(10)申请公布号 CN 101695518 A
(43)申请公布日 2010.04.21C N 101695518 A
*CN101695518A*
(21)申请号 200910167852.9
(22)申请日 2009.10.10
A61K 36/59(2006.01)
A61P 9/06(2006.01)
A61P 25/20(2006.01)
A61P 31/04(2006.01)
A61P 31/10(2006.01)
A61P 31/14(2006.01)A61P 31/20(2006.01)A61P 37/04(2006.01)C07D 455/03(2006.01)A61K 135/00(2006.01)
(71)申请人成都中医药大学
地址611137 四川省成都市温江区柳台大道
1166号
(72)发明人刘友平 陈鸿平 程贝
(74)专利代理机构北京律诚同业知识产权代理
有限公司 11006
代理人
李高峡
(54)发明名称
(57)摘要
本发明提供了一种黄藤总生物碱，它含有盐
的重量百分含量大于10％。本发明还提供了黄藤
总生物碱、黄藤素、药根碱的制备方法。采用本发
明方法可制备黄藤总生物碱，同时也可以提取分
离黄藤素和药根碱，其中黄藤素按干燥品以无水
盐酸巴马汀(C 21H 22O 4N·HCl)计算，重量百分含量
高于98.0％，纯度高，本发明提取分离方法使盐
酸巴马汀的转移率达到26％以上，比现有传统工
艺(约15％)高1.7倍；该提取工艺在提高黄藤
素主要成分盐酸巴马汀的转移率的同时还保留了
药根碱成分，大大提高了药材资源利用率；工艺
中采用树脂纯化法，工艺流程简单可行，树脂可再
生重复利用，与传统盐析法相比，减少了碱液对环
境造成的污染。(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 1 页 说明书 16 页 附图 5 页
权 利 要 求 书
CN 101695518 A1/1页
1.一种黄藤总生物碱，其特征在于：它含有盐酸巴马汀的重量百分含量大于60％，盐酸药根碱的重量百分含量大于10％。
2.一种制备权利要求1所述的黄藤总生物碱的提取方法，它包括如下步骤：
a、取防己科植物黄藤Fibraurea recisa Pierre.的干燥藤茎，加0.1％-1.0％硫酸溶液，浸渍，过滤，得滤液；
b、将滤液过大孔吸附树脂，分别用蒸馏水和10％-60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
c、将乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，蒸干，得黄藤总生物碱。
3.根据权利要求2所述的黄藤总生物碱的提取方法，其特征在于：步骤a所述的硫酸浓度为0.2％。
4.根据权利要求2所述的黄藤总生物碱的提取方法，其特征在于：步骤b所述的乙醇浓度为：40％乙醇；所述的洗脱液的的流速为1-3BV/h；所述的大孔吸附树脂为：D101型或AB-8型大孔吸附树脂。
5.根据权利要求4所述的黄藤总生物碱的提取方法，其特征在于：所述的洗脱液的流速为1-2BV/h。
6.一种黄藤素的提取分离方法，它包括下述步骤：
①权利要求2-5任意一项中步骤b所述的乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，加入盐酸调pH 为2，静置，过滤，得滤液和沉淀；
②取步骤①所述的沉淀，干燥、粉碎，得黄藤素粗品，再精制，得黄藤素精品。
7.根据权利要求6所述的黄藤素的提取分离方法，其特征在于：所述步骤②的精制方法为：将黄藤素粗品与碱性氧化铝按重量配比为1∶(50-100)混合，上氧化铝柱，以95％乙醇洗脱，收集黄谱带，回收乙醇，在室温下冷却，过滤，得黄藤素精品。
8.根据权利要求7所述的黄藤素的提取分离方法，其特征在于：黄藤素粗品与碱性氧化铝按重量配比为1∶80。
9.一种药根碱的提取分离方法，它是由权利要求6中步骤①所述的滤液，加15％w/ vKI，静置，沉淀完全，取沉淀烘干，得药根碱提取物，精制，得药根碱。
10.根据权利要求9所述的药根碱的提取分离方法，其特征在于：所述的精制方法为：上硅胶柱，以正丁醇-冰醋酸-水(体积比为7∶1∶2)为洗脱溶剂，收集棕红谱带，加盐酸调pH为2后，蒸干，得药根碱盐酸盐。
一种提取黄藤总生物碱、分离黄藤素、药根碱的方法技术领域
[0001]
本发明涉及一种黄藤总生物碱的制备方法，并从中同时分离得到高纯度黄藤素、药根碱的提取分离方法。背景技术
[0002]
