利用另外的生物素酰化肽或将卵巢癌新抗原/hla复合物缀合到纳米颗粒或螯合物载体上来产生多聚卵巢癌新抗原/hla复合物，如us6197302b1、us6268411b1、us20150329617a1、ep1670823b1、ep1882700b1、ep2061807b1、us20120093934a1、us20130289253a1、us20170095544a1、us20170003288a1和wo2017015064a1中所述。
[1584]
本公开还提供了蛋白质复合物，该蛋白质复合物包含人白细胞抗原(hla)和本公开的多肽，该多肽包含以下的氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403、405，或它们的片段。
[1585]
在一些实施方案中，hla可包括i类或ii类。
[1586]
在一些实施方案中，hla可包括hla-a、hla-b或hla-c。
[1587]
在一些实施方案中，hla可包括hla-dp、hla-dq或hla-dr。
[1588]
在一些实施方案中，hla可包括i类等位基因hla-a*01:01、a*02:01、a*03:01、a*24:02、b*07:02或b*08:01。
[1589]
蛋白质类分子
[1590]
本公开还提供了特异性结合本公开的多肽或者hla与该多肽的复合物的分离的蛋白质类分子。
[1591]
在一些实施方案中，蛋白质类分子为抗体、替代支架、嵌合抗原受体(car)或t细胞受体(tcr)。
[1592]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是抗体的抗原结合片段。
[1593]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是多特异性分子。在一些实施方案中，蛋白质类分子是双特异性分子。在一些实施方案中，蛋白质类分子是三特异性分子。在一些实施方案中，多特异性分子结合两种或更多种不同的卵巢新抗原。在一些实施方案中，多特异性分子结合卵巢新抗原和t细胞受体(tcr)复合物。在一些实施方案中，多特异性分子结合两种或更多种不同的卵巢新抗原和t细胞受体(tcr)复合物。
[1594]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是抗体。
[1595]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是多特异性抗体。在一些实施方案中，蛋白质类
分子是双特异性抗体。在一些实施方案中，蛋白质类分子是三特异性抗体。在一些实施方案中，蛋白质类分子是t细胞重定向分子。
[1596]
在本公开的卵巢新抗原是蛋白质的胞外结构域的一部分的情况下，卵巢新抗原可用作肿瘤相关抗原，用于利用选择性结合肿瘤细胞上的卵巢新抗原的抗原结合结构域将t细胞募集到肿瘤或将car-t和其他细胞疗法靶向肿瘤。
[1597]
在卵巢新抗原是胞内结构域的一部分的情况下，具有递送到与细胞毒素剂或剂缀合的胞内区室中的能力的抗原结合结构域可用作剂。另选地，工程化以表达结合卵巢新抗原/hla复合物的同源tcr的细胞可用作剂。
[1598]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是替代支架。
[1599]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是嵌合抗原受体(car)。
[1600]
在一些实施方案中，蛋白质类分子是t细胞受体(tcr)。
[1601]
蛋白质类分子与本公开的卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的结合可使用任何合适的方法通过实验确定。这类方法可以采用本领域技术人员已知的proteon xpr36、biacore 3000或kinexa仪器、elisa或竞争结合测定。如果在不同的条件(例如，同渗容摩、ph)下测量，则所测量的结合可变化。因此，亲和力与其他结合参数(例如kd、k
on
、k
off
)的测量通常用标准化条件和标准化缓冲液(诸如本文所述的缓冲液)进行。本领域技术人员将理解，使用例如biacore 3000或proteon进行亲和力测量的内部误差(测量为标准偏差，sd)通常可在典型检出限内的测量值的5％-33％内。“非实质性”是指当与所测量的蛋白质类分子与本公开的卵巢新抗原的结合相比时，结合为1/100。可使用已知方法和本文所述的那些方法进一步表征本公开的蛋白质类分子的活性和功能，诸如蛋白质类分子杀死表达卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的细胞的能力。
[1602]
抗体和抗原结合结构域
[1603]
可使用已知方法产生特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗体和抗原结合结构域。此类抗体可包括任何类型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、类别(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亚类的免疫球蛋白分子。
[1604]
例如，可以使用kohler和milstein，nature 256:495,1975中的杂交瘤方法来生成单克隆抗体。在杂交瘤方法中，用一种或多种卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物免疫小鼠或其他宿主动物，诸如仓鼠、大鼠或猴，然后使用标准方法将来自免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞(goding,monoclonal antibodies:principles and practice,pp.59-103(academic press,1986))。筛选出由单个永生化杂交瘤细胞产生的菌落，用于产生具有期望特性(诸如对本公开的卵巢新抗原的结合特异性和亲和力)的抗体。
[1605]
可使用各种宿主动物来产生抗体。例如，可以使用balb/c小鼠、大鼠或鸡来生成含有vh/vl对的抗体，并且可以使用标准免疫方案，使用美洲驼和羊驼来生成仅重链(vhh)抗体。可使用各种技术来人源化在非人动物中制备的抗体，以产生更类似人的序列。
[1606]
包括选择人受体框架的示例性人源化技术是已知的，并且包括cdr接枝(美国专利号5,225,539)、sdr接枝(美国专利号6,818,749)、表面重塑(padlan,(1991)mol immunol 28:489-499)、特异性决定残基表面重塑(美国专利公布2010/0261620)、人框架改型(美国专利号8,748,356)和超人源化(美国专利号7,709,226)。在这些方法中，将亲本抗体的cdr转移到人框架上，该人框架可基于其与亲本框架的总体同源性、基于cdr长度的相似性或规
范结构同一性或它们的任何组合进行选择。
[1607]
可通过如下过程进一步优化人源化抗体以改善其对所需抗原的选择性或亲和力：通过采用诸如国际专利公布wo1090/007861和wo1992/22653中所述的技术，引入修改的框架支持残基来保持结合亲和力(回复突变)，或者通过在任何cdr处引入变体例如来改善抗体的亲和力。
[1608]
在其基因组中携带人免疫球蛋白(ig)基因座的转基因动物(诸如小鼠或大鼠)可以用于生成抗卵巢新抗原/hla复合物的卵巢新抗原的人抗体，这在例如美国专利号6,150,584、国际专利公布号wo99/45962、国际专利公布号wo2002/066630、wo2002/43478、wo2002/043478和wo1990/04036；lonberg等人(1994)nature 368:856-9；green等人(1994)nature genet.7:13-21；green&jakobovits(1998)exp.med.188:483-95；lonberg和huszar(1995)int rev immunol 13:65-93；bruggemann等人，(1991)eur j immunol 21:1323-1326；fishwild等人，(1996)nat biotechnol14:845-851；mendez等人，(1997)nat genet 15:146-156；green(1999)j immunol methods 231:11-23；yang等人，(1999)cancer res 59:1236-1243；br
ü
ggemann和taussig(1997)curr opin biotechnol 8:455-458中有所描述。可破坏此类动物中的内源性免疫球蛋白基因座或使该基因座缺失，并且可使用转染体或微小基因，通过同源或非同源重组将至少一种完整或部分的人免疫球蛋白基因座插入动物的基因组中。可邀请诸如regeneron(http://_www_regeneron_com)、harbour antibodies(http://_www_harbourantibodies_com)、open monoclonal technology,inc.(omt)(http://_www_omtinc_net)、kymab(http://_www_kymab_com)、trianni(http://_www.trianni_com)和ablexis(http://_www_ablexis_com)等公司使用上述技术以提供抗选定抗原的人抗体。
[1609]
人抗体可选自噬菌体展示文库，其中噬菌体被工程化以表达人免疫球蛋白或其部分，诸如fab、单链抗体(scfv)、结构域抗体或者未配对或配对抗体可变区(knappik等人，(2000)j mol biol 296:57-86；krebs等人，(2001)j immunol meth 254:67-84；vaughan等人，(1996)nature biotechnology 14:309-314；sheets等人，(1998)pitas(usa)95:6157-6162；hoogenboom和winter(1991)j mol biol 227:381；marks等人，(1991)j mol biol 222:581)。可例如用噬菌体pix外壳蛋白从将抗体重链和轻链可变区表达为异源多肽的噬菌体展示文库中分离出本公开的抗体，如shi等人，(2010)j mol biol 397:385-96和国际专利公布号wo09/085462)中所述。可从文库中筛选与卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物结合的噬菌体，并且可进一步表征获得的阳性克隆，从克隆裂解物中分离fab，并将其表达为全长igg。用于分离人抗体的此类噬菌体展示方法描述于例如以下文献中：美国专利5,223,409、5,403,484、5,571,698、5,427,908、5,580,717、5,969,108、6,172,197、5,885,793、6,521,404、6,544,731、6,555,313、6,582,915和6,593,081。可进一步测试抗体与hla/新抗原复合物或与单独的新抗原的结合。
[1610]
可使用任何合适的技术诸如重组蛋白产生或通过肽的合成来进行免疫源性抗原的制备以及单克隆抗体的产生。免疫原性抗原能够以纯化蛋白质或蛋白质混合物(包括全细胞或者细胞或组织提取物)的形式施用于动物，或者该抗原可以在动物体内由编码所述抗原或其部分的核酸从头形成。
[1611]
特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗原结合结构域也可来源于
本文所述的抗体。抗原结合结构域包括单链抗体、fab片段、fv片段、单链fv片段(scfv)、vhh结构域、vh、vl、替代支架(例如，非抗体抗原结合结构域)、二价抗体片段诸如(fab)2
′‑
片段、f(ab
′
)片段、二硫键连接的fv(sdfv)、细胞内抗体、微抗体、双抗体、三抗体和十抗体。
[1612]
可使用已知方法生成特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物和第二抗原的双特异性和多特异性抗体。第二抗原可以是t细胞受体复合物(tcr复合物)。第二抗原可以是tcr复合物内的cd3。可使用特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物和第二抗原的任何已知抗原结合结构域形式将特异性结合本公开的卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物和第二抗原的双特异性和多特异性抗体工程化为任何多价形式。可将特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗原结合结构域缀合至一个或多个fc结构域或其片段，或任选地缀合至其他支架，诸如半衰期延长的部分，包括白蛋白、peg或转铁蛋白。
[1613]
特异性结合两个或更多个卵巢新抗原的多特异性抗体可在靶向表达卵巢新抗原的肿瘤细胞时在改善的特异性方面提供益处。
[1614]
可将特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗原结合结构域工程化为使用fab臂交换产生的全长多特异性抗体，其中将置换引入ig恒定区ch3结构域内促进fab臂体外交换的两个单特异性二价抗体中。在所述方法中，两种单特异性二价抗体被工程化为在ch3结构域处具有促进异源二聚体稳定性的某些取代；将这些抗体在足以使铰链区中的半胱氨酸发生二硫键异构化的还原条件下一起温育；从而通过fab臂交换生成双特异性抗体。温育条件最理想地可恢复到非还原条件。可使用的示例性还原剂为2-巯基乙胺(2-mea)、二硫苏糖醇(dtt)、二硫赤藓糖醇(dte)、谷胱甘肽、三(2-羧乙基)膦(tcep)、l-半胱氨酸和β-巯基乙醇，优选地为选自由2-巯基乙胺、二硫苏糖醇和三(2-羧乙基)膦组成的组的还原剂。例如，可使用如下条件：在至少25mm 2-mea的存在下或至少0.5mm二硫苏糖醇的存在下，在5-8的ph例如ph7.0或ph7.4，至少20℃的温度下，温育至少90分钟。
[1615]
可使用的ch3突变包括诸如旋钮空穴突变(genentech)、静电匹配突变(chugai,amgen,novonordisk,oncomed)、链交换工程化结构域主体(seedbody)(emd serono)、突变(genmab)以及其他非对称突变(例如zymeworks)的技术。
[1616]
旋钮空穴突变公开于例如wo1996/027011中，并且包括ch3区域的界面上的突变，其中具有小侧链(空穴)的氨基酸被引入第一ch3区域，而具有大侧链(旋钮)的氨基酸被引入第二ch3区域，导致第一ch3区域和第二ch3区域之间的优先相互作用。形成旋钮和空穴的示例性ch3区域突变是t366y/f405a、t366w/f405w、f405w/y407a、t394w/y407t、t394s/y407a、t366w/t394s、f405w/t394s和t366w/t366s_l368a_y407v。
[1617]
重链异源二聚体的形成可通过使用静电相互作用，通过取代第一ch3区上的带正电残基和第二ch3区上的带负电残基来促进，如us2010/0015133、us2009/0182127、us2010/028637或us2011/0123532中所述。
[1618]
可用于促进重链异源二聚化的其他非对称突变是l351y_f405a_y407v/t394w、t366i_k392m_t394w/f405a_y407v、t366l_k392m_t394w/f405a_y407v、l351y_y407a/t366a_k409f、l351y_y407a/t366v_k409f、y407a/t366a_k409f或t350v_l351y_f405a_y407v/t350v_t366l_k392l_t394w，如us2012/0149876或us2013/0195849(zymeworks)中所述。
[1619]
seedbody突变牵涉将选择的igg残基取代为iga残基以促进重链异源二聚化，如
us20070287170中所述。
[1620]
可使用的其他示例性突变是r409d_k370e/d399k_e357k、s354c_t366w/y349c_t366s_l368a_y407v、y349c_t366w/s354c_t366s_l368a_y407v、t366k/l351d、l351k/y349e、l351k/y349d、l351k/l368e、l351y_y407a/t366a_k409f、l351y_y407a/t366v_k409f、k392d/d399k、k392d/e356k、k253e_d282k_k322d/d239k_e240k_k292d、k392d_k409d/d356k_d399k，如wo2007/147901、wo 2011/143545、wo2013157954、wo2013096291和us2018/0118849中所述。
[1621]
突变(genmab)公开于例如us9150663和us2014/0303356中，并且包括突变f405l/k409r、野生型/f405l_r409k、t350i_k370t_f405l/k409r、k370w/k409r、d399afghilmnrstvwy/k409r、t366adefghilmqvy/k409r、l368adeghnrstvq/k409agrh、d399fhkrq/k409agrh、f405iklstvw/k409agrh和y407lwq/k409agrh。
[1622]
可将特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗原结合结构域掺入其中的另外的双特异性或多特异性结构包括双可变结构域免疫球蛋白(dvd)(国际专利公布号wo2009/134776；dvd是全长抗体，其包含具有vh1-接头-vh2-ch结构的重链和具有vl1-接头-vl2-cl结构的轻链；接头是任选的)、包括多种二聚化结构域以连接具有不同特异性的两个抗体臂的结构诸如亮氨酸拉链或胶原二聚化结构域(国际专利公布号wo2012/022811、美国专利号5,932,448；美国专利号6,833,441)、缀合在一起的两个或更多个结构域抗体(dab)、双价抗体、仅重链抗体诸如骆驼科抗体和工程化骆驼科抗体、双重靶向(dt)-ig(gsk/domantis)、二合一抗体(genentech)、交联mab(karmanos cancer center)、mab2(f-star)和covx-主体(covx/pfizer)、igg样双特异性抗体(innclone/eli lilly)、ts2ab(medimmune/az)和bsab(zymogenetics)、hercules(biogen idec)和tvab(roche)、scfv/fc融合体(academic institution)、scorpion(emergent biosolutions/trubion，zymogenetics/bms)、双亲和重靶向技术(fc-dart)(macrogenics)和双(scfv)
