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免疫测定测试条的制作方法

免疫测定测试条
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2021年2月14日提交的美国临时申请第63/149,321号的权益，该申请的全部内容据此通过引用并入。
技术领域
3.本公开总体上涉及免疫测定装置、测试系统和方法。更具体地，本公开涉及一种免疫测定测试条，其包括用于指示样本的充足性的试剂测试线，使得由于样本中不存在感兴趣的分析物而导致的阴性测试结果可以与由于样本质量、数量或组成差而导致的阴性测试结果区分开来。

背景技术：

4.本文所描述的免疫测定系统提供可靠、廉价、便携、快速和简单的诊断测试。免疫测定可以快速准确地检测样本中感兴趣的分析物的存在与否，并且在一些情况下量化样本中感兴趣的分析物。有利地，大多数免疫测定是微创的并且用作即时测试系统。已经开发了免疫测定来检测多种医学或环境分析物。然而，免疫测定有许多缺点，包括假阴性、不准确的低结果，以及当样本中存在高浓度的感兴趣的分析物时缺乏分辨率。

技术实现要素：

5.本文公开了一种免疫测定测试条，其包含：流动路径，其被配置为接纳样本；样本接纳区，其联接到所述流动路径；至少一个样本充足性线；以及至少一个分析物捕获线。参考免疫测定测试条描述了本公开的实施方式，但是应理解，根据本公开，在不使用测试条形式的免疫测定中也可以使用样本充足性标志来指示样本的充足性，包括但不限于使用基于平板或孔板的测定、luminex测定、elisa测定、基于珠的测定和微阵列测定进行的测定。在一些实施方式中，所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含人白蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗hsa抗体。在一些实施方式中，所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含乳运铁蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗乳运铁蛋白抗体。在一些实施方式中，所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在和丰度取决于所述样本的数量、质量和/或组成。在一些实施方式中，所述样本还包含至少一种感兴趣的分析物。在一些实施方式中，所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在和丰度取决于供体的疾病状态。在一些实施方式中，样本选自由以下组成的组：从供体收集的鼻液样本、粘液样本、血液样本、血浆样本、尿液样本、汗液样本或唾液样本。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含传染病的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含病毒标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含sars-cov-2标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包
含甲型流感病毒的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含乙型流感病毒的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志和sars-cov-2标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含细菌标志。在一些实施方式中，所述样本的所述供体是哺乳动物。在一些实施方式中，所述样本的所述供体是人。在一些实施方式中，所述测试条用作直接免疫测定的一部分。在一些实施方式中，所述测试条用作间接免疫测定的一部分。在一些实施方式中，所述测试条用作夹心免疫测定的一部分。在一些实施方式中，所述测试条用作竞争性免疫测定的一部分。在一些实施方式中，所述测试条用作侧流测定的一部分。在一些实施方式中，所述测试条用于bd veritor
tm
系统。在一些实施方式中，所述测试条用于bd veritor
tm
居家covid-19测试。在一些实施方式中，所述测试条还包含阴性对照线。在一些实施方式中，所述测试条还包含阳性对照线。在一些实施方式中，所述阳性对照线位于所述测试条上所述至少一个分析物捕获线和所述至少一个样本充足性线之间、所述至少一个分析物捕获线和所述阴性对照线之间、或所述至少一个样本充足性线和所述阴性对照线之间。在一些实施方式中，其中所述阳性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。在一些实施方式中，所述阴性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。在一些实施方式中，所述样本在进入所述流动路径时未被标记。在一些实施方式中，所述样本在进入所述流动路径时被标记。
6.本公开的一些方面涉及一种使用免疫测定测试条评估样本充足性的方法，所述免疫测定测试条包含被配置为接纳样本的流动路径、联接到所述流动路径的样本接纳区、至少一个样本充足性线和至少一个分析物捕获线，所述方法包含将所述样本施加到所述免疫测定测试条，使所述流动路径中的所述样本流向所述样本接纳区，通过在所述至少一个分析物捕获线中进行的免疫测定来监测所述样本中至少一种感兴趣的分析物的存在，以及通过在所述至少一个样本充足性线中进行的免疫测定来监测所述样本中至少一个样本充足性标志的存在；其中所述至少一个样本充足性标志的检测被用作样本数量、质量和/或组成的指示。参考使用免疫测定测试条评估样本充足性的方法描述了本公开的实施方式，但是应理解，根据本公开，在不使用测试条形式的免疫测定中也可以使用样本充足性标志来指示样本的充足性，包括但不限于使用基于平板或孔板的测定、luminex测定、elisa测定、基于珠的测定和微阵列测定进行的测定。在一些实施方式中，所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含人白蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗hsa抗体。在一些实施方式中，所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含乳运铁蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗乳运铁蛋白抗体。在一些实施方式中，所述样本还包含至少一种感兴趣的分析物。在一些实施方式中，所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在和丰度取决于供体的疾病状态。在一些实施方式中，所述样本选自由以下组成的组：从供体收集的鼻液样本、粘液样本、血液样本、血浆样本、尿液样本、汗液样本或唾液样本。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含传染病的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含病毒标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含sars-cov-2标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一
种感兴趣的分析物包含甲型流感病毒的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含乙型流感病毒的标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志和sars-cov-2标志。在一些实施方式中，所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含细菌标志。在一些实施方式中，所述样本的所述供体是哺乳动物。在一些实施方式中，所述样本的所述供体是人。在一些实施方式中，用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是直接免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是直接免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是间接免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是间接免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是夹心免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是夹心免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是竞争性免疫测定。在一些实施方式中，用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是竞争性免疫测定。在一些实施方式中，所述免疫测定是侧流测定。在一些实施方式中，所述免疫测定使用bd veritor