黄藤为防己科植物黄藤Fibraurearecisa Pierre.的干燥藤茎，是云南、广西、广
东等地常用中药。别名有：大黄藤(广西《中草药新医疗法处方集》)、土黄连(《南宁市药物态》)、藤黄连(《广西中药志》)、黄连藤(《中国药植图鉴》)。黄藤的藤茎中主要含有生物碱：巴马汀(Palmatine)、药根碱(Jatrorrhizine)、伪非洲防己碱(Pseudocolumbamine)及黄藤内酯(Fibralactone)，并含有黄藤素甲(Fibranine)，黄藤素乙(Fibraminine)、甾醇(Sterol)等。[0003]
[0004]
巴马汀(Palmatine) 药根碱(Jatrorrhizine)
[0005] 巴马汀(Palmatine)本品系季铵生物碱，溶于水、乙醇，几乎不溶于氯仿、乙醚、苯等溶剂，巴马汀盐酸盐即氯化巴马汀(palmation Chloride)C 21H 22O 4N.HCl.3H 2O 为黄针状结晶，熔点205℃(分解)，其理化性质与盐酸小檗碱类似。药根碱(Jatrorrhizine)系具酚羟基季铵盐，其理化性质与巴马汀类似，但较易溶于苛性碱液中，其盐酸盐在水中的溶解度亦比盐酸巴马汀为大。药根碱盐酸盐(Jatrorrhizine Chloride)C 20H 20O 4N.HCl.H 2O 为红针状结晶，溶点204～206℃。黄藤素是从黄藤药材中提取得到的生物碱，采用重量法，按干燥品以无水盐酸巴马汀(C 21H 22O 4N·HCl)计算不得少于95.0％(《中国药典》1977年版一部)。
[0006] 黄藤中所含的巴马汀和药根碱均具有药效，巴马汀具有①抗菌作用，作用强度与小檗碱基本相同或略低于小檗碱，对白念珠菌、亚洲乙型病毒有明显抑菌作用，对葡萄球菌及抗酸分枝杆菌有抑菌作用，对柯氏表皮癣菌等12种真菌有不同程度的抑制作用；②增强白细胞吞噬功能的作用，黄藤素腹腔注射能增强大鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫功能，反应其对机体免疫功能的提高作用。药根碱具有：①抗心律失常，黄藤中药根碱10mg/kg ，iv 对大鼠心肌缺血和复灌所致心律失常有对抗作用，可使心肌缺血和复灌期间心律失常的开始时间推后，持续时间缩短；②镇静作用，黄藤中药根碱100mg/kg 腹腔注射可减少小鼠自发活动，延长钠所致动物睡眠时间；③谭毓治等研究药根碱与华法令、硫喷妥钠、甲苯磺丁脲合用时，可使其药效(或毒性)增强，导致药物相互作用，其可能的机制是药根碱竞争血浆蛋白结合部位，使其游离药物浓度增高，药效(或毒性)增强。
[0007] 巴马汀等成分为苄基异喹啉类季胺生物碱，属水溶性生物碱，易溶于水、酸水等极性大的溶剂。巴马汀硫酸盐或醋酸盐在水中溶解度大，故提取时多选用硫酸或醋酸溶液作提取溶媒。工业生产黄藤素，多以酸水提取该类生物碱成分，向所得的酸水提取液经适当调节pH值后加入食盐进行盐析，利用生物碱的盐溶解度的差异，使其从水液中析出分离，得到黄藤粗碱；粗碱再经结晶法精制，得到黄藤素，如：唐爱莲，刘笑甫，冯冬梅.用煎煮法和冷浸法对黄藤中巴马丁成分提取的比较研究[J].华夏医学，2003，1(16)分别用煎煮法和冷浸法对黄藤中的巴马丁成分提取进行比较，结果，煎煮法提取巴马汀的得率较高；张举成，苏一兰，闵勇，等.超声波提取黄藤中黄藤素[J].云南化工，2006，33(6)：9～10研究了
超声提取最优工艺为：超声时间为30min，料剂比为1∶6，H
2SO
4
的质量分数为2％，认为此
法优于热提法和冷浸法；黄祖良等，从黄藤中提取黄藤素工艺的改进，基层中药杂志，2001年第15卷第3期，报道了从黄藤中提取黄藤素的理想工艺为：黄藤粉碎后用0.2％的硫酸溶液浸泡4次，时间为48h，24h X 3，提取液用NaOH调pH 10，静置沉淀除杂，滤液加7％NaCl(碘盐)盐析，静置一昼夜，过滤，沉淀晒干得粗碱，粗碱粉碎后按1∶5用80％酒精提取3次，提取液用HCl调pH2，冷却结晶精品；郑云花，金在久，等.黄藤掌叶防己碱提取条件的探索[J].延边大学医学学报，1999，22(3)：176～178研究的结果是以20ml/L冰醋酸水溶液，浸渍24h，碱化pH值10，使用11％氯化钠为宜；李晓莹，廖华卫.pH值对黄藤中巴马汀盐析的影响[J].广东药学院学报，1999，15(3)认为在pH3时进行盐析，有利于提高收率。此外，还有相关专利申请，如：申请号：200410013988.1，发明名称：从黄藤总生物碱中精制巴马汀的方法及其应用，该发明涉及一种从黄藤总生物碱中精制巴马汀的方法。本发明将利用现有技术已制取的含量低于或达到96％巴马汀的黄藤总生物碱采用溶剂pH分离或柱层析分离的方法，利用不同生物碱在溶解性能上的差异，选用pH差或溶剂极性差的原理将其分离，辅以相关技术进行精制。申请号：20071