2-fab(national research center for antibody medicine
‑‑
china)、双功能或bis-fab(genentech)、对接锁定(dnl)(immunomedics)、二价双特异性(biotecnol)和fab-fv(ucb-celltech)。基于scfv的、基于双价抗体的结构域抗体包括但不限于双特异性t细胞衔接器(bite)(micromet)、串联双价抗体(tandab)(affimed)、双亲和重靶向技术(dart)(macrogenics)、单链双价抗体(academic)、tcr样抗体(ait，receptorlogics)、人血清白蛋白scfv融合体(merrimack)和combody(epigen biotech)、双重靶向纳米抗体(ablynx)、双重靶向仅重链结构域抗体。
[1623]
替代支架
[1624]
可使用本领域已知和本文所述的各种支架来产生特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的替代支架(也称为抗体模拟物)。替代支架可以是单体，其被设计成掺入纤连蛋白的iii型纤连蛋白结构域(fn3)或腱生蛋白作为蛋白质支架(美国专利6,673,901；美国专利6,348,584)或合成fn3结构域诸如tencon，如美国专利公布号2010/0216708和美国专利公布号2010/0255056中所述。另外的替代支架包括adnectin
tm
、imab、eeti-ii/agrp、kunitz结构域、硫氧还蛋白肽适体、darpin、affilin、tetranectin、fynomer和avimer。替代支架是单链多肽框架，其包含与高构象耐受
性的可变结构域相关联的高度结构化的核，从而允许可变结构域内的插入、缺失或其他置换。可使用已知方案产生将多样性引入一个或多个可变结构域并且在一些情况下引入结构化核的文库，并且可筛选所得文库以与本公开的新抗原结合，并且可使用已知方法进一步表征所鉴定的结合物的特异性。替代支架可以来源于蛋白质a，具体地为其z结构域(亲和体)，imme7(免疫蛋白)、bpti/appi(kunitz结构域)、ras结合蛋白af-6(pdz结构域)、卡律蝎毒素(蝎毒素)、ctla-4、min-23(打结素)、脂质运载蛋白(anticalin)、新制癌菌素、纤连蛋白结构域、锚蛋白共有重复序列结构域或硫氧还蛋白(skerra,a.,“alternative non-antibody scaffolds for molecular recognition,”curr.opin.biotechnol.18:295-304(2005)；hosse等人，“a new generation of protein display scaffolds for molecular recognition,”protein sci.15:14-27(2006)；nicaise等人，“affinity transfer by cdr grafting on a nonimmunoglobulin scaffold,”protein sci.13:1882-1891(2004)；nygren和uhlen，“scaffolds for engineering novel binding sites in proteins,”curr.opin.struc.biol.7:463-469(1997)。
[1625]
嵌合抗原受体(car)
[1626]
可通过将特异性地结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗原结合结构域掺入car的胞外结构域来产生结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的car。car是遗传工程化受体。这些工程化受体可根据本领域已知的技术容易地插入包括t细胞在内的免疫细胞中并由其表达。对于car，单个受体可被编程为识别特异性抗原，并且当与该抗原结合时，激活免疫细胞以攻击和破坏携带该抗原的细胞。当这些抗原存在于肿瘤细胞上时，表达car的免疫细胞可靶向并杀伤肿瘤细胞。
[1627]
car通常包含结合抗原(例如，卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物)的胞外结构域、任选的接头、跨膜结构域以及包含共刺激结构域和/或信号传导结构域的胞质结构域。
[1628]
car的胞外结构域可含有特异性结合所需抗原(例如卵巢新抗原)的任何多肽。胞外结构域可包括scfv、抗体的一部分或另选的支架。也可将car工程化为结合两个或更多个所需抗原，所述抗原可串联排列并由接头序列隔开。例如，一种或多种结构域抗体、scfv、llama vhh抗体或其他仅vh抗体片段可经由接头串联地组织，以向car提供双特异性或多特异性。
[1629]
car的跨膜结构域可来源于以下项的跨膜结构域：cd8、t细胞受体的α、β或ζ链、cd28、cd3ε、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、kirds2、ox40、cd2、cd27、lfa-1(cdi la、cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、4-1bbl、gitr、cd40、baffr、hvem(lightr)、slamf7、nkp80(klrfi)、cd160、cd1 9、il2rβ、il2rγ、il7r a、itga1、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cdi id、itgae、cd103、itgal、cdi la、lfa-1、itgam、cdi lb、itgax、cdi lc、itgb1、cd29、itgb2、cd1 8、lfa-1、itgb7、tnfr2、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(触觉)、ceacam1、crt am、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、slamf6(ntb-a、lyl08)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、pag/cbp、nkp44、nkp30、nkp46、nkg2d和/或nkg2c。
[1630]
car的细胞内共刺激结构域可来源于一种或多种共刺激分子的胞内结构域。共刺激分子是熟知的除抗原受体或fc受体之外的细胞表面分子，其提供t淋巴细胞在与抗原结
合时的有效活化和功能所需的第二信号。可用于car的示例性共刺激结构域是4-1bb、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim、btla、gitr、cd226、hvem和zap70的胞内结构域。
[1631]
car的胞内信号传导结构域可来源于例如cd3ζ、cd3ε、cd22、cd79a、cd66d、cd39 dap10、dap12、fcε受体iγ链(fcer1g)、fcrβ、cd3δ、cd3γ、cd5、cd226或cd79b的信号传导结构域。“胞内信号传导结构域”是指car多肽参与将有效car与目标抗原结合的信息转导到免疫效应细胞内部以引发效应细胞功能的部分，所述效应细胞功能例如活化、细胞因子产生、增殖和细胞毒性活性，包括细胞毒性因子向car结合的目标细胞的释放，或者在抗原结合到胞外car结构域后引发的其他细胞反应。
[1632]
car的位于胞外结构域与跨膜结构域之间的任选接头可以是长度为约2至100个氨基酸的多肽。接头可包括柔性残基(诸如甘氨酸和丝氨酸)或由所述柔性残基构成，使得相邻的蛋白质结构域相对于彼此自由移动。当希望确保两个相邻结构域不会在空间上彼此干扰时，可使用较长的接头。接头可以是可裂解的或不可裂解的。可裂解接头的示例包括2a接头(例如t2a)、2a样接头或它们的功能等同物，以及它们的组合。接头还可来源于任何免疫球蛋白的铰链区或铰链区的部分。接头的非限制性示例包括人cd8α链的一部分、cd28的部分胞外结构域、fcyrllla受体、igg、igm、iga、igd、ige、ig铰链或其功能片段。
[1633]
可使用的示例性car是例如包含结合本公开的卵巢新抗原的胞外结构域、cd8跨膜结构域和cd3ζ信号传导结构域的car。其他示例性car包含结合本公开的卵巢新抗原的胞外结构域、cd8或cd28跨膜结构域、cd28、41bb或ox40共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。
[1634]
通过标准分子生物学技术产生car。结合所需抗原的胞外结构域可来源于使用本文所述的技术生成的抗体或其抗原结合片段。
[1635]
t细胞受体(tcr)
[1636]
可产生结合卵巢新抗原/hla复合物的tcr。可基于t细胞与卵巢新抗原/hla复合物的结合、分离t细胞并对在t细胞中表达的tcr进行测序来鉴定tcr。鉴定的tcr可以是从αβt细胞或γδt细胞中鉴定的。可将所鉴定的tcr进一步工程化以改善其亲和力、稳定性、溶解度等。可使用用于亲和成熟免疫球蛋白的相同技术对tcr进行亲和成熟。可将tcr表达为已被半胱氨酸稳定的可溶性tcr，它们可通过在α/β相互作用表面上的工程化突变(例如，α链上的g192r和β链上的r208g)来稳定。tcr也可通过以下方式稳定：将形成二硫键的半胱氨酸残基工程化到tcr恒定结构域中，将突变引入疏水核中(诸如α链的位置11、13、19、21、53、76、89、91或94处)，利用结构域交换(包括α链与β链v结构域、跨膜结构域或恒定结构域之间的交换，如us7329731、us7871817b2、us7569664、us9133264、us9624292、us20120252742a1、us2016/0130319、ep3215164a1、ep3286210a1、wo2017091905a1或us9884075中所述。
[1637]
表达本公开的car或tcr的细胞
[1638]
表达特异性结合本公开的卵巢新抗原或本公开的卵巢新抗原/hla复合物的car或tcr的细胞在本公开的范围内。本公开还提供了包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞。在一些实施方案中，用本公开的car或tcr转导分离的细胞，从而使得本公开的car或tcr在细胞表面上组成型表达。还可将表达本公开的car或tcr的细胞工程化为表达一种或多种共刺激分子。示例性共刺激分子是cd28、icos、light、gitr、4-1bb和ox40。还可将表达
本公开的car或tcr的细胞工程化为产生一种或多种细胞因子或趋化因子或促炎介质，诸如tnfα、ifnγ、il-2、il-3、il-6、il-7、il-11、il-12、il-15、il-17或il-21。可使用已知的基因编辑技术使细胞的内源性tcr基因座和/或hla基因座失活。在一些实施方案中，包含本公开的car或tcr的细胞是可由其分化淋巴样细胞的t细胞、自然杀伤(nk)细胞、细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、调节性t细胞(treg)、人胚胎干细胞、淋巴样祖细胞、t细胞前体细胞或多能干细胞或诱导多能干细胞(ipsc)。
[1639]
在一些实施方案中，包含本公开的car或tcr的分离的细胞是t细胞。t细胞可以是任何t细胞，诸如培养的t细胞(例如原代t细胞)或来自培养的t细胞系的t细胞(例如，jurkat、supt1等)或从哺乳动物获得的t细胞。如果从哺乳动物获得，则t细胞可从任何来源(包括骨髓、血液、淋巴结、胸腺或其他组织或流体)获得。也可富集或纯化t细胞。t细胞可以是人t细胞。t细胞可以是从人分离的t细胞。t细胞可以是任何类型的t细胞并且可以处于任何发育阶段，包括cd4
+
cd8
+
双阳性t细胞、cd8
+ t细胞(例如，细胞毒性t细胞)、cd4
+
辅助t细胞(例如，th1细胞和th2细胞)、外周血单核细胞(pbmc)、外周血白细胞(pbl)、肿瘤浸润细胞、记忆t细胞、初始t细胞，等等。t细胞可以是cd8
+ t细胞或cd4
+ t细胞。t细胞可以是αβt细胞或γδt细胞。
[1640]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是nk细胞。
[1641]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是αβt细胞。
[1642]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是γδt细胞。
[1643]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是ctl。
[1644]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是人胚胎干细胞。
[1645]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是淋巴样祖细胞。
[1646]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是多能干细胞。
[1647]
在一些实施方案中，包含本公开的car或本公开的tcr的分离的细胞是诱导多能干细胞(ipsc)。
[1648]
本公开的细胞可通过使用已知方法将包含所需car或tcr的慢病毒载体引入细胞中来产生。本公开的细胞能够在体内复制，从而产生可持续控制肿瘤的长期持久性。
[1649]
与细胞毒素剂、药物、可检测标签等的缀合物
[1650]
可将多肽、异源多肽以及结合它们的蛋白质类分子缀合至细胞毒素剂、剂、可检测标签等。这些分子在本文中称为免疫缀合物。包含卵巢新抗原的免疫缀合物可用于检测、递送有效载荷或杀死表达结合卵巢新抗原的hla分子的细胞。包含特异性结合卵巢新抗原或卵巢新抗原/hla复合物的抗体、抗原结合片段或另选支架的免疫缀合物可用于检测、递送有效载荷或在较大蛋白质的情况下或与hla复合时杀死在其表面上表达卵巢新抗原的细胞，或在细胞裂解后检测细胞内卵巢新抗原。
[1651]
在一些实施方案中，免疫缀合物包含可检测标签。
[1652]
在一些实施方案中，免疫缀合物包含细胞毒素剂。
[1653]
在一些实施方案中，免疫缀合物包含剂。
[1654]
可检测标签包括可经由光谱、光化学、生物化学、免疫化学或化学手段可视化的组合物。可检测标签还可包括细胞毒素剂，细胞毒素剂可包括可检测标签。
[1655]
示例性的可检测标签包括放射性同位素、磁珠、金属珠、胶体颗粒、荧光染料、电子高密度试剂、酶(例如，如elisa中常用的)、生物素、、半抗原、发光分子、化学发光分子、荧光染料、荧光团、荧光淬灭剂、有分子、放射性同位素、闪烁体、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、蛋白质a、蛋白质g、抗体或其片段、多组氨酸、ni
2+
、flag标签、myc标签、重金属、酶、碱性磷酸酶、过氧化物酶、荧光素酶、电子供体/受体、吖啶酯和比底物。
[1656]
可检测标签可自发地发出信号，例如当可检测标签为放射性同位素时。在其他情况下，可检测标签由于受到外场的刺激而发出信号。
[1657]
示例性放射性同位素可以是发出γ、发出auger、发出β、发出α或发出正电子的放射性同位素。示例性放射性同位素包括3h、
11
c、
13
c、
15
n、
18
f、
19
f、
55
co、
57
co、
60
co、
61
cu、
62
cu、
64
cu、
67
cu、
68
ga、
72
as、
75
br、
86
y、
89
zr、
90
sr、
94m
tc、
99m
tc、
115
in、
123
1、
124
1、
125
i、
131
1、
211
at、
212
bi、
213
bi、
223
ra、
226
ra、
225
ac和
227
ac。
[1658]
示例性金属原子为原子序数大于20的金属，诸如钙原子、钪原子、钛原子、钒原子、铬原子、锰原子、铁原子、钴原子、镍原子、铜原子、锌原子、镓原子、锗原子、砷原子、硒原子、溴原子、氪原子、铷原子、锶原子、钇原子、锆原子、铌原子、钼原子、锝原子、钌原子、铑原子、钯原子、银原子、镉原子、铟原子、锡原子、锑原子、碲原子、碘原子、氙原子、铯原子、钡原子、镧原子、铪原子、钽原子、钨原子、铼原子、锇原子、铱原子、铂原子、金原子、汞原子、铊原子、铅原子、铋原子、钫原子、镭原子、锕原子、铈原子、镨原子、钕原子、钷原子、钐原子、铕原子、钆原子、铽原子、镝原子、钬原子、铒原子、铥原子、镱原子、镥原子、钍原子、镤原子、铀原子、镎原子、钚原子、镅原子、锔原子、锫原子、锎原子、锿原子、镄原子、钔原子、锘原子或铹原子。
[1659]
在一些实施方案中，金属原子可以是原子序数大于二十的碱土金属。
[1660]
在一些实施方案中，金属原子可以是镧系元素。
[1661]
在一些实施方案中，金属原子可以是锕系元素。
[1662]
在一些实施方案中，金属原子可以是过渡金属。
[1663]
在一些实施方案中，金属原子可以是贫金属。
[1664]
在一些实施方案中，金属原子可以是金原子、铋原子、钽原子和钆原子。
[1665]
在一些实施方案中，金属原子可以是原子序数为53(即碘)至83(即铋)的金属。
[1666]
在一些实施方案中，金属原子可以是适用于磁共振成像的原子。
[1667]
金属原子可为+1、+2或+3氧化态形式的金属离子，诸如ba
2+
、bi
3+
、cs
+
、ca
2+
、cr
2+
、cr
3+
、cr
6+
、co
2+
、co
3+
、cu
+
、cu
2+
、cu
3+
、ga
3+
、gd
3+
、au
+
、au
3+
、fe
2+
