(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910136640.8
(22)申请日 2019.02.25
(71)申请人 青岛大学
地址 266071 山东省青岛市宁夏路308号
申请人 首都医科大学附属北京同仁医院
(72)发明人 朱玮 王宁利 苗永震 武珅
张敬学 于红霞
(74)专利代理机构 北京国林贸知识产权代理有
限公司 11001
代理人 郑俊彦 许文娟
(51)Int.Cl.
C12N 5/10(2006.01)
(54)发明名称一种用于诱导性多能干细胞定向分化小梁网细胞的培养体系(57)摘要本发明提供了一种用于诱导性多能干细胞定向分化小梁网细胞的培养体系，所述培养体系包括第一阶段诱导分化培养基和第二阶段诱导分化培养基；所述第一阶段诱导分化培养基由基本培养基添加T G F -b e t a 1、N G F -b e t 和Erythropoietin制备得到；所述第二阶段诱导分化培养基由基本培养基添加TGF -beta1、NGF -beta、Erythropoietin、PGF2alpha和EGF制备得到；所述基本培养基为含血清替代品的MEM -alpha培养基。通过定向诱导分化培养体系诱导分化的细胞与原代小梁网细胞极其相似，满足了干细胞青光眼的临床要求；同时该培养体系中不存在外来物种以及同种其他个体的“污染”，是一种稳定、有效且不存在污染的定向诱导分化 体系。权利要求书1页 说明书3页 附图3页CN 109943532 A 2019.06.28
C N 109943532
A
1.一种用于诱导性多能干细胞（iPSCs ）定向分化小梁网细胞的培养体系，其特征在于，所述培养体系包括第一阶段诱导分化培养基和第二阶段诱导分化培养基；
所述第一阶段诱导分化培养基由基本培养基添加转化生长因子-β（TGF -beta1）、神经生长因子-β（NGF -bet ）和红细胞生成素（Erythropoietin ）制备得到；
所述第二阶段诱导分化培养基由基本培养基添加转化生长因子-β（TGF -beta1）、神经生长因子-β（NGF -beta ）、红细胞生成素（Erythropoietin ）、前列腺素F2α（PGF2alpha）和表皮细胞生长因子（EGF ）制备得到；
所述基本培养基为含血清替代品（knockout serum replacement ）的MEM -alpha培养基。
2.根据权利要求1所述的用于诱导性多能干细胞定向分化小梁网细胞的培养体系，其特征在于，所述基本培养基中knockout serum replacement的含量为5%-15%。
3.根据权利要求1所述的用于诱导性多能干细胞定向分化小梁网细胞的培养体系，其特征在于，所述第一
阶段诱导分化培养基中TGF -beta1、NGF -bet和Erythropoietin的添加量分别为1-5ng/ml、50-200ng/ml和1-5U/ml。
4.根据权利要求1所述的用于诱导性多能干细胞定向分化小梁网细胞的培养体系，其特征在于，所述第二阶段诱导分化培养基中TGF -beta1、NGF -beta、Erythropoietin、PGF2alpha和EGF的添加量分别为1-5ng/ml、50-200ng/ml、1-5U/ml、0.5-5μM和5-20ng/ml。
5.一种利用如权利要求1-4任一项所述培养体系进行诱导性多能干细胞定向分化为小梁网细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）利用所述第一阶段诱导分化培养基，诱导分化iPSCs 5~10天；
（2）换用所述第二阶段诱导分化培养基，诱导分化iPSCs 10~20天。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（1）和（2）的诱导分化条件为37℃，5%CO 2。
权 利 要 求 书1/1页2CN 109943532 A
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