tm
系统进行。在一些实施方式中，所述免疫测定使用bd veritor
tm
居家covid-19测试进行。在一些实施方式中，所述免疫测定测试条还包含阴性对照线。在一些实施方式中，所述免疫测定测试条还包含阳性对照线。在一些实施方式中，所述阳性对照线位于所述测试条上所述至少一个分析物捕获线和所述至少一个样本充足性线之间、所述至少一个分析物捕获线和所述阴性对照线之间、或所述至少一个样本充足性线和所述阴性对照线之间。在一些实施方式中，所述阳性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。在一些实施方式中，所述阴性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。在一些实施方式中，所述样本在进入所述流动路径时未被标记。在一些实施方式中，所述样本在进入所述流动路径时被标记。在一些实施方式中，当未检测到所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本质量不充分的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本具有足够质量的指示。在一些实施方式中，当检测到高浓度的所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本以高浓度存在的指示。在一些实施方式中，当检测到低浓度的所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本以低浓度存在的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含所述感兴趣的分析物存在的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到高浓度的所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示所述感兴趣的分析物以高浓度存在的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到低浓度的所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示所述感兴趣的分析物以低浓度存在的指示。在一些实施方式中，当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在、检测到所述至少一种感兴趣的分析物的第一分析物的存在以及未检测到所述至少一种感
兴趣的分析物的第二分析物的存在时，所述方法还包含显示所述至少一种感兴趣的分析物的所述第一分析物存在并且未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的所述第二分析物的指示。在一些实施方式中，监测所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在包含目视观察所述至少一个样本充足性线存在光学信号。在一些实施方式中，监测所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在包含目视观察至少一个分析物捕获线存在光学信号。在一些实施方式中，监测所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在包含拍摄所述至少一个样本充足性线的图像。在一些实施方式中，监测所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在包含拍摄所述至少一个分析物捕获线的图像。
7.本公开的一些方面涉及一种测试试剂盒。所述测试试剂盒可以包括：任何上述免疫测定测试条；和计算机可读代码，所述计算机可读代码识别软件应用程序，所述软件应用程序被配置为至少部分地基于所述至少一个样本充足性线分析所述免疫测定测试条的图像以确定测试结果。在一些实施方式中，至少部分地基于所述软件应用程序确定来自所述至少一个样本充足性线的光学信号的强度低于预定阈值，由所述软件应用程序确定的所述测试结果是无效测试结果。
8.本文提供的本公开的实施方式通过以下编号的可选方案进行描述：
9.1.一种免疫测定测试条，其包含：
10.流动路径，其被配置为接纳样本；
11.样本接纳区，其联接到所述流动路径；
12.至少一个样本充足性线；以及
13.至少一个分析物捕获线。
14.2.根据可选方案1所述的免疫测定测试条，其中所述样本还包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含人白蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗hsa抗体。
15.3.根据可选方案1所述的免疫测定测试条，其中所述样本还包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含乳运铁蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗乳运铁蛋白抗体。
16.4.根据可选方案2和3中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在和丰度取决于所述样本的数量、质量和/或组成。
17.5.根据可选方案1至4中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本还包含至少一种感兴趣的分析物。
18.6.根据可选方案5所述的免疫测定测试条，其中所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在和丰度取决于供体的疾病状态。
19.7.根据可选方案1至6中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本选自由以下组成的组：从供体收集的鼻液样本、粘液样本、血液样本、血浆样本、尿液样本、汗液样本或唾液样本。
20.8.根据可选方案1至7中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含传染病的标志。
21.9.根据可选方案8所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的至少一种感兴趣的分析物包含病毒标志。
22.10.根据可选方案8至9中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含sars-cov-2标志。
23.11.根据可选方案8至10中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志。
24.12.根据可选方案11所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含甲型流感病毒的标志。
25.13.根据可选方案11所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含乙型流感病毒的标志。
26.14.根据可选方案8至11中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志和sars-cov-2标志。
27.15.根据可选方案8所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含细菌标志。
28.16.根据可选方案1至12中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本的所述供体是哺乳动物。
29.17.根据可选方案1至13中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本的所述供体是人。
30.18.根据可选方案1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作直接免疫测定的一部分。
31.19.根据可选方案1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作间接免疫测定的一部分。
32.20.根据可选方案1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作夹心免疫测定的一部分。
33.21.根据可选方案1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作竞争性免疫测定的一部分。
34.22.根据可选方案1至21中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作侧流测定的一部分。
35.23.根据可选方案1至22中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用于 bd veritor
tm
系统。
36.24.根据可选方案1至23中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用于 bd veritor
tm
居家covid-19测试。