、fe
3+
、f
3+
、pb
2+
、mn
2+
、mn
3+
、mn
4+
、mn
7+
、hg
2+
、ni
2+
、ni
3+
、ag
+
、sr
2+
、sn
2+
、sn
4+
和zn
2+
。金属原子可包括金属氧化物，诸如氧化铁、氧化锰或氧化钆。
[1668]
合适的染料包括任何可商购染料，诸如例如5(6)-羧基荧光素、irdye680rd马来酰亚胺或irdye 800cw、钌多吡啶染料等。
[1669]
合适的荧光团是异硫氰酸荧光素(fitc)、氨基硫脲荧光素、罗丹明、德克萨斯红、cydyes(例如cy3、cy5、cy5.5)、alexa fluors(例如alexa488、alexa555、alexa594；alexa647)、近红外(nir)(700-900nm)荧光染料、以及碳菁和氨基苯乙烯基染料。
[1670]
包含可检测标签的免疫缀合物可用作成像剂。
[1671]
在一些实施方案中，细胞毒素剂是化疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性缀合物)。
[1672]
在一些实施方案中，细胞毒素剂是道诺霉素、阿霉素、甲氨蝶呤、长春地辛、细菌毒素(诸如，白喉毒素)、蓖麻毒素、格尔德霉素、美登木素生物碱或卡里奇霉素。细胞毒素剂可通过包括微管蛋白结合、dna结合或拓扑异构酶抑制在内的机制引发其细胞毒性和细胞抑制效应。
[1673]
在一些实施方案中，细胞毒素剂是酶促活性毒素，诸如白喉a链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素a链(来自铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素a链、相思豆毒素a链、蒴莲根毒素a链、α-八叠球菌素、油桐(aleurites fordii)蛋白质、石竹素蛋白质、美洲商陆(phytolaca americana)蛋白质(papi、papii和pap-s)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒素、巴豆毒素、肥阜草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲霉素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯族化合物。
[1674]
在一些实施方案中，细胞毒素剂是放射性核素，诸如
212
bi、
131
i、
131
in、
90
y和
186
re。
[1675]
在一些实施方案中，细胞毒素剂是多拉司他汀或多拉司他汀肽类似物和衍生物、奥瑞司他汀或单甲基奥瑞司他汀苯丙氨酸。示例性分子在美国专利号5,635,483和5,780,588中公开。多拉司他汀和奥瑞司他汀已被证实可干扰微管动力学、gtp水解以及细胞核和细胞分裂(woyke等人，(2001)antimicrob agents and chemother.45(12):3580-3584)，并且具有抗癌和抗真菌活性。多拉司他汀或奥瑞司他汀药物部分可通过肽药物部分的n(氨基)末端或c(羧基)末端(wo02/088172)或经由工程化到抗体中的任何半胱氨酸附接到本发明的抗体。
[1676]
免疫缀合物可使用已知的方法制备。
[1677]
在一些实施方案中，可检测标签与螯合剂复合。
[1678]
可检测标签、细胞毒素剂或剂可直接或经由接头间接连接到多肽、异源多肽或者结合多肽或异源多肽的蛋白质类分子。合适的接头是本领域已知的，包括例如辅基、非酚类接头(n-琥珀酰亚胺基-苯甲酸酯的衍生物；十二硼酸酯)、大环螯合剂和无环螯合剂两者的螯合部分，诸如1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)的衍生物、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)的衍生物、s-2-(4-异硫氰酸基苄基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(nota)的衍生物和1,4,8,11-四氮杂环十二烷-1,4,8,11-四乙酸(teta)的衍生物、n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(spdp)、亚氨基噻吩(it)、亚胺酸酯的双官能衍生物(诸如己二亚胺酸二甲酯hcl)、活性酯(诸如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)以及其他螯合部分。合适的肽接头是公知的。
[1679]
本文的任何组合物的方法、用途和施用
[1680]
本文提供了用本文所公开的组合物受试者的方法。本文所提供的方法包括施用包含本公开的多核苷酸、多肽、载体和重组病毒中的任一种的组合物。本公开的包含多核苷酸、多肽、载体、重组病毒的组合物和施用方案可以用于、预防临床病症，或者降低临床病症的风险。
[1681]
在一些实施方案中，临床病症为卵巢癌。
[1682]“卵巢癌”旨在包括卵巢或致癌过程、转移组织或恶性转化的细胞、组织或器官内的所有类型的癌性生长，而不管组织病理学类型或侵袭阶段。
[1683]
在一些实施方案中，卵巢癌是腺癌。
[1684]
在一些实施方案中，卵巢癌是转移性卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌已经转移到骨盆、输卵管、膀胱、直肠、子宫、腹部衬层、腹部、淋巴结、肝、肺、脾、皮肤、脑或骨，或它们的任何组合。
[1685]
在一些实施方案中，卵巢癌是上皮卵巢癌、生殖细胞卵巢癌、基质细胞卵巢癌或小细胞癌或它们的组合。
[1686]
在一些实施方案中，卵巢癌是1期卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌是2期卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌是3期卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌是4期卵巢癌。
[1687]
在一些实施方案中，卵巢癌是上皮卵巢癌。
[1688]
在一些实施方案中，卵巢癌是复发性或难治性卵巢癌。
[1689]
在一些实施方案中，卵巢癌是铂类耐药卵巢癌。
[1690]
在一些实施方案中，卵巢癌对化学疗法敏感。
[1691]
在一些实施方案中，卵巢癌对化学疗法不敏感。
[1692]
在一些实施方案中，受试者是未接受过的。
[1693]
在一些实施方案中，受试者已经接受手术。
[1694]
在一些实施方案中，受试者具有升高水平的癌抗原125(ca 125)。当水平通常约≥35u/ml时，受试者的ca 125是升高的。也可以将ca 125水平与手术后的水平进行比较。
[1695]
本文提供了用于、预防或降低受试者卵巢癌症风险的方法，所述方法包括施用可用于将本公开的卵巢癌新抗原引入受试者中的本公开的各种组合物，例如本公开的多核苷酸、异源多核苷酸、多肽、异源多肽、载体、重组病毒和疫苗。另外，可以在本公开的方法中使用结合本公开的卵巢癌新抗原的蛋白质类分子。
[1696]
本公开还提供了用于在受试者中诱导免疫应答的方法，所述方法包括施用可用于将本公开的卵巢癌新抗原引入受试者中的本公开的各种组合物，例如本公开的多核苷酸、异源多核苷酸、多肽、异源多肽、载体、重组病毒和疫苗。
[1697]
在一些实施方案中，本文鉴定的卵巢癌新抗原以至少约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、约10％或更高、约11％或更高、约12％或更高、约13％或更高、约14％或更高、约15％或更高、约16％或更高、约17％或更高、约18％或更高、约19％或更高、约20％或更高、约21％或更高、约22％或更高、约23％或更高、约24％或更高、约25％或更高、约26％或更高、约27％或更高、约28％或更高、约29％或更高、约30％或更高、约35％或更高、约40％或更高、约45％或更高、约50％或更高、约55％或更高、约60％或更高、约65％或更高或者约70％或更高的频率存在于患有卵巢癌的受试者体中。
[1698]
在一些实施方案中，、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括向有需要的受试者施用本文所公开的任何组合物，并且其中所述施用包括所述组合物的一次或多次施用。在一些实施方案中，卵巢癌选自上皮卵巢癌、生殖细胞卵巢癌、基质细胞卵巢癌、小细胞卵巢癌、复发性或难治性卵巢癌、铂类耐药卵巢癌、1
期卵巢癌、2期卵巢癌、3期卵巢癌和4期卵巢癌。
[1699]
在一些实施方案中，诱导免疫应答的方法包括向有需要的受试者施用本文所公开的任何组合物，并且其中所述施用包括所述组合物的一次或多次施用。
[1700]
在本文所公开的任何方法中，施用于受试者的组合物可以包含选自腺病毒、甲病毒、痘病毒、腺相关病毒、逆转录病毒的重组病毒，或者可以包含自复制rna分子，或它们的组合。
[1701]
在一些实施方案中，重组病毒包含本公开的卵巢癌新抗原，例如本公开的多核苷酸、异源多核苷酸、多肽、异源多肽和载体。
[1702]
在一些实施方案中，病毒或重组病毒选自ad26、mva、gad20及它们的组合。
[1703]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的rad26。
[1704]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的rmva。
[1705]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的rgad。
[1706]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的rgad20。
[1707]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的rch20。
[1708]
在一些实施方案中，组合物包含本公开的自复制rna。
[1709]
第二次施用
[1710]
在一些实施方案中，本文所公开的方法包括本公开中所提供的组合物的一次或多次施用。例如，该方法包括第一次施用、随后的第二次施用，以及这两次施用之间的时间段。
[1711]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包含相同或不同的组合物。例如，第一次施用可以包括包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码本公开的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子，或它们的组合的组合物。在一些实施方案中，第二次施用可以包括包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码本公开的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子，或它们的组合的组合物。
[1712]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用在受试者的生命期中施用一次。在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用在受试者的生命期中施用两次或更多次。
[1713]
在一些实施方案中，第一次施用与第二次施用之间的时间段为约1周至约2周、约1周至约4周、约1周至约6周、约1周至约8周、约1周至约12周、约1周至约20周、约1周至约24周，或约1周至约52周。
[1714]
在一些实施方案中，第一次施用与第二次施用之间的时间段为约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周、约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周、约25周、约26周、约27周、约28周、约29周、约30周、约31周、约32周、约33周、约34周、约35周、约36周、约37周、约38周、约39周、约40周、约41周、约42周、约43周、约44周、约45周、约46周、约47周、约48周、约49周、约50周、约51周，或约52周。
[1715]
在一些实施方案中，第一次施用与第二次施用之间的时间段为约2周。
[1716]
在一些实施方案中，第一次施用与第二次施用之间的时间段为约4周。
[1717]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用构成周期，并且方案可以包括两个或更多个周期，每个周期间隔约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月或约12个月。
[1718]
提供以下实施例以进一步描述本文所公开的实施方案中的一些。这些实施例旨在说明而非限制本发明所公开的实施方案。在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包括在表1中提供的重组病毒或自复制rna分子的任何组合，所述组合包含编码本公开的一种或多种多肽或其任何组合的多核苷酸。
[1719]
表1.第一次施用和第二次施用中的重组病毒和自复制rna分子组成
[1720]
第一次施用第二次施用ad26mvaad26gad20ad26自复制rna分子ad26ad26mvaad26mvagad20mva自复制rna分子mvamvagad20ad26gad20mvagad20自复制rna分子gad20gad20自复制rna分子ad26自复制rna分子mva自复制rna分子gad20自复制rna分子自复制rna分子
[1721]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包括编码本公开的任何多肽或其组合的多核苷酸。在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包括编码选自由以下项组成的组的任何多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包括编码本公开的任何多肽的两个或更多个串联重复序列的多核苷酸。
[1722]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用可以包括不同的重组病毒。
[1723]
在一些实施方案中，第一次施用和第二次施用包括重组病毒，所述重组病毒包含编码不同氨基酸序列的多肽的多核苷酸。
[1724]
在一些实施方案中，诱导免疫应答的方法，或者在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括周期，其中每个周期包括：
[1725]
包括第一组合物的第一次施用，该第一组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子或它们的组合，其中所述病毒或重组病毒选自ad26、mva、gad20；以及
[1726]
包括第二组合物的第二次施用，该第二组合物包含重组病毒或包含编码本公开的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子或它们的组合，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20。
[1727]
第三次施用
[1728]
在一些实施方案中，本文所公开的任何方法可以还包括第三次施用。例如，该方法可以包括第一次施用、第二次施用、随后的第三次施用，以及每次施用之间的时间段。
[1729]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用和第三次施用可以包含相同或不同的组合物。例如，第一次施用可以包括包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码组合物的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子或它们的组合的组合物。在一些实施方案中，第二次施用可以包括选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码组合物的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子或它们的组合。在一些实施方案中，第三次施用可以包括包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码组合物的任何多肽的多核苷酸的自复制rna分子或它们的组合的组合物。
[1730]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用和第三次施用可以包括一种组合物，该组合物包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或包含编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。
[1731]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用或第三次施用包括编码本公开的任何多肽的两个或更多个串联重复序列的多核苷酸。
[1732]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用或第三次施用可以包括不同的重组病毒。
[1733]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用或第三次施用可以包括重组病毒，所述重组病毒包含编码不同氨基酸序列的多肽的多核苷酸。
[1734]
例如，第一次施用可以包括编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。在一些实施方案中，第二次施用可以包括编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。在
一些实施方案中，第三次施用可以包括编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。
