(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910149174.7
(22)申请日 2019.02.28
(71)申请人 浙江宝录检测技术有限公司
地址 314000 浙江省嘉兴市经济技术开发
区昌盛南路36号智慧产业园16幢501
室
(72)发明人 谢艳 赵红阳 杨洁 李天顺
李珏
(74)专利代理机构 大连博晟专利代理事务所
(特殊普通合伙) 21236
代理人 于忠晶
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
C12N 1/04(2006.01)
C12Q 1/04(2006.01)
C12R 1/145(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明属于药品微生物学检测方面的质量
控制领域，特别涉及一种生孢梭菌适用性试验菌
株及其制备方法。生孢梭菌适用性试验菌株仅包
含一定量的生孢梭菌。本发明均匀性、稳定性符
合适用性试验菌株要求，菌株所含菌数在适用性
试验标准要求范围内，最大程度满足药品微生物
检测过程中适用性试验、促生长试验等需要，样
品的制备方法，工艺简单，
成功率高。权利要求书1页 说明书8页 附图1页CN 109971673 A 2019.07.05
C N 109971673
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109971673 A
1.生孢梭菌适用性试验菌株，其特征是：仅包含一种目标菌：生孢梭菌，目标菌的目标浓度为500～2000CFU/支，每支装有0.2g的冻干粉。
2.根据权利要求1所述的生孢梭菌适用性试验菌株，其特征是：所述样品属药品检查中适用性试验用菌株，应用于药品微生物检测过程中适用性试验。 3.根据权利要求1所述的生孢梭菌适用性试验菌株，其特征是：所述适用性试验菌株以海藻糖、明胶和无菌水为基质，其中海藻糖体积分数为10％、明胶体积分数为1%。
4.根据权利要求1所述的生孢梭菌适用性试验菌株的制备方法，其特征是：包括样品添加菌株的配制、冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验、样品定值五个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌液分装—菌悬液配制—冻干和包装—储存，具体过程为：
（1）菌株复苏传代
将标准菌株接种到梭菌增菌培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；
（2）增菌
目标菌培养至对数生长期末，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成菌液；
（3）菌液分装
将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，配制100mL菌液，将此菌液置于磁力搅拌器上不断搅拌下平均分装到菌液储存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存备用；
（4）菌悬液配制
按目标菌的目标浓度500～2000 CFU/支，取适量上述5mL菌液与1500mL冻干保护剂混合，置于磁力搅拌器上不断搅拌下分装到样品瓶中，0.3mL/瓶，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实；
（5）冻干和包装
将装有菌悬液的样品瓶开盖放入冻干机中，冷冻干燥40～50h，当样品冷冻干燥结束后，直接进行箱内加塞，关闭机器，样品瓶中样品为真空状态；
（6）储存
将样品放置在-18℃条件下避光保存，从全部样品中随机挑选样品发放给实验室或进行均匀性和稳定性试验。
5.根据权利要求4所述的生孢梭菌适用性试验菌株的制备方法，其特征是：所述冻干保护剂为含有海藻糖和明胶的无菌水，其中体积分数分别为：海藻糖10%、明胶1%；一次性配制相同浓度的菌液，可重复制备多批次相同量值范围的适用性试验菌株。
6.根据权利要求4所述的生孢梭菌适用性试验菌株的制备方法，其特征是：所述样品的均匀性和稳定性试验按照均匀性和稳定性试验参照GB/T 15000.3-2008《标准样品工作导则（3）标准样品定值的一般原则和统计方法》进行。
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