一种抑制胆红素和TRPM2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用的制作方法

一种抑制胆红素和trpm2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种抑制胆红素和trpm2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用。

背景技术：

2.脑卒中(也称中风)是造成成年人死亡和残疾的主要原因之一。脑卒中的最典型的病理改变是动脉粥样硬化、房颤、高血压和糖尿病等因素所导致的脑组织血流灌注的中断。根据病理改变的原因不同，可以分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中尤以前者最为常见，大约80％的脑卒中可以归为此类。在缺血性脑卒中患者，循环中的血栓或局部血管中粥样硬化斑块形成后阻塞大脑血管(如大脑中动脉)，引起和氧气供应的中断，导致神经细胞的死亡，最终对脑组织的结构和功能产生损伤。在脑卒中期间，脑组织由于缺血缺氧会引起谷氨酸的大量释放，激活n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdars)，从而诱导ca
2+
内流，使神经元胞内ca
2+
稳态遭到破坏，最终引起胞内ca
2+
超载；同时，nmdars下游细胞死亡信号的ca
2+
依赖性激活触发了大量的级联反应，这些级联反应协同工作，共同诱导神经元发生死亡。在卒中的发生过程中，梗塞灶中心和低灌注的脑实质区域会有炎症反应的出现，常常还会伴发酸中毒、活性氧自由基(ros)和活性氮自由基(rns)的增多等，而这些病理改变可能会进一步激活其他非选择性阳离子通道，如：酸敏感离子通道(asics)和瞬时受体电位m型通道(trpm)等，从而最终共同加剧脑损伤。尽管针对缺血性脑卒中的开展了大量的研究工作，但是针对nmdars的临床前疗效不错的药物却很少能够成功的推广到临床阶段，这一困境迫使医生和研究人员进一步的明确脑卒中的损伤机制和潜在的新的靶点。
3.有研究表明，脑卒中的损伤和人体胆红素水平的升高有关。胆红素作为哺乳动物血红素分解代谢的最终产物，其正常生理水平较低(＜1mg/dl)，异常升高的胆红素可导致皮肤、巩膜和粘膜呈黄染，从而被诊断为高胆红素血症(即黄疸)。成人黄疸可由多种良性病理改变或危及生命的疾病所引起，如：病毒性肝炎、原发性胆汁性肝硬化以及原发性硬化性胆管炎等。高胆红素血症时，体内非结合胆红素(ucb)水平升高，而ucb具有亲脂性的特点，并且缺血性卒中时血脑屏障的完整性遭到破坏，这一改变加剧了ucb在脑组织和外周组织之间的交换，造成更多的胆红素进入脑内。脑内急剧升高的胆红素可以诱发内质网应激、炎症反应等病理改变破坏神经元胞内ca
2+
稳态，最终导致神经元损伤和凋亡。更为关键的是，有研究发现在急性缺血性脑卒中患者中发现胆红素水平的异常升高，并且升高的程度和卒中的严重程度成正相关。但是，究竟是脑卒中引起了胆红素水平的异常变化还是升高的胆红素水平加重了脑卒中的损伤目前仍旧不清楚。目前关于胆红素的神经毒性虽然开展了大量的研究工作，但是其具体机制和作用靶点都尚不明确。本发明人既往的研究以及其他人的研究结果普遍认为胆红素诱导的神经元胞内ca
2+
超载和超兴奋性作用是其主要的损伤机制。尽管诸多研究都表明，胆红素可以通过调节多种离子通道的开放影响神经元的兴奋性和ca
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离子水平，但是胆红素是否能够直接从细胞外打开某种ca
2+
通透性的离子通道
并启动ca
2+
依赖的信号级联放大过程，从而最终导致神经元损伤和死亡，这一点仍旧处于未知的状态。而trpm2通道作为一种高通透ca
2+
的非选择性阳离子通道，可以通过调节多种胞内信号通路，如：胰岛素的分泌、炎症细胞的迁移和凋亡等，介导多种生理和病理过程。更为重要的是，trpm2通道在脑组织中表达量极其丰富，它还可以作为氧化应激状态的感受器，通过结合胞内生成的腺苷二磷酸核糖(adpr)和ca
2+
打开通道，进而参与到氧化应激或炎症反应的过程。通过传统的nmdars途径内流的ca
2+
和异常升高的adpr水平导致trpm2通道在内的多个trp通道的开放被认为是脑卒中缺血和再灌注过程中诱导细胞死亡的主要途径，鉴于单独针对nmdars的临床试验中所表现出的诸多不足，我们推测：缺血性脑损伤过程中，除了nmdars途径之外，应该还存在其他关键的机制介导了相关的脑损伤。结合上述分析我们认为，这一额外机制可能和trpm2通道有关，然而trpm2通道能否独立地作为细胞外内源性激动剂的受体产生相应的作用目前尚缺乏研究。