[1735]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用和第三次施用在受试者的生命期中施用一次。在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用和第三次施用在受试者的生命期中施用两次或更多次。
[1736]
在一些实施方案中，第二次施用与第三次施用之间的时间段为约1周至约2周、约1周至约4周、约1周至约6周、约1周至约8周、约1周至约12周、约1周至约20周、约1周至约24周，或约1周至约52周。
[1737]
在一些实施方案中，第二次施用与第三次施用之间的时间段为约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周、约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周、约25周、约26周、约27周、约28周、约29周、约30周、约31周、约32周、约33周、约34周、约35周、约36周、约37周、约38周、约39周、约40周、约41周、约42周、约43周、约44周、约45周、约46周、约47周、约48周、约49周、约50周、约51周，或约52周。
[1738]
在一些实施方案中，第二次施用与第三次施用之间的时间段为约6周。
[1739]
在一些实施方案中，第二次施用与第三次施用之间的时间段为约8周。
[1740]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用和第三次施用一起构成周期，并且方案可以包括两个或更多个周期，每个周期间隔约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月或约12个月。
[1741]
提供以下实施例以进一步描述本文所公开的实施方案中的一些。本文所公开的方法中使用的第一次施用、第二次施用和第三次施用可以表2中所提供的表位和组合物的任何组合。
[1742]
表2.第一次施用、第二次施用和第三次施用中的重组病毒和自复制rna分子组成
[1743]
[1744][1745]
在一些实施方案中，诱导免疫应答的方法，或者在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括周期，其中每个周期包括：
[1746]
包括第一组合物的第一次施用，该第一组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20；以及
[1747]
包括第二组合物的第二次施用，该第二组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20；以及
[1748]
包括第三组合物的第三次施用，该第三组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20。
[1749]
第四次施用
[1750]
在一些实施方案中，本文所公开的任何方法可以还包括第四次施用。例如，该方法可以包括第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用，以及每次施用之间的时间段。在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用可以包含相同或不同的组合物。
[1751]
例如，第四次施用可以包括包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或编码本公开的一种或多种多肽的自复制rna分子的组合物。
[1752]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用可以包括一种组合物，该组合物包含选自ad26、gad20或mva的重组病毒或编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371和375，及它们的组合。
[1753]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用或第四次施用包括编码本公开的任何多肽的两个或更多个串联重复序列的多核苷酸。
[1754]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用或第四次施用可以包括不同的重组病毒。
[1755]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用或第四次施用可以包括重组病毒，所述重组病毒包含编码不同氨基酸序列的多肽的多核苷酸。
[1756]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用在受试者的生命期中施用一次。在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用在受试者的生命期中施用两次或更多次。
[1757]
在一些实施方案中，第三次施用与第四次施用之间的时间段为约1周至约2周、约1周至约4周、约1周至约6周、约1周至约8周、约1周至约12周、约1周至约20周、约1周至约24周，或约1周至约52周。
[1758]
在一些实施方案中，第三次施用与第四次施用之间的时间段为约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周、约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周、约25周、约26周、约27周、约28周、约29周、约30周、约31周、约32周、约33周、约34周、约35周、约36周、约37周、约38周、约39周、约40周、约41周、约42周、约43周、约44周、约45周、约46周、约47周、约48周、约49周、约50周、约51周，或约52周。
[1759]
在一些实施方案中，第三次施用与第四次施用之间的时间段为约4周。
[1760]
在一些实施方案中，第三次施用与第四次施用之间的时间段为约8周。
[1761]
在一些实施方案中，第一次施用、第二次施用、第三次施用和第四次施用一起构成周期，并且方案可以包括两个或更多个周期，每个周期间隔约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月或约12个月。
[1762]
在一些实施方案中，诱导免疫应答的方法，或者在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括周期，其中每个周期包括：
[1763]
包括第一组合物的第一次施用，该第一组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20；以及
[1764]
包括第二组合物的第二次施用，该第二组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20；以及
[1765]
包括第三组合物的第三次施用，该第三组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20或自复制rna分子。以及
[1766]
包括第四组合物的第四次施用，该第四组合物包含重组病毒或包含编码本公开的一种或多种多肽的多核苷酸的自复制rna分子，其中所述重组病毒选自ad26、mva、gad20。
[1767]
维持施用
[1768]
在一些实施方案中，该方法还包括在周期期间以规则的间隔向受试者施用组合物，并且甚至在周期已结束后也可以继续施用。例如，该组合物可以在方案期间每月施用于受试者，并且可以再继续施用6个月。在一些实施方案中，该组合物可以在两个周期之间施用。在一些实施方案中，该组合物可以是本文所公开的任何组合物，诸如包含选自ad26载体、gad20载体、mva载体或编码表位序列的自复制rna分子的载体的组合物。
[1769]
施用的剂量和途径
[1770]
本公开的组合物可以通过多种途径(诸如皮下、局部、口服和肌内)施用于受试者。组合物的施用可口服或非肠道实现。肠胃外递送的方法包括局部、动脉内(直接至组织)、肌内、皮内、皮下、髓内、鞘内、心室内、静脉内、腹膜内或鼻内施用。本公开还具有提供在预防方法和方法中使用的合适的局部、口服、全身和肠胃外制剂的目的。
[1771]
在一些实施方案中，该疫苗组合物的肌内施用可以通过使用针来实现。一种替代方法是使用无针注射装置来施用组合物(使用例如biojector(tm))或含有疫苗的冻干粉末。
[1772]
对于静脉内、皮肤或皮下注射，或者在患病部位注射，该疫苗组合物可以是不含热原且具有合适的ph、等渗性和稳定性的肠胃外可接受的水性溶液剂的形式。本领域的技术人员完全能够使用例如等渗媒介物诸如氯化钠注射液、林格氏注射液、乳酸林格氏注射液来制备合适的溶液。根据需要，可包含防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其他添加剂。也可使用缓释配制品。
[1773]
通常，施用将具有预防目的以在卵巢癌症状发展之前对卵巢新抗原产生免疫应答。
[1774]
将本公开的组合物施用于受试者，从而在受试者中产生免疫应答。将该疫苗或组合物的能够诱导可检测的免疫应答的量定义为“免疫有效剂量”。本公开的组合物可以诱导体液免疫应答以及细胞介导的免疫应答。在一个典型的实施方案中，免疫应答是保护性免疫应答。
[1775]
在一些实施方案中，在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延
迟卵巢癌发病的方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的一种或多种疫苗。
[1776]
在一些实施方案中，在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括向所述受试者施用有效的量的本公开的一种或多种组合物。
[1777]
在一些实施方案中，在受试者中产生免疫应答的方法包括向受试者施用免疫有效量的本公开的一种或多种组合物。
[1778]
在一些实施方案中，在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法包括向所述受试者施用有效量的疫苗或组合物，该疫苗或组合物包含编码以下的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，从而在受试者中、预防卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病，其中所述施用包括组合物的一次或多次施用。
[1779]
在本文所公开的任何方法中，施用于受试者的组合物可以包含选自腺病毒、甲病毒、痘病毒、腺相关病毒、逆转录病毒的重组病毒，或者可以包含自复制rna分子，或它们的组合。
[1780]
在一些实施方案中，受试者被怀疑患有或被怀疑会发展成卵巢癌。
[1781]
实际施用量，以及施用速率和时间过程将取决于被疾病的性质和严重性。处方(例如，剂量决策等)由全科医生和其他医师负责，并且通常要考虑待的障碍、个体患者的状况、递送部位、施用方法和医生已知的其他因素。
[1782]
在一些实施方案中，包含重组腺病毒的组合物以每剂约1
×
104ifu(感染单位)至约1
×
10
12
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
10
11
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
10
10
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
109ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
108ifu，或每剂约1
×
104ifu至约1
×
106ifu的剂量施用。
[1783]
在一些实施方案中，包含重组腺病毒的组合物以每剂约1
×
106vp(病毒颗粒)至约1
×
10
14
vp、每剂约1
×
106vp至约1
×
10
12
vp、每剂约1
×
106vp至约1
×
10
10
vp、每剂约1
×
106vp至约1
×
108vp，或每剂约1
×
106vp至约1
×
107vp的剂量施用。
[1784]
在一些实施方案中，包含重组ad26病毒的组合物以每剂约1
×
10
10
ifu施用。在一些实施方案中，包含重组ad26病毒的组合物以每剂约1
×
10
11
ifu施用。在一些实施方案中，包含重组ad26病毒的组合物以每剂约1
×
10
10
vp施用。在一些实施方案中，包含重组ad26病毒的组合物以每剂约1
×
10
11
vp施用。
[1785]
在一些实施方案中，包含重组gad20病毒的组合物以每剂约1
×
108ifu施用。在一些实施方案中，包含重组gad20病毒的组合物以每剂约1
×
10
10
ifu施用。在一些实施方案中，包含重组gad20病毒的组合物以每剂约1
×
10
10
vp施用。在一些实施方案中，包含重组gad20病毒的组合物以每剂约1
×
10
11
vp施用。
[1786]
在一些实施方案中，包含重组痘病毒的组合物以每剂约1
×
104ifu(感染单位)至约1
×
10
12
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
10
11
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
10
10
ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
109ifu、每剂约1
×
104ifu至约1
×
108ifu，或每剂约1
×
104ifu至约1
×
106ifu的剂量施用。
[1787]
在一些实施方案中，包含重组mva病毒的组合物以每剂约1
×
108ifu施用。在一些实施方案中，包含重组mva病毒的组合物以每剂约1
×
10
10
ifu施用。
[1788]
在一些实施方案中，包含自复制rna分子的组合物以约1微克至约100微克、约1微克至约90微克、约1微克至约80微克、约1微克至约70微克、约1微克至约60微克、约1微克至约50微克、约1微克至约40微克、约1微克至约30微克、约1微克至约20微克、约1微克至约10微克或者约1微克至约5微克自复制rna分子的剂量施用。
[1789]
在一个示例性方案中，包含腺病毒的组合物以包含约104至10
12
个病毒颗粒/ml的浓度的介于约100μl至约10ml之间范围内的体积施用(例如，肌内)。腺病毒载体可以0.25ml至1.0ml范围内的体积(诸如以0.5ml的体积)施用。
[1790]
腺病毒可在一次施用期间以约109至约10
12
个病毒颗粒(vp)的量、更通常以约10
10
至约10
12
个vp的量施用给人类受试者。
[1791]
在一个示例性方案中，将包含本公开的rmva病毒的组合物以介于约100μl至约10ml盐水溶液之间范围内的体积(例如，肌内)施用，该盐水溶液含有约1
×
107tcid
50
至1
×
109tcid
50
(50％组织培养感染剂量)或inf.u.(感染单位)的剂量。rmva病毒可以0.25ml至1.0ml范围内的体积施用。组合物可在第一次施用第一组合物后数周或数月(例如，在施用第一组合物后约1周或2周或3周或4周或6周或8周或12周或16周或20周或24周或28周或32周或一年至两年)施用两次或更多次。组合物的附加施用可在初始步骤(b)后6周至5年(诸如在初始加强接种后6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25周，或7、8、9、10、11或12个月，或2、3、4或5年)施用。任选地，另外的施用步骤(c)可根据需要重复一次或多次。
[1792]
联合疗法
[1793]
本公开的疫苗和组合物可与至少一种另外的癌症剂联合用于卵巢癌。
[1794]
另外的癌症剂可以是手术、放射疗法、化学疗法、激素疗法、靶向疗法、检查点抑制剂、抗生素、免疫刺激剂或细胞疗法，或它们的任何组合。
[1795]
手术可以包括经腹全子宫切除术、双侧输卵管-卵巢切除术、网膜切除术、所有腹膜表面的可视化和随机腹膜活检加腹膜清洗，或它们的组合。
[1796]
示例性的化学剂包括但不限于铂类药剂(例如，卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin))、烷化剂；亚；抗代谢物；抗肿瘤抗生素；植物生物碱；紫杉烷(例如，紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel))；激素剂、白消安、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、达拉巴嗪(dacarbazine)、异环磷酰胺、盐酸氮芥、美法仑(melphalan)、丙卡巴肼(procarbazine)、噻替哌(thiotepa)、乌拉莫司汀(uracil mustard)、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、放线菌素d(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、阿霉素(doxorubicin)、伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素c(mitomycin-c)和米托蒽醌(mitoxantrone)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)、白蛋白结合型紫杉醇(nab-紫杉醇，)、
六甲蜜胺(altretamine)依托泊苷(etoposide)(vp-16)、伊立替康(cpt-11，)、阿霉素脂质体培美曲塞(pemetrexed)和拓扑替康(topotecan)，或它们的组合。示例性的激素疗法包括促黄体素释放激素(lhrh)激动剂、他莫昔芬(tamoxifen)和芳香酶抑制剂(来曲唑(letrozole))、(阿那曲唑(anastrozole))和(依西美坦(exemestane))。
[1797]
在一些实施方案中，化学剂包括铂类药剂和紫杉烷。
[1798]
在一些实施方案中，化学剂包括卡铂和紫杉醇。
[1799]
在一些实施方案中，化学剂包括顺铂和紫杉醇。
[1800]
在一些实施方案中，化学疗法包括静脉内(iv)化学疗法和/或腹膜内(ip)化学疗法。
[1801]
