(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910175380.5(22)申请日 2019.03.08
(83)生物保藏信息
CGMCC NO.16246 2018.08.10CGMCC NO.16247 2018.08.10CGMCC NO.16248 2018.08.10
(71)申请人 大连理工大学
地址 116024 辽宁省大连市高新技术产业
园区凌工路2号
申请人 新疆西部牧业股份有限公司(72)发明人 徐永平 张喆 李晓宇 侯扶琴
陈红莉 吴妍妍 陈岩 王丽丽 王思佳
(74)专利代理机构 大连格智知识产权代理有限
公司 21238
代理人 刘琦
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)C05F 11/08(2006.01)C12R 1/06(2006.01)
(54)发明名称
本发明提供了一种堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法，包括步骤：S1、取有效活菌数>1×108CFU/mL的烟草节杆菌ZL -1菌液、耐寒短杆菌
ZL -2菌液、
赫氏草螺菌ZL -3菌液，按体积比1:1:1混合得发酵液；S2、将步骤S1所得发酵液与玉米芯粉按质量比2:1混合均匀，晾干至含水率≤25％，即得堆肥低温复合发酵菌剂。本发明制备的堆肥低温复合发酵菌剂可应用于新鲜粪便的秋冬季堆肥，解决寒冷环境中堆体难以启动发酵，粪便大量堆积所造成的环境污染问题。在5～10℃的环境中，加入堆肥低温复合发酵菌剂的堆体升温快、温度高，第3～4天进入高温期并持续8～10天，最高温度76.2℃，达到了我国堆肥处理
无害化标准。
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
CN 110195028 A 2019.09.03
C N 110195028
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110195028 A
1.一种堆肥低温复合发酵菌剂，其特征在于，组成包括三株兼性嗜冷型细菌，所述兼性嗜冷型细菌分别为：
烟草节杆菌(Arthrobacter nicotianae)ZL-1，保藏编号CGMCC NO.16246；耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)ZL-2，保藏编号CGMCC NO.16247；赫氏草螺菌(Herbaspirillum huttiense)ZL-3，保藏编号CGMCC NO.16248；
上述三株菌已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，将所述三株兼性嗜冷型细菌的种子液接种到液体培养基进行培养发酵，将发酵液与高温灭菌玉米芯粉充分混合，自然晾干得到具有快速升温功能的堆肥低温复合发酵菌剂。
3.根据权利要求2所述堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：
S1、分别取有效活菌数>1×108CFU/mL的烟草节杆菌ZL-1菌液、耐寒短杆菌ZL-2菌液、赫氏草螺菌ZL-3菌液，按体积比1:1:1混合得发酵液；
S2、将步骤S1所得发酵液与载体按质量比2:1混合均匀，晾干至含水率≤25％，即得堆肥复合菌剂；
所述载体为经过121℃高温灭菌20min的玉米芯粉。
4.根据权利要求3所述堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法，，其特征在于，步骤S1所述菌液的制备方法，包括步骤：
S11、菌种活化：将菌体划线接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基，在10℃培养72h，划线接种活化培养3次形成单菌落；
所述菌体为烟草节杆菌ZL-1、耐寒短杆菌ZL-2、赫氏草螺菌ZL-3中的一种；所述牛肉膏蛋白胨固体培养基为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15g，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20分钟；
S12、制作种子液：取步骤S1所得单菌落，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，15℃培养48～60小时，得到种子液；
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基为：每1000ml中含有牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，余量为水，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20分钟；
S13、制作发酵液：按体积比1％的比例将步骤S12所得种子液接种到发酵培养基中，15℃培养48～60h，得到有效活菌数>1×108CFU/mL的菌液；所述发酵培养基包括以下组分：葡萄糖3.0％(g/ml)、蛋白胨1.0％(g/ml)、淀粉3.5％(g/ml)、氯化钠1.0％(g/ml)，余量为水；pH7.0～7.2，121℃灭菌20分钟。
5.根据权利要求3所述堆肥低温复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S2所述玉米芯粉能通过40目筛。
6.权利要求2-5任一方法制备的堆肥低温复合发酵菌剂在无害化堆肥中的应用。
7.根据权利要求6所述堆肥低温复合发酵菌剂在无害化堆肥中的应用，其特征在于，使用所述堆肥复合菌剂在5～10℃发酵堆肥。
2
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