37.25.根据可选方案1至24中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条还包含阳性对照线和/或阴性对照线。
38.26.根据可选方案25所述的免疫测定测试条，其中所述测试条包含阳性对照线，和其中所述阳性对照线位于所述测试条上所述至少一个分析物捕获线和所述至少一个样本充足性线之间、所述至少一个分析物捕获线和阴性对照线之间、或所述至少一个样本充足性线和所述阴性对照线之间。
39.27.根据可选方案26所述的免疫测定测试条，其中所述阳性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。
40.28.根据可选方案25所述的免疫测定测试条，其中所述测试条包含阴性对照线，和
其中所述阴性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。
41.29.根据可选方案1至28中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本在进入所述流动路径时未被标记。
42.30.根据可选方案1至28中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本在进入流动路径时被标记。
43.31.一种使用免疫测定测试条评估样本充足性的方法，所述免疫测定测试条包含被配置为接纳样本的流动路径、联接到所述流动路径的样本接纳区、至少一个样本充足性线和至少一个分析物捕获线，所述方法包含：
44.将所述样本施加到所述免疫测定测试条；
45.使所述流动路径中的所述样本流向所述样本接纳区；
46.通过在所述至少一个分析物捕获线中进行的免疫测定来监测所述样本中至少一种感兴趣的分析物的存在；以及
47.通过在所述至少一个样本充足性线中进行的免疫测定来监测所述样本中至少一个样本充足性标志的存在；
48.其中所述至少一个样本充足性标志的检测被用作样本数量、质量和/或组成的指示。
49.32.根据可选方案31所述的方法，其中所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含人白蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗hsa抗体。
50.33.根据可选方案31所述的方法，其中所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含乳运铁蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗乳运铁蛋白抗体。
51.34.根据可选方案31至33中任一项所述的方法，其中所述样本还包含至少一种感兴趣的分析物。
52.35.根据可选方案34所述的方法，其中所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在和丰度取决于供体的疾病状态。
53.36.根据可选方案31至35中任一项所述的方法，其中所述样本选自由以下组成的组：从供体收集的鼻液样本、粘液样本、血液样本、血浆样本、尿液样本、汗液样本或唾液样本。
54.37.根据可选方案31至36中任一项所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含传染病的标志。
55.38.根据可选方案37所述的方法，其中所述样本中的至少一种感兴趣的分析物包含病毒标志。
56.39.根据可选方案37至38中任一项所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含sars-cov-2标志。
57.40.根据可选方案37至39中任一项所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志。
58.41.根据可选方案40所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析
物包含甲型流感病毒的标志。
59.42.根据可选方案40所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含乙型流感病毒的标志。
60.43.根据可选方案37至40中任一项所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志和sars-cov-2标志。
61.44.根据可选方案37所述的方法，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含细菌标志。
62.45.根据可选方案31至44中任一项所述的方法，其中所述样本的所述供体是哺乳动物。
63.46.根据可选方案31至45中任一项所述的方法，其中所述样本的所述供体是人。
64.47.根据可选方案31至46中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是直接免疫测定。
65.48.根据可选方案31至47中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是直接免疫测定。
66.49.根据可选方案31至46和48中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是间接免疫测定。
67.50.根据可选方案31至47和49中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是间接免疫测定。
68.51.根据可选方案31至46、48和50中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是夹心免疫测定。
69.52.根据可选方案31至47、49和51中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是夹心免疫测定。
70.53.根据可选方案31至46、48、50和52中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一种感兴趣的分析物的存在的免疫测定是竞争性免疫测定。
71.54.根据可选方案31至47、49、51和53中任一项所述的方法，其中用于监测所述至少一个样本充足性标志的存在的免疫测定是竞争性免疫测定。
72.55.根据可选方案31至54中任一项所述的方法，其中所述免疫测定是侧流测定。
73.56.根据可选方案31至54中任一项所述的方法，其中所述免疫测定使用bdveritor
tm
系统进行。
74.57.根据可选方案31至56中任一项所述的方法，其中所述免疫测定使用bdveritor
tm
居家covid-19测试进行。
75.58.根据可选方案31至57中任一项所述的方法，其中所述免疫测定测试条还包含阳性对照线和/或阴性对照线。
76.59.根据可选方案58所述的方法，其中所述测试条包含阳性对照线，和其中所述阳性对照线位于所述测试条上所述至少一个分析物捕获线和所述至少一个样本充足性线之间、所述至少一个分析物捕获线和阴性对照线之间、或所述至少一个样本充足性线和所述阴性对照线之间。
77.60.根据可选方案59所述的方法，其中所述阳性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。
78.61.根据可选方案58所述的免疫测定测试条，其中所述测试条包含阴性对照线，和其中所述阴性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。
79.62.根据可选方案31至61中任一项所述的方法，其中所述样本在进入所述流动路径时未被标记。
80.63.根据可选方案31至61中任一项所述的方法，其中所述样本在进入所述流动路径时被标记。
81.64.根据可选方案31至63中任一项所述的方法，其中当未检测到所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本质量不充分的指示。
82.65.根据可选方案31至63中任一项所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本具有足够质量的指示。
83.66.根据可选方案65所述的方法，其中当检测到高浓度的所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本以高浓度存在的指示。
84.67.根据可选方案65所述的方法，其中当检测到低浓度的所述至少一个样本充足性标志的存在时，所述方法还包含显示所述样本以低浓度存在的指示。
85.68.根据可选方案65至67中任一项所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的指示。
86.69.根据可选方案65至67中任一项所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示所述感兴趣的分析物存在的指示。
87.70.根据可选方案69所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到高浓度的所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示所述感兴趣的分析物以高浓度存在的指示。