在一些实施方案中，化学疗法包括剂量密集型化学疗法。作为非限制性示例，化学疗法可以包括每3周与iv卡铂组合的每周iv剂量密集型紫杉醇(例如，80mg/m2)。
[1802]
可使用各种方法进行放射疗法，包括外束疗法、内部放射疗法、植入物放射、立体定向放射外科手术、全身放射疗法、放射疗法以及永久性或暂时性间质短距离放射疗法。外束疗法涉及三维适形放射疗法(其中设计有辐射场)、局部放射(例如，指向预选目标或器官的放射)或聚焦放射。聚焦放射可选自立体定向放射外科手术、分段立体定向放射外科手术或调强放射疗法。聚焦放射可具有粒子束(质子)、钴-60(光子)线性加速剂(x射线)作为放射源(参见例如wo 2012/177624)。“短距离放射疗法”是指通过将空间受限的放射性材料插入体内肿瘤或其他增殖性组织疾病部位或其附近的放射，包括暴露于放射性同位素(例如，at-211、i-131、i-125、y-90、re-186、re-188、sm-153、bi-212、p-32和lu的放射性同位素)。用作细胞调节剂的合适辐射源包括固体和液体两者。辐射源可以是放射性核素，诸如作为固体源的i-125、i-131、yb-169、ir-192，作为固体源的i-125，或者发射光子、β粒子、γ辐射或其他射线的其他放射性核素。放射性材料也可以是由放射性核素的任何溶液制成的流体，例如i-125或i-131的溶液，或者放射性流体可使用包含固体放射性核素(诸如au-198、y-90)的小颗粒的合适流体的浆液来产生。放射性核素可体现在凝胶或放射性微球中。可以将放射性流体引入腹膜。
[1803]
靶向疗法包括但不限于单克隆抗体疗法，诸如贝伐单抗(bevacizumab)派姆单抗(pembrolizumab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)；酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、帕唑帕尼(pazopanib)、西地尼布(cediranib)、卡博替尼(cabozantinib)、埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)和尼达尼布(nintedanib)(bibf1120)；聚(adp-核糖)聚合酶(parp)抑制剂，诸如奥拉帕尼(olaparib)(lynparza)、卢卡帕尼(rucaparib)(rubraca)和尼拉帕尼(niraparib)(zejula)；以及其他血管生成抑制剂，诸如阿柏西普(aflibercept)和曲班那尼(trebananib)(amg 386)。
[1804]
另外的癌症剂还可以包括基因疗法，诸如brca1靶向微rna。
[1805]
示例性检查点抑制剂是pd-1、pd-l1、pd-l2、vista、btnl2、b7-h3、b7-h4、hvem、hhla2、ctla-4、lag-3、tim-3、btla、cd160、ceacam-1、lair1、tgfβ、il-10、siglec家族蛋白质、kir、cd96、tigit、nkg2a、cd112、cd47、sirpa或cd244的拮抗剂。“拮抗剂”是指当与细胞
蛋白质结合时抑制由蛋白质的天然配体诱导的至少一种反应或活性的分子。当至少一种反应或活性被抑制的程度比不存在拮抗剂(例如，阴性对照)时抑制的至少一种反应或活性多至少约30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％时，或当与不存在拮抗剂时的抑制相比抑制在统计学上是显著的时，所述分子是拮抗剂。拮抗剂可以是抗体、可溶性配体、小分子、dna或rna(诸如sirna)。检查点抑制剂的示例性拮抗剂描述于美国专利公布号2017/0121409。
[1806]
在一些实施方案中，将本公开的一种或多种疫苗或组合物与ctla-4抗体、ctla4配体、pd-1轴抑制剂、pd-l1轴抑制剂、tlr激动剂、cd40激动剂、ox40激动剂、羟基脲、鲁索替尼、菲卓替尼、41bb激动剂、cd28激动剂、sting激动剂、rig-i激动剂、tcr-t疗法、car-t疗法、flt3配体、硫酸铝、btk抑制剂、cd38抗体、cdk抑制剂、cd33抗体、cd37抗体、cd25抗体、gm-csf抑制剂、il-2、il-15、il-7、cd3重定向分子、泊马米布(pomalimib)、ifnγ、ifnα、tnfα、vegf抗体、cd70抗体、cd27抗体、bcma抗体或gprc5d抗体、它们的任何组合联合施用。
[1807]
在一些实施方案中，检查点抑制剂是伊匹单抗(ipilimumab)、西利单抗(cetrelimab)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、信迪利单抗(sintilimab)、西米普利单抗(cemiplimab)、特瑞普利单抗(toripalimab)、卡瑞利珠单抗(toripalimab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)、多塔利单抗(dostralimab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、普鲁戈利单抗(prolgolimab)、ak-105、hlx-10、巴替利单抗(balstilimab)、medi-0680、hx-008、gls-010、bi-754091、杰诺单抗(genolimzumab)、ak-104、mga-012、f-520、609a、ly-3434172、amg-404、sl-279252、sct-i10a、ro-7121661、ictcar-014、medi-5752、cs-1003、xmab-23104、sym-021、lzm-009、hab21、bat-1306、mgd-019、jtx-4014、布加达利单抗(budigalimab)、xmab-20717、ak-103、mgd-013、ibi-318、萨善利单抗(sasanlimab)、cc-90006、阿维单抗(avelumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)、cs-1001、bintrafuspα、恩沃利单抗(envafolimab)、cx-072、gen-1046、gs-4224、kl-a167、bgb-a333、shr-1316、cbt-502、il-103、kn-046、zkab-001、ca-170、tg_1501、lp-002、incb-86550、adg-104、shr-1701、bcd-135、imc-001、msb-2311、fpt-155、faz-053、hlx-20、碘帕利单抗(iodapolimab)、fs-118、bms-986189、ak-106、mcla-145、ibi-318或ck-301，或它们的任何组合。
[1808]
在一些实施方案中，将本公开的一种或多种疫苗或组合物与伊匹单抗、西利单抗、派姆单抗、纳武单抗、信迪利单抗、西米普利单抗、特瑞普利单抗、卡瑞利珠单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、普鲁戈利单抗、巴替利单抗、布加达利单抗、萨善利单抗、阿维单抗、阿替利珠单抗、度伐鲁单抗、恩沃利单抗或碘帕利单抗或它们的任何组合联合施用。
[1809]
在一些实施方案中，第二剂可以与第一次施用的第一组合物或第二次施用的第二组合物或第三次施用的第三组合物或第四次施用的第四组合物联合施用。
[1810]
在一些实施方案中，抗ctla-4抗体与本公开组合物的第一次施用或第二次施用或第三次施用或第四次施用中的任一者组合。
[1811]
在一些实施方案中，抗pd-1或抗pd-l1抗体与本公开组合物的第一次施用或第二次施用或第三次施用或第四次施用中的任一者组合。
[1812]
在一些实施方案中，检查点抑制剂以约0.5mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约10mg/
kg、约10mg/kg至约15mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约50mg/kg、约25mg/kg至约50mg/kg、约50mg/kg至约75mg/kg、约50mg/kg至约100mg/kg、约75mg/kg至约100mg/kg、约100mg/kg至约125mg/kg、约125mg/kg至约150mg/kg、约150mg/kg至约175mg/kg、约175mg/kg至约200mg/kg、约200mg/kg至约225mg/kg、约225mg/kg至约250mg/kg，或约250mg/kg至约300mg/kg的剂量施用。
[1813]
实施例
[1814]
提供以下实施例以进一步描述本文所公开的实施方案中的一些。这些实施例旨在说明而非限制本发明所公开的实施方案。
[1815]
实施例1：通过生物信息学鉴定新抗原
[1816]
开发了计算框架以通过生物信息学手段分析各种癌症rna-seq数据集，从而鉴定由基因融合事件产生的常见癌新抗原，所述基因融合事件导致新颖肽序列的产生、内含子保留、可变剪接变体、发育沉默基因的异常表达或点突变。
[1817]
查询的数据集为：
[1818]
·
基因型-组织表达(gtex)研究联盟(the genotype-tissue expression consortium)。该数据集涵盖来自49个正常组织的6137个rna-seq数据集，并且用于注释正常组织中的rna特征并评估正常组织中可能的卵巢癌新抗原候选物的频率。
[1819]
·
免疫细胞类型特异性rna-seq数据集。该内部研究由从来源于五个健康供体的20个免疫细胞类型(t细胞、b细胞、nk细胞和骨髓细胞类型)获得的110个rna-seq数据集组成。
[1820]
·
tcga卵巢癌。该研究由从患有局部卵巢癌的未接受过的患者获得的330个rna-seq数据集组成。
[1821]
·
内部卵巢癌研究。该研究由从患有局部卵巢癌的患者获得的43个rna-seq数据集组成。
[1822]
在分析之前进行原始数据的质量控制(qc)。首先修剪测序读数以去除illumina的接头序列，并从下游分析中去除映射到人类trna和rrna的读数。还对低质量碱基调用的读数(《10phred质量评分；指示不正确概率为1/10的碱基)进行了修剪。从数据集中去除小于25个碱基对(bp)的修剪读数。另外，遵循qc步骤被认为可以去除质量较差的读数：去除最高碱基质量评分小于15的读数；去除平均碱基质量评分小于10的读数；去除polyatcg比率》80％的读数；去除两个读数中的一个读数失效的rna序列。
[1823]
稍后使用arraystudio(https_//www_omicsoft_com/array-studio/)平台将读数映射到人类基因组构建(human genome build)38。使用ncbi的refseq基因模型(发布日期2017年6月6日)将读数映射到人类基因组的已知外显子区域。
[1824]
基因融合事件的鉴定
[1825]
使用fusionmap算法鉴定上述癌症数据集中的基因融合事件。参见ge h等人，bioinformatics.2011；27(14):1922-8.，其全文以引用的方式并入本文用于所有目的。fusionmap基于读数检测融合接点，所述读数包含测序读数中间区域的融合位置。在这之后从种子读数的共识中搜索可能的融合接点位置。fusionmap基于伪融合库构建参考指数并且将未映射的潜在融合读数与该伪参考进行比对。在此步骤期间映射的读数被认为是拯救读数。
[1826]
这种算法鉴定了嵌合通读融合，如图1中所示和由染体易位产生的基因融合事件两者，如图2所示。当满足以下标准时，将基因融合事件称为在rna-seq数据集中：基因组中映射位置不同的至少两个种子读数、支持融合接点的至少四个种子和拯救读数以及至少一个跨接点的读数对。从下游分析中忽略来自共有高序列相似性(直系同源物和蛋白质家族)的基因对的基因融合事件。
[1827]
使用以下标准鉴定源自基因融合事件的共有新抗原：疾病队列中基因融合事件的发生率应大于5％(对于内部卵巢癌数据集应大于10％)，在整个gtex数据集中使用宽松标准(至少2个种子读数和跨接头的读数)，基因融合事件的出现率小于1％并且基因融合事件的出现率《＝来源于正常免疫细胞类型的2个rna-seq数据集。使用来自基因a的开放阅读框(图1和图2)获得源自所鉴定的新颖接头的蛋白质序列。
[1828]
剪接变体的鉴定
[1829]
开发了定制的生物信息学过程来分析配对末端rna-seq数据，从而鉴定由可变剪接事件产生的潜在新抗原。利用所开发的过程，鉴定了如图3所示的具有新盒的可变5’或3’剪接位点、保留的内含子、排除的外显子、可变终止或插入的剪接变体。该过程通过两个主要功能鉴定ncbi的refseq基因模型中不存在的剪接变体：1)基于具有》5个碱基对的比对空位和在空位的每一侧上比对≥15个碱基对的测序读数鉴定新接点。对于每个rna-seq数据集，如果受到至少5个分裂映射的读数和一对跨接点的伴侣读数支持则称为新接点，2)鉴定比对读数的岛，此后称为覆盖岛。图4示出了该方法的草图。
[1830]
为了评估每个样品中的信噪比，其中基因组dna和前体mrna是噪声的潜在贡献者，从一组200个高度表达的管家基因计算两个参数：
[1831]
1.内含子覆盖深度(idc)：所有管家内含子碱基的第90百分位数覆盖深度。如果特定区域的覆盖范围降到该值以下，则将发生这种情况的第一碱基定义为覆盖岛边界。
[1832]
2.内含子/外显子覆盖率(iecr)：所有管家基因内含子的最近上游外显子的中值内含子覆盖率与中值覆盖率之间的第90百分位数比率。
[1833]
使用以下标准对各种剪接变体进行分类：
[1834]
可变3’/5’剪接位点鉴定：
[1835]-通过分裂映射读数定义新剪接位点边界
[1836]-使用剪接位点(如果适用)产生的内含子区域超过iecr并且整个区域超过idc
[1837]
新盒鉴定：
[1838]-通过分裂映射读数定义的内含子区域中的两个新剪接位点
[1839]-两个剪接位点之间的区域超过iecr并且整个区域超过idc
[1840]
内含子保留鉴定：
[1841]-内含子区域超过iecr并且整个区域超过idc
[1842]-至少5个读数跨越两个内含子-外显子边界，其中在边界的每一侧上比对至少15bp
[1843]
可变终止鉴定：
[1844]-3’边界被定义为覆盖岛的不在规范外显子3’端60bp范围内的边缘
[1845]-规范外显子的5’端与3’边界之间的任何内含子区域超过iecr并且整个区域超过idc
[1846]
外显子排除鉴定：
[1847]-通过分裂映射读数定义的新接点，其中一个或多个规范外显子被跳过
[1848]
使用以下标准鉴定源自异常剪接事件的共有新抗原：疾病队列中剪接事件的发生率大于5％(对于内部卵巢癌数据集大于10％)，在整个gtex数据集中使用宽松标准(至少2个分裂映射读数)剪接事件的出现率小于1％并且剪接事件存在于来源于正常免疫细胞类型的≤2个rna-seq数据集中。对于外显子排除、新盒和可变3’/5’剪接位点，使用以下公式计算，事件的每百万个映射读数的中位分裂映射读数计数(cpm)≥0.05且中位百分比剪接(psi)≥0.1：
[1849][1850]
如果发现异常剪接基因在疾病队列中相对于健康组织差异基因表达分析上调2倍，则选择中值为0.05≥psi≥0.1的事件。对于可变终止和保留的内含子，事件的分裂映射cpm的中位数≥0.1且中位psi》0.5。不管中位分裂映射cpm和psi值如何，都包括源自基因muc16和nr2f2的新抗原。
[1851]
同种型预测和翻译：
[1852]
为了组装含有可变剪接新抗原的同种型，使用分裂映射读数鉴定与新颖剪接特征相邻的规范外显子。选择可能含有预测的新表位的最高度表达的同种型以通过选择适当的开放阅读框来翻译成相应的蛋白质。提取蛋白质序列的新抗原部分并与第一个改变的氨基酸上游另外8个氨基酸残基串联。然后将该蛋白质序列用于后续验证研究。
[1853]
基于dna突变和移码的新抗原的鉴定
[1854]
检查由包含来自卵巢癌患者的外显子组测序数据的癌症基因组图谱(tcga)联盟生成的数据集。参见berger a.c.等人cancer cell 2018,；33(4)690-705，其全文以引用的方式并入本文用于所有目的。下载由产生该数据集的联盟公布的突变检出，并且对存在于》10％的患者体中或已知为癌症的关键驱动因素的基因中的基因突变进行鉴定。对于所选择的每个单点突变，鉴定在其中心具有突变氨基酸的17mer肽用于进一步验证研究。
[1855]
表3示出了由基因融合(fus)事件产生的所鉴定新抗原的基因来源和氨基酸序列。在表3中，粗体字母指示来自基因1的规范氨基酸。斜体字母指示用于框内基因融合事件的来自基因2的规范氨基酸。未加粗的字母指示由帧外基因融合事件产生的新型氨基酸序列。表4示出了它们对应的多核苷酸序列。表5列出了融合形成每个基因融合体的基因的长形式名称。
[1856]
表3.
[1857]
[1858][1859]
表4.
[1860]
[1861]
[1862][1863]
表5.
[1864]
[1865][1866]
表6示出了由可变剪接(as)事件产生的所鉴定新抗原的基因来源和氨基酸序列。粗体字母表示来自野生型蛋白质的序列，而常规字母表示由可变剪接事件产生的突变序列。表7示出了它们对应的多核苷酸序列。表8示出了可变剪接事件的每个基因的长形式名称和基因组坐标。
[1867]
表6.
[1868]
[1869]
[1870]
[1871]
[1872]
[1873]
[1874][1875]
表7.
[1876]
[1877]
[1878]
[1879]
[1880]
[1881]
[1882]
[1883]
[1884]
[1885]
[1886]
[1887][1888]
表8.
[1889]
[1890]
[1891]
[1892]
[1893]
[1894]
[1895][1896]
表9示出了由点突变事件(m)产生的所鉴定新抗原的基因来源、基因全称、突变和氨基酸序列。点突变用粗体字母指示。表10示出了它们对应的多核苷酸序列。点突变用粗体字母指示，并且突变残基的密码子带下划线。
[1897]
表9.
[1898][1899]
[1900]
表10.
[1901][1902]
实施例2：对肿瘤和正常组织中的卵巢癌新抗原的定量pcr分析
[1903]
在以下样品中测试卵巢癌(ov)新抗原候选物的表达：
[1904]
·
来自卵巢癌患者的80种原发性肿瘤切除
[1905]
·
来源于3个健康供体的分选免疫细胞(b细胞、血浆细胞、t细胞、pbmc和单核细胞)
[1906]
·
