[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101420972A [43]公开日2009年4月29日
[21]申请号200780013243.7[22]申请日2007.03.19
[21]申请号200780013243.7
[30]优先权
[32]2006.03.20 [33]US [31]60/784,130
[86]国际申请PCT/US2007/006787 2007.03.19
[87]国际公布WO2007/109221 EN 2007.09.27
[85]进入国家阶段日期
2008.10.13[71]申请人惠氏公司
地址美国新泽西州
[72]发明人N·W·沃恩 A·坎托尔 T·J·克劳利
E·C·索利 李黎 N·G·卢克沙 E·A·
奈德哈德 [74]专利代理机构北京市中咨律师事务所代理人黄革生 林柏楠[51]Int.CI.A61K 38/20 (2006.01)A61K 38/37 (2006.01)A61K 39/395 (2006.01)
A61K 47/18 (2006.01)
C07K 16/28 (2006.01)
权利要求书 3 页 说明书 35 页 附图 15 页
[54]发明名称
[57]摘要
法，以及具有聚集降低的性质的蛋白质制剂。此处
说明的方法和制剂保持了蛋白质的生物活性，延长
了蛋白质制剂的保存期限。
200780013243.7权 利 要 求 书第1/3页 1、一种降低蛋白质制剂中蛋白质的聚集的方法，包括向制剂中加入甲硫氨酸至浓度为约0.5mM到约145mM，其中，与没有甲硫氨酸的制剂中的蛋白质聚集相比，所述方法使得制剂中的蛋白质聚集降低。
2、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂为液体制剂或冷冻干燥粉剂。
3、权利要求1所述的方法，其中蛋白质浓度在约0.1mg/ml和约300 mg/ml之间。
4、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂包含表面活性剂。
5、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂包含氨基酸，其选自由精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和谷氨酸所组成的组。
6、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂包含张度调节剂。
7、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂包含糖。
8、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂还包含降低制剂中的蛋白质聚集的试剂。
9、权利要求1所述的方法，其中蛋白质聚集不是甲硫氨酸氧化的结果。
10、权利要求1所述的方法，其中在向制剂中加入甲硫氨酸之前和/或之后评估制剂中的蛋白质的聚集。
11、权利要求10所述的方法，其中用SEC-HPLC、AUC、光散射和紫外吸光率评估聚集。
12、权利要求1所述的方法，其中用％HMW物质评估聚集，且与没有甲硫氨酸的制剂中的％HMW物质相比，％HMW物质降低了约30％。
13、权利要求1所述的方法，其中在蛋白质制剂中加入甲硫氨酸后1周到12周之间，或在蛋白质制剂中加入甲硫氨酸后1个月到36个月之间，评估制剂中的蛋白质聚集。
14、权利要求1所述的方法，其中具有甲硫氨酸的蛋白质制剂配制后，在4℃到50℃之间的温度储存约1周到约12周后，评估制剂中的蛋白质聚
集。
15、权利要求1所述的方法，其中具有甲硫氨酸的蛋白质制剂配制后，在4℃到30℃之间的温度储存约1个月到约36个月后，评估制剂中的蛋白质聚集。
16、权利要求1所述的方法，其中制剂中的蛋白质的聚集由剪切应力、储存、升高温度储存、暴露于光、pH、表面活性剂的存在、及这些的组合所导致。
17、权利要求1所述的方法，其中制剂中加入甲硫氨酸的终浓度在约1mM和约25mM之间。
18、权利要求1所述的方法，其中制剂的pH在约5.0和约7.0之间。
19、权利要求1所述的方法，其中蛋白质制剂包含缓冲剂，其选自由柠檬酸盐、琥珀酸盐、组氨酸、T r i s、及这些的组合所组成的组。
20、权利要求1所述的方法，其中该方法延长制剂的保存期限，或保持制剂的效力。
21、权利要求1所述的方法，其中蛋白质不含甲硫氨酸残基或包含少于5个甲硫氨酸残基。
22、一种降低受到剪切应力的蛋白质制剂中蛋白质的聚集的方法，包括向制剂中加入甲硫氨酸至浓度约0.5mM到约145mM，其中，与没有甲硫氨酸的制剂中的蛋白质聚集相比，所述方法使得制剂中的蛋白质聚集降低。
23、权利要求22所述的方法，其中剪切应力由震动、吸入注射器和纯化过程、及这些的组合所导致。
24、一种降低蛋白质制剂中蛋白质效力或生物活性丧失的方法，其中制剂在室温储存多于一天，所述方法包括向制剂中加入甲硫氨酸至浓度约0.5mM到约145mM，与没有甲硫氨酸的制剂中的蛋白质相比，使得制剂中的蛋白质的效力或生物活性的丧失降低。
25、权利要求24所述的方法，其中蛋白质制剂在荧光下储存。
26、权利要求24所述的方法，其中蛋白质制剂在黑暗中储存约1个月。
27、一种降低蛋白质制剂中蛋白质聚集的方法，包括：
(i)向制剂中加入甲硫氨酸至浓度约0.5m M到约145m M；和 (ii)用SEC-HPLC测定制剂中的蛋白质的％HMW水平；
其中，与没有甲硫氨酸的制剂中的蛋白质聚集相比，所述方法使得制剂中的蛋白质聚集降低。
28、权利要求27所述的方法，其中所述方法使得蛋白质制剂中的％HMW物质少于约5％，％HMW物质由SEC-HPLC测定。
29、一种蛋白质制剂，其包含如下之一：抗B7.1抗体、抗B7.2抗体、抗CD22抗体、PSGL-Ig和因子VIII、或它们的生物活性片段；并包含约0.5mM到50mM甲硫氨酸。
30、权利要求29所述的制剂，还包含1-150mM氨基酸，所述氨基酸选自由精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸所组成的组。
200780013243.7说 明 书第1/35页
降低蛋白质聚集的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求美国临时申请号60/784,130的优先权，该临时申请于2006年3月20日递交，发明名称为“降低蛋白质聚集的方法”，其全部内容在此通过引用并入本文中。
技术领域
本领域涉及降低蛋白质聚集的方法，以及聚集水平降低的蛋白质制剂。技术背景
人类基因组计划的完成，伴随着蛋白质分离和纯化方法改进的发展，使蛋白质制剂的大量生产得以实现。事实上，有百种以上的重组蛋白质处在I期或其后的临床试验阶段，有几十种得到了美国食品药品管理局的许可。确保蛋白质或肽以生物活性形式有效、安全递送的制剂，是当前和未来生物技术产品取得商业成功的关键。
不幸的是，蛋白质具有独特的物理和化学性质，对配制和开发造成了困难。蛋白质的物理和化学不稳定性为研发合适的蛋白质制剂造成极大的挑战。最常见的蛋白质物理不稳定性是蛋白质聚集，和宏观上与其相当的沉淀。对于想要合成、加工、并以可能的最高浓度长时间储存蛋白质的生物技术和制药行业来说，蛋白质聚集的倾向是尤为棘手的问题。 尽管促使蛋白质聚集的机制尚未完全了解，这样的最终结果是人们所不愿看到的。药物组合物中多肽聚集体的形成可对该多肽的生物活性造成不利影响，使得药物组合物的效果降低。此外，聚集状态的蛋白质可致免疫，甚至可在体内造成急性中毒效应。另外，聚集体形成可在蛋白质
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