88.71.根据可选方案69所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在并且检测到低浓度的所述至少一种感兴趣的分析物的存在时，所述方法还包含显示所述感兴趣的分析物以低浓度存在的指示。
89.72.根据可选方案69至71中任一项所述的方法，其中当检测到所述至少一个样本充足性标志的存在、检测到所述至少一种感兴趣的分析物的第一分析物的存在以及未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的第二分析物的存在时，所述方法还包含显示所述至少一种感兴趣的分析物的所述第一分析物存在并且未检测到所述至少一种感兴趣的分析物的所述第二分析物的指示。
90.73.根据可选方案31至72中任一项所述的方法，其中监测所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在包含目视观察所述至少一个样本充足性线存在光学信号。
91.74.根据可选方案31至73中任一项所述的方法，其中监测所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在包含目视观察所述至少一个分析物捕获线存在光学信号。
92.75.根据可选方案31至72中任一项所述的方法，其中监测所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在包含拍摄所述至少一个样本充足性线的图像。
93.76.根据可选方案31至72中任一项所述的方法，其中监测所述样本中所述至少一
种感兴趣的分析物的存在包含拍摄所述至少一个分析物捕获线的图像。
94.77.一种测试试剂盒，其包含：根据可选方案1至30中任一项所述的免疫测定测试条；和计算机可读代码，所述计算机可读代码识别软件应用程序，所述软件应用程序被配置为至少部分地基于所述至少一个样本充足性线分析所述免疫测定测试条的图像以确定测试结果。
95.78.根据可选方案77所述的测试试剂盒，其中至少部分地基于所述软件应用程序确定来自所述至少一个样本充足性线的光学信号的强度低于预定阈值，由所述软件应用程序确定的所述测试结果是无效测试结果。
附图说明
96.图1描绘了根据本公开的实例免疫测定测试条，其中l5是样本充足性线，l4是阳性对照线(pc)，l3是空白线，l2是用于sars-cov-2标志的分析物捕获线，l1是阴性对照线(nc)，并且b2是背景部分(bg)。
97.图2描绘了使用根据本公开的实例免疫测定收集和分析的369个流体样本的以au为单位的样本充足性线强度分布的直方图。
98.图3描绘了在临床试验期间使用根据本公开的实例免疫测定收集和分析的样本的以 au为单位的样本充足性线强度分布的直方图。
具体实施方式
99.高质量快速诊断测试的发展使得实验室质量诊断测定能够部署到历史上无法实时处理样本和获得结果的环境中，以实现更相关的患者护理。然而，诊断过程中有一个步骤在历史上一直存在问题，那就是适当采集待测样本。质量差的样本将导致质量差的诊断测试结果。由此产生的对训练有素的医学专业人员参与样本收集步骤的要求通常仍然是在所有可能的测试场所部署这些快速技术的障碍。
100.由于此原因，需要使训练水平较低的个体(包括非实验室个体)能够收集有效用于分析的临床样本。此类实施的先前的实例是使用尿液中的肌酸酐来标准化其他生物标志(如白蛋白)的测量，以解决影响感兴趣的生物标志的解译的尿液输出的变化。
101.此类实施的价值在于，可以判断从临床样本获得的分析测量值的特征，如样本有效性。例如，在对滥用物质的测试中，被测试的个体可能被激励试图经由如添加水以改变诊断目标的测量值的机制来改变分析结果。样本有效性测试可以检测到此类变化，并且随后的结果可以酌情判断为有效或无效。
102.covid-19大流行导致需要以前所未有的规模检测病毒感染的机制。检测最好经由在过去与实验室质量诊断测试无关的环境中进行广泛的感染测试来完成，此外，还可以能由在收集有效样本进行此类测试方面没有经验的个体来完成。显然，需要确保在广泛分布的非实验室环境(如机场、长期护理设施、学校和包括家庭环境)中样本收集的质量。
103.与尿液中样本有效性生物标志的需求非常相似，需要识别和实施对源自鼻腔的样本中的生物标志的检测，所述检测可以与针对病原体(如sars-cov-2)的更典型的快速抗原测试相结合，以确保非实验室个体收集高质量的样本，用于在非实验室环境中进行评估。
104.本公开的实施方式涉及用于检测可能存在于如流体的生物或非生物样本中的感
兴趣的分析物的系统和技术。贯穿本公开，将参考分析物(如与传染病相关的诊断测试相关的分析物)的收集、测试和检测来描述实例系统、装置和方法，但是应理解，本技术可以用于收集、测试和检测任何感兴趣的粒子、分子或分析物。
105.定义
106.除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员所通常理解的含义相同的含义。除非另有说明，否则本文引用的所有专利、申请、公开的申请和其他出版物均通过引用以其整体并入。如本文中某一术语有多种定义，除非另有说明，否则以本节中的定义为准。
107.如本文所用，“一”或“一个”可以意指一个或多于一个。
108.如本文所用，术语“约”或“近似”具有本领域技术人员所理解的通常含义，并且因此指示值包括用于确定值的方法的固有误差变化，或存在于多次确定中的变化。
109.贯穿整个本说明书，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise、comprises、 comprising)”应理解为暗示包括所述步骤或要素或一组步骤或要素，但不排除任何其他步骤或要素或一组步骤或要素。术语“由
……
组成”意指包括且限于“由
……
组成”一词之后的任何成分。因此，短语“由
……
组成”表示所列要素是必需的或强制性的，并且不存在其他要素。“基本上由
……
组成”意指包括在该短语之后列出的任何要素并且限于不干扰或有助于本公开中规定的所列要素的活性或行为的其他要素。因此，短语“基本上由
……
组成”表示所列要素是必需的或强制性的，但是也表示根据是否实质上影响所列要素的活性或行为，其他要素是可选的、可能存在或可能不存在。
110.本文公开的量度和数值不应理解为严格限于引用的确切数值。反而，除非另有规定，否则每个此类量度旨在意指所引用值和围绕该值的功能等效范围两者。例如，某量度公开为“20mm”，其旨在意指“约20mm”。
111.如本文所用的术语“功能”和“功能性的”具有如根据说明书所理解的其一般和普通的含义，并且指生物学、酶促或功能。
112.本公开涉及免疫测定装置、测试系统和方法。如本文所用，“分析物”通常是指待检测的物质。感兴趣的分析物可以包括任何可检测的物质，如但不限于抗体、抗原、抗原性物质、配体、蛋白质、半抗原、糖、脂质、核酸、rna、dna、扩增子、激素、小分子、细胞因子、免疫细胞、免疫细胞粒子、免疫细胞表面、细菌粒子、细菌表面、病毒粒子、病毒表面、细胞片段、细胞表面，以及危险或非危险药物或污染物，如用于癌症的抗肿瘤药物。分析物包括但不限于毒素、有机化合物、肽、微生物、氨基酸、类固醇、维生素、药物(包括为目的施用的药物以及为非法目的施用的药物)、药物中间体或副产物，以及任何上述物质的代谢物或抗体。一些分析物的具体实例包括sars-cov-2粒子、甲型流感粒子、乙型流感粒子、铁蛋白；肌酸酐激酶mb(ck-mb)；人绒毛膜促性腺激素(hcg)；；苯妥英；；卡马西平；万古霉素；庆大霉素；茶碱；丙戊酸；奎尼丁；黄体生成素(lh)；卵泡刺激素(fsh)；雌二醇、孕酮；c-反应蛋白(crp)；脂质运载蛋白；ige抗体；细胞因子；tnf相关凋亡诱导配体(trail)；维生素b2微球蛋白；干扰素γ诱导蛋白10(ip-10)；糖化血红蛋白(gly hb)；皮质醇；洋地黄毒苷； n-乙酰普鲁卡因酰胺(napa)；普鲁卡因胺；风疹抗体，如风疹-igg和风疹igm；弓形虫病抗体，如弓形虫病igg(toxo-igg)和弓形虫病igm(toxo-igm)；睾酮；水杨酸盐；对乙酰氨基酚；乙肝病毒表面抗原(hbsag)；乙肝核心抗原抗体，如抗乙肝核心抗原igg 和igm(抗
hbc)；人类免疫缺陷病毒1和2(hiv 1和2)；人类t细胞白血病病毒1和2 (htlv)；乙型肝炎e抗原(hbeag)；乙型肝炎e抗原抗体(抗hbe)；流感病毒；促甲状腺激素(tsh)；甲状腺素(t4)；总三碘甲状腺原氨酸(总t3)；游离三碘甲状腺原氨酸(游离t3)；癌胚抗原(cea)；脂蛋白、胆固醇和甘油三酯；以及甲胎蛋白(afp)。滥用药物和受管制物质包括但不旨在限于；甲基；类药物，如异、司可、、和；苯二氮类，如利眠宁和；素，如印度脂和；；；lsd；甲喹酮；剂，如、、可待因、氢酮、氢可酮、、、羟酮和；；以及丙氧苯。出于感兴趣的生物或环境物质的目的，可以包括另外的分析物。如本文所用，基于样本供体的疾病状态，样本中可能存在感兴趣的分析物。
113.免疫测定
114.如本文所用，术语“免疫测定”具有根据说明书理解的其普通含义，并且是指通过使用抗体或抗原来测量溶液中一种或多种分析物的存在或浓度的生化测试。免疫测定的实例包括放射免疫测定、计数免疫测定、酶免疫测定、荧光免疫测定和化学发光免疫测定。
115.本公开的实施方式涉及一种用于免疫测定的测试条，所述测试条含有样本充足性线。尽管本文参考所述测试条用于直接、间接、夹心和竞争性免疫测定来描述本公开的实施方式，但是应理解，本文所描述的测试条可以用作任何分析物检测测定中的部件。此外，尽管参考测试条描述了本公开的实施方式，但是应理解，本公开可以以任何合适的形式实施，如下文详细描述的。