17个健康供体来源的组织(肝、肾、胰腺、乳腺、结肠、胃、骨骼肌、肺、卵巢、胎盘、小肠、脊髓、子宫、脾、脑、心脏和膀胱)
[1907]
使用primer express软件(版本3.0.1)将定量pcr引物设计成跨越断点接头序列。选择tm为60℃、gc含量介于30％-80％之间且形成稳定二级结构的可能性低的引物用于表达分析。
[1908]
按照制造商的方案，使用qiagen rna分离试剂盒(#430098094)分离来自这些样品的rna。使用在高容量cdna逆转录试剂盒(invitrogen-部分#11904018)中提供的寡聚dt引物从200ng总rna制备互补dna文库。接下来，使用taqman预扩增试剂盒(thermofisher scientific,#4384267)在15μl预扩增混合物中将3ng-10ng的cdna预扩增10个pcr循环。对
于每个样品，估计输入cdna将内源性对照(rpl19、rpl13a、gapdh、gusb、pgk1)的ct值保持在13-15个ct值的范围内。在测试的对照基因中，rpl19在健康组织中显示出最一致的表达。最后，将预扩增的cdna稀释5倍并且上样到fluidigm biomark
tm hd上，进行40个pcr扩增循环。
[1909]
针对内源性对照rpl19对新抗原候选物(ct值)的表达进行归一化。使用δct《15的截断值(约～32,000的倍数变化)来确定生物样品中新抗原候选物的表达。在图5a、图5b、图5d和图5d中示出了所有肿瘤限制新抗原候选物的表达谱的结果。在图6a、图6b、图6c和图6d中示出了在对照样品和肿瘤样品两者中具有表达的抗原。
[1910]
实施例3：新抗原的体外免疫原性评估
[1911]
使用外源自体正常供体再刺激测定评估新抗原的免疫原性。肽由genscript合成，纯度》80％。将冻干的肽溶解在100％ dmso中。
[1912]
使用培养基(补充有谷氨酰胺、hepes、5％人血清(sigma)和1x pen-strep的imdm(gibco))解冻从人健康pbmc分离的cd1c+树突状细胞(cd1c+dc)。将dc细胞重悬于补充有il-4(peprotech，20ng/ml)和gm-csf(gibco，20ng/ml)的培养基中，接种在6孔微孔板中，并在37℃和5％ co2培养箱中静置过夜。第二天，对dc细胞进行计数，并以30,000个活细胞/孔的浓度接种在96孔圆底微孔板中。将冻干的新抗原肽库(具有8-mer重叠肽序列的15-mer肽)溶解在100％ dmso中，原液浓度为20mg/ml。将新抗原肽库添加到dc中达到10μg/ml的最终浓度并且在在37℃和5％ co2培养箱中静置2小时。将cef peptide pool“plus”(cellular technologies,ltd.)用作阳性对照(每种病毒肽的最终浓度为4ug/ml)，并将最终浓度(0.05％)与实验肽相同的dmso用作阴性对照。2小时后，用50格雷电离辐射照射dc细胞。使用培养基解冻从人正常pbmc分离的自体cd3+pan-t细胞。照射后，将自体pan-t细胞以300,000个活细胞/孔添加到照射过的dc中。将人il-15(peprotech)以10ng/ml的最终浓度添加到所有孔中。将板在37℃和5％ co2培养箱中总共温育12天。每2-3天用il-15(r&d system，10ng/ml最终浓度)和il-2(r&d systems，10iu/ml最终浓度)更新一次培养基。
[1913]
第11天，用浓度与第1天的肽刺激相同的相同实验肽库或对照再刺激细胞。将蛋白质抑制剂混合物(ebioscience)添加到每个孔中，并将板在37℃和5％ co2培养箱中温育过夜14-16小时。第12天，对细胞进行染，用于表面和细胞内流式细胞术分析。将细胞用pbs洗涤，并用live/dead fixable aqua死细胞染液(thermo-fisher)染。在活/死细胞染后，使用不含生物素的fc受体阻断剂(biotin-free fc receptor blocker)(accurate chemical&scientific corp)阻断细胞。细胞外细胞流组(每孔1μl/抗体，50μl)由cd3 percp-cy5.5(biolegend)、cd4bv421(biolegend)和cd8 apc-cy7(biolegend)组成。细胞外染后，将细胞固定并使用foxp3/转录因子染缓冲液组(ebioscience)进行透化，并使用tnfαfitc(r&d systems)和ifnγbv785(biolegend)对细胞内蛋白进行染(1:50稀释)。将细胞洗涤并重悬于染缓冲液中，分析并在bd celesta流式细胞仪中进行记录。
[1914]
在flowjo v10.6软件上进行流式细胞术分析。在活的单线态的cd3+、cd4+和cd8+ t细胞上对细胞进行门控。分析cd8+和cd4+ t细胞的tnfα和ifnγ表达。
[1915]
如果满足以下标准，则认为对于肽库而言免疫原性应答是阳性的：
[1916]
·
在用实验肽库刺激后的双阳性tnfα/ifnγcd8+和/或tnfα/ifnγcd4+ t细胞的频率大于或等于dmso对照的3倍
[1917]
·
双阳性tnfα/ifnγcd8+和/或双阳性tnfα/ifnγcd4+ t细胞的频率为至少
0.01％
[1918]
首先研究在9-16个健康供体中新抗原的免疫原性。在7个健康供体的新队列上进一步测试非反应性新抗原。新抗原的免疫原性数据汇总在表11中。图7a和图7b展示了显示门控策略和对几种新抗原实现的免疫原性应答的代表性点图。有趣的是，大部分新抗原在多个供体中显示出免疫原性应答(图8、图9a和图9b)。
[1919]
表11.所有肿瘤特异性新抗原的免疫原性数据汇总。对于每个新抗原，报告最大cd8+和cd4+ t细胞应答(tnfα和ifnγ)。报告的应答是不依赖于供体的。
[1920]
[1921]
[1922]
[1923]
[1924]
[1925]
[1926]
[1927]
[1928]
[1929][1930]
实施例4：hla结合预测
[1931]
将使用如实施例1所述的各种方法鉴定的新抗原的氨基酸序列分成所有可能的独特的连续9mer氨基酸片段，并且使用netmhcpan4.0对这些9mer中的每一个进行与六个常见hla等位基因(hla-a*01:01、hla-a*02:01、hla-a*03:01、hla-a*24:02、hla-b*07:02、hla-b*08:01)的hla结合预测。基于与一个或多个所测试hla等位基因结合的可能性及其在卵巢癌患者中的患病率的排序，选择几个9mer片段用于进一步分析。
[1932]
实施例5：新抗原与i类mhc的体外结合
[1933]
使用已知方法评价选择的新抗原或其片段与hla-a*01:01、hla-a*02:01、hla-a*
03:01、hla-a*24:02、hla-b*07:02和hla-b*08:01或任何其它hla的结合。
[1934]
分析通过生物信息学分析鉴定的9mer肽与6个常见hla i类等位基因(hla-a*01:01、a*02:01、a*03:01、a*24:02、b*07:02、b*08:01)的结合倾向。该方法的原理在下文简要描述，并且由两个部分组成，一个部分涉及肽与由紫外线(uv)辐射诱导的阳性对照发生交换，第二部分是检测稳定hla肽和空hla复合物的酶免疫测定。
[1935]
hla结合的肽对于hla复合物的稳定性很关键。通过uv不稳定肽稳定条件性hla i类复合物，每种hla利用不同的肽(pos：hla-a*01:01：ctelklsdy(seq id no:407)、hla-a*02:01：nlvpmvatv(seq id no:408)、hla-a*03:01：liyrrrlmk(seq id no:409)、hla-a*24:02：lysacfwwl(seq id no:410)、hla-b*07:02：npkasllsl(seq id no:411)、hla-b*08:01:elrsrywai(seq id no:412))，所述肽与hla分子结合时可通过uv照射裂解。在裂解时，所得的肽片段从hla i类复合物解离，因为它们的长度不足以与hla稳定结合。在进行肽裂解的条件下(中性ph，在融化的冰上)，不含肽的hla复合物保持稳定。因此，当在存在另一种所选的hla i类肽的情况下进行裂解时，该反应使得裂解的uv不稳定肽pos与所选肽发生净交换(rodenko,b等人(2006)nature protocols 1:1120-32；toebes,m等人(2006)nat med 12:246-51；bakker,ah等人(2008)proc natl acad sci usa 105:3825-30)。
[1936]
使用hla i类elisa分析目的肽与pos之间的交换效率。组合技术允许鉴定目的hla分子的具有潜在免疫原性的配体。
[1937]
交换对照肽pos是相关hla i类等位基因的高亲和力结合物，而交换对照肽neg是非结合物。uv对照表示在不存在拯救肽的情况下uv照射条件性hla i类复合物。交换对照肽neg(hla-a*01:01：npkasllsl(seq id no:413)、hla-a*02-01：ivtdfsvik(seq id no:414)、hla-a*03:01：npkasllsl(seq id no:415)、hla-a*24:02：nlvpmvatv(seq id no:416)、hla-b*07:02：liyrrrlmk(seq id no:417)、hla-b*08:01：nlvpmvatv(seq id no:418))和所有实验肽的结合是相对于交换对照肽pos的结合来评价的。将后一种肽的吸收设为100％。该程序产生了一系列不同的交换百分比，反映了不同实验肽对所用的hla等位基因的亲和力。
[1938]
hla i类elisa是一种基于(肽稳定的)hla i类复合物的β2-微球蛋白(b2m)的检测的酶免疫测定法。为此，将链霉亲和素结合到聚苯乙烯微量滴定孔上。在洗涤和封闭后，由微量滴定板上的链霉亲和素经由其生物素酰化重链捕获交换反应混合物或elisa对照中存在的hla复合物。通过洗涤去除未结合的材料。随后，添加辣根过氧化物酶(hrp)缀合的人b2m抗体。hrp缀合的抗体仅与微量滴定孔中存在的完整hla复合物结合，因为肽交换不成功会导致初始uv敏感hla复合物在uv照明下崩解。在后一种情况下，在洗涤步骤期间除去b2m。通过洗涤去除未结合的hrp缀合物后，将底物溶液添加到孔中。有产物与样品中存在的完整hla复合物的量成比例形成。在通过添加终止溶液终止反应后，在微量滴定读板机中测量吸光度。将吸光度归一化为交换对照肽的吸光度(代表100％)。也可以通过这种elisa技术来检测肽以对hla i类分子的中等亲和力至低亲和力进行的次优hla结合(rodenko,b等人(2006)nature protocols 1:1120-32)。
[1939]
所测试的hla等位基因具有目的肽与之交换的对应阳性对照(pos)和阴性对照(neg)肽。因此，与pos的100％交换率意指目的肽具有与阳性对照肽相同的对hla等位基因的结合亲和力。对于考虑进行进一步评估的6个hla等位基因中的至少一个，肽与对应pos肽
的交换率为至少10％。百分比更高对应于与hla等位基因的结合更强。
[1940]
实施方案
[1941]
实施方案的以下列表旨在补充而不是替换或取代先前的描述。
[1942]
实施方案1.一种多肽，所述多肽包含选自由以下项组成的组的至少一种或多种肽序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段。
[1943]
实施方案2.一种多肽，所述多肽包含选自由以下项组成的组的至少一种或多种肽序列：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[1944]
实施方案3.一种多肽，所述多肽包含以下的两个或更多个串联重复序列：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[1945]
实施方案4.根据实施方案1至3中任一项所述的多肽，其中所述多肽序列按任何顺序彼此连接。
[1946]
实施方案5.根据实施方案2所述的多肽，其中所述多肽选自：
[1947]
氨基酸序列seq id no:1，或者与seq id no:1具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[1948]
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[1949]
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[1950]
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[1951]
氨基酸序列seq id no:15，或者与seq id no:15具有至少90％序列同一性的氨基
酸序列；
[1952]
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[1953]
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[1954]
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[1955]
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[1956]
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[1957]
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[1958]
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[1959]
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[1960]
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[1961]
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[1962]
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[1963]
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[1964]
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[1965]
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[1966]
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[1967]
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[1968]
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[1969]
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[1970]
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[1971]
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[1972]
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[1973]
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[1974]
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[1975]
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[1976]
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[1977]
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[1978]
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[1979]
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[1980]
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[1981]
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[1982]
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[1983]
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[1984]
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[1985]
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[1986]
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[1987]
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[1988]
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[1989]
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[1990]
氨基酸序列seq id no:195，或者与seq id no:195具有至少90％序列同一性的氨
基酸序列；
[1991]
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[1992]
