(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010546476.0
(22)申请日 2020.06.15
(71)申请人 江苏安泰生物技术有限公司
地址 225326 江苏省泰州市中国医药城四
期G60西南门四楼安泰生物
(72)发明人 闫小君 罗进
(74)专利代理机构 北京中政联科专利代理事务
所(普通合伙) 11489
代理人 尹玮
(51)Int.Cl.
A61K 35/28(2015.01)
A61K 9/19(2006.01)
A61K 47/26(2006.01)
A61P 11/00(2006.01)
A61P 25/00(2006.01)
A61K 31/05(2006.01)A61K 31/343(2006.01)A61K 31/4415(2006.01)A61K 31/519(2006.01)A61K 31/715(2006.01)
(54)发明名称
一种肺泡吸入组合物及其制备方法和其应
用
(57)摘要
本发明提供了一种肺泡吸入组合物及其制
备方法和其应用。所述肺泡吸入组合物包括干细
变后功能修复的与预防具有显著疗效。权利要求书1页 说明书10页CN 111773251 A 2020.10.16
C N 111773251
A
1.一种肺泡吸入组合物，其特征在于，所述组合物包括细胞提取物、植物提取物和药学上可接受的载体。 2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，每100mg所述的组合物中包括由3-10×108个细胞制备得到的细胞提取物、5-25mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述细胞提取物为干细胞提取物，优选为间充质干细胞提取物。 4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述植物提取物选自丹酚酸、维生素、黄芪多糖、水溶性白藜芦醇的任一种或其组合。
5.根据权利要求1-4任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：称取所需量的细胞提取物、植物提取物与药学上可接受的载体，将其均匀混合，冻干，即得。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述细胞提取物的制备方法包括下述步骤：将培养成熟的细胞重悬于原培养液上清中，破碎细胞，收集破碎液，离心去除碎片，收集上清，即得。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述植物提取物的制备方法包括下述步骤：将所需量的5％(w/w)丹酚酸B水溶液、维生素、50％(w/w)黄芪多糖水溶液、10％(w/w)水溶性白藜芦醇水溶液加入到蒸馏水中，控制溶质浓度为0.5-2g/L，混合均匀并密封，过夜，离心收集上清，再经滤膜过滤，即得。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述冻干工艺包括下述步骤：将生理盐水、细胞提取物、植物提取物、冻干保护剂溶液混合均匀后，静置，冷冻干燥，即得。
9.根据权利要求1-4任一项的肺泡吸入组合物用于制备预防和/或肺部疾病、肺部病变后功能修复、神经系统相关疾病的药物中的应用。
10.一种药物组合物，包括权利要求1-4所述的药物组合物与其他药物的组合，优选所述其他药物选自抗病毒药物、抗菌药物的任一种或其组合。
权 利 要 求 书1/1页CN 111773251 A
一种肺泡吸入组合物及其制备方法和其应用
技术领域
[0001]本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种肺泡吸入组合物及其制备方法和其应用。
背景技术
[0002]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)来源于发育早期的中胚层，是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞。间充质干细胞广泛存在于全身多处组织中，包括骨髓、脂肪、滑膜、牙髓、羊水、胎盘、脐带、胚胎等，均可分离用于制备间充质干细胞。不同来源的间充质干细胞具有相似的形态，表达相同的表面标记，具有相似的生物学特性。MSCs除了具有多向组织细胞分化能力之外，还在免疫调节、组织修复等方面发挥重要的功能调节作用，可产生干细胞生长因子(SCF)、神经生长因子(NGF)、白介素-6(IL-6)、白介素-7(IL-7)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)等细胞活性因子，参与调节细胞生长、细胞凋亡、细胞分化、抗病毒、免疫成熟等过程，可用于急性肺损伤、重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征等疾病。