技术实现要素：

4.为了克服现有技术中的缺陷，本发明基于内源性代谢产物
‑‑‑
胆红素作为胞外激动剂直接结合于trpm2通道的k928和/或d1069位点加重脑卒中所致脑损伤，提供了一种抑制胆红素和trpm2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用。
5.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
6.本发明的第一方面是提供一种竞争性抑制或阻断胆红素和trpm2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用。
7.进一步地，上述化合物或者试剂竞争性结合trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点或促进trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点发生突变。
8.进一步地，突变的类型为取代突变。
9.进一步地，上述trpm2通道蛋白具有k928a和/或d1069a的取代突变。
10.进一步地，上述trpm2通道蛋白具有k928a和d1069a的取代突变。
11.本发明的第二方面是提供一种脑卒中的药物，其包括竞争性抑制或阻断胆红素和trpm2通道结合的化合物或者试剂作为主要活性成分。
12.进一步地，上述化合物或者试剂促进trpm2通道蛋白发生突变进而阻碍胆红素激活trpm2通道，该发生突变的氨基酸残基位点为k928和/或d1069；优选地，突变的类型为取代突变；较为优选地，trpm2通道蛋白具有k928a和/或d1069a的取代突变；更优选地，trpm2通道蛋白具有k928a和d1069a的取代突变；或
13.上述化合物或者试剂竞争性结合trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点进而阻碍胆红素激活trpm2通道。
14.进一步地，上述药物还包括药学上可接受的载体或者赋形剂。
15.进一步地，上述药物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。
16.本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
17.本发明验证了胆红素可以作为细胞外内源性激动剂直接结合trpm2通道加重卒中所致脑组织损伤，k928和/或d1069位点是其发挥作用的关键氨基酸残基，k928和/或d1069位点发生突变或者被竞争性结合将阻碍胆红素激活trpm2通道，更为重要的，d1069a取代突变(小鼠对应位点突变为d1066a)可以有效拮抗胆红素的神经损伤效果，为减轻和缺血
性脑卒中提供了潜在的靶点。
附图说明
18.图1显示了高胆红素可以加重野生型小鼠缺血性脑损伤；其中，图1a为缺血性脑卒中动物模型脑组织的切片染图片以及脑组织梗死体积的统计结果；图1b分别显示了小鼠血清(serum)和脑脊液(csf)中总胆红素浓度(tb)与脑组织梗死体积大小的相关性分析；图1c分别显示了trpm2
+/+
/trpm2-/-小鼠血清和脑脊液中的ucb浓度；
19.图2显示了胆红素可以直接结合并激活trpm2通道；其中，图2a显示了转染trpm2通道的hek-293细胞的全细胞式膜片钳记录结果；图2b显示了单通道记录结果，说明胆红素是作为激动剂直接结合于trpm2引起通道的开放；图2c显示了给予-80到+80mv的电压刺激(20mv递增)时，在胆红素作用下单通道电流的记录结果，并对平均电流幅度进行拟合，计算单通道电导为76.29 7.85ps，这和正常trpm2通道的电导大小一致；
20.图3显示了k928/d1069是胆红素激活trpm2通道产生损伤作用的关键位点；其中，图3a和图3b显示了分子对接计算机模拟结果；图3c显示了转染双突变(k928a/d1069a)trpm2通道的hek293细胞进行全细胞膜片钳记录的结果：该双突变trpm2通道依旧可以被其传统激动剂adpr激活，并且trpm2通道阻断剂氟灭酸(ffa)可以完全阻断通道的开放；图3d显示了双突变对trpm2通道本身并未造成损伤：即在双突变trpm2通道adpr激活的电流大小与正常野生型(wt)trpm2通道无异；图3e显示了k928a/d1069a的双突变直接影响了胆红素打开trpm2通道的过程；