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[1993]
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[1994]
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[1995]
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[1996]
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[1997]
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[1998]
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[1999]
氨基酸序列seq id no:215，或者与seq id no:215具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2000]
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[2001]
氨基酸序列seq id no:221，或者与seq id no:221具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2002]
氨基酸序列seq id no:223，或者与seq id no:223具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2003]
氨基酸序列seq id no:235，或者与seq id no:235具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2004]
氨基酸序列seq id no:237，或者与seq id no:237具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2005]
氨基酸序列seq id no:239，或者与seq id no:239具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2006]
氨基酸序列seq id no:241，或者与seq id no:241具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2007]
氨基酸序列seq id no:243，或者与seq id no:243具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2008]
氨基酸序列seq id no:245，或者与seq id no:245具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2009]
氨基酸序列seq id no:247，或者与seq id no:247具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2010]
氨基酸序列seq id no:251，或者与seq id no:251具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2011]
氨基酸序列seq id no:255，或者与seq id no:255具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2012]
氨基酸序列seq id no:257，或者与seq id no:257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2013]
氨基酸序列seq id no:259，或者与seq id no:259具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2014]
氨基酸序列seq id no:261，或者与seq id no:261具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2015]
氨基酸序列seq id no:263，或者与seq id no:263具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2016]
氨基酸序列seq id no:267，或者与seq id no:267具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2017]
氨基酸序列seq id no:271，或者与seq id no:271具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2018]
氨基酸序列seq id no:279，或者与seq id no:279具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2019]
氨基酸序列seq id no:281，或者与seq id no:281具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2020]
氨基酸序列seq id no:285，或者与seq id no:285具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2021]
氨基酸序列seq id no:293，或者与seq id no:293具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2022]
氨基酸序列seq id no:295，或者与seq id no:295具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2023]
氨基酸序列seq id no:297，或者与seq id no:297具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2024]
氨基酸序列seq id no:301，或者与seq id no:301具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2025]
氨基酸序列seq id no:305，或者与seq id no:305具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2026]
氨基酸序列seq id no:307，或者与seq id no:307具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2027]
氨基酸序列seq id no:309，或者与seq id no:309具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2028]
氨基酸序列seq id no:319，或者与seq id no:319具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2029]
氨基酸序列seq id no:323，或者与seq id no:323具有至少90％序列同一性的氨
基酸序列；
[2030]
氨基酸序列seq id no:325，或者与seq id no:325具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2031]
氨基酸序列seq id no:337，或者与seq id no:337具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2032]
氨基酸序列seq id no:339，或者与seq id no:339具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2033]
氨基酸序列seq id no:343，或者与seq id no:343具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2034]
氨基酸序列seq id no:345，或者与seq id no:345具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2035]
氨基酸序列seq id no:349，或者与seq id no:349具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2036]
氨基酸序列seq id no:371，或者与seq id no:371具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2037]
氨基酸序列seq id no:375，或者与seq id no:375具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
[2038]
以及它们的组合。
[2039]
实施方案6.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据实施方案1至5中任一项所述的多肽。
[2040]
实施方案7.根据实施方案6所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸选自由以下项组成的组：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406，或它们的片段。
[2041]
实施方案8.一种载体，所述载体包含根据实施方案6或实施方案7所述的多核苷酸。
[2042]
实施方案9.根据实施方案8所述的载体，其中所述载体选自腺病毒载体、甲病毒载体、痘病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、自复制rna分子、以及它们的组合。
[2043]
实施方案10.根据实施方案9所述的载体，其中所述腺病毒载体选自had5、had7、had11、had26、had34、had35、had48、had49、had50、gad20、gad19、gad21、gad25、gad26、gad27、gad28、gad29、gad30、gad31、chad3、chad4、chad5、chad6、chad7、chad8、chad9、
chad10、chad11、chad16、chadi7、chad19、chad20、chad22、chad24、chad26、chad30、chad31、chad37、chad38、chad44、chad55、chad63、chad73、chad82、chad83、chad146、chad147、panad1、panad2和panad3。
[2044]
实施方案11.根据实施方案9所述的载体，其中所述痘病毒载体选自天花病毒载体、痘苗病毒载体、牛痘病毒载体、猴痘病毒载体、哥本哈根痘苗病毒(w)载体、纽约减毒痘苗病毒(nyvac)载体和经修饰的痘苗安卡拉(mva)载体。
[2045]
实施方案12.根据实施方案9所述的载体，其中所述载体是包含编码根据实施方案1至5中的任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的腺病毒载体。
[2046]
实施方案13.根据实施方案9所述的载体，其中所述载体是包含编码根据实施方案1至5中的任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的痘病毒载体。
[2047]
实施方案14.根据实施方案9所述的载体，其中所述载体是包含编码根据实施方案1至5中任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的自复制rna分子。
[2048]
实施方案15.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方案1至5中任一项所述的多肽。
[2049]
实施方案16.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方案6和7中任一项所述的多核苷酸。
[2050]
实施方案17.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方案8至14中任一项所述的载体。
[2051]
实施方案18.根据实施方案17所述的药物组合物，其中所述载体选自ad26载体、mva载体、gad20载体、自复制rna分子，以及它们的组合。
[2052]
实施方案19.根据实施方案18所述的药物组合物，其中所述载体是ad26载体，其包含
[2053]
编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，或者
[2054]
编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2055]
实施方案20.根据实施方案18所述的药物组合物，其中所述载体是gad20载体，其包含
[2056]
编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、
201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，或者
[2057]
编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2058]
实施方案21.根据实施方案18所述的药物组合物，其中所述载体是mva载体，其包含
[2059]
编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，或者
[2060]
编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2061]
实施方案22.根据实施方案18所述的药学组合物，其中所述载体是自复制rna分子，其包含
[2062]
编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，或者
[2063]
编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2064]
实施方案23.一种诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据实施方案15至22中任一项所述的药物组合物。
[2065]
实施方案24.一种诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含重组病毒的组合物和/或包含自复制rna分子的组合物，其中所述重组病毒或所述自复制rna分子包含编码选自由以下组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2066]
实施方案25.根据实施方案23或24所述的方法，其中所述受试者表达或被怀疑表达一种或多种根据权利要求1所述的多肽。
[2067]
实施方案26.一种、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据实施方案15至22中任一项所述的药物组合物。
[2068]
实施方案27.一种、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含重组病毒的组合物和/或包含自复制rna分子的组合物，其中所述重组病毒或所述自复制rna分子包含编码选自由以下组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2069]
实施方案28.一种、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含重组病毒的组合物和/或包含自复制rna分子的组合物，其中所述重组病毒或所述自复制rna分子包含编码选自由以下组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述施用包括所述组合物的一次或多次施用。
[2070]
实施方案29.根据实施方案23至28中任一项所述的方法，其中所述病毒或重组病毒选自ad26、mva、gad20及它们的组合。
[2071]
实施方案30.根据实施方案29所述的方法，其中所述重组病毒是ad26病毒，其包含编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、
325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2072]
实施方案31.根据实施方案29所述的方法，其中所述重组病毒是gad20病毒，其包含编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2073]
实施方案32.根据实施方案29所述的方法，其中所述重组病毒是mva病毒，其包含编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2074]
实施方案33.根据实施方案29所述的方法，其中所述自复制rna分子包含编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。
[2075]
实施方案34.根据实施方案23至33中任一项所述的方法，其包括一个或多个周期，其中每个周期包括：
[2076]
包括第一组合物的第一次施用，所述第一组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2077]
包括第二组合物的第二次施用，所述第二组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自
ad26、mva或gad20。
[2078]
实施方案35.根据实施方案23至33中任一项所述的方法，其包括一个或多个周期，其中每个周期包括：
[2079]