[0003]徐畅等(Sci Sin Vitae，2020，50)报道了间充质干细胞(MSCs)用于COVID-19并取得了初步疗效。第一例临床试验利用人脐带来源MSCs进行三次静脉回输，结果表明，受试者中性粒细胞下降，淋巴细胞增加，CD4+T、CD8+T细胞恢复至正常水平，大部分生命体征得到改善。第二例临床试验显示，MSCs静脉移植2-4天后，受试者调节型树突细胞增大、促炎因子TNF-a水平下降、抗炎因子IL-10水平升高。结果表明，MSCs对重症患者的有益作用。但MSCs产品为“活的药物”，要求在其储存、生产、运输和应用等环节冷链运输且要求极为苛刻。为此，如何开发新型药物组合物利于提高其质量和疗效、更好地满足临床应用需求成为医药领域迫切需要解决的技术问题。
发明内容
[0004]本发明的目的之一在于提供一种肺泡吸入组合物，每100mg所述的组合物中包括由3-10×108个细胞制备得到的细胞提取物、5-25mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
[0005]本发明的优选技术方案中，所述细胞提取物为干细胞提取物，优选为间充质干细胞提取物。
[0006]本发明的优选技术方案中，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪组织间充质干细胞、滑膜间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、羊水间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、胚胎间充质干细胞、多能干细胞来源的间充质干细胞的任一种或其组合。
[0007]本发明的优选技术方案中，所述细胞提取物的制备方法包括下述步骤：将培养成熟的细胞重悬于原培养液上清中，破碎细胞，收集破碎液，离心去除碎片，收集上清，即得。[0008]本发明的优选技术方案中，所述培养成熟的细胞为传代1-10次的细胞，优选为传
代3-7次的细胞，更优选为传代5-6次的细胞。
[0009]本发明的优选技术方案中，所述重悬步骤中的细胞浓度为1-5×108/ml，优选为1.5-4×108/ml，更优选为2-3×108/ml。
[0010]本发明的优选技术方案中，所述培养液中不含有抗生素及胎牛血清。
[0011]本发明的优选技术方案中，所述培养液为DMEM/F12(1:1)培养液。
[0012]本发明的优选技术方案中，采用超声破碎法破碎细胞。
[0013]本发明的优选技术方案中，所述超声破碎条件为：超声功率为135w，超声频率为25KHz，超声30-60min。
[0014]本发明的优选技术方案中，所述离心条件为：转速为1000-3000g，离心5-10min。[0015]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物选自丹酚酸、维生素、黄芪多糖、水溶性白藜芦醇的任一种或其组合。
[0016]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的丹酚酸为浓度为5％(w/w)的丹酚酸B水溶液。
[0017]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的丹酚酸B水溶液占比为30％-60％(v/v)，优选为35％-55％(v/v)，更优选为40％-50％(v/v)。
[0018]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的维生素选自维生素B6、维生素B9的任一种或其组合。
[0019]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中维生素B6占比为5％-20％(v/v)，优选为8％-15％(v/v)，更优选为10％-12％(v/v)。
[0020]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中维生素B9占比为2％-8％(v/v)，优选为3％-7％(v/v)，更优选为5％-6％(v/v)。
[0021]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的黄芪多糖为浓度为50％(w/w)的黄芪多糖水溶液。
[0022]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中黄芪多糖水溶液占比为1％-10％(v/v)，优选为2％-8％(v/v)，更优选为5％-6％(v/v)。
[0023]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的水溶性白藜芦醇为浓度为10％(w/w)的水溶性白藜芦醇水溶液。