21.图4显示了在k928a、d1069a单位点突变以及双位点突变的情况下，胆红素对trpm2通道的作用；其中，图4a和图4b分别显示了胆红素对k928a和d1069a单突变的trpm2通道的作用，图4c显示了三种突变类型下，胆红素激活trpm2通道的电流幅度对比；
22.图5显示了胆红素结构类似物
‑‑‑
胆红素二钠盐(bds)同样可以作为激动剂直接激活trpm2通道，bds不能透过细胞膜，只能从胞外产生作用，并且其作用可以被a23竞争性拮抗/预防，最终避免脑组织免受相应的损伤；图5a和5b显示了bds和a23在胆红素结合口袋区域与trpm2通道结合时相互作用的氨基酸位点及作用力(关闭状态对接得分：a23-8.57＞胆红素-5.04＞bds-4.47；开放状态对接得分：胆红素-7.84＞a23-7.38＞bds-5.60)；图5c到5f显示了a23不仅可以竞争性抑制bds的激活作用，还可以提前预防bds激活trpm2电流；图5g和5h显示了a23通过结合于关键结合位点(k928/d1069a)抑制胆红素激活trpm2通道，最终抑制胆红素的神经损伤作用；
23.图6显示了在d1066a基因突变小鼠中胆红素不再具有神经损伤作用；其中，图6a显示了d1066a基因小鼠缺血性脑卒中造模后脑组织的切片染图片以及脑组织梗死体积的统计结果；图6b分别显示了对照组(ctrl)和高胆红素组(bil)d1066a小鼠血清(serum)和脑脊液(csf)中的ucb浓度。
具体实施方式
24.本发明提供了一种抑制胆红素和trpm2通道结合的化合物在制备脑卒中药物中的应用。下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
25.实施例中方法如无特殊说明的采用常规方法，使用的试剂如无特殊说明的使用常规市售试剂或按常规方法配制的试剂。
26.实施例1
27.本实施例在体动物模型探究高胆红素血症对缺血性脑卒中所致神经损伤的影响，具体的实验步骤和结果如下：
28.①
短暂性大脑中动脉闭塞(tmcao)动物模型构建
29.a)选取体重20-25g、年龄在6-8周的野生型(trpm2
+/+
)和trpm2基因敲除(trpm2-/-)的小鼠，2％异氟烷诱导麻醉，麻醉诱导成功后，以1.5％的浓度维持麻醉。
30.b)避光称量适量的胆红素溶解于1mol/l的naoh中，完全溶解后，用稀盐酸调节ph至7.4-8.0，手术前30分钟腹腔注射配置好的胆红素溶液(剂量：50μg/g)，对照组动物给予等量的生理盐水。
31.c)剪开麻醉后小鼠颈部正中皮肤，分离皮下组织，暴露右侧颈总动脉，进一步分析血管旁组织，清晰游离出颈内动脉和颈外动脉，剪断并结扎颈外动脉，同时暂时性结扎颈总动脉和颈内动脉，于颈外动脉剪一个小切口，将线栓插入颈外动脉并固定，松开颈内动脉的线节，将线栓从颈外动脉插入颈内动脉，并持续缓慢插入至有阻力出现为止。缺血30分钟后，拔出线栓，永久性结扎颈外动脉，并放开颈总动脉，缝合颈部伤口，将动物放置于37℃加热垫待其复苏，复苏后归笼。
32.②
手术前后模型动物血清、脑脊液ucb浓度检测
33.a)手术前、后24小时分别对实验动物进行眼眶静脉丛采血和脑脊液收集，具体步骤如下：腹腔注射麻醉((55mg/kg)，将麻醉好的小鼠固定于立体定位系统。剪开头骨上方颈部到眼睛之间的皮肤充分暴露颅骨，在右侧脑室正上方磨掉外侧骨质，将微量注射器缓慢插入侧脑室(坐标：前囟右侧1.1mm，后方0.5mm，深度2.5mm)。利用微量注射泵缓慢抽吸脑脊液(速度：0.2μl/min)，脑脊液抽取完成后拔出微量注射器并缝合皮肤。从立体定位仪取下小鼠，通过眼眶静脉丛采取适量血液。将实验动物放置于37℃加热垫，待其复苏后归笼。
34.b)血清和脑脊液胆红素浓度检测：制备含有50μl胆红素荧光蛋白unag溶液(浓度2μm)，50μl稀释的血清或脑脊液加入到unag溶液中，设置多功能酶标仪，在37℃下使用光栅激发和发射波长分别为485nm和528nm检测10分钟，利用unag标准曲线计算出ucb的浓度。总胆红素浓度利用sigma检测试剂盒进行检测。
35.③
缺血性脑卒中动物模型脑组织梗死体积(infarct volume)检测