包括第一组合物的第一次施用，所述第一组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2080]
包括第二组合物的第二次施用，所述第二组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2081]
包括第三组合物的第三次施用，所述第三组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20。
[2082]
实施方案36.根据实施方案23至33中任一项所述的方法，其包括一个或多个周期，其中每个周期包括：
[2083]
包括第一组合物的第一次施用，所述第一组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2084]
包括第二组合物的第二次施用，所述第二组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、
15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2085]
包括第三组合物的第三次施用，所述第三组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20；以及
[2086]
包括第四组合物的第四次施用，所述第四组合物包含含有编码来自由以下项组成的组的一种或多种多肽的多核苷酸的重组病毒或自复制rna分子：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20。
[2087]
实施方案37.根据实施方案34至36所述的方法，其中所述第一次施用、第二次施用、第三次施用或第四次施用可以包括不同的重组病毒。
[2088]
实施方案38.根据实施方案34至37所述的方法，其中所述第一次施用、第二次施用、第三次施用或第四次施用包括重组病毒，其中所述重组病毒包含编码不同氨基酸序列的多肽的多核苷酸。
[2089]
实施方案39.根据实施方案26至38中任一项所述的方法，所述方法还包括施用第二剂，所述第二剂选自ctla-4抗体、pd-1抗体、pd-l1抗体、tlr激动剂、cd40激动剂、ox40激动剂、羟基脲、鲁索替尼、菲卓替尼、41bb激动剂、cd28激动剂、flt3配体、硫酸铝、btk抑制剂、jak抑制剂、cd38抗体、cdk抑制剂、cd33抗体、cd37抗体、cd25抗体、gm-csf抑制剂、il-2、il-15、il-7、ifnγ、ifnα、tnfα、vegf抗体、cd70抗体、cd27抗体、bcma抗体、gprc5d抗体，以及它们的组合。
[2090]
实施方案40.根据实施方案25至39所述的方法，其中所述卵巢癌是上皮卵巢癌、生殖细胞卵巢癌、基质细胞卵巢癌或小细胞癌或它们的组合。
[2091]
实施方案41.根据实施方案23至40所述的方法，其中一种或多种根据权利要求1所述的多肽以至少约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、约10％或更高、约11％或更高、约12％或更高、约13％或更高、约14％或更高、约15％或更高、约16％或更高、约17％或更高、
约18％或更高、约19％或更高、约20％或更高、约21％或更高、约22％或更高、约23％或更高、约24％或更高、约25％或更高、约26％或更高、约27％或更高、约28％或更高、约29％或更高、约30％或更高、约35％或更高、约40％或更高、约45％或更高、约50％或更高、约55％或更高、约60％或更高、约65％或更高或者约70％或更高的频率存在于患有所述卵巢癌的受试者体中。

技术特征：

1.一种多肽，所述多肽包含a)选自由以下项组成的组的一个或多个氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段；b)与选自由以下项组成的组的所述氨基酸序列有至少90％同一性的一个或多个氨基酸序列：seq id no:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、391、393、395、397、399、401、403或405，或它们的片段；c)选自由以下项组成的组的一个或多个氨基酸序列：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段；或者d)与选自由以下项组成的组的所述氨基酸序列有至少90％同一性的一个或多个氨基酸序列：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述一个或多个氨基酸序列以任何顺序彼此连接。3.根据权利要求1所述的多肽，其中所述一个或多个氨基酸序列在没有接头的情况下以任何顺序彼此连接。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含一个或多个反向肽键、氨基酸的d-异构体或化学修饰或者它们的任何组合。5.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1至4中任一项所述的多肽。6.根据权利要求5所述的多核苷酸，a)其中所述多核苷酸选自由以下项组成的组：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406，或它们的片段；b)其中所述多核苷酸选自由以下项组成的组：seq id no:2、4、6、12、16、18、20、22、26、30、32、34、40、44、46、50、54、60、64、64、68、82、86、88、90、92、96、98、112、114、116、120、124、128、130、146、178、180、182、184、186、188、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、216、220、222、224、230、234、236、238、240、242、244、246、248、252、256、258、260、262、264、268、272、280、282、286、294、296、298、302、304、306、308、310、320、324、326、338、340、344、346、350、372或376，或它们的片段；c)其中所述多核苷酸与以下的多核苷酸有至少90％同一性：seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404或406，或它们的片段；或者d)其中所述多核苷酸与以下的多核苷酸有至少90％同一性：seq id no:2、4、6、12、16、18、20、22、26、30、32、34、40、44、46、50、54、60、64、64、68、82、86、88、90、92、96、98、112、114、116、120、124、128、130、146、178、180、182、184、186、188、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、216、220、222、224、230、234、236、238、240、242、244、246、248、252、256、258、260、262、264、268、272、280、282、286、294、296、298、302、304、306、308、310、320、324、326、338、340、344、346、350、372或376，或它们的片段。
7.根据权利要求6所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含dna或rna。8.根据权利要求7所述的分离的多核苷酸，其中所述rna是mrna。9.一种载体，所述载体包含根据权利要求5至8中任一项所述的多核苷酸。10.根据权利要求9所述的载体，其中所述载体选自腺病毒载体、痘病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、自复制rna分子、以及它们的组合。11.根据权利要求10所述的载体，其中所述腺病毒载体源自had5、had7、had11、had26、had34、had35、had48、had49、had50、gad20、gad19、gad21、gad25、gad26、gad27、gad28、gad29、gad30、gad31、chad3、chad4、chad5、chad6、chad7、chad8、chad9、chad10、chad11、chadi6、chadi7、chadi9、chad20、chad22、chad24、chad26、chad30、chad31、chad37、chad38、chad44、chad55、chad63、chad73、chad82、chad83、chad146、chad147、panad1、panad2或panad3。12.根据权利要求10所述的载体，其中所述痘病毒载体选自天花病毒载体、痘苗病毒载体、牛痘病毒载体、猴痘病毒载体、哥本哈根痘苗病毒(w)载体、纽约减毒痘苗病毒(nyvac)载体和经修饰的痘苗安卡拉(mva)载体。13.根据权利要求10所述的载体，其中所述载体是包含编码根据权利要求1至4中任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的所述腺病毒载体。14.根据权利要求10所述的载体，其中所述载体是包含编码根据权利要求1至4中任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的所述痘病毒载体。15.根据权利要求10所述的载体，其中所述载体是包含编码根据权利要求1至3中任一项所述的多肽中的任一种多肽的多核苷酸的所述自复制rna分子。16.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体是包含多核苷酸的ad26载体，所述多核苷酸编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段；或者所述多核苷酸编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段。17.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体是包含多核苷酸的gad20载体，所述多核苷酸编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、
323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段；或者所述多核苷酸编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段。18.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体是包含多核苷酸的mva载体，所述多核苷酸编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段；或者所述多核苷酸编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段。19.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体是包含多核苷酸的自复制rna分子，所述多核苷酸编码选自由以下项组成的组的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段；或者所述多核苷酸编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段。20.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至4中任一项所述的多肽。21.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求5至7中任一项所述的多核苷酸。22.一种药物组合物，所述药物组合物包含重组病毒，所述重组病毒包含根据权利要求9至18中任一项所述的载体。23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述重组病毒选自ad26病毒、mva病毒或
gad20病毒以及它们的组合。24.一种诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求20至23中任一项所述的药物组合物。25.一种诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含重组病毒或自复制rna分子的组合物，所述重组病毒或自复制rna分子包含：编码选自由以下项组成的组的至少一种或多种多肽序列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段；或者编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371或375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20，并且其中所述施用包括所述组合物的一次或多次施用。26.一种、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求20至23中任一项所述的药物组合物。27.一种、预防受试者中的卵巢癌，降低卵巢癌的发病风险或者延迟卵巢癌发病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含重组病毒或自复制rna分子的组合物，所述重组病毒或自复制rna分子包含：编码选自由以下项组成的组的至少一种或多种多肽序列的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段；或者编码与以下有至少90％序列同一性的一种或多种多肽的多核苷酸：seq id no:1、3、5、11、15、17、19、21、25、29、31、33、39、43、45、49、53、59、63、65、67、81、85、87、89、91、95、97、111、113、115、119、123、127、129、145、177、179、181、183、185、187、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、215、219、221、223、229、233、235、237、239、241、243、245、247、251、255、257、259、261、263、267、271、279、281、285、293、295、297、301、303、305、307、309、319、323、325、337、339、343、345、349、371、375，或它们的片段，并且其中所述重组病毒选自ad26、mva或gad20，并且其中所述施用包括所述组合物的一次或多次施用。
28.根据权利要求24至27中任一项所述的方法，其中所述受试者表达或被怀疑表达一种或多种根据权利要求1所述的多肽。29.根据权利要求28所述的方法，其中一种或多种根据权利要求1所述的多肽以至少约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、约10％或更高、约11％或更高、约12％或更高、约13％或更高、约14％或更高、约15％或更高、约16％或更高、约17％或更高、约18％或更高、约19％或更高、约20％或更高、约21％或更高、约22％或更高、约23％或更高、约24％或更高、约25％或更高、约26％或更高、约27％或更高、约28％或更高、约29％或更高、约30％或更高、约35％或更高、约40％或更高、约45％或更高、约50％或更高、约55％或更高、约60％或更高、约65％或更高或者约70％或更高的频率存在于患有所述卵巢癌的受试者体中。30.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述卵巢癌是复发性卵巢癌、难治性卵巢癌、转移性卵巢癌或铂类耐药卵巢癌或它们的任何组合。31.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述受试者是未接受过的。32.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述受试者已经接受手术。33.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述受试者具有升高的癌抗原125(ca 125)水平。34.根据权利要求27至33中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用另外的癌症剂。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述另外的癌症剂是手术、化学疗法、放射、检查点抑制剂、靶向疗法或它们的任何组合。36.根据权利要求35所述的方法，其中所述另外的癌症剂是ctla-4抗体、ctla4配体、pd-1轴抑制剂、pd-l1轴抑制剂、tlr激动剂、cd40激动剂、ox40激动剂、羟基脲、鲁索替尼、菲卓替尼、41bb激动剂、cd28激动剂、sting拮抗剂、rig-1拮抗剂、tcr-t疗法、car-t疗法、flt3配体、硫酸铝、btk抑制剂、cd38抗体、cdk抑制剂、cd33抗体、cd37抗体、cd25抗体、gm-csf抑制剂、il-2、il-15、il-7、cd3重定向分子、泊马米布、ifnγ、ifnα、tnfα、vegf抗体、cd70抗体、cd27抗体、bcma抗体或gprc5d抗体或它们的任何组合。37.根据权利要求35所述的方法，其中所述检查点抑制剂是伊匹单抗、西利单抗、派姆单抗、纳武单抗、信迪利单抗、西米普利单抗、特瑞普利单抗、卡瑞利珠单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、普鲁戈利单抗、巴替利单抗、布加达利单抗、萨善利单抗、阿维单抗、阿替利珠单抗、度伐鲁单抗、恩沃利单抗或碘帕利单抗或它们的任何组合。

技术总结

本公开涉及卵巢癌新抗原、编码卵巢癌新抗原的多核苷酸、载体、宿主细胞、重组病毒颗粒、包含新抗原的疫苗、结合卵巢癌新抗原的蛋白质类分子及制备和使用它们的方法。类分子及制备和使用它们的方法。类分子及制备和使用它们的方法。

技术研发人员：

巴尔加瓦 V

受保护的技术使用者：

詹森生物科技公司

技术研发日：

2021.02.12

技术公布日：

2022/12/23