[0024]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中的水溶性白藜芦醇溶液占比为20％-45％(v/v)，优选为25％-40％(v/v)，更优选为30％-35％(v/v)。
[0025]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中各组份的体积比组成为：5％丹酚酸B水溶液为50％，维生素B6为10％，维生素B9为5％，50％黄芪多糖水溶液为5％和10％水溶性白藜芦醇为30％。
[0026]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中各组份的体积比组成为：5％丹酚酸B水溶液为40％，维生素B6为10％，维生素B9为6％，50％黄芪多糖水溶液为8％，10％水溶性白藜芦醇为36％。
[0027]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物中各组份的体积比组成为：5％丹酚酸B水溶液为55％，维生素B6为5％，维生素B9为8％，50％黄芪多糖水溶液为4％，10％水溶性白藜芦醇为28％。
[0028]本发明的优选技术方案中，所述药学上可接受载体选自吸附剂、分散介质、防腐
剂、稳定剂、冻干保护剂中的任一种或其组合。
[0029]本发明的优选技术方案中，所述吸附剂选自硅酸钙、硅酸镁、硅酸铝、硫酸铝、碳酸镁中的任一种或其组合。
[0030]本发明的优选技术方案中，所述分散介质选自丙二醇、丙三醇、山梨醇、聚乙二醇400-600中的任一种或其组合。
[0031]本发明的优选技术方案中，所述防腐剂选自山梨酸钾、甘油、异抗坏血酸钠、肉桂醇、乳酸、桉油醇中的任一种或其组合。
[0032]本发明的优选技术方案中，所述冻干保护剂选自葡萄糖、蔗糖、半乳糖、甘露醇、海藻糖、山梨醇、甘油、木糖醇、聚乙二醇、葡聚糖、丙氨酸、甘氨酸、精氨酸中的任一种或其组合。
[0033]本发明的优选技术方案中，每100mg所述的组合物中包括由5×108个细胞制备得到的细胞提取物、10.5mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
[0034]本发明的优选技术方案中，每100mg所述的组合物中包括由3×108个细胞制备得到的细胞提取物、8.5mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
[0035]本发明的优选技术方案中，每100mg所述的组合物中包括由1.5×108个细胞制备得到的细胞提取物、20mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
[0036]本发明的优选技术方案中，所述植物提取物的制备方法包括下述步骤：将所需量的5％(w/w)丹酚酸B水溶液、维生素、50％(w/w)黄芪多糖水溶液、10％(w/w)水溶性白藜芦醇水溶液加入到蒸馏水中，控制溶质浓度为0.5-2g/L，混合均匀并密封，4℃过夜，1500g离心10min，收集上清，再经0.22um滤膜过滤，即得。
[0037]本发明的优选技术方案中，所述的肺泡吸入组合物为无菌冻干粉。
[0038]本发明的优选技术方案中，所述冻干工艺包括下述步骤：将生理盐水、细胞提取物、植物提取物、冻干保护剂溶液混合均匀后，静置，冷冻干燥，即得。
[0039]本发明的优选技术方案中，所述冻干工艺包括下述步骤：将生理盐水：含0.5-5×108的间充质干细胞的破碎成分的细胞提取物：植物提取物溶液(溶质浓度为0.5-2g/L)：20％甘露醇溶液按照体积比为5:2:1:2量取后，混合均匀，37℃静置30-60min，-80℃预冷冻8-24h后，冷冻干燥12-24h，即得组合物冻干粉。
[0040]本发明的优选技术方案中，所述的组合物冻干粉于4℃低温保存。
[0041]本发明的优选技术方案中，所述的肺泡吸入组合物经雾化处理后被肺泡吸入。[0042]本发明的优选技术方案中，所述的肺泡吸入组合物被雾化成颗粒后被肺泡吸入。[0043]本发明的优选技术方案中，所述雾化颗粒的空气动力学粒径为0.1-10μm，优选为0.3-5μm，更优选为0.5-2μm。
[0044]本发明的另一目的在于提供所述肺泡吸入组合物的制备方法，包括如下步骤：称取所需量的细胞提取物、植物提取物与药学上可接受的载体，将其均匀混合，冻干，即得。[0045]本发明的优选技术方案中，每100mg所述的组合物中包括由3-10×108个细胞制备得到的细胞提取物、5-25mg植物提取物(溶质质量)和药学上可接受的载体。
[0046]本发明的优选技术方案中，所述细胞提取物为干细胞提取物，优选为间充质干细胞提取物。
[0047]本发明的优选技术方案中，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充
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