36.手术后24小时的实验动物腹腔注射麻醉，收集完血液和脑脊液后断头处死，分离脑组织，放入模具中进行切片(厚度1mm)，将脑片放入2％的2,3,5-三苯基四唑氯化物(ttc)溶液中37℃染20分钟，染完成后imagej软件计算梗死比例。
37.如图1a所示，在trpm2
+/+
小鼠，高胆红素组(bil)小鼠梗死体积较对照组(ctrl)显著增加，而trpm2-/-组小鼠脑组织损伤不受胆红素的影响；并且trpm2
+/+
小鼠血清和脑脊液中总胆红素浓度和梗死体积成正相关，trpm2-/-小鼠总胆红素浓度和梗死体积无任何相关性(图1b)；trpm2
+/+
小鼠bil组血清和脑脊液ucb浓度都显著高于对照组，而trpm2-/-小鼠两组之间无统计学差异(图1c)。
38.综上所述，高胆红素可以加重野生型小鼠缺血性脑损伤。
39.实施例2
40.本实施例利用电生理膜片钳技术研究胆红素是否可以直接激活trpm2通道，具体的实验步骤和结果如下：
41.①
细胞外液配方(mm)：145nacl，5.6kcl，2mgcl2，1.2cacl2，10hepes，10glucose，naoh调ph至7.4，渗透压调节至290-320mosm。
42.②
电极内液配方(mm)：147nacl，1mgcl2，1egta，10hepes，naoh调ph至7.4，渗透压调节至290-320mosm。
43.③
全细胞膜片钳记录：转染trpm2通道的hek-293细胞放置在含有标准细胞外溶液的培养皿中，使用倒置显微镜观察细胞，在显微镜下使用微操将玻璃电极放置在细胞上进行封接，形成高阻封接(＞1gω)后进行破膜，形成全细胞式膜片钳记录。转染细胞被电压钳制在0mv，每5s给予从-100mv到+100mv(500ms持续时间)的斜坡电压以记录trpm2电流是否激活，每皿细胞仅记录一次。
44.④
单细胞膜片钳记录：使用电阻为6-8mω的玻璃电极，在外面朝外式记录模式下进行单通道记录，通过观察单通道记录模式下trpm2电流激活情况探究胆红素是否为trpm2通道的直接激动剂。形成单通道记录之后，分别给予-80mv到+80mv(20mv增加幅度)的膜电压，通过不同电位下平均电流振幅的线性回归拟合，从斜率计算其电导，对比其是否和trpm2常规电导大小相一致。
45.如图2a所示，全细胞膜片钳记录模式下，可以看到胆红素可以激活trpm2电流，但无法区分是直接作用还是间接作用；结合单通道记录结果(图2b)，可以确定胆红素是作为激动剂直接结合于trpm2引起通道的开放。胆红素激活trpm2通道的电导为76
±
7.85ps(图2c)，符合既往研究结果(60-90ps)。
46.实施例3
47.本实施例利用分子计算机模拟寻胆红素和trpm2通道作用的关键结合位点，具体的实验步骤和结果如下：
48.trpm2通道的蛋白结构来自蛋白质数据库(pdb id：6pus，6puo)。胆红素的3d结构由pubchem化合物库(pubchem cid：5280352)获得。分子对接使用maestro软件进行模拟。在对接之前，使用标准程序对蛋白质进行处理，以添加缺失的残基、去除水、优化氢键和能量，使用ligprep模块对配体进行优化等。选取尺寸为的网格区域内的位点和胆红素进行对接模拟，分析具有最高对接分数的构象，以确定配体和结合区域氨基酸残基之间的关键分子相互作用，从而寻关键作用位点。
49.如图3a和3b所示，胆红素主要是通过和trp螺旋、s3、s5形成的口袋状结构域中的d866、w868、k928和d1069氨基酸位点的相互作用而结合于trpm2通道。胆红素和相互作用位点作用力强弱如下表1所示，根据作用力强弱分析，k928和d1069是关键作用位点的可能性最大。
50.表1胆红素和trpm2通道相互作用氨基酸位点残基(residue)作用力强度分析
[0051][0052]
实施例4
[0053]
本实施例利用点突变技术和电生理膜片钳技术验证胆红素的作用在突变trpm2通道是否丧失，具体的实验步骤和结果如下：
[0054]
利用分子对接计算机模拟的结果对trpm2通道进行单突变(k928a或d1069a)和双点突变(k928a/d1069a)，突变体构建过程大致如下：利用设计好的引物进行pcr扩增目的基因，表达载体酶切后进行回收载体片段，目的基因与载体片段同源重组后转换e.coli感受态细胞，用菌落pcr鉴定转化子，阳性克隆进行测序，测序无误的克隆进行质粒抽提。
[0055]
突变后再进行电生理膜片钳实验(全细胞膜片钳记录)，操作过程同实施例2。
