(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010666765.4
(22)申请日 2020.07.13
(71)申请人 南京赛尔健生物技术有限公司
地址 211199 江苏省南京市江宁区兴民北
路42号江宁高新园
(72)发明人 于海涛 杨晓旭
(51)Int.Cl.
A61K 31/56(2006.01)
A61P 11/00(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了蒲公英赛醇用于肺纤维
化的用途。研究发现，蒲公英赛醇可以有效抑制
促进人胚肺成纤维细胞株MRC ‑5的凋亡，因此蒲
公英赛醇具有开发成抗肺纤维化药物的前景。权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 111743903 A 2020.10.09 C N 111743903
A
1.蒲公英赛醇用于制备肺纤维化的药物的生物医药用途。
2.一种肺纤维化的药物，其特征在于：以蒲公英赛醇为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制备成药学上可以接受的剂型。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：辅料可以为固体辅料或液体辅料。
4.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：剂型可以为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂。
权 利 要 求 书1/1页CN 111743903 A
蒲公英赛醇用于肺纤维化的用途
技术领域
[0001]本发明涉及羊齿烯醇的医药用途，具体涉及蒲公英赛醇用于肺纤维化的用途。
背景技术
[0002]多种肺间质疾病都会引起肺纤维化，肺纤维化严重后就会出现进行性呼吸困难，患者最终因而死亡，目前尚没有特别有效的药物用于肺纤维化的。
[0003]肺成纤维细胞是肺纤维化形成过程中最重要的细胞，这些细胞一方面会不断增殖合成大量胶原蛋白参与肺纤维化，另一方面会分泌多种细胞因子促进肺纤维化进展。因此，抑制肺成纤维细胞的增殖可以有效抑制肺纤维化的进展。
发明内容
[0004]本发明的目的是为了提供蒲公英赛醇用于肺纤维化的用途。
[0005]实现上述目的的技术方案如下：
[0006]蒲公英赛醇用于制备肺纤维化的药物的生物医药用途。
[0007]一种肺纤维化的药物，以蒲公英赛醇为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制备成药学上可以接受的剂型。
[0008]优选地，辅料可以为固体辅料或液体辅料。
[0009]优选地，剂型可以为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂。
[0010]有益效果：
[0011]研究发现，蒲公英赛醇可以有效抑制人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖，还可以有效促进人胚肺成纤维细胞株MRC-5的凋亡，因此蒲公英赛醇具有开发成抗肺纤维化药物的前景。
附图说明
[0012]图1为不同浓度药物干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率。[0013]图2为药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响，其中B 为对照组，Y为羊齿烯醇组，P为蒲公英赛醇组。
具体实施方式
[0014]一、试验材料
[0015]人胚肺成纤维细胞株MRC-5购自上海雅吉生物，液氮冻存。
[0016]羊齿烯醇、蒲公英赛醇纯度不低于98％，配制成药物溶液备用。
[0017]RPMI 1640培养液、胎牛血清购自Gibco。
[0018]青霉素、链霉素购自Sigma。
[0019]CCK8检测试剂盒购自南京碧云天生物。
[0020]二、试验方法
[0021]1、细胞培养
[0022]将液氮冻存的人胚肺成纤维细胞株MRC-5按照常规方法复苏后悬浮培养在含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养液中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养，每2～3d换液传代，取对数生长期的细胞进行实验。
[0023]2、CCK8法测定药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制作用
[0024]取对数生长期的人胚肺成纤维细胞株MRC-5，消化重悬后制成密度为5×104/mL的细胞悬浮液，按照每孔200μL的接种量接种于96孔板，适应性培养24h后，将培养基更换为含2、5、10μM羊齿烯醇或蒲公英赛醇的完全培养基，每个浓度设3个复孔，另设不含细胞的培养液为空白组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养48h后，每孔加入10μL的CCK8试剂，孵育4h后在酶联免疫检测仪450nm波长处测定每孔OD450值，取3孔平均值，计算增殖抑制率。
[0025]增殖抑制率(％)＝[1－(OD药物组－OD空白组)/(OD对照组－OD空白组)]×100％。
[0026]3、WB法测定药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达影响[0027]取对数生长期人胚肺成纤维细胞株MRC-5，消化重悬后制成密度1×105/mL的细胞悬浮液，以每孔2mL接种于6孔板，适应性培养24h后，将培养基更换为含5μM羊齿烯醇或蒲公英赛醇的完全培养基，并设不加药培养的细胞为对照组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养48h后，收集细胞，PBS洗涤，裂解液裂解，测定蛋白浓度，各组取30μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转膜，5％脱脂奶粉封闭，加入Bcl-2、Bax、GAPDH一抗4℃孵育过夜，洗膜，加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育2h，显，灰度扫描分析。
[0028]4、统计学分析
[0029]采用软件SPSS 17.0进行统计学分析处理，计量数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
[0030]三、试验结果
[0031]1、对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制作用
[0032]不同浓度羊齿烯醇、蒲公英赛醇干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率如表1和图1所示，可以发现羊齿烯醇、蒲公英赛醇可以显著抑制人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖，且具有明显的剂量依赖效应。
[0033]表1不同浓度药物干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率
[0034]
[0035]2、对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的促进凋亡作用
[0036]图2为羊齿烯醇、蒲公英赛醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax 表达的影响(B为对照组，Y为羊齿烯醇组，P为蒲公英赛醇组)。Bcl-2、Bax是调控凋亡最重要的细胞因子，Bcl-2抑制细胞凋亡，Bax则促进细胞凋亡。可以发现，羊齿烯醇、蒲公英赛醇均显著下调Bcl-2蛋白表达，上调Ba
x蛋白表达，且蒲公英赛醇对Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响强于羊齿烯醇，二者均具有显著的促进人胚肺成纤维细胞株MRC-5凋亡的作用。
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