(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 104263652 A (43)申请公布日 2015.01.07 |
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(21)申请号 CN201410392298.5
(22)申请日 2014.08.11
(71)申请人 北京东方红航天生物技术股份有限公司
地址 100089 北京市海淀区知春路61号院康拓科技大厦3层东区309
(72)发明人 邱斌 齐文武 谢瑶 路子佳
(74)专利代理机构 北京同辉知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人 刘洪勋
(51)Int.CI
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一株高产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株，其命名为红曲霉Monascus sp.，保藏编号为CGMCC No.9230。其诱变方法为先采用地面模拟诱变，然后进行空间诱变的联合诱变方法。其筛选方法为通过含有红曲产洛伐他汀的代谢抑制剂的培养基进行筛选。该突变菌株比出发菌株发酵单位提高10-40％，诱变及筛选方法效率高。 | |
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法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一株产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株，其命名为红曲霉Monascus sp.，保藏编号为CGMCC No.9230。
2.根据权利要求1所述的一株产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株，其特征在于，在麦芽汁琼脂培养平板上，其菌株的形态特征为：菌落表面绒毛状，平坦，边缘完整；菌丝体最初呈白，随菌落的生长、发育而变化，逐渐呈现橘至橘红；背面边缘浅褐，中央渐呈褐；该菌株的生理生化特点为：生长温度范围比出发菌株更广，耐高温，45℃仍可正常生长，最适生长温度为25-30℃；生长的最适pH值3.5-5，可耐浓度高达10％的乙醇，耐高渗透压，在甘油含量25％的平板上仍可正常生长。
3.一种权利要求1或2中产洛伐他汀紫红曲霉突变菌株的诱变方法，其特征在于，是先采用地面模拟诱变，然后进行空间诱变的的联合诱变方法。
4.根据权利要求3所述的产洛伐他汀紫红曲霉突变菌株的诱变方法，其特征在于，所述地面模拟诱变按如下步骤进行：
(1)将出发菌株接种在含有固体培养基的平板上进行培养，当菌株长满整个平板后待用；
(2)对平板上的菌株进行以下一组或几组筛选试验，筛选出生长速度更快、颜加深的菌株：
a)振动试验：将长满菌株的平板固定在双振动台上，在0-400kN下振动1h，其中前0.5小时为低频正弦振动试验，后0.5小时为随机振动试验；
b)真空低能粒子辐照试验：将长满菌株的平板放入空间低能综合辐照实验设备中，在10<sup>-3</sup>-10<sup>-6</sup>Pa真空度下辐照30-180分钟后回收，辐射剂量为1×10<sup>14</sup>eV—4×10<sup>14</sup>eV。
5.根据权利要求3所述的产洛伐他汀紫红曲霉突变菌株的诱变方法，其特征在于，所述空间诱变是将地面模拟诱变中筛选出的菌株转移到搭载管中，置于太空舱内，然后将太空舱送入空间环境诱变，所述空间环境为：微重力10<sup>-3</sup>-10<sup>-6</sup>g，振动0-400kN；真空度10<sup>-3</sup>-10<sup>-6</sup>Pa，太空舱内辐射剂量0.1-0.9mGy。
6.一种权利要求1或2中产洛伐他汀紫红曲霉突变菌株的筛选方法，其特征在于，依次按如下步骤进行：
(1)在市售的麦芽琼脂培养基中加入红曲产洛伐他汀的代谢抑制剂，组成筛选培养基；
(2)将筛选培养基灭菌并倒在直径为90mm的平板中，冷凝后就可用于筛选高产洛伐他汀的菌株；
(3)将经地面模拟空间诱变与空间诱变过的菌株、或在生产中长期使用发生退化变异的菌株均匀涂布在筛选平板上；
(4)常规培养，依照生产速度、菌落大小筛选生长较快、菌落形态变化较大、颜较深的菌株
作为备选菌株，进入发酵流程，最终依靠菌株产洛伐他汀的含量确定高产菌株。
7.根据权利要求6所述产洛伐他汀红曲霉突变菌株的筛选方法，其特征在于，所述红曲产洛伐他汀的代谢抑制剂为乙酰辅酶A、二氢莫纳可林(DihydromonacolinL)、莫纳可林L(monacolinL)、莫纳可林J(monacolin J)和莫纳可林K(monacolin K)其中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求7所述产洛伐他汀红曲霉突变菌株的筛选方法，其特征在于，所述代谢抑制剂的混合浓度为10<sup>-6</sup>g/L——10<sup>-1</sup>g/L。
说 明 书
<p>技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株高产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株及其诱变和筛选方法。
背景技术
经查证，红曲发明在汉代，是传统的食品和中药材。五代人陶谷在《清异录》中有“红曲煮肉”的记载。历代多种本草，如《本草经解》、《本草从新》、《本草衍义补遗》、《本草纲目》、《本草备药》及《中药大辞典》对红曲均有记载。尤其明代李时珍《本草纲目》中对红曲的记载最为完整。综合历代本草，红曲性味甘温，无毒。归心、肝、脾、大肠经。具有活体化瘀，健脾消食、除湿祛痰功能，主治头晕、头痛、体胖多痰，心腹作痛、跌打损伤，妇女产后恶露不净等症状。红曲类产品已成为目前保健食品中辅助降血脂功能的主要产品。如CN103284060A就公开了一种含红曲霉菌和酒酿酵母的杂粮食品及其制备方法，可促进人体对营养物质的全面消化吸收，具有改善营养构成、平衡营养，益血补气、清理肠胃、清热解毒、利水消肿及促进消化等功效。
红曲霉属于真菌界(Fungi)、真菌门(Eumycota)、子囊菌亚门(Ascomycotina)、不整囊菌纲(Plectomyhcetes)、散囊菌目(Eurtoitales)、红曲科(Monascaceae)、红曲菌属(Monascus Van.tiegh.)。中科院微生物菌种保藏管理委员会正式收集编目的红曲霉有10个种58个菌株。主要有：紫红红曲霉(M.purpureus)、安卡红曲霉(M.anka)、红红曲霉(M.ruber)、巴克红曲霉(M.barken)、烟红曲霉(W.uliginosus)、发白红曲霉(M.albidus)、锈红曲霉(M.rubiginosus)、变红红曲霉(M.serorubesens)、橙红曲霉(M.aurantiacus)、丛
毛红曲霉(M.pilosus)等。
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