116.如本文所用，术语“直接免疫测定”具有本领域技术人员所理解的其通常含义，因此是指通过对感兴趣的分析物特异的标记抗体或标记抗原直接测量所述分析物。在一些实施方式中，抗体或抗原被固定在测试条上，并且感兴趣的分析物与溶液中的抗体或抗原接触。在一些实施方式中，感兴趣的分析物被固定在测试条上，并且标记抗体或抗原与溶液中的分析物接触。
117.如本文所用，术语“间接免疫测定”具有本领域技术人员所理解的其通常含义，因此是指这样一种测定，其中感兴趣的分析物首先与所述分析物特异性的抗体或抗原结合并且形成复合物，然后第二抗体、分析物或化合物与所述复合物结合并且提供可检测的信号。
118.在一些实施方式中，第一或“初级”抗体或抗原是未标记的。在一些实施方式中，感兴趣的分析物被固定在测试条上。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物与初级抗体或抗原结合。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物与分析物结合。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物和与分析物复合的初级抗体或抗原结合。
119.如本文所用，术语“夹心免疫测定”具有本领域技术人员所理解的其通常含义，因此是指这种测定，其中将对感兴趣的分析物特异的抗体或抗原固定在测试条上，然后感兴趣的分析物与溶液中的抗体或抗原接触并且形成复合物，然后第二抗体、分析物或化合物与所述复合物结合并且提供可检测的信号。在一些实施方式中，第一或“初级”抗体或抗原是未标记的。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物与初级抗体或抗原结合。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物与分析物结合。在一些实施方式中，第二抗体、分析物或化合物和与分析物复合的初级抗体或抗原结合。
120.如本文所用，术语“竞争性免疫测定”，也称为“抑制”或“阻断”免疫测定，具有本领域技术人员所理解的其通常含义，因此是指通过检测预期信号输出中的干扰来测量样本中
感兴趣的分析物浓度的测定。
121.本文所描述的免疫测定可以包括标记。标记可以采取许多不同的形式，包括结合或能够结合到分析物、分析物类似物、检测试剂或结合配偶体的分子或组合物，其可以通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学手段检测。标记的实例包括酶、胶体金粒子(也称为金纳米粒子)、有胶乳粒子、放射性同位素、共因子、配体、化学发光剂或荧光剂、蛋白质吸附的银粒子、蛋白质吸附的铁粒子、蛋白质吸附的铜粒子、蛋白质吸附的硒粒子、蛋白质吸附的硫粒子、蛋白质吸附的碲粒子、蛋白质吸附的碳粒子和蛋白质偶联的染料囊。化合物(例如，检测试剂)与标记的附接可以是通过共价键、吸附过程、疏水和/或静电键，如在螯合物中等，或这些键的组合以及相互作用和/或可以涉及连接组。
122.术语“特异性结合配偶体(或结合配偶体)”是指一对分子中的成员，所述一对分子中的成员借助于依赖所涉及分子的三维结构的特异性非共价相互作用而相互作用。典型的特异性结合配偶体对包括抗原/抗体、半抗原/抗体、激素/受体、核酸链/互补核酸链、底物 /酶、抑制剂/酶、碳水化合物/凝集素、生物素/(链霉素)抗生物素蛋白、受体/配体，和病毒/细胞受体，或它们的各种组合。
123.如本文所用，术语“免疫球蛋白”或“抗体”是指结合特异性抗原的蛋白质。免疫球蛋白包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合和人源化抗体、fab片段、f(ab’)2片段，并且包括以下类别的免疫球蛋白：igg、iga、igm、igd、ige和分泌型免疫球蛋白(sig)。免疫球蛋白通常包含两个相同的重链和两个轻链。然而，术语“抗体”和“免疫球蛋白”也涵盖单链抗体和双链抗体。
124.本文所描述的免疫测定可在多种兼容的装置、材料和平台上运行，例如但不限于，基板、孔板、聚苯乙烯微管、微量滴定板、侧流测定、bd veritor
tm
系统、luminex测定、干试剂盒、elisa测定、微阵列测定、基于珠的测定、荧光板读取器、发光板读取器、化学板读取器、光学板读取器、化学发光板读取器和基于芯片的测定。因此，尽管参考免疫测定测试条描述了本公开的实施方式，但是应理解，根据本公开，在不使用测试条形式的免疫测定中也可以使用样本充足性标志来指示样本的充足性，包括但不限于使用基于平板或孔板的测定、luminex测定、elisa测定、基于珠的测定和微阵列测定进行的测定。
125.侧流测定
126.本公开的一些方面涉及一种特殊类型的免疫测定——侧流测定。侧流测定是可在本文所描述的侧流装置上进行的测定。本文所描述的侧流装置是用于侧流谱的分析装置。侧流装置可在测试条上实施，但是其他形式也是合适的。在测试条形式中，怀疑含有分析物的测试样本流体流过该条(例如通过毛细管作用)。该条可由吸水材料制成，如纸、硝化纤维素和纤维素。样本流体被接纳在样本储器处。样本流体可以沿着该条流到捕获区，在所述捕获区中，分析物(如果存在)与捕获剂相互作用，以指示分析物的存在、不存在和 /或数量。捕获剂可以包括固定在捕获区中的抗体。
127.本文在由反射型标记(如但不限于金纳米粒子标记)产生的光学信号的背景下描述了根据本公开的测定产生的信号。尽管本文参考“光学”信号描述了本公开的实施方式，但是应理解，本文所描述的测定可以使用任何合适的标记材料来产生可检测的信号，包括但不限于产生荧光信号的荧光型乳胶珠标记和产生指示与测定相关联的磁场变化的信号的磁性纳米粒子标记。
128.本公开的实施可以检测在包括高浓度在内的各种浓度下出现的感兴趣的分析物或样本充足性标志。例如，本公开的实施方式可以使用在2018年6月25日提交的国际申请号 pct/us2018/039347中描述的侧流装置、测试系统和方法来检测分析物，所述申请通过引用整体并入本文。在实施2018年6月25日提交的国际申请号pct/us2018/039347中描述的侧流装置、测试系统和方法的实施方式中，应理解，随着更多的感兴趣的分析物结合到分析物捕获线上，分析物捕获线上的可检测的信号的量减少，而不是增加。
129.夹心型和竞争型侧流测定
130.侧流测定可以以夹心或竞争形式进行。本文所描述的夹心和竞争形式测定将在产生光学信号的反射型标记(如金纳米粒子标记)的背景下进行描述，但是应理解，测定可以包括被配置为产生荧光信号的乳胶珠标记、被配置为产生磁信号的磁性纳米粒子标记或被配置为产生可检测的信号的任何其他标记。夹心型侧流测定包括标记抗体，所述标记抗体沉积在固体基质上的样本储器中。将样本加入样本储器后，标记抗体溶解在样本中，于是抗体识别并且结合样本中分析物上的第一表位，形成标记-抗体-分析物复合物。此复合物沿着液体前面从样本储器通过固体基质流到捕获区(有时称为“测试线”)，固定的抗体(有时称为“捕获剂”)位于所述捕获区。在一些情况下，当分析物是多聚体或在同一单体上含有多个相同的表位时，沉积在样本储器中的标记抗体可以与固定在捕获区中的抗体相同。固定的抗体识别并且结合分析物上的表位，从而在捕获区捕获标记-抗体-分析物复合物。标记抗体在捕获区的存在在捕获区提供可检测的光学信号。在一个非限制性实例中，金纳米粒子用于标记抗体，因为它们相对便宜、稳定，并且基于金纳米粒子的表面等离子体共振特性提供容易观察到的颜指示。在一些情况下，此信号提供定性信息，如样本中是否存在分析物。在一些情况下，此信号提供定量信息，如样本中分析物数量的测量值。
131.样本充足性标志
132.在一些实施方式中，样本是用于检测环境中分析物的环境样本。在一些实施方式中，样本是来自受试者的生物样本。在一些实施方式中，样本是流体。在一些实施方式中，生物样本可以包括血液、外周血、血清、血浆、腹水、尿液、脑脊液(csf)、痰、唾液、骨髓、滑液、房水、羊水、耵聍、母乳、支气管肺泡灌洗液、精液(包括前列腺液)、考珀液或射精前液、女性射精、汗液、粪便、毛发、眼泪、囊液、胸膜液和腹膜液、心包液、淋巴液、食糜、乳糜、胆汁、间质液、月经、脓液、皮脂、呕吐物、阴道分泌物、粘膜分泌物、鼻液、粘液、粪便水、胰液、来自窦腔的灌洗液、支气管肺吸出物或其他灌洗液。
133.如本文所用，“样本充足性标志”是可以用于评估其源样本的数量、质量和/或组成的分析物、分子、化合物或物质。在传统的免疫测定中，当样本中不存在感兴趣的分析物时，或当样本不充分充足时，就会获得阴性结果。在本公开中，样本充足性标志的阳性检测指示样本存在于免疫测定中，并且具有足够高的浓度和完整性以引发检测。样本充足性标志可以是样本本身的任何物质，包括组成型、内源性和“管家”分子。样本充足性标志的实例包括但不限于蛋白质、总蛋白质、白蛋白、血清白蛋白、人白蛋白、乳运铁蛋白(乳铁蛋白)、肌动蛋白、溶菌酶、iga、血红蛋白、粘蛋白、粘蛋白7、粘蛋白5ac、粘蛋白20、三叶因子3、细胞、细胞粒子、铵、酸性磷酸盐、钙、富含脯氨酸的蛋白质家族、唾液淀粉酶、激素、载脂蛋白d、丛生蛋白、催乳素诱导蛋白和皮离蛋白。
134.免疫测定测试条
135.根据本公开的免疫测定测试条可以用于检测、识别并且在一些情况下量化生物制品。生物制品包括由活生物体产生的化学或生物化学化合物，所述活生物体可以包括原核细胞系、真核细胞系、哺乳动物细胞系、微生物细胞系、昆虫细胞系、植物细胞系、混合细胞系、天然存在细胞系或合成工程细胞系。生物制品可以包括大分子，如蛋白质、多糖、脂质和核酸，以及小分子，如初级代谢物、次级代谢物和天然产物。