0085987.1，发明名称：盐酸巴马汀的提取精制方法及其应用，均是采用盐析法提取分离黄藤素。按目前报道的方法仅用于提取黄藤素，提取的黄藤素含无水盐酸巴马汀的含量均在95.0％-98％，不能得到更高纯度的黄藤素，同时若按目前报道的工艺进行成本估算，生产1吨黄藤素，其粗碱母液达4000吨，盐约250吨，将粗碱母液全部废弃，不仅损失了大量的盐，对环境造成污染，而且也浪费了药材中大量药根碱成分。
发明内容
[0008] 本发明的技术方案是提供了一种黄藤总生物碱的制备方法，本发明还提供了一种黄藤素的提取分离方法，本发明的另一技术方案是提供了一种药根碱的提取分离方法。[0009] 本发明提供了一种黄藤总生物碱，它含有盐酸巴马汀的重量百分含量大于60％，盐酸药根碱的重量百分含量大于10％。
[0010] 本发明提供了一种制备黄藤总生物碱的提取方法，它包括如下步骤：
[0011] a、取防己科植物黄藤Fibraurea recisa Pierre.的干燥藤茎，加0.1％-1.0％硫酸溶液，浸渍，过滤，得滤液；
[0012] b、将滤液过大孔吸附树脂，分别用蒸馏水和10％-60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
[0013] c、将乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，蒸干，得黄藤总生物碱。
[0014] 其中，步骤a 所述的硫酸浓度为0.2％。
[0015] 其中，步骤b 所述的乙醇浓度为：40％乙醇。
[0016] 其中，b 步骤所述的洗脱液的的流速为1-3BV/h 。进一步优选地，所述的洗脱液的流速为1-2BV/h 。
[0017] 本发明还提供了一种黄藤素的提取分离方法，它包括下述步骤：
[0018]
①步骤b 所述的乙醇洗脱液回收乙醇，浓缩，加入盐酸调pH2，静置，过滤，得滤液和沉淀；
[0019] ②取步骤①所述的沉淀，烘干燥、粉碎，得黄藤素精品，再精制，得黄藤素精品。
[0020] 其中，所述的精制方法为：将黄藤素粗品与碱性氧化铝按重量配比为1∶50-100混合，上氧化铝柱，以95％乙醇洗脱，收集黄谱带，回收乙醇，在室温下冷却，过滤，得黄藤素精品。进一步优选地，黄藤素粗品与碱性氧化铝按重量配比为1∶80。
[0021] 本发明还提供了一种药根碱的提取分离方法，它是由黄藤素的提取分离方法中步骤①所述的滤液，加15％w/vKI ，静置，沉淀完全，取沉淀烘干，得药根碱提取物，精制，得药根碱。
[0022] 其中，所述的精制方法为：上硅胶柱，以正丁醇-冰醋酸-水(体积比为7∶1∶2)为洗脱溶剂，收集棕红谱带，加盐酸调pH 为2后，蒸干，得药根碱盐酸盐。
[0023] 采用本发明方法可制备黄藤总生物碱，同时也可以提取分离黄藤素和药根碱，其中黄藤素按干燥品以无水盐酸巴马汀(C 21H 22O 4N·HCl)计算高于98.0％，纯度高(传统工艺只能达到94％)，本发明提取分离方法使盐酸巴马汀的转移率达到26％以上，比现有传统工艺(约15％)高1.7倍；
[0024] 同时，该提取工艺在提高黄藤素主要成分盐酸巴马汀的转移率的同时还保留了药根碱成分，大大提高了药材资源利用率；工艺中采用树脂纯化法，工艺流程简单可行，树脂可再生重复利用，与传统盐析法相比，减少了碱液对环境造成的污染。
[0025] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0026] 以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明
[0027]
图1常规黄藤总生物碱、黄藤素粗品和精品的制备方法[0028]
图2本发明工艺流程[0029]
图3D 101型和AB-8型两种树脂对巴马汀成分的吸附与解吸性能示意图[0030]
图4吸附流速对动态吸附容量的影响[0031]
图5各洗脱溶媒的洗脱效果比较[0032]
图6洗脱曲线图[0033]
图7黄藤药材与树脂洗脱物HPLC 谱图(A 树脂洗脱物；B 黄藤药材)[0034] 图8氧化铝谱柱洗脱流份的HPLC 谱图(A 黄谱带区；B.中间区；C.棕谱带区)
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