[0056]
由图3c可知，adpr作为经典的trpm2激动剂的作用完全不受影响，且adpr在k928a/d1069a双突变体激活的trpm2电流(current)幅度和野生型trpm2通道无差异(图3d)，说明双突变对trpm2通道本身并未造成损伤；然而，胆红素对双突变trpm2通道的作用完全消失(图3e)，说明k928a/d1069a的双突变直接影响了胆红素打开trpm2通道的过程，也即胆红素正是通过作用于k928/d1069产生作用。
[0057]
由图4可知，和wt-trpm2通道相比，在两个单突变体中，胆红素的激活作用都有显著的下降，且三种突变方式之间并没有统计学差异(one-way anova)。
[0058]
实施例5
[0059]
本实施例利用胆红素结构类似的衍生物(胆红素二钠盐bds)进行分子计算机对接模拟实验、电生理膜片钳技术验证和离体脑组织细胞死亡实验评估，具体实验步骤和结果如下：
[0060]
利用分子计算机对接技术模拟bds和a23通过作用于胆红素结合口袋激活/抑制trpm2通道的状态，具体操作过程同实施例4。由图5a和5b可以看到，bds作为trpm2通道的激动剂，它需要通过与k725、l862、n869、k870、k928、k932氨基酸残基进行交互作用形成氢键和盐桥结合于作用区域，而a23通过与k928形成h键和盐桥，以更强的结合力更合适的结合于此口袋区域中(关闭状态对接得分：a23-8.57＞胆红素-5.04＞bds-4.47；开放状态对接得分：胆红素-7.84＞a23-7.38＞bds-5.60)。
[0061]
接下来利用电生理膜片钳技术验证a23对bds激活作用的影响，分别在bds作用前后灌流a23观察对trpm2电流的影响。由图5c-5f可以看到，a23不仅完全抑制了bds激活的trpm2电流，而且预先使用a23还可以阻止trpm2通道的激活；通过a23拮抗效果的浓度依赖性分析还发现，a23竞争抑制胆红素和bds的半数有效浓度都低至纳摩尔级别(ic50分别为
0.92μm和0.72μm)。
[0062]
鉴于a23与trpm2通道中胆红素结合腔的亲和力很高，接下来通过体外细胞死亡试验来检测a23是否能减轻胆红素的神经毒性，分别用calcein-am和pi标记存活和死亡的皮层神经元(图5g)，具体过程如下：
[0063]
①
年龄4-8周的trpm2
+/+
小鼠，1％腹腔注射麻醉(55mg/kg)后，急性分离小鼠脑组织后，振动切片机获得150μm厚的脑片。
[0064]
②
孵育完成后对脑片分组进行处理(具体为：对照组、胆红素组和胆红素+a23组)，处理完成后使用calcein-am(1μm)和pi(2μm)分别对活细胞和死亡细胞进行染。
[0065]
③
染完成后用4％多聚甲醛避光固定40分钟，最后进行共聚焦成像。利用image-j软件进行细胞计数计算死亡率。
[0066]
由结果可知，在成年trpm2
+/+
小鼠脑片中，胆红素孵育1h后显著提高皮层神经元死亡率，而a23可以完全拮抗胆红素的这种作用(图5h，ctrl：35.01
±
1.49％，n＝6；bil：60.84
±
2.13％，n＝6；bil+a23：35.27
±
1.85％，n＝11)。这些结果表明，trpm2通道中的胆红素结合区域是a23样结构的化合物在脑卒中及其它hb(黄疸)相关脑损伤中降低胆红素依赖性神经毒性的理想药物靶点。
[0067]
实施例6
[0068]
本实施例利用d1066a点突变基因小鼠进行缺血性脑卒中造模，探索关键结合位点(d1066a)突变对胆红素所致神经损伤的影响，具体的实验步骤同实施例1，大致如下：
[0069]
①
短暂性大脑中动脉闭塞(tmcao)动物模型构建
[0070]
②
手术后模型动物血清、脑脊液ucb浓度检测
[0071]
③
缺血性脑卒中动物模型脑组织梗死体积(infarct volume)检测
[0072]
如图6a所示，在d1066a小鼠，高胆红素组(bil)小鼠梗死体积较对照组(ctrl)并未出现明显变化，并且bil组血清和脑脊液ucb浓度也都维持在和ctrl组相同的水平(图6b)。
[0073]
综上所述，d1066a(人trpm2对应位点为d1069a)突变可以有效拮抗胆红素所致的缺血性脑损伤。
[0074]
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