136.如本文所公开的，样本通过流动路径被施用于测试条。在一些实施方式中，在施用进入流动路径之前，将样本加入缓冲液或溶液中。然后，样本沿着流动路径进入样本接纳区。在一些实施方式中，测试条包含阴性对照线，所述阴性对照线用于区分非特异性信号和感兴趣的分析物与抗体、分析物或化合物的结合。在一些实施方式中，测试条包含阳性对照线，所述阳性对照线显示用于结合的最佳信号。阳性对照线和阴性对照线都可以验证免疫测定的完整性，确保适当的试剂功能，并且验证正确的测试程序。本公开的一些非限制性实施是在包括测试线、样本充足性线、阳性对照线和阴性对照线的测试条的背景下描述的，但是应理解，本公开的实施不需要包括阳性对照线和/或阴性对照线。在一些非限制性实施方式中，样本充足性线除了指示样本是否充足或有效之外，还执行与阳性对照线相同或类似的功能。
137.本公开的某些方面包括捕获剂。捕获剂包括能够结合分析物的固定剂，包括游离(未标记)分析物和/或标记分析物。捕获剂包括未标记的特异性结合配偶体，其对以下具有特异性：(i)标记的感兴趣的分析物、(ii)标记的分析物或未标记的分析物，如在竞争测定中，或(iii)辅助的特异性结合配偶体，其本身对分析物是特异性的，如在间接测定中。如本文所用，“辅助特异性结合配偶体”是与分析物的特异性结合配偶体结合的特异性结合配偶体。例如，辅助特异性结合配偶体可以包括对另一种抗体特异的抗体，例如山羊抗人抗体。本文所描述的免疫测定测试条可以包括“捕获线”，所述“捕获线”是侧流装置中的捕获试剂被固定的区域。本文所描述的免疫测定测试条可以包括多于一个的捕获区域，例如“初级捕获区域”、“次级捕获区域”等。在一些情况下，不同的捕获试剂将被固定在初级捕获区域、次级捕获区域和/或其他捕获区域中。在侧流基板上，多个捕获区域可以相对于彼此具有任何取向；例如，沿着流体流动的路径，初级捕获区域可以远离或接近次级(或其他)捕获区域，并且反之亦然。可选地，初级捕获区域和次级(或其他)捕获区域可以沿着垂直于流体流动路径的轴线对准，使得流体同时或约同时接触捕获区域。
138.在一些实施方式中，捕获剂被固定，使得在免疫测定测试条的正常操作期间捕获剂的移动受到限制。例如，在将流体样本施加到免疫测定测试条之前和之后，固定的捕获剂的移动受到限制。捕获剂的固定可以通过物理手段(如屏障、静电相互作用、氢键、生物亲和性、共价相互作用或其组合)完成。
139.如本文所描述的测试条还包含分析物捕获线和样本充足性线。分析物捕获线使用至少一种捕获剂结合并且固定至少一种感兴趣的分析物。在一些实施方式中，感兴趣的分析物与分析物捕获线的结合产生可检测的信号。本公开的样本充足性线的实施方式被配置为使用至少一种捕获剂结合并且固定至少一个样本充足性标志。在一些实施方式中，样本充足性标志与样本充足性线的结合产生可检测的信号。在一些实施方式中，由分析物捕获线产生的信号测量地不同于样本充足性线。在一些实施方式中，至少一个信号是荧光的。在一些实施方式中，至少一个信号是化学发光的。在一些实施方式中，至少一个信号是发光
的bd veritor
tm
系统、用于快速检测甲型链球菌的bd veritor
tm
系统、bd veritor
tm
系统、 bd veritor plus
tm
系统和/或其部件或操作的系统来实施。应理解，本公开的实施方式可以结合任何合适的检测系统来实现。在一些非限制性实例中，使用测试条的目视观察来读取测试结果。
143.根据本公开的免疫测定测试条可以作为部件包括在多重测定中。多重测定包括可以检测、识别并且在一些情况下量化多种不同的感兴趣的分析物的测定。例如，在多重测定装置中，可以存在初级、次级或更多捕获区域，每个捕获区域对多种感兴趣的分析物中的一种感兴趣的分析物是特异性的。在一个非限制性实例中，本公开的实施方式检测：第一感兴趣的分析物，包括但不限于sars-cov-2；第二感兴趣的分析物，包括但不限于甲型流感；第三感兴趣的分析物，包括但不限于乙型流感；或这些感兴趣的分析物的任意组合。
144.使用根据本公开的免疫测定来诊断病症的方法
145.本文提供的一些实施方式涉及使用免疫测定来诊断医学病症的方法。在一些实施方式中，所述方法包括提供如本文所描述的免疫测定。在一些实施方式中，所述方法包括在免疫测定的样本储器处接纳样本。
146.在一些实施方式中，样本从来源(包括环境来源或生物来源)获得。在一些实施方式中，怀疑样本具有感兴趣的分析物。在一些实施方式中，不怀疑样本具有感兴趣的分析物。在一些实施方式中，获得并且分析样本以验证分析物的不存在或存在。在一些实施方式中，获得样本并且分析样本中分析物的数量。在一些实施方式中，样本中分析物的数量小于健康受试者中存在的正常值，处于或接近健康受试者中存在的正常值，或高于健康受试者中存在的正常值。
147.在一些实施方式中，在免疫测定的样本储器处接纳样本包括使样本与免疫测定接触。通过外部应用如用滴管或其他涂药器将样本引入样本储器，样本可以接触免疫测定。在一些实施方式中，样本储器可以直接浸入样本中，如当测试条浸入保持样本的储器中时。在一些实施方式中，样本可以被倒入、滴下、喷洒、放置或以其他方式与样本储器接触。
148.实施例1
149.在最初选择用于评估的初步候选生物标志中，测定白蛋白或乳铁蛋白中的任一种，以确认可行的鼻样本的收集，然后确保相关联抗原检测的质量。随着人类生物标志被引入 sars-cov-2的快速抗原测试中，所述诊断检测可以被可靠地部署到非实验室场所(如居家)，供非实验室人员使用。
150.以下实施例描述了根据本公开的侧流测定的制备和使用。在此非限制性实施例中，描述了居家covid-19测试中使用侧流夹心法测定人血清白蛋白(hsa)。此种检测需要最终用户(被测受试者，在此情况下，是没有经验的个体)在没有受过训练的健康护理提供者的辅助或指导下，从他或她自己的鼻腔通道(或作为被测受试者的另一个体的鼻子)收集拭子样本。在图1中绘示了根据侧流测定的此非限制性实例的测试条100的一部分。
151.为了制备侧流测定，抗hsa抗体在位于测试条100的硝酸纤维素膜(固相)的l5位置的样本充足性线上划线，阳性对照(pc)线在l4位置划线，抗sars-cov-2抗体在位于l2位置的分析物捕获线上划线，阴性对照(nc)线在l1位置划线。在此实施例中， l3位置留空，但可以用于其他抗体，如用于流感测试的抗流感抗体。l1位置在上游，并且l5位置在下游，使得样本从背景区域流向l5位置。在上游侧，硝酸纤维素膜与缀合垫 (未绘示)接触，在所述缀
合垫上沉积有抗sars-cov-2-金缀合物、抗hsa金缀合物和pc 线特异性缀合物。硝酸纤维素膜的下游侧与吸收垫(未绘示)接触，所述吸收垫起到海绵的作用以便于样本从缀合垫流过固相，在此情况下是硝酸纤维素。
152.现在将描述侧流测定的使用。用户从被施加到被测受试者的鼻通道的鼻拭子获得液体样本。在一个非限制性实施例中，液体样本包括已经接触鼻拭子的提取试剂。在一个非限制性实施例中，提取试剂含有缓冲剂以维持一定的ph。提取试剂包括盐溶液和在此ph下的表面活性剂，以允许发生特异性抗体-抗原结合并且防止或最小化非特异性抗体-抗原复合物的形成。表面活性剂还有助于将鼻拭子上的样本洗脱到提取试剂中。在另一个非限制性实施例中，液体样本不包括提取试剂。当将来自鼻拭子的液体样本或提取的液体样本施加到缀合垫上时，沉积在缀合垫上的抗体-金缀合物被再水合并且溶解。特异性的分析物如存在于人鼻中的hsa将结合到与金粒子缀合的抗体上，形成hsa-抗体-金复合物，并且流向反应区(在此情况下，样本充足性线位于l5位置)，在所述反应区，另一个抗hsa抗体固定在固相上，其可以捕获hsa-抗体-金复合物，形成夹心并且发出信号，所述信号可以被最终用户目视观察到，被检测器检测到，和/或被成像用于初始或进一步的解译或其他目的。
153.如果与样本相关联的拭子没有插入被测受试者的鼻腔通道，或鼻腔通道非常干燥，则来自鼻腔通道的蛋白质(如hsa)不存在或以非常低的浓度存在。在这种情况下，捕获抗体-hsa-抗体-金夹心将不会形成，或将以低于可检测的水平形成，并且位于l5位置的样本充足性线将指示阴性结果，指示样本不充足。位于l5位置的样本充足性线可以指示样本不充足的另一个实例场景是当从不情愿或不愿意允许用户将拭子放入他或她的鼻腔通道的被测受试者处收集样本时(例如，如果被测受试者是儿童)。在此实例场景中，拭子可能不会进入被测受试者的鼻腔通道，拭子可能不会被放置在鼻腔通道中足够深的地方，或拭子可能不会被放置在鼻腔通道中足够长的时间和/或充分接触。位于l5位置的样本充足性线可以指示样本不充足的另一个实例场景是当从鼻腔通道敏感和/或脆弱的被测受试者收集样本时。在此实例场景中，拭子可能不会进入被测受试者的鼻腔通道，拭子可能不会被放置在鼻腔通道中足够深的地方，或拭子可能不会被放置在鼻腔通道中足够长的时间和/或充分接触。位于l5位置的样本充足性线可以指示样本不充足的另一个实例场景是当使用拭子而不是被指示用于侧流测定的拭子收集样本时。例如，最终用户可能使用未经批准或不合适的拭子收集样本，导致鼻分泌物的收集不充分或效率低下，以致不能产生足够的样本，或由于用于拭子尖端的材料，样本不能洗脱到提取试剂中。
154.sars-cov-2测定的操作方式与上述hsa测定相同或类似。例如，在存在足够的病毒抗原的情况下，捕获抗体-sars-cov-2抗原-抗体-检测器复合物将在l2位置的分析物捕获线上形成，并且发出可检测的信号。在没有病毒抗原的情况下，将不会形成夹心，并且不会在分析物捕获线上发出信号，或发出的信号将低于阈值检测限。只要液相流过pc线， pc线特异性缀合物就会结合到pc线，并且形成可见的线，指示测定正在正常运行并且测定试剂是可行的。如果被测受试者的样本中含有干扰物质，如人抗小鼠抗体或高浓度类风湿因子，则nc线将发出信号，指示测定不应报告为阳性或测试结果应无效。
155.实施例2
156.本公开的实施方式可指示或检测各种检测范围内的白蛋白或乳铁蛋白的存在，允许非常敏感的样本充足性测试来确认可行的鼻样本的收集。在根据本公开的侧流测定的一
种非限制性实施中，样本充足性线指示hsa的数量在约50ng/ml至约1.5μg/ml范围内的样本中hsa的存在。其他hsa检测范围在本公开的实施方式中是可能的。在根据本公开的侧流测定的另一个非限制性实施中，在样本充足性线处指示或检测到具有小于50ng/mlhsa的样本中hsa的存在。在根据本公开的侧流测定的又一个非限制性实施中，样本中 hsa存在的检测限的下限为约100ng/ml hsa。在根据本公开的侧流测定的又一非限制性实施中，在样本充足性线处指示或检测到样本中大于1.5μg/ml的hsa的存在。本公开的实施方式还可以指示或检测样本中不同范围的乳运铁蛋白。在根据本公开的侧流测定的一个非限制性实施中，样本充足性线指示在具有约10ng/ml乳运铁蛋白的样本中乳运铁蛋白的存在。
157.实施例3
158.本公开的实施方式可在样本充足性线处使用抗hsa抗体的组合来指示或检测hsa的存在，允许指示或检测样本中非常低的浓度的hsa。在根据本公开的侧流测定的一个非限制性实施中，两种抗hsa抗体以50/50的比例施加到样本充足性线。第一种抗hsa抗体由biospacific提供，其为a15374，并且第二种抗hsa抗体由fitzgerald industriesinternational提供，其为目录#10c-cr2116m2，克隆227425。此实例实施产生了样本充足性线，所述样本充足性线指示在具有非常低浓度的hsa的样本中hsa的存在。应理解，根据本公开，来自其他供应商的抗hsa抗体可以适当地在样本充足性线处实施。还应理解，根据本公开，可在样本充足性线处适当地实施不同于两种不同抗hsa抗体的50/50比率的比率以及不同抗hsa抗体的不同组合。
159.实施例4
160.现在将描述从根据本公开的侧流测定获得的测试结果。测试结果显示在图2中，其描绘了频率图，示出了使用根据本公开的实例免疫测定收集和分析的369个流体样本的以au (任意单位)为单位的测量的样本充足性线强度的分布。在此实验中，根据本公开的侧流测定的样本充足性线用抗hsa抗体划线。将含有1.2mg/ml biospacific抗hsa抗体a15374 和fitzgerald抗hsa抗体10c-cr2116m2的划线溶液以0.75μl/cm的速率沉积在硝酸纤维素膜的样本充足性线上，这相当于沉积在测试装置上的两种抗体各0.41μg。测试结果的频率图指示，本公开的样本充足性线的实施方式能够以足够的准确性和可靠性指示样本中样本充足性标志(在此情况下是hsa)的存在或不存在，以指示各个样本是否适合测试。
161.实施例5
162.现在将描述从根据本公开的侧流测定获得的临床试验测试结果。本非限制性实施例展示了使用根据本公开的包括样本充足性线的测定来确定sars-cov-2病毒的存在，该病毒导致covid-19，其是一种传染性呼吸系统疾病。在来自受试者的样品中检测到 sars-cov-2的存在能够指示该受试者已经感染了导致covid-19的病毒。在2021年3月至5月举行的临床试验期间，临床试验参与者使用bd veritor
tm
居家covid-19测试 (becton,dickinson and company,franklin lakes,nj)收集鼻拭子样本，该测试是一种用于检测鼻拭子中的sars-cov-2病毒蛋白的定性测试。应当理解，根据本公开的测定可用于使用拭子来收集样本的任何种类的检测测定。
163.在此临床试验中，试验参与者收集拭子样本，并且所述拭子样本由上述这些参与者在八个定点照护场所使用根据本公开的侧流测定进行测试。在bd veritort居家covid-19测试的非临床试验使用期间，应理解，使用该测试的个体可以使用包括在该测试中的根
据本公开的侧流测定收集鼻拭子样本，然后在家中或在其他非临床环境中测试所收集的样本。该测试可以在家中进行，大约15分钟后就可获得结果。循序渐进的用法说明全程指导受试者完成样本收集、样本处理和即时结果解译。在临床试验中，在定点照护场所，受试者对自己进行了bd veritor循居家covid-19测试，或父母/法定监护人/伴侣进行了样本擦拭、处理以及解译测试结果，上述这些在无人帮助下进行，就像在家庭环境中，只有兼容智能手机上相关应用程序中的可用信息、产品信息传单和快速入门指南。
164.设计bd veritor处居家covid-19测试以供个体测试自己或家属的导致covid-19的病毒蛋白质。该测试被授权用于非处方、家庭使用。该测试旨在供具有或没有症状或因其他流行病学原因怀疑covid-19的个体在两天或三天内进行两次测试时使用，测试间隔至少24小时且不超过48小时。该测试旨在由成人收集样本并使用该测试来定性检测2-13岁个体的直接前鼻拭子样本中的sars-cov-2病毒蛋白，14岁及以上的个体自己采样。14 岁以上的个体也可以由成人收集。使用bd veritor成居家covid-19测试的阳性测试结果指示，被测试个体很可能患有covid-19，因为在个体样本中检测到导致covid-19的病毒的蛋白质。使用bd veritor测居家covid-19测试的阴性测试结果指示，在被测试个体的样本中未发现导致covid-19的病毒的蛋白质，并且该个体不太可能患有covid-19。即使测试结果为阴性，被测试个体也有可能患有covid-19。
165.八百九十三(893)名成人和儿科人受试者参加了临床试验。使用bd veritor者居家 covid-19测试中提供的拭子从每个受试者的鼻腔通道收集拭子样本。样本由测试受试者、测试受试者的父母或伴侣直接收集，无需医疗保健专业人员(hcp)的帮助。然后，由测试受试者、测试受试者的父母或伴侣使用根据本公开的侧流测定分析每个样本。参考拭子由hcp收集并储存在传递用培养基(becton,dickinson and company(franklin lakes,nj) 的通用病毒传递用培养基(uvt))中，然后送到参考实验室。中央参考实验室使用lyrasars-cov-2测定(quidel,san diego,ca)对参考测试进行了测试。
166.在临床试验中由测试受试者使用的侧流测定在类似于上述实施例1参考图1描述的测试条100的测试条上实施。侧流测定测试条根据上述实施例3和实施例4制备。例如，为了制备临床试验中使用的侧流测定，抗体在位于测试条的硝酸纤维素膜(固相)的l5位置的样本充足性线上划线，该测试条类似于实施例3中描述的测试条100。测试线抗体(在此情况下是重组兔单克隆抗体(hytest ltd.,turku,finland))以2.4mg/ml浓度和0.75 μl/cm划线速率在l2线划线。每个测试条含有0.814μg的此抗体。如实施例1所述，阳性对照(pc)线在l4位置划线，阴性对照(nc)线在l1位置划线，l3线留空。l1位置在上游，l5位置在下游，使得样本从背景区域流向l5位置。在上游侧，硝酸纤维素膜与缀合垫接触，在所述缀合垫上沉积有抗体金缀合物和pc线特异性缀合物。硝酸纤维素膜的下游侧与吸收垫接触，所述吸收垫起到海绵的作用以便于样本从缀合垫流过固相，在此情况下是硝酸纤维素。
167.将临床试验参与者收集的每个样本应用于bd veritor的居家covid-19测试中提供的个体测试条上的缀合垫。参与者在无人帮助的情况下解译测试结果，就像在家庭环境一样，使用兼容智能手机上的相关应用程序、产品信息传单和快速入门指南。如上述实施例中所公开的，应用于含有足量病毒抗原(例如，处于或高于测试的检测限)的测试条的样本在 l2位置的分析物捕获线处形成抗体-covid-19抗原-抗体-检测器复合物并发出信号(以 au为单位)，所述信号是使用兼容智能手机上实施的bd veritor使居家covid-19测试应用
程序软件检测到的。高于阈值的检测信号表明样本被鉴定为含有sars-cov-2病毒抗原，并且样本测试结果报告为covid-19“阳性”。不含足量病毒抗原的样本不会形成此类复合物，并且在分析物捕获线处未检测到信号(以au为单位)。这些样本被鉴定为不含 sars-cov-2病毒抗原，并且样本测试结果报告为covid-19“阴性”。由pc线特异性缀合物与pc线结合形成的可见的线用作每个样本的阳性对照，指示测定正常运行并且测定试剂是可行的。
168.使用兼容智能手机上实施的bd veritor施居家covid-19测试应用程序软件测量和分析从侧流测定获得的以au为单位的信号。bd veritor和居家covid-19测试针对有症状受试者的lyra sars-cov-2测定的总体性能为81.3％ppa(阳性符合率)、99.8％npa(阴性符合率)和98.7％opa(总体符合率)。图3描绘了在临床试验期间分析的样本的以au 为单位的样本充足性线强度分布的直方图，其中y轴为频率，x轴为样本充足性线强度。 l5(样本充足性线)值范围为0.55至98.92au，平均值为58.17au。如图3所示，在一些测试条的样本充足性线l5处测得的强度为零或接近零(或测得的强度低于样本充足性的预定阈值或“截止”值)，指示在样本中未检测到hsa，即使在非常低的浓度下(或者 hsa以如此低的浓度存在，以至于检测到所述hsa低于样本充足性的预定阈值或“截止”值)。这些样本中不存在hsa(或存在浓度低于样本充足性阈值的hsa)指示这些样本不充足。上述实施例1描述了这些样本可能不足以进行测试的潜在非限制性原因。