技术特征：

1.一种竞争性抑制或阻断胆红素和trpm2通道结合的化合物或者试剂在制备脑卒中药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物或者试剂竞争性结合trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点或促进trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点发生突变。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，突变的类型为取代突变。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述trpm2通道蛋白具有k928a和/或d1069a的取代突变。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述trpm2通道蛋白具有k928a和d1069a的取代突变。6.一种脑卒中的药物，其特征在于，包括竞争性抑制或阻断胆红素和trpm2通道结合的化合物或者试剂作为主要活性成分。7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述化合物或者试剂促进trpm2通道蛋白发生突变进而阻碍胆红素激活trpm2通道，所述发生突变的氨基酸残基位点为k928和/或d1069；优选地，突变的类型为取代突变；较为优选地，trpm2通道蛋白具有k928a和/或d1069a的取代突变；更优选地，trpm2通道蛋白具有k928a和d1069a的取代突变；或所述化合物或者试剂竞争性结合trpm2通道蛋白的k928和/或d1069位点进而阻碍胆红素激活trpm2通道。8.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，还包括药学上可接受的载体或者赋形剂。9.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物的给药途径为口服、透皮、肌肉、皮下或静脉注射。

技术总结

本发明提供了一种竞争性抑制或阻断胆红素和TRPM2通道结合的化合物或试剂在制备脑卒中药物中的应用，该化合物或者试剂竞争性结合TRPM2通道蛋白的K928和/或D1069位点或促进TRPM2通道蛋白的K928和/或D1069位点发生突变。本发明验证了胆红素可以作为细胞外内源性激动剂直接结合TRPM2通道加重卒中所致脑组织损伤，K928和/或D1069位点是其发挥作用的关键氨基酸残基，K928和/或D1069位点发生突变或者被竞争性结合将阻碍胆红素激活TRPM2通道，其中D1069(小鼠对应位点D1066)突变可以有效拮抗胆红素的神经损伤效果，为减轻和缺血性脑卒中提供了潜在的靶点。脑卒中提供了潜在的靶点。脑卒中提供了潜在的靶点。

技术研发人员：

殷善开 时海波 刘汉玮 赖轲 王路阳

受保护的技术使用者：

上海市第六人民医院

技术研发日：

2022.10.10

技术公布日：

2022/12/19