169.在此临床试验期间，使用10.4au的截止值作为评估特定样本是否足以进行测试的阈值或截止值。例如，在样本充足性线处小于10.4au的强度测量值将导致相应样本被视为不充足，因为所述测量值低于为此临床试验建立的预定阈值或截止值。此类样本由bdveritor应居家covid-19测试应用程序软件分配“无效”测试结果。在样本充足性线处超过10.4au的强度测量值将使得相应样本被认为足以进行测试，因为所述测量值高于为此临床试验建立的预定阈值或截止值。此类样本由bd veritor应居家covid-19测试应用程序软件分配“阳性”测试结果、“阴性”测试结果，或者如果该测试因与在样本充足性线处测量的强度无关的原因导致无效(例如，基于在阳性对照线或阴性对照线处测量的强度)，则可能分配“无效”测试结果。应理解，在此临床试验中10.4au的样本充足性线强度的阈值或截止值是非限制性示例，并且可以在本公开的实施方式中实施其他合适的截止值。
170.此临床试验的结果清楚地表明，根据本公开的实施方式的包括样本充足性线的侧流测定以足够的准确性和可靠性检测样本中的sars-cov-2病毒抗原，从而指示相应样本是否充足进行测试。在对大多数样本的测试中，样本充足性线显示出高强度，指示临床试验参与者正确收集了相应样本。在对两个样本的测试中，样本充足性线非常弱(0.55au和6.59 au)。测得的这两个强度低于为此临床试验建立的样本充足性的截止值10.4au。结果， bd veritor低居家covid-19测试应用程序软件将这两个样本的测试结果判定为“无效”。在对第三个样本的测试中，在样本充足性线处测得的强度为15.09au，高于为此临床试验建立的样本充足性截止值10.4au。结果，bd veritor立居家covid-19测试应用程序软件判定该测试结果足以进行测试，尤其是至少部分地基于在位置l2分析物捕获线处测量的强度判定该测试结果为“阴性”(对于此示例，0.000255au)。在对第四个样本的测试中，在样本充足性线处测得的强度为57.46au，高于为此临床试验建立的样本充足性截止值 10.4au。结果，bd veritor立居家covid-19测试应用程序软件判定该测试结果足以进行测试，尤其是至少部分地基于在位置l2分析物捕获线处测量的强度判定该测试结果为“阳性”(对于此示例，
119.9au)。因此，此临床试验说明，在两个样本中，未检测到根据本公开的样本充足性标记物(或在低于样本充足性的阈值或截止值的水平检测到)，指示原始样本的数量、质量和/或组成不充足。特别是，此临床试验说明，在两个样本中，临床试验参与者没有收集到数量、质量和/或组成足以进行测试的样本。应理解，描述、具体实例和数据尽管指示了示例实施方式，但是它们是以说明的方式给出的，并且不旨在限制本公开的各种实施方式。根据本文含有的描述和数据，本公开内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说将变得显而易见，并且因此被认为是本公开的各种实施方式的一部分。

技术特征：

1.一种免疫测定测试条，其包含：流动路径，其被配置为接纳样本；样本接纳区，其联接到所述流动路径；以及至少一个分析物捕获线，其特征在于所述免疫测定测试条进一步包含至少一个样本充足性线。2.根据权利要求1所述的免疫测定测试条，其中所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含人白蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗hsa抗体。3.根据权利要求1所述的免疫测定测试条，其中所述样本包含至少一个样本充足性标志，所述样本中的所述至少一个样本充足性标志包含乳运铁蛋白，并且所述至少一个样本充足性线包括抗乳运铁蛋白抗体。4.根据权利要求2和3中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中所述至少一个样本充足性标志的存在和丰度取决于所述样本的数量、质量和/或组成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本还包含至少一种感兴趣的分析物。6.根据权利要求5所述的免疫测定测试条，其中所述样本中所述至少一种感兴趣的分析物的存在和丰度取决于供体的疾病状态。7.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本选自由以下组成的组：从供体收集的鼻液样本、粘液样本、血液样本、血浆样本、尿液样本、汗液样本或唾液样本。8.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含传染病的标志。9.根据权利要求8所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含病毒标志。10.根据权利要求8至9中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含sars-cov-2标志。11.根据权利要求8至10中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志。12.根据权利要求11所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含甲型流感病毒的标志。13.根据权利要求11所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含乙型流感病毒的标志。14.根据权利要求8至11中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含流感标志和sars-cov-2标志。15.根据权利要求8所述的免疫测定测试条，其中所述样本中的所述至少一种感兴趣的分析物包含细菌标志。16.根据权利要求1至12中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本的所述供体是哺乳动物。17.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本的所述供体是
人。18.根据权利要求1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作直接免疫测定的一部分。19.根据权利要求1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作间接免疫测定的一部分。20.根据权利要求1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作夹心免疫测定的一部分。21.根据权利要求1至17中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作竞争性免疫测定的一部分。22.根据权利要求1至21中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用作侧流测定的一部分。23.根据权利要求1至22中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用于bd veritor
tm
系统。24.根据权利要求1至23中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条用于bd veritor
tm
居家covid-19测试。25.根据权利要求1至24中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述测试条还包含阳性对照线和/或阴性对照线。26.根据权利要求25所述的免疫测定测试条，其中所述测试条包含阳性对照线，并且其中所述阳性对照线位于所述测试条上所述至少一个分析物捕获线和所述至少一个样本充足性线之间、所述至少一个分析物捕获线和阴性对照线之间、或所述至少一个样本充足性线和所述阴性对照线之间。27.根据权利要求26所述的免疫测定测试条，其中所述阳性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。28.根据权利要求25所述的免疫测定测试条，其中所述测试条包含阴性对照线，并且其中所述阴性对照线验证所述免疫测定的完整性、适当的试剂功能，并且确保正确的测试程序。29.根据权利要求1至28中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本在进入所述流动路径时未被标记。30.根据权利要求1至28中任一项所述的免疫测定测试条，其中所述样本在进入所述流动路径时被标记。

技术总结

本实用新型的名称是免疫测定测试条。本实用新型涉及免疫测定测试条，其包含：流动路径，其被配置为接纳样本；样本接纳区，其联接到流动路径；以及至少一个样本重组型线。本申所述的免疫测定测试条能够区分不含感兴趣的分析物的样本和对于获得准确结果不充分充足的样本。本文所描述的免疫测定测试条可以作为临床、实验室或居家测试系统的一部分来实现。实验室或居家测试系统的一部分来实现。实验室或居家测试系统